1、球菌球菌n链球菌属链球菌属-猪链球菌猪链球菌n蜂房球菌蜂房球菌 肠杆菌科肠杆菌科n埃希菌属埃希菌属大肠埃希氏大肠埃希氏菌菌n沙门氏菌属沙门氏菌属-沙门氏菌沙门氏菌 巴氏杆菌科及相关属巴氏杆菌科及相关属n巴氏杆菌属巴氏杆菌属-多杀多杀巴氏杆菌巴氏杆菌n里氏杆菌属里氏杆菌属-鸭疫鸭疫里氏杆菌里氏杆菌n嗜血杆菌属嗜血杆菌属-副猪副猪嗜血杆菌嗜血杆菌n放线杆菌属放线杆菌属-胸膜胸膜肺炎放线杆菌肺炎放线杆菌 革兰氏阴性需氧杆菌革兰氏阴性需氧杆菌n布鲁氏菌属布鲁氏菌属-布鲁布鲁氏菌氏菌n伯氏菌属伯氏菌属-鼻疽伯鼻疽伯氏菌氏菌n波氏菌属波氏菌属-支气管支气管败血波氏菌败血波氏菌 革兰氏阳性无芽孢杆菌革兰氏阳
2、性无芽孢杆菌n李氏杆菌属李氏杆菌属-产单产单核细菌李氏杆菌核细菌李氏杆菌 革兰氏阳性产芽孢杆菌革兰氏阳性产芽孢杆菌n芽孢杆菌属芽孢杆菌属-炭疽炭疽芽孢杆菌芽孢杆菌n梭菌属梭菌属-产气荚膜产气荚膜杆菌杆菌n拟幼虫芽孢杆菌拟幼虫芽孢杆菌 分支杆菌分支杆菌n牛分支杆菌牛分支杆菌n副结核分支杆菌副结核分支杆菌 螺旋体螺旋体n猪痢短螺旋体猪痢短螺旋体 支原体支原体n鸡毒支原体鸡毒支原体n猪肺炎支原体猪肺炎支原体n牛支原体牛支原体 真菌真菌n白僵菌白僵菌n蜜蜂球囊菌变种（蜜蜂蜜蜂球囊菌变种（蜜蜂病原）病原）类菌质体类菌质体n蜜蜂螺旋菌质体蜜蜂螺旋菌质体 第第1 1节节 球菌球菌n葡萄球菌属葡萄球菌属和和链
3、球菌属链球菌属是人和动物的重是人和动物的重要致病菌。要致病菌。一、链球菌属一、链球菌属 链球菌属细菌是化脓性链球菌属细菌是化脓性球菌中的另一大类常见细菌，球菌中的另一大类常见细菌，广泛分布于自然界，多数不广泛分布于自然界，多数不致病，有些可导致人或动物致病，有些可导致人或动物各种化脓性炎症、肺炎、乳各种化脓性炎症、肺炎、乳腺炎、败血症。腺炎、败血症。链球菌在血平板上的溶血现象分为链球菌在血平板上的溶血现象分为n型溶血链球菌型溶血链球菌 在菌落周围形成不透明的草在菌落周围形成不透明的草绿色溶血环，红细胞未溶解，血红蛋白变成绿绿色溶血环，红细胞未溶解，血红蛋白变成绿色。致病力不强，多为机会致病菌。
4、色。致病力不强，多为机会致病菌。n型溶血链球菌型溶血链球菌 菌落周围形成完全透明的溶菌落周围形成完全透明的溶血环，红细胞完全溶解。这类菌致病力强，常血环，红细胞完全溶解。这类菌致病力强，常引起人及动物各种疾病。引起人及动物各种疾病。n型溶血链球菌型溶血链球菌 菌落周围无溶血现象。一般菌落周围无溶血现象。一般为非致病菌。为非致病菌。1 1 形态及染色形态及染色猪链球菌猪链球菌球形或卵圆形，直径球形或卵圆形，直径0.6-1.0um0.6-1.0um。呈链。呈链状排列，链长短不一。状排列，链长短不一。致病性菌链长，液体培养基中菌链长。致病性菌链长，液体培养基中菌链长。2、培养及生化特性培养及生化特性
5、n大多数兼性厌氧，少数为专性厌氧。营养要求复大多数兼性厌氧，少数为专性厌氧。营养要求复 杂，需补充血液、血清、葡萄糖等。杂，需补充血液、血清、葡萄糖等。n在血液琼脂平板上形成灰白色、表面光滑、边缘在血液琼脂平板上形成灰白色、表面光滑、边缘整齐、直径整齐、直径0.5-0.75mm0.5-0.75mm的细小菌落。的细小菌落。n不同菌株溶血不一。在血清肉汤中易形成长链，不同菌株溶血不一。在血清肉汤中易形成长链，管底呈絮状沉淀。管底呈絮状沉淀。3.3.致病性及毒力因子致病性及毒力因子n可致猪脑膜炎、关节炎、肺炎、心内膜可致猪脑膜炎、关节炎、肺炎、心内膜炎、多发性浆膜炎、流产和局部脓仲。炎、多发性浆膜炎
