1、 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序 目的基因的获取目的基因的获取 基因表达载体的构建基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定 （一）目的基因的提取（一）目的基因的提取 目的基因：主要是指目的基因：主要是指_ 。 获取方法：获取方法： 1、_中获取目的基因中获取目的基因 2、 PCR反应扩增反应扩增DNA 2、人工合成法人工合成法：如果基因比较小，核苷酸序列又已知，：如果基因比较小，核苷酸序列又已知， 也可以通过也可以通过DNA合成仪合成仪用化学方法直接人工合成。用化学方法直接人工合成。 基本操作步骤基本操作步骤 从从
2、基因文库基因文库 编码蛋白质的结构基因编码蛋白质的结构基因 从基因文库中获取目的基因从基因文库中获取目的基因 什么是基因文库？什么是基因文库？ 什么是基因组文库？什么是基因组文库？ 什么是部分基因文库？什么是部分基因文库？ 怎样从基因文库中得到我们所需的目怎样从基因文库中得到我们所需的目 的基因？的基因？ 目的基因的有关信息与什么相联系？目的基因的有关信息与什么相联系？ 1.从从基因文库基因文库中获取目的基因中获取目的基因 基因文库：基因文库： 将含有将含有某种某种生物生物不同基因不同基因的许多的许多DNADNA 片断，导入到片断，导入到受体菌的群体受体菌的群体中，各个中，各个 受体菌分别含有
3、这种生物的不同基因，受体菌分别含有这种生物的不同基因， 称为基因文库。称为基因文库。 基因文库基因文库 基因组文库基因组文库 部分基因文库部分基因文库 （如（如cDNAcDNA文库）文库） 一种生物一种生物所有所有 的基因的基因 一种生物的一种生物的 一部分一部分基因基因 基因文库的构建过程基因文库的构建过程 基基 因因 组组 文文 库库 限制酶限制酶 供体细胞的供体细胞的 全部全部DNA 大量大量DNA 片段片段 拼接到载体上拼接到载体上 导入受体细胞扩增导入受体细胞扩增 目的基因的目的基因的mRNA 单链单链DNA (cDNA） 双链双链DNA (即目的基因即目的基因) 反转录反转录 合成
4、合成 1）反转录法：）反转录法： 以目的基因转录成的以目的基因转录成的mRNAmRNA为为 模板，反转录成互补的单链模板，反转录成互补的单链DNADNA， 然后在酶的作用下合成双链然后在酶的作用下合成双链DNADNA， 从而获得所需的基因。从而获得所需的基因。 蛋白质蛋白质 的氨基的氨基 酸序列酸序列 mRNA 的核苷的核苷 酸序列酸序列 结构基因结构基因 的核苷酸的核苷酸 序列序列 目的目的 基因基因 推测推测 推测推测 化学化学 合成合成 2）根据已知的氨基酸序列合成）根据已知的氨基酸序列合成DNA法法 ： cDNAcDNA： 非编码区非编码区 非编码区非编码区 编码区编码区 RNA聚合酶
5、聚合酶 结合位点结合位点 外显子外显子 内含子内含子 终止子终止子 基因的结构基因的结构 启动子启动子 原核原核 真核真核 一个典型的一个典型的原核细胞原核细胞基因结构示意图基因结构示意图 编码区编码区: :组成基因的组成基因的核苷酸序列可以分为不同的区段核苷酸序列可以分为不同的区段, , 有的区段能够转录为相应的信使有的区段能够转录为相应的信使RNARNA，进而指导蛋白，进而指导蛋白 质的合成，这样的区段叫做编码区。质的合成，这样的区段叫做编码区。 非编码区：非编码区：有的区段不能转录为信使有的区段不能转录为信使RNARNA，也就是说，也就是说 不能编码蛋白质不能编码蛋白质，这样的区段叫做非
6、编码区。，这样的区段叫做非编码区。 一个典型的一个典型的真核细胞真核细胞基因结构示意图基因结构示意图 真核细胞基因结构的主要特点是：真核细胞基因结构的主要特点是： 编码区是间隔的、不连续的。编码区是间隔的、不连续的。 能够编码蛋白质的序列叫做能够编码蛋白质的序列叫做外显子外显子， 一般不能够编码蛋白质的序列叫做一般不能够编码蛋白质的序列叫做内含子内含子。 2.PCR技术技术多聚酶链式反应（体外） 原理：原理： 前提：前提： 条件：条件： PCR扩增仪扩增仪 DNA双链复制的基本原理双链复制的基本原理 一段已知目的基因的核苷酸序列一段已知目的基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸（四种脱氧核苷酸（dN
