1、革兰氏阴性杆菌大肠杆菌介绍一一、大肠杆菌的一般特性、大肠杆菌的一般特性v1、G直短杆菌，两端钝圆，散在或成对。革兰染色革兰染色2、周身鞭毛，能运动，无芽孢，有的有荚膜。3、代谢能力强，代谢类型是异养兼性厌氧型。二二、培养及生化特性、培养及生化特性v1、培养特性、培养特性 v 兼性厌氧；v 最适生长温度37，最适生长pH7.27.6；v 普通琼脂培养基：生长良好，圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约23mm；v 普通肉汤培养基：均匀浑浊，管底有粘性沉淀，液面管壁有菌环。v 肠道菌鉴别培养基v麦康凯琼脂培养基：红色菌落。v伊红美兰琼脂培养基：黑色带金属闪光的菌落。vSS琼脂培养基：一般
2、不生长或生长较差，生长者呈红色。v 血平板：一些致病性菌株常溶血。麦康凯琼脂培养基麦康凯琼脂培养基伊红美兰琼脂培养基伊红美兰琼脂培养基SS琼脂培养基琼脂培养基血平板血平板 2、生化特性生化特性I：吲哚试验M：甲基红试验V：V-P试验C：枸橼酸盐利用实验v（1）三糖铁培养基）三糖铁培养基v配方配方v牛肉膏 5g 硫酸亚铁硫酸亚铁 0.2gv氯化钠 5g 蒸馏水 1000mLv蛋白胨 20g 硫代硫酸钠 0.2gv蛋白胨 5g 琼脂 1 2gv乳糖乳糖 10g 2%酚红溶液 12.5mlv蔗糖蔗糖 10gv葡萄糖葡萄糖 1gv原理原理v测定细菌对葡萄糖、乳糖及蔗糖的发酵反应，以及能否产生硫化氢。可
3、鉴别肠道菌。葡萄糖乳糖蔗糖硫酸亚铁大肠杆菌沙门菌能产硫化氢菌株发酵葡萄糖和乳糖；大量产酸产气底层和斜面均呈黄色，底层有气泡只发酵葡萄糖产酸产气底层黄色，斜面保持红色因形成硫化亚铁而使培养基呈黑色对照对照假单胞菌假单胞菌志贺氏菌志贺氏菌 沙门氏菌沙门氏菌 大肠杆菌大肠杆菌 变形杆菌变形杆菌三糖铁培养基三糖铁培养基吲哚试验吲哚试验V-P试验试验枸橼酸盐试验枸橼酸盐试验甲基红试验甲基红试验IMViC试验试验三、大肠杆菌的基本结构三、大肠杆菌的基本结构v(一一)细胞壁细胞壁 v大肠杆菌的细胞壁分外膜和肽聚糖层。v外膜是大肠杆菌细胞壁的主要成分，主要由磷脂、蛋白质和脂多糖组成。v脂多糖是革兰氏阴性细菌的
4、内毒素，也是革兰氏阴性细菌细胞壁的特有成分，主要与抗原性、致病性及对噬菌体的敏感性有关。外膜外膜周质周质细胞质膜细胞质膜（二）质粒（二）质粒vF因子：又称致育因子，插入、复制和转移的功能。有F因子的大肠杆菌为雄性，用F+表示，不含F因子的大肠杆菌称为雌性，用F-表示。通过F+和F-细菌的接合，F因子可经性菌毛传递给F-菌株，使F-菌株转变为F+菌株。vR因子：抗性转移因子和抗性决定因子。vCol因子：产大肠杆菌素因子，编码合成大肠杆菌素。四、大肠杆菌的特殊结构v1、荚膜 荚膜具有抗原性，构成了大肠杆菌的表面抗原，即K抗原。v2、鞭毛v由鞭毛蛋白组成，构成了细菌的鞭毛抗原，与运动有关。v3、菌毛
5、 在细胞表面还含有一种比鞭毛更细更短更硬的丝状体叫菌毛，可分为普通菌毛和性菌毛。大肠杆菌可以透过接合作用传递遗传物质。五、抗原及血清型v（一）抗原（一）抗原vO抗原，即菌体抗原，为细胞壁脂多糖。该抗原刺激机体主要产生IgM类抗体。vH抗原，即鞭毛抗原，H抗原主要刺激机体产生IgG类抗体，与其他肠道菌基本无交叉反应。vK抗原，即荚膜抗原，位于O抗原外层，为多糖。具有K抗原的菌株不能被其相应的抗O血清所凝集叫“O不凝集性”。v据耐热性不同，K抗原又分为：L、A和B 三型。（2）产志贺毒素大肠杆菌(STEC）如：O8:K23:H19，表示该菌具有O抗原8，K抗原23，H抗原为19。1肠道外感染：多为
6、内源性感染，以泌尿系感染为主；保护肠道的微生态平衡。葡萄糖 1g据耐热性不同，K抗原又分为：L、A和B 三型。其他病料可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。2、周身鞭毛，能运动，无芽孢，有的有荚膜。具有K抗原的菌株不能被其相应的抗O血清所凝集叫“O不凝集性”。麦康凯琼脂培养基：红色菌落。保护肠道的微生态平衡。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感。1、G直短杆菌，两端钝圆，散在或成对。蛋白胨 5g 琼脂 1 2g（4）肠出血性大肠杆菌（EHEC）1、G直短杆菌，两端钝圆，散在或成对。大肠杆菌可以透过接合作用传递遗传物质。当与某一种多价O血清凝集时，在与该多价O血清的单价O血清做实验。最适生长温度