6、、流产和局部脓仲。n二大类毒力因子二大类毒力因子n一类与黏附有关一类与黏附有关n一类毒素。一类毒素。4 微生物学诊断微生物学诊断n标本的采集：标本的采集：根据临床疾病类型的不同，采集适当的根据临床疾病类型的不同，采集适当的 标本标本渗出液、脓汁、乳腺炎乳液、脑脊髓液、渗出液、脓汁、乳腺炎乳液、脑脊髓液、尿液和感染组织。尿液和感染组织。n检验方法检验方法（一）直接检查：（一）直接检查：可直接涂片，革兰氏染色镜检。可直接涂片，革兰氏染色镜检。（二）分离培养（二）分离培养:在涂片前先接种血平板，在涂片前先接种血平板，3724-48h3724-48h。观察菌落形态和溶血情况。然后涂片染色镜检。观察菌落
7、形态和溶血情况。然后涂片染色镜检。（三）细菌鉴定：菌落形态、溶血特性、细菌形态、生（三）细菌鉴定：菌落形态、溶血特性、细菌形态、生 化特性。如定群、定型，则要作血清学试验。化特性。如定群、定型，则要作血清学试验。PCRPCR二、蜂房球菌二、蜂房球菌n欧洲幼虫腐臭病病原为蜂房球菌。一种欧洲幼虫腐臭病病原为蜂房球菌。一种蜜蜂幼虫病害。蜜蜂幼虫病害。第第2 2节节 肠杆菌科肠杆菌科大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌沙门氏菌沙门氏菌n肠杆菌科是由一大群生化和遗传上相关肠杆菌科是由一大群生化和遗传上相关的中等大小杆菌所组成。的中等大小杆菌所组成。n其共同特性为：其共同特性为：革兰阴性革兰阴性、非抗酸性非抗酸性、无
8、芽胞的兼性厌氧菌无芽胞的兼性厌氧菌。n本科细菌广泛分布于自然界，包括腐生本科细菌广泛分布于自然界，包括腐生菌、寄生菌和人及动物的病原菌。菌、寄生菌和人及动物的病原菌。代表属代表属n埃希菌属（埃希菌属（EscherichiaEscherichia）n沙门菌属（沙门菌属（SalmonellaSalmonella）大肠埃希菌大肠埃希菌 n本菌系人和温血动物肠道内正常菌群成本菌系人和温血动物肠道内正常菌群成员之一，终生伴随，经粪便不断散播于员之一，终生伴随，经粪便不断散播于周围环境。周围环境。n在环境卫生和食品卫生学上，常被用作在环境卫生和食品卫生学上，常被用作粪便直接或间接污染的检测指标。粪便直接或
9、间接污染的检测指标。1.1.形态及染色特性形态及染色特性n大肠杆菌为革兰阴性无芽胞的直杆菌，大肠杆菌为革兰阴性无芽胞的直杆菌，大小大小0.4-0.70.4-0.72-3m2-3m，n大多数菌株以周生鞭毛运动大多数菌株以周生鞭毛运动，但也有无，但也有无鞭毛的变异株。鞭毛的变异株。n某些致病菌株有荚膜或微荚膜。某些致病菌株有荚膜或微荚膜。革兰染色的大肠杆菌革兰染色的大肠杆菌2.培养及生化特性 n本菌为兼性厌氧菌，本菌为兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好在普通培养基上生长良好，最适，最适生长生长温度为温度为3737，最适生长，最适生长pHpH为为7.2-7.47.2-7.4。n麦康凯琼脂上形成红色菌