7、TPdNTP） 一对引物一对引物 热稳定热稳定DNADNA聚合酶聚合酶( (TaqTaq酶酶） DNADNA的两条链为模板的两条链为模板 温度控制温度控制 方式：方式： 以以_形式扩增，即形式扩增，即_（n n为扩增循环的为扩增循环的 次数）次数） 指数指数 2 2n n 过程过程 变性、退火、延伸三步曲变性、退火、延伸三步曲 变性：变性：加热至加热至90909595 双链双链DNADNA解链成为单链解链成为单链 DNADNA 退火：退火：冷却至冷却至55556060 部分引物与模板的单链部分引物与模板的单链 DNADNA的特定互补部位相配的特定互补部位相配 对和结合对和结合 延伸：延伸：加热
8、至加热至70707575 以目的基因为模板，合以目的基因为模板，合 成互补的新成互补的新DNADNA链链 变性变性 退火退火 延伸延伸 需要提供合成模板；需要提供合成模板； 合成的方向都是合成的方向都是 5 533。 DNADNA聚合酶不能起始新聚合酶不能起始新 的的DNADNA链，必须要有引物链，必须要有引物 提供提供3 3- -OHOH； 核糖核糖 脱氧核糖脱氧核糖 5 5/ / 3 3/ / G GG G T TC C 3 3/ / 5 5/ / G GA A C CC C 5 5/ / 3 3/ / 引物引物 G GG G 1.目的基因目的基因DNA受热变性，解链；受热变性，解链； 2
9、.引物与单链互补结合；引物与单链互补结合； 3.合成链在合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。聚合酶作用下进行延伸。 5 5/ / 3 3/ / A AG G 引物引物 利用利用PCRPCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因 胞内胞内DNADNA复制与复制与PCRPCR技术的比较：技术的比较： 胞内胞内DNADNA复制复制 PCRPCR 解旋解旋 解旋酶，边解旋边复制解旋酶，边解旋边复制 酶酶 解旋酶解旋酶/DNA/DNA聚合酶聚合酶 模板模板 DNADNA母链母链 引物引物 RNARNA 能量能量+ +原原 料料 dNTPdNTP 温度温度 最适温度最适温度 高温变性高温变性 Taq Taq D
10、NADNA聚合酶聚合酶 DNADNA母链母链 dNTPdNTP 3 3个温度个温度 DNADNA或或RNARNA 1.1.下表关于基因工程中有关基因操作下表关于基因工程中有关基因操作 的名词及对应的内容，正确的组合是的名词及对应的内容，正确的组合是 2 2、下列属于获取目的基因的方法的是、下列属于获取目的基因的方法的是( )( ) 利用利用mRNAmRNA反转录形成反转录形成 从基因组文库中提取从基因组文库中提取 从受体细胞中提取从受体细胞中提取 利用利用PCRPCR技术技术 利用利用DNADNA转录转录 人工合成人工合成 A.A. B.B. C.C. D.D. 随堂闯关随堂闯关 3、在遗传工
11、程中，若有一个控制有利性状的在遗传工程中，若有一个控制有利性状的DNADNA分分 子片段为子片段为ATGTGATGTGTACACTACAC，要使其数量增多，可用，要使其数量增多，可用PCRPCR 技术进行人工复制，复制时应给予的条件是技术进行人工复制，复制时应给予的条件是 双链双链DNADNA分子为模板分子为模板 ATGTGATGTG或或TACACTACAC模板链模板链 四四 种脱氧核苷酸种脱氧核苷酸 四种核苷酸四种核苷酸 DNADNA聚合酶聚合酶 热稳定热稳定 DNADNA聚合酶聚合酶引物引物 温度变化温度变化 恒温恒温 A B C D 4、在基因工程中，把选出的目的基因（共、在基因工程中，
12、把选出的目的基因（共1000个脱氧个脱氧 核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是460个）放入个）放入DNA 扩增仪中扩增扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱 氧核苷酸的个数是氧核苷酸的个数是 A.540个个 B.8100个个 C.17280个个 D.7560个个 消耗的脱氧核苷酸数消耗的脱氧核苷酸数 设亲代DNA分子中含有某种脱氧核苷酸数 m个，则： (1)经过n次复制，共需要消耗游离的该脱氧核 苷酸数： (2)在第n次复制时，共需要消耗游离的该脱氧 核苷酸数： m (2n-1) m 2n-1 （1 1）用一定的）用一定