7、37，最适生长pH7.3、生化鉴定：大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和木胶糖等产酸产气。vL型K抗原：对热敏感，100 1h破坏其抗原性，并失去与相应抗体的结合力和凝集性，位于被膜中，偶见于荚膜中。vA型K抗原：耐100 1h，但121 2.5h破坏其抗原性和O不凝集性，但保留与相应抗体结合能力。位于荚膜中，抗A血清可使具有相应A抗原的菌体出现荚膜肿胀现象。vB型K抗原：100 1h 破坏其抗原性与相应抗体的凝集性，但保留其与相应抗体结合力。v（二）血清型（二）血清型v可用O:K:H排列表示其血清型。如：O8:K23:H19，表示该菌具有O抗原8，K抗原23，H抗
8、原为19。v致人畜腹泻的产肠毒素大肠杆菌，除含K抗原外，还可含有蛋白质性粘附素抗原。对粘附素抗原应并列写于多糖K抗原之后。如：O8:K87，K88:H19 中 K88即为粘附素抗原。六、致病性六、致病性v（一）致病物质（一）致病物质v1、定居因子（Colonization factor，CF）；也称粘附素，即大肠杆菌的菌毛。v2、肠毒素是肠产毒性大肠杆菌在生长繁殖过程中释放的外毒素，分为耐热和不耐热两种。v耐热（ST）：10020min不破坏，免疫原性弱。v不耐热（LT）：65 30min破坏，免疫原性强。v3其他：细胞壁脂多糖的类脂A具有毒性；K抗原有抗吞噬作用，有抵抗抗体和补体的作用。v（
9、二）所致疾病（二）所致疾病v1肠道外感染肠道外感染：多为内源性感染，以泌尿系感染为主；大肠杆菌可侵入血液，引起败血症；大肠杆菌性脑膜炎。v2急性腹泻急性腹泻v（1）肠产毒性大肠杆菌（ETEC）v（2）产志贺毒素大肠杆菌(STEC）v（3）肠致病性大肠杆菌（EPEC）v（4）肠出血性大肠杆菌（EHEC）v（5）肠侵袭性大肠杆菌（EIEC）v（6）肠粘附性大肠杆菌（EAEC）v肠产毒性大肠杆菌（ETEC）ETEC是致人和幼畜腹泻最常见的病原菌；毒力因子有粘附素性菌毛和肠毒素。致病过程致病过程七、抵抗力七、抵抗力v大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强。v55加热60min或60加热15min仍有部分
10、细菌存活。v胆盐、煌绿等对非致病性大肠杆菌有选择性抑制作用，而对致病性大肠杆菌无抑制作用，所以用肠道选择鉴别培养基来分离致病性大肠杆菌。v对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感。八、非致病性大肠杆菌的作用八、非致病性大肠杆菌的作用v保护肠道的微生态平衡。消耗肠道内的氧气，创造厌氧环境，利于厌氧菌的生长；分解代谢产物供厌氧菌生长。v能合成维生素K和B。v对外袭菌有拮抗作用。某些大肠杆菌能产生大肠菌素，对一些病原微生物具有拮抗作用。九、微生物学的诊断九、微生物学的诊断v1、病料的采集、病料的采集：肠道外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。v2、分离培养、分离培养：粪便标本直接接种肠道杆菌选择
11、性培养基。其他病料可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。37培养1824h后，观察菌落并涂片染色镜检。v3、生化鉴定：、生化鉴定：大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和木胶糖等产酸产气。vIMViC试验为“+-”。即为典型大肠杆菌。病料病料腹泻或水肿病例腹泻或水肿病例败血症病例败血症病例常采集粪便或肠粘膜刮取物常采集粪便或肠粘膜刮取物常采集血液及其病变组织常采集血液及其病变组织麦康凯或伊红美兰琼脂平板划线麦康凯或伊红美兰琼脂平板划线血琼脂或麦康凯琼脂平板划线血琼脂或麦康凯琼脂平板划线挑取疑似大肠杆菌菌落挑取疑似大肠杆菌菌落510个分别在琼脂平板进行纯培养个分别在