10、落麦康凯琼脂上形成红色菌落；可与沙门氏菌区别。；可与沙门氏菌区别。n在在SSSS琼脂上一般不生长或生长较差，生长者呈红色。琼脂上一般不生长或生长较差，生长者呈红色。n一些致病性菌株在绵羊血平板上呈一些致病性菌株在绵羊血平板上呈溶血。溶血。n在营养琼脂上生长在营养琼脂上生长24h24h后，形成后，形成圆形凸起、光滑、湿润、圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落半透明、灰白色菌落，直径约，直径约2-3mm2-3mm。nS S型菌株在肉汤中培养型菌株在肉汤中培养18-24h18-24h，呈均匀浑浊，管底有粘性，呈均匀浑浊，管底有粘性沉淀，液面管壁有菌环。沉淀，液面管壁有菌环。n本菌能发酵多种碳水化
11、合物产酸产气。大多数菌株可本菌能发酵多种碳水化合物产酸产气。大多数菌株可迅速迅速发酵乳糖和山梨醇发酵乳糖和山梨醇 3.致病性及毒力因子致病性及毒力因子n一类是细菌寄生部位发生改变，如移位侵入一类是细菌寄生部位发生改变，如移位侵入肠外组织或器官，成为机会致病菌；肠外组织或器官，成为机会致病菌；n另一类是病原性大肠杆菌，与人和动物的大另一类是病原性大肠杆菌，与人和动物的大肠杆菌病（肠杆菌病（ColibacilosisColibacilosis）密切相关，正）密切相关，正常情况下极少存在于健康机体内常情况下极少存在于健康机体内 与动物疾病有关的大肠杆菌可分为五类：与动物疾病有关的大肠杆菌可分为五类：
12、n产肠毒素大肠杆菌，产肠毒素大肠杆菌，ETEC ETEC：幼畜腹泻幼畜腹泻n肠致病型大肠杆菌，肠致病型大肠杆菌，EPEC EPEC n产类志贺毒大肠杆菌，产类志贺毒大肠杆菌，SLTECSLTECn败血性大肠杆菌，败血性大肠杆菌，SEPECSEPECn尿道致病性大肠杆菌，尿道致病性大肠杆菌，UPECUPEC（2 2）与大肠杆菌致病有关的毒力因子）与大肠杆菌致病有关的毒力因子定居因子：定居因子：粘附素粘附素n包括菌毛和非菌毛类蛋白，具有粘附于宿主的包括菌毛和非菌毛类蛋白，具有粘附于宿主的小肠上皮细胞的能力，故称为小肠上皮细胞的能力，故称为粘附素粘附素（adhesinadhesin）n在动物源在动物
13、源ETECETEC中已发现的菌毛粘附素主要有中已发现的菌毛粘附素主要有F4F4（K88K88）、F5F5（K99K99）、F6F6（987P987P）、）、F41F41、F42F42、F165F165、F17F17（旧称为（旧称为FYFY或或Att25Att25）和）和F18 F18。肠毒素肠毒素n是是ETECETEC在体内或体外生长时产生并分泌在体内或体外生长时产生并分泌到胞外的一种蛋白质毒素，到胞外的一种蛋白质毒素，n可分为可分为不耐热肠毒素不耐热肠毒素（heat-labile heat-labile enterotoxinenterotoxin，LTLT）和）和耐热肠毒素耐热肠毒素（he
14、at-stable enterotoxinheat-stable enterotoxin，STST）两种。）两种。4.4.微生物学诊断微生物学诊断n分离培养：分离培养：无菌采集病变组织，在血琼脂或麦康无菌采集病变组织，在血琼脂或麦康凯平板上划线分离培养。凯平板上划线分离培养。n生化鉴定：生化鉴定：挑取挑取麦康凯平板上的红色菌落麦康凯平板上的红色菌落或血平或血平板上呈板上呈溶血的典型菌落，分别转种三糖铁（溶血的典型菌落，分别转种三糖铁（TSITSI）培养基和普通琼脂斜面做初步生化鉴定和纯培养。培养基和普通琼脂斜面做初步生化鉴定和纯培养。n抗原鉴定：抗原鉴定：将将TSITSI琼脂反应模式符合埃希菌