13、的_ 切割质粒，使其出现一个切割质粒，使其出现一个 切口，露出切口，露出_。 （2 2）用）用_ 切断目的基因，使其产生切断目的基因，使其产生 _。 （3 3）将切下的目的基因片段插入质粒的）将切下的目的基因片段插入质粒的_处，处， 再加入适量再加入适量_，形成了一个重组，形成了一个重组DNADNA分分 子（重组质粒）子（重组质粒） 限制酶限制酶 黏性末端黏性末端 同一种限制酶同一种限制酶 相同相同的黏性末端的黏性末端 切口切口 DNADNA连接酶连接酶 重组质粒形成过程重组质粒形成过程: : 科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的 过程和不懈的努力，才获
14、得成功。过程和不懈的努力，才获得成功。 起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体 质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基 因在棉花体内没有表达。因在棉花体内没有表达。 然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子( (抗抗 虫基因首端虫基因首端) )，导入棉花受精卵，长成的棉花植株，导入棉花受精卵，长成的棉花植株 还是没有抗虫能力。科学家又在有还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子启动子、抗虫抗虫 基因的质粒中插入终止子基因的质粒中插入终止子( (抗虫基因末端抗虫基因末端) )，导入，导
15、入 棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。 资资 料料: 基因表达载体构建基因表达载体构建 基因表达载体的组成：基因表达载体的组成： 目的：使目的基因在受体细胞中稳定存目的：使目的基因在受体细胞中稳定存 在，并且可以遗传给下一代，同时使目在，并且可以遗传给下一代，同时使目 的基因能够表达和发挥作用。的基因能够表达和发挥作用。 a、目的基因、目的基因 b、启动子、启动子 c、终止子、终止子 d、标记基因、标记基因 启动转录启动转录, ,是是RNARNA聚合酶的聚合酶的 识别识别和和结合结合部位部位 位于基因的末端位于基因的末端, ,终止转录终止转录
16、检测检测目的基因是否导入受体细胞，目的基因是否导入受体细胞， 筛选筛选出含目的基因的受体细胞出含目的基因的受体细胞 1、（多选）一个基因表达载体的构建应包括、（多选）一个基因表达载体的构建应包括 A目的基因目的基因 B启动子启动子 C终止子终止子 D标记基因标记基因 ABCD 2、下列关于基因表达载体的叙述不正确的是、下列关于基因表达载体的叙述不正确的是 A启动子是与启动子是与RNA聚合酶识别和结合的部位，是起聚合酶识别和结合的部位，是起 始密码始密码 B启动子和终止子都是特殊结构的启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对短片段，对 mRNA的转录起调控作用的转录起调控作用 C标记基因是为
17、了鉴别受体细胞中是否有目的基因标记基因是为了鉴别受体细胞中是否有目的基因 从而便于筛选从而便于筛选 D基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同基因表达载体的构建视受体细胞及导入方式不同 而有所差别而有所差别 A 3、目前转基因工程可以目前转基因工程可以 A. 打破地理隔离但不能突破生殖隔离打破地理隔离但不能突破生殖隔离 B. 打破生殖隔离但不能突破地理隔离打破生殖隔离但不能突破地理隔离 C. 完全突破地理隔离和生殖隔离完全突破地理隔离和生殖隔离 D. 部分突破地理隔离和生殖隔离部分突破地理隔离和生殖隔离 C ( (三三) )将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞 常用的受体细胞：常用的