12、琼脂平板进行纯培养革兰染色镜检革兰染色镜检接种接种TSI琼脂培养基琼脂培养基革兰氏染色阴性革兰氏染色阴性生化试验生化试验血清学鉴定血清学鉴定猪水肿病菌株猪水肿病菌株猪腹泻菌株猪腹泻菌株Stx2e检测检测肠毒素检测肠毒素检测临床上只检测O抗原蔗糖 10g1肠道外感染：多为内源性感染，以泌尿系感染为主；稀释血清与抗原悬液在10mm75mm试管内等量混合，做试管凝集试验。1、病料的采集：肠道外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。外膜是大肠杆菌细胞壁的主要成分，主要由磷脂、蛋白质和脂多糖组成。具有K抗原的菌株不能被其相应的抗O血清所凝集叫“O不凝集性”。当与某一种多价O血清凝集时，在与该
13、多价O血清的单价O血清做实验。假定试验：取经生化试验证实的大肠杆菌培养物，用致病性大肠杆菌，侵袭性大肠杆菌和产毒素大肠杆菌多价O血清和出血性大肠杆菌的O157血清做玻片凝集试验。（1）肠产毒性大肠杆菌（ETEC）据耐热性不同，K抗原又分为：L、A和B 三型。具有K抗原的菌株不能被其相应的抗O血清所凝集叫“O不凝集性”。3、代谢能力强，代谢类型是异养兼性厌氧型。55加热60min或60加热15min仍有部分细菌存活。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感。大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强。2、周身鞭毛，能运动，无芽孢，有的有荚膜。1、病料的采集：肠道外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便
14、。如：O8:K23:H19，表示该菌具有O抗原8，K抗原23，H抗原为19。证实试验：制备O抗原悬液。Col因子：产大肠杆菌素因子，编码合成大肠杆菌素。4、血清型鉴定、血清型鉴定v假定试验：取经生化试验证实的大肠杆菌培养物，用致病性大肠杆菌，侵袭性大肠杆菌和产毒素大肠杆菌多价O血清和出血性大肠杆菌的O157血清做玻片凝集试验。v当与某一种多价O血清凝集时，在与该多价O血清的单价O血清做实验。如与某一单价O血清发生强凝集反应，则为假定试验阳性。v证实试验：制备O抗原悬液。原效价为1：1601：320的O血清，用0.5%盐水稀释至1：40。稀释血清与抗原悬液在10mm75mm试管内等量混合，做试管
15、凝集试验。混匀后放于50水浴箱内，经16h后观察结果。如出现凝集，可证实为该O抗原。证实试验：制备O抗原悬液。5%盐水稀释至1：40。如：O8:K23:H19，表示该菌具有O抗原8，K抗原23，H抗原为19。有F因子的大肠杆菌为雄性，用F+表示，不含F因子的大肠杆菌称为雌性，用F-表示。稀释血清与抗原悬液在10mm75mm试管内等量混合，做试管凝集试验。蛋白胨 5g 琼脂 1 2g大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强。据耐热性不同，K抗原又分为：L、A和B 三型。位于荚膜中，抗A血清可使具有相应A抗原的菌体出现荚膜肿胀现象。最适生长温度37，最适生长pH7.其他病料可同时接种血琼脂平板和肠道杆
16、菌选择性培养基。（2）产志贺毒素大肠杆菌(STEC）对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感。3、生化鉴定：大部分菌株发酵乳糖产酸产气，并发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和木胶糖等产酸产气。测定细菌对葡萄糖、乳糖及蔗糖的发酵反应，以及能否产生硫化氢。大肠杆菌可以透过接合作用传递遗传物质。大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强。55加热60min或60加热15min仍有部分细菌存活。保护肠道的微生态平衡。由鞭毛蛋白组成，构成了细菌的鞭毛抗原，与运动有关。大肠杆菌可侵入血液，引起败血症；该抗原刺激机体主要产生IgM类抗体。Col因子：产大肠杆菌素因子，编码合成大肠杆菌素。胆盐、煌绿等对非致病性大肠杆菌有选择性