15、属的生琼脂反应模式符合埃希菌属的生长物或其相应的普通斜面纯培养物做长物或其相应的普通斜面纯培养物做O O抗原鉴定。抗原鉴定。n检测毒力因子：检测毒力因子：进而检测毒力因子，便可确定其进而检测毒力因子，便可确定其属于何类致病性大肠杆菌。属于何类致病性大肠杆菌。大肠杆菌大肠杆菌分离鉴定程序分离鉴定程序 二、沙门氏菌二、沙门氏菌 n沙门菌属是一群寄生于人和动物肠道内沙门菌属是一群寄生于人和动物肠道内的革兰阴性杆菌，生化特性和抗原结构的革兰阴性杆菌，生化特性和抗原结构相似，兼性厌氧。相似，兼性厌氧。n绝大多数发酵葡萄糖产酸产气，也偶尔绝大多数发酵葡萄糖产酸产气，也偶尔有不产气的。在三糖铁琼脂上常产生有
16、不产气的。在三糖铁琼脂上常产生H H2 2S Sn为人类食物中毒的主要病原之一，对医为人类食物中毒的主要病原之一，对医学、兽医学和公共卫生均十分重要。学、兽医学和公共卫生均十分重要。1.1.形态及染色特性形态及染色特性n沙门菌的形态和染色特性与同科的大多沙门菌的形态和染色特性与同科的大多数其它菌属相似，呈直杆状，数其它菌属相似，呈直杆状，0.7-0.7-1.51.52.0-5m2.0-5m，革兰阴性。，革兰阴性。n除雏沙门菌和鸡沙门菌无鞭毛不运动外，除雏沙门菌和鸡沙门菌无鞭毛不运动外，其余各菌均以周生鞭毛运动，且绝大多其余各菌均以周生鞭毛运动，且绝大多数具有数具有型菌毛。型菌毛。致病性致病性n
17、本属具有极其广泛的动物宿主，是一种重要的本属具有极其广泛的动物宿主，是一种重要的人畜共患病病原。人畜共患病病原。n不仅引致人的伤寒、副伤寒、急性胃肠炎、败不仅引致人的伤寒、副伤寒、急性胃肠炎、败血症等疾病，还侵害幼、青年动物，使之发生血症等疾病，还侵害幼、青年动物，使之发生败血症、胃肠炎及其它组织局部炎症。败血症、胃肠炎及其它组织局部炎症。n对成年动物则往往引起散发性或局限性沙门菌对成年动物则往往引起散发性或局限性沙门菌病，发生败血症的怀孕母畜可表现流产。病，发生败血症的怀孕母畜可表现流产。n在发病的畜禽群中，具有一定比例的个体是隐在发病的畜禽群中，具有一定比例的个体是隐性感染或康复带菌者，并
18、间歇地排菌，成为主性感染或康复带菌者，并间歇地排菌，成为主要传染源。要传染源。n沙门菌很容易在动物与动物、动物与人、人与沙门菌很容易在动物与动物、动物与人、人与人之间通过直接或间接的途径传播，没有中间人之间通过直接或间接的途径传播，没有中间宿主。宿主。n主要传染途径是消化道主要传染途径是消化道。卫生不良、应激以及。卫生不良、应激以及发生病毒或寄生虫感染，均可诱发易感动物沙发生病毒或寄生虫感染，均可诱发易感动物沙门菌病。门菌病。（2）毒力因子）毒力因子n菌毛菌毛n内毒素内毒素n肠毒素肠毒素4.微生物学诊断微生物学诊断n分离培养：分离培养：未污染的被检组织可直接培未污染的被检组织可直接培养基平板上