18、受体细胞： 动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。 将目的基因导入受体细胞的原理：将目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 转化转化 目的基因进入目的基因进入_内，并且在内，并且在 受体细胞内维持受体细胞内维持_和和_的过程的过程 受体细胞受体细胞 稳定稳定 表达表达 导入植物导入植物 细胞：细胞： （三）将目的基因导入受体细胞（三）将目的基因导入受体细胞 导入动物导入动物 细胞：细胞： 导入微生物细胞：导入微生物细胞： 受体细胞受体细胞 导入方法导入方法 体细胞体细胞 受精卵受精卵 受精
19、卵受精卵 显微注射法显微注射法 Ca2 处理法 处理法 农杆菌转化法农杆菌转化法 基因枪法基因枪法 花粉管通道法花粉管通道法 1、将目的基因导入植物细胞、将目的基因导入植物细胞 （1）农杆菌）农杆菌 转化法转化法 特点特点: 能感染能感染双子叶植物双子叶植物和和祼子植物祼子植物,对对 单子叶植物无感染能力单子叶植物无感染能力 Ti质粒质粒的的TDNA可转移至受体细可转移至受体细 胞并胞并整合整合到其染色体上到其染色体上 转化过程转化过程: Ti质粒质粒 目的基因目的基因 构建构建 表表 达达 载载 体体 导入导入 植植 物物 细细 胞胞 插入插入 植物细胞植物细胞 染色染色DNA 表达表达 新
20、新 性性 状状 转入转入 农农 杆杆 菌菌 （2）基因枪法）基因枪法 基因枪法又称基因枪法又称微弹轰击法微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，是利用压缩气体产生的动力， 将包裹在金属颗粒表面的表达载体将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目打入受体细胞中，使目 的基因与其整合并表达的方法。的基因与其整合并表达的方法。 （3）花粉通道法）花粉通道法 植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。植物花粉在柱头上萌发后，花粉管要穿过花柱直通胚囊。 花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合花粉管通道法就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合 前，剪去柱头，然后，滴
21、加前，剪去柱头，然后，滴加DNA（含目的基因），使目的基（含目的基因），使目的基 因借助花粉管通道进入受体细胞。因借助花粉管通道进入受体细胞。 2、将目的基因导入动物细胞、将目的基因导入动物细胞 方法方法: 显微注射技术显微注射技术 操作程序操作程序: 提纯含目的基提纯含目的基 因表达载体因表达载体 取受精卵取受精卵 显微注射显微注射 移植到子宫移植到子宫 受精卵发育受精卵发育 新性状动物新性状动物 3、将目的基因导入微生物细胞、将目的基因导入微生物细胞 常用法常用法：Ca2+处理处理 常用菌常用菌：大肠杆菌：大肠杆菌 微生物作受体细胞原因：微生物作受体细胞原因： 繁殖快繁殖快、多为单细胞、遗
22、传物质相对少、多为单细胞、遗传物质相对少 过程：过程： Ca2+处理处理 大肠杆菌大肠杆菌 感受态感受态 细胞细胞 表达载体表达载体 与感受态与感受态 细胞混合细胞混合 感受态细感受态细 胞吸收胞吸收 DNA 增大细胞壁的通透性增大细胞壁的通透性 1、基因工程中科学家常用细菌、酵母菌等微生物作、基因工程中科学家常用细菌、酵母菌等微生物作 为受体细胞，原因是为受体细胞，原因是 A结构简单、操作方便结构简单、操作方便 B繁殖速度快繁殖速度快 C遗传物质含量少、简单遗传物质含量少、简单 D性状稳定、变异少性状稳定、变异少 2、基因工程常用的受体细胞有、基因工程常用的受体细胞有 大肠杆菌大肠杆菌 枯草