17、抑制作用，而对致病性大肠杆菌无抑制作用，所以用肠道选择鉴别培养基来分离致病性大肠杆菌。大肠杆菌的细胞壁分外膜和肽聚糖层。底层和斜面均呈黄色，底层有气泡其他病料可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感。蛋白胨 20g 硫代硫酸钠 0.毒力因子有粘附素性菌毛和肠毒素。氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL常采集粪便或肠粘膜刮取物 最适生长温度37，最适生长pH7.55加热60min或60加热15min仍有部分细菌存活。测定细菌对葡萄糖、乳糖及蔗糖的发酵反应，以及能否产生硫化氢。其他病料可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。稀释血清与抗原悬液在10mm75mm试管
18、内等量混合，做试管凝集试验。分解代谢产物供厌氧菌生长。1、病料的采集：肠道外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。IMViC试验为“+-”。胆盐、煌绿等对非致病性大肠杆菌有选择性抑制作用，而对致病性大肠杆菌无抑制作用，所以用肠道选择鉴别培养基来分离致病性大肠杆菌。证实试验：制备O抗原悬液。该抗原刺激机体主要产生IgM类抗体。葡萄糖 1g对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感。大肠杆菌可侵入血液，引起败血症；外膜是大肠杆菌细胞壁的主要成分，主要由磷脂、蛋白质和脂多糖组成。（6）肠粘附性大肠杆菌（EAEC）牛肉膏 5g 硫酸亚铁 0.测定细菌对葡萄糖、乳糖及蔗糖的发酵反应，以及能否产生硫化氢。
19、其他病料可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。大肠杆菌可以透过接合作用传递遗传物质。H抗原，即鞭毛抗原，H抗原主要刺激机体产生IgG类抗体，与其他肠道菌基本无交叉反应。如出现凝集，可证实为该O抗原。耐热（ST）：10020min不破坏，免疫原性弱。Col因子：产大肠杆菌素因子，编码合成大肠杆菌素。（4）肠出血性大肠杆菌（EHEC）55加热60min或60加热15min仍有部分细菌存活。四、大肠杆菌的特殊结构对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感。保护肠道的微生态平衡。如：O8:K23:H19，表示该菌具有O抗原8，K抗原23，H抗原为19。牛肉膏 5g 硫酸亚铁 0.3、生化鉴定：大部分菌株发酵
20、乳糖产酸产气，并发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和木胶糖等产酸产气。（4）肠出血性大肠杆菌（EHEC）蔗糖 10g因形成硫化亚铁而使培养基呈黑色其他病料可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。蔗糖 10g稀释血清与抗原悬液在10mm75mm试管内等量混合，做试管凝集试验。血琼脂或麦康凯琼脂平板划线位于荚膜中，抗A血清可使具有相应A抗原的菌体出现荚膜肿胀现象。3、代谢能力强，代谢类型是异养兼性厌氧型。1、病料的采集：肠道外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。如：O8:K23:H19，表示该菌具有O抗原8，K抗原23，H抗原为19。底层黄色，斜面保持红色1、G直短杆菌，两端钝圆，散在或成对。如：O8:K87，K88:H19 中 K88即为粘附素抗原。大肠杆菌对热的抵抗力较其他肠道杆菌强。具有K抗原的菌株不能被其相应的抗O血清所凝集叫“O不凝集性”。谢谢观看！