19、划线分离，但已污染的被检养基平板上划线分离，但已污染的被检材料需要增菌培养基增菌后，再用鉴别材料需要增菌培养基增菌后，再用鉴别培养基分离。培养基分离。n生化鉴定生化鉴定n血清型分型血清型分型沙门菌的革兰氏染色沙门菌的革兰氏染色沙门菌的麦康凯培养沙门菌的麦康凯培养第3节 巴氏杆菌科及相关属 n巴氏杆菌属（Pasteurellan里氏杆菌属（Riemerella）n放线杆菌属（Actinobacillus）n嗜血杆菌属（Haemophilus）n多杀巴氏杆菌病n鸭疫里氏杆菌病n猪传染性胸膜肺炎n猪副猪嗜血杆菌病一、巴氏杆菌属：多杀性巴氏杆菌一、巴氏杆菌属：多杀性巴氏杆菌n本菌是引起多种畜禽巴氏杆菌
20、病本菌是引起多种畜禽巴氏杆菌病（PasteurellosisPasteurellosis）的病原体，主要使）的病原体，主要使动物发生出血性败血病或传染性肺炎。动物发生出血性败血病或传染性肺炎。n广泛分布于世界各地。广泛分布于世界各地。n在同种或不同动物间可相互传染，也可在同种或不同动物间可相互传染，也可感染人，大多因被动物咬伤所致。感染人，大多因被动物咬伤所致。1.形态及染色形态及染色n为球杆状或短杆状菌，两端钝圆，为球杆状或短杆状菌，两端钝圆，大小为大小为0.25-0.40.25-0.40.5-2.50.5-2.5 m m。n单个存在，有时成双排列单个存在，有时成双排列n病料涂片用瑞氏染色或
21、美蓝染色病料涂片用瑞氏染色或美蓝染色时，可见典型的时，可见典型的两极着色两极着色n无鞭毛，不形成芽胞。无鞭毛，不形成芽胞。n革兰染色阴性革兰染色阴性 美蓝染色2.培养及生化特性培养及生化特性n需氧或兼性厌氧菌。对营养要求需氧或兼性厌氧菌。对营养要求较严格。较严格。n在普通培养基上生长贫瘠，在麦在普通培养基上生长贫瘠，在麦康凯培养上不生长。康凯培养上不生长。n在加有血液、血清或微量血红素在加有血液、血清或微量血红素的培养基中生长良好。的培养基中生长良好。n在血琼脂平板上培养在血琼脂平板上培养24h24h，长成长成水滴样小菌落水滴样小菌落，无溶血现象。，无溶血现象。n从病料从病料新分离的强毒菌株具
22、有荚新分离的强毒菌株具有荚膜膜，菌落为粘液型，较大。，菌落为粘液型，较大。3.致病性与毒力因子致病性与毒力因子n本菌是多种动物的重要病原菌。本菌是多种动物的重要病原菌。n对鸡、鸭、鹅、野禽、猪、牛、马、兔等对鸡、鸭、鹅、野禽、猪、牛、马、兔等都可致病，都可致病，n急性型呈出血性败血症迅速死亡，如急性型呈出血性败血症迅速死亡，如牛出血性牛出血性败血症败血症、猪肺疫猪肺疫、禽霍乱禽霍乱、兔巴氏杆菌病等；、兔巴氏杆菌病等；n慢性型则呈现慢性型则呈现萎缩性鼻炎（萎缩性鼻炎（猪、羊）、关节炎猪、羊）、关节炎及局部化脓性炎症等。及局部化脓性炎症等。n实验动物中实验动物中小鼠极易感染小鼠极易感染，鸽对杀禽亚
23、种，鸽对杀禽亚种的易感性强。的易感性强。猪肺疫禽霍乱禽霍乱n具有荚膜的菌株有较强的抗性，荚膜成分为具有荚膜的菌株有较强的抗性，荚膜成分为透明透明质酸质酸，有抗吞噬作用。，有抗吞噬作用。n研究表明，杀禽亚种的致病力与菌体的内毒素有研究表明，杀禽亚种的致病力与菌体的内毒素有关。该内毒素是一种含氮的磷酸脂多糖，与菌体关。该内毒素是一种含氮的磷酸脂多糖，与菌体结合不紧密，用福尔马林盐水可洗脱，少量注入结合不紧密，用福尔马林盐水可洗脱，少量注入鸡体，即可引致禽霍乱，表现出血性败血症状。鸡体，即可引致禽霍乱，表现出血性败血症状。n已知已知A A、B B、D D型菌株具有型菌株具有4 4型菌毛。本菌的铁载体