23、杆菌枯草杆菌 支原体支原体 动植物细胞动植物细胞 A B C D B D 3、基因工程是在、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在分子水平上进行设计施工的，在 基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 A.人工合成基因人工合成基因 B.目的基因与运载体结合目的基因与运载体结合 C.将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞 D.目的基因的检测和表达目的基因的检测和表达 C 4. 采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因 的做法正确的是的做法正确的是 将毒素蛋白质注射到棉受精卵中
24、将毒素蛋白质注射到棉受精卵中 将编码毒素蛋白将编码毒素蛋白 的的DNA序列注射到棉受精卵中序列注射到棉受精卵中 将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的 DNA序列与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精序列与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精 卵中卵中 将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNA序列与质粒重组，导入序列与质粒重组，导入 细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养 A B C D C 5. 下列属于基因工程中导入目的基因方法的是下列属于基因工程中导入目的基因方法的是 农杆菌转化法农杆菌转化法 基因枪法基因枪法 花粉管道法花粉管道法 显微注显微注 射法射法 胚胎
25、移植胚胎移植 DNA分子杂交法分子杂交法 A B C D C 目的基因是否插入转基目的基因是否插入转基 因生物染色体的因生物染色体的DNA上上 （四）目的基因的检测与鉴定（四）目的基因的检测与鉴定 目的基因是否表达：目的基因是否表达： 目的基因是否转录目的基因是否转录： 方法方法: : DNADNA分子杂交分子杂交 方法方法: : 分分 子子 杂杂 交交 方法方法: : 抗原抗体杂交抗原抗体杂交 鉴定鉴定 抗虫性鉴定、抗病性鉴定、生物抗虫性鉴定、抗病性鉴定、生物 活性鉴定等（活性鉴定等（生理、性状水平的生理、性状水平的 检测检测） 检测检测 知识延伸知识延伸DNADNA分子杂交技术分子杂交技术
26、 该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链该方法是根据碱基互补配对原则，把互补的双链 DNA解开，把单股的解开，把单股的DNA小片段用同位素、荧光分子或小片段用同位素、荧光分子或 化学发光催化剂等进行标记，之后同被检测的化学发光催化剂等进行标记，之后同被检测的DNA中的中的 同源互补序列杂交，从而检出所要查明的同源互补序列杂交，从而检出所要查明的DNA或基因。或基因。 基因工程概念解读： 基本原理基本原理 操作环境操作环境 操作对象操作对象 操作水平操作水平 基本过程基本过程 结果结果 优点优点 不足不足 实例实例 基因拼接成功基因拼接成功 的原因的原因 成功表达原因成功表达原因 基因重组基
27、因重组 体外体外 基因基因 DNA分子水平分子水平 剪切剪切拼接拼接导入导入表达表达 新的生物类型和生物产品新的生物类型和生物产品 密码子的通用性：密码子的通用性：生物界共用一套相同的密生物界共用一套相同的密 码子码子 基本单位相同基本单位相同 结构相同结构相同 碱基配对方式相同碱基配对方式相同 安全性问题：生物安全、食品安全、环境安全安全性问题：生物安全、食品安全、环境安全 转基因抗虫棉转基因抗虫棉 打破生殖隔离打破生殖隔离定向改造生物定向改造生物时间短时间短 1、基因工程中科学家常用细菌、酵母菌等微生物作、基因工程中科学家常用细菌、酵母菌等微生物作 为受体细胞，原因是为受体细胞，原因是 A
28、结构简单、操作方便结构简单、操作方便 B繁殖速度快繁殖速度快 C遗传物质含量少、简单遗传物质含量少、简单 D性状稳定、变异少性状稳定、变异少 2、基因工程常用的受体细胞有、基因工程常用的受体细胞有 大肠杆菌大肠杆菌 枯草杆菌枯草杆菌 支原体支原体 动植物细胞动植物细胞 A B C D B D 2、基因工程是在、基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的，在分子水平上进行设计施工的，在 基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是 A.人工合成基因人工合成基因 B.目的基因与运载体结合目的基因与运载体结合 C.将目的基因导入受体细胞将目的基因导