24、型菌毛。本菌的铁载体名为多杀素（名为多杀素（multocidinmultocidin），也与毒力有关。），也与毒力有关。微生物学诊断微生物学诊断n采取渗出液、心血、肝、脾、淋巴结、骨髓等新采取渗出液、心血、肝、脾、淋巴结、骨髓等新鲜病料涂片或触片，以碱性美蓝液或瑞氏染色液鲜病料涂片或触片，以碱性美蓝液或瑞氏染色液染色，显微镜检查，如发现典型的染色，显微镜检查，如发现典型的两极着色的短两极着色的短杆菌杆菌，结合流行病学及剖检，即可作初步诊断。，结合流行病学及剖检，即可作初步诊断。n但慢性病例或腐败材料不易发现典型菌体，须进但慢性病例或腐败材料不易发现典型菌体，须进行培养和动物试验。行培养和动物试
25、验。n可用血琼脂分离培养，疑似菌落再接种在三糖铁可用血琼脂分离培养，疑似菌落再接种在三糖铁培养基，细菌生长，使底部变黄。必要时可进一培养基，细菌生长，使底部变黄。必要时可进一步做生化反应作鉴定。步做生化反应作鉴定。动物试验动物试验 n用病料悬液或分离培养菌，皮下注射用病料悬液或分离培养菌，皮下注射小小鼠鼠、家兔或鸽，动物多在、家兔或鸽，动物多在24-48h24-48h内死亡。内死亡。n参照患畜的生前临床症状和剖检变化，参照患畜的生前临床症状和剖检变化，结合分离菌株的毒力试验，作出诊断。结合分离菌株的毒力试验，作出诊断。血清学鉴定血清学鉴定n若要鉴定荚膜抗原和菌体抗原型，则要若要鉴定荚膜抗原和菌
26、体抗原型，则要用抗血清或单克隆抗体进行血清学试验。用抗血清或单克隆抗体进行血清学试验。n检测动物血清中的抗体，可用试管凝集、检测动物血清中的抗体，可用试管凝集、间接凝集、琼脂扩散试验或间接凝集、琼脂扩散试验或ELISAELISA。二、里氏杆菌属：鸭疫里氏杆菌二、里氏杆菌属：鸭疫里氏杆菌n鸭疫里氏杆菌（鸭疫里氏杆菌（R.anatipestiferR.anatipestifer）是本）是本属的代表种，原名鸭疫巴氏杆菌。属的代表种，原名鸭疫巴氏杆菌。n该菌与巴氏杆菌属的该菌与巴氏杆菌属的rRNArRNA不同源，与黄杆不同源，与黄杆菌等相近，因此建议建立里氏杆菌新属，菌等相近，因此建议建立里氏杆菌新属
27、，归于归于黄杆菌科黄杆菌科（FlavobacteriaceaeFlavobacteriaceae1.形态及染色形态及染色n菌体呈杆状或椭圆形，大小菌体呈杆状或椭圆形，大小0.3-0.3-0.50.50.7-6.5m0.7-6.5m，偶见个别长丝状。，偶见个别长丝状。n多为单个，少数成双或短链排列。多为单个，少数成双或短链排列。n可形成荚膜，无芽胞，无鞭毛。可形成荚膜，无芽胞，无鞭毛。n瑞氏染色可见两极着色。瑞氏染色可见两极着色。n革兰染色阴性。革兰染色阴性。培养及生化特性培养及生化特性n本菌营养要求较高，普通培养基和麦康凯培养基本菌营养要求较高，普通培养基和麦康凯培养基上不生长。初次分离培养供
28、给上不生长。初次分离培养供给5%-10%5%-10%的的CO2CO2易于易于生长。生长。n在在巧克力巧克力或胰蛋白胨大豆琼脂（或胰蛋白胨大豆琼脂（TSATSA）平板上，）平板上，CO2CO2培养箱或蜡烛缸中，培养箱或蜡烛缸中，3737培养培养24-48h24-48h，生长，生长的菌落无色素，呈圆形、表面光滑，直径的菌落无色素，呈圆形、表面光滑，直径1-2mm1-2mm。n在含血清或胰蛋白胨酵母的肉汤中，在含血清或胰蛋白胨酵母的肉汤中，3748h3748h培培养，呈上下一致轻微混浊，管底有少量沉淀。养，呈上下一致轻微混浊，管底有少量沉淀。n本菌不发酵葡萄糖、蔗糖，可与多杀性巴氏杆本菌不发酵葡萄糖