29、入受体细胞 D.目的基因的检测和表达目的基因的检测和表达 C 3. 采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因采用基因工程的方法培育抗虫棉，下列导入目的基因 的做法正确的是的做法正确的是 将毒素蛋白质注射到棉受精卵中将毒素蛋白质注射到棉受精卵中 将编码毒素蛋白将编码毒素蛋白 的的DNA序列注射到棉受精卵中序列注射到棉受精卵中 将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的 DNA序列与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精序列与细菌质粒重组，注射到棉的子房并进入受精 卵中卵中 将编码毒素蛋白的将编码毒素蛋白的DNA序列与质粒重组，导入序列与质粒重组，导入 细菌感染棉的体细胞，再进行组织培养细菌感染棉的体
30、细胞，再进行组织培养 A B C D C 4. 下列属于基因工程中导入目的基因方法的是下列属于基因工程中导入目的基因方法的是 农杆菌转化法农杆菌转化法 基因枪法基因枪法 花粉管道法花粉管道法 显微注显微注 射法射法 胚胎移植胚胎移植 DNA分子杂交法分子杂交法 A B C D C 5、应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基 因探针才能达到检测疾病的目的因探针才能达到检测疾病的目的。这里的基因探针是这里的基因探针是 A用于检测疾病的医疗器械用于检测疾病的医疗器械 B用放射性同位素或荧光分子等标记的用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子分子 C合成
31、合成-珠蛋白的珠蛋白的DNA D合成苯丙羟化酶的合成苯丙羟化酶的DNA片段片段 6.细菌的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗细菌的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗 性基因在基因工程中的主要作用是性基因在基因工程中的主要作用是 A提高受体细胞在自然环境中的耐药性提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B B有利于对目的基因是否导入进行检测有利于对目的基因是否导入进行检测 C C增加质粒分子的分子量增加质粒分子的分子量 D D便于与外源基因连接便于与外源基因连接 7.7. 有关基因工程的叙述正确的是有关基因工程的叙述正确的是 A A限制酶只在获得目的基因时才用限制酶只在获得目的基因时才用 B B重
32、组质粒的形成是在细胞内完成的重组质粒的形成是在细胞内完成的 C C质粒都可作为运载体质粒都可作为运载体 D D蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 8.哪项不是基因表达载体的组成部分哪项不是基因表达载体的组成部分( ) A.启动子 B.终止密码 C.标记基因 D.目的基因 9.下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法( ) A基因枪法 B显微注射法 C.农杆菌转化法 D花粉管通道法 1010）（）（多选）人们利用基因工程的方法，用大肠杆菌生产多选）人们利用基因工程的方法，用大肠杆菌生产 人类胰岛素，这一过程涉及到（人类胰岛素，这一过程涉及到（ ） A.用适当的酶对胰岛素基因与运载体进行切割并连接用适当的酶对胰岛素基因与运载体进行切割并连接 B.把重组后的把重组后的DNA分子导入受体细菌内进行扩增分子导入受体细菌内进行扩增 C.检测重组检测重组DNA分子是否导入受体细菌内并表达出性状分子是否导入受体细菌内并表达出性状 D.筛选出能产生胰岛素的“工程菌”筛选出能产生胰岛素的“工程菌” ABCD