29、、蔗糖，可与多杀性巴氏杆菌区别。菌区别。n极少数菌株发酵麦芽糖或肌醇。靛基质、硝酸极少数菌株发酵麦芽糖或肌醇。靛基质、硝酸盐还原、柠檬酸盐利用、盐还原、柠檬酸盐利用、VPVP、甲基红试验、硫、甲基红试验、硫化氢产生、尿素分解等均为阴性。化氢产生、尿素分解等均为阴性。n氧化酶、触酶试验为阳性。多不溶血，多液化氧化酶、触酶试验为阳性。多不溶血，多液化明胶，明胶，nG+CG+C多为多为35mol%35mol%。致病性与毒力因子致病性与毒力因子n本菌是雏鸭传染性浆膜炎的病原菌。本菌是雏鸭传染性浆膜炎的病原菌。n可引起可引起1-81-8周龄、尤其周龄、尤其2-32-3周龄雏鸭大批周龄雏鸭大批发病、死亡，
30、生长发育严重受阻。发病、死亡，生长发育严重受阻。n也从患败血症的鸡、鹅、火鸡、野生水也从患败血症的鸡、鹅、火鸡、野生水禽分离。兔和小鼠不易感。禽分离。兔和小鼠不易感。n豚鼠腹腔注射大量细菌可致死。豚鼠腹腔注射大量细菌可致死。微生物学诊断微生物学诊断n取发病初期病鸭的脑及心血，用巧克力取发病初期病鸭的脑及心血，用巧克力培养基容易分离到本菌。培养基容易分离到本菌。n肝、脾分离率低，仅肝、脾分离率低，仅10%10%左右。分离时应左右。分离时应同时接种麦康凯培养基，以便及时区别同时接种麦康凯培养基，以便及时区别大肠杆菌。大肠杆菌。n分离的细菌应进行葡萄糖和蔗糖发酵试分离的细菌应进行葡萄糖和蔗糖发酵试验
31、，也可接种小鼠，与多杀性巴氏菌相验，也可接种小鼠，与多杀性巴氏菌相区别。区别。PCRPCR法可用作快速诊断。法可用作快速诊断。三、嗜血杆菌属：副猪嗜血杆菌三、嗜血杆菌属：副猪嗜血杆菌n副猪嗜血杆菌病，也写作副猪嗜血杆菌病，也写作猪副嗜血杆菌病，又称格猪副嗜血杆菌病，又称格拉泽氏病或革拉泽氏病。拉泽氏病或革拉泽氏病。n引起的猪的疾病，表现为引起的猪的疾病，表现为猪的纤维性多发性浆膜炎、猪的纤维性多发性浆膜炎、关节炎、胸膜炎和脑膜炎关节炎、胸膜炎和脑膜炎等。等。血清型n根据热稳定抗原的差异可将本菌分为至少根据热稳定抗原的差异可将本菌分为至少15个血清型，个血清型，约约25%分离株无法定型，优势菌型
32、为分离株无法定型，优势菌型为4型及型及5型。型。n不同血清型毒力存在差异，不同血清型毒力存在差异，1、5、10、12、13及及14型为高毒力型为高毒力，2、4、8、15为中毒力为中毒力，其它血清型视，其它血清型视为无毒力。但同一血清型的不同菌株毒力可不同。为无毒力。但同一血清型的不同菌株毒力可不同。1.1.形态及染色形态及染色n 多为短杆状，也有呈球、杆状或长丝状多为短杆状，也有呈球、杆状或长丝状等多形性。大小为等多形性。大小为1.51.50.3-0.40.3-0.4 m m。n多单个、也有短链排列。多单个、也有短链排列。n无鞭毛，无芽胞，新分离的致病菌株有无鞭毛，无芽胞，新分离的致病菌株有荚
33、膜。荚膜。美兰染色呈两极美兰染色呈两极，革兰染色为阴，革兰染色为阴性。性。2.培养及生化特性培养及生化特性初次分离培养时供给初次分离培养时供给5%-10%CO25%-10%CO2可促进生长。生长需供可促进生长。生长需供给给X X因子和因子和V V因子。因子。nX X因子因子是血红蛋白中的血红素及其衍生物是血红蛋白中的血红素及其衍生物nV V因子因子为辅酶为辅酶即烟酰胺腺嘌噙二核苷酸（即烟酰胺腺嘌噙二核苷酸（NADNAD）或辅酶）或辅酶n血液中的血液中的V V因子一般处于被抑制状态，将鲜血琼脂加热因子一般处于被抑制状态，将鲜血琼脂加热80-80-9090，5-15min5-15min，制成，制成
34、巧克力培养基巧克力培养基，培养基中的抑制物被，培养基中的抑制物被破坏，释出破坏，释出V V因子。因子。3.3.致病性及毒力因子致病性及毒力因子n多发性浆膜炎等多发性浆膜炎等4.4.微生物学诊断微生物学诊断nTSATSA分分离，分分离，PCRPCR鉴定等鉴定等四、放线杆菌属：猪胸膜肺炎放线杆菌四、放线杆菌属：猪胸膜肺炎放线杆菌n本菌旧称猪胸膜肺炎嗜血杆菌或副溶血本菌旧称猪胸膜肺炎嗜血杆菌或副溶血嗜血杆菌嗜血杆菌n但但DNADNA杂交试验表明，本菌与林氏放射杆杂交试验表明，本菌与林氏放射杆菌有很高的同源性，因此自菌有很高的同源性，因此自19831983年起改年起改为现名，并划归为现名，并划归放线杆
35、菌属放线杆菌属。n本菌引致本菌引致猪传染性胸膜肺炎猪传染性胸膜肺炎，是集约化，是集约化猪场常见猪病之一。猪场常见猪病之一。1.形态及染色形态及染色n小球杆菌，具多形性。新鲜病料呈两极小球杆菌，具多形性。新鲜病料呈两极染色，有荚膜和鞭毛，具运动性。染色，有荚膜和鞭毛，具运动性。n兼性厌氧，置兼性厌氧，置1010 COCO2 2中可长出粘液性中可长出粘液性菌落。最适生长温度菌落。最适生长温度3737。n在普通营养基不长，需在普通营养基不长，需添加添加V V因子因子n常用巧克力培养基培养。常用巧克力培养基培养。n在绵羊血平板上，可产生稳定的在绵羊血平板上，可产生稳定的溶血，溶血，金黄色葡萄球菌可增强
36、其溶血圈（金黄色葡萄球菌可增强其溶血圈（CAMPCAMP试验阳性试验阳性）CAMP试验3.致病及毒力因子微生物学诊断微生物学诊断n取病死猪肺坏死组织、胸水、鼻及气管渗出物取病死猪肺坏死组织、胸水、鼻及气管渗出物作涂片，显微镜检查是否有革兰阴性两极染色作涂片，显微镜检查是否有革兰阴性两极染色的球杆菌。的球杆菌。n确诊需取上述病料接种巧克力琼脂或绵羊血琼确诊需取上述病料接种巧克力琼脂或绵羊血琼脂，置脂，置5%CO2 375%CO2 37越夜培养。如有溶血小菌越夜培养。如有溶血小菌落生长，应进一步作落生长，应进一步作CAMPCAMP试验试验，。，。n近年来则采用近年来则采用PCRPCR法，检测荚膜合
37、成相关基因法，检测荚膜合成相关基因等，可达快速诊断和定型。等，可达快速诊断和定型。第第4节节 革兰氏阴性需氧杆菌革兰氏阴性需氧杆菌n布鲁氏菌属布鲁氏菌属-布鲁氏菌布鲁氏菌n伯氏菌属伯氏菌属-鼻疽伯氏菌鼻疽伯氏菌n波氏菌属波氏菌属-支气管败血波氏菌支气管败血波氏菌 胞内菌的基本概念胞内菌的基本概念n根据病原菌与宿主细胞的关系，病原菌分为根据病原菌与宿主细胞的关系，病原菌分为胞胞外菌外菌和和胞内菌胞内菌两类。两类。n胞外菌胞外菌是指可以在宿主细胞外的细胞间隙、血是指可以在宿主细胞外的细胞间隙、血液、淋巴液、组织液等体液中生长繁殖的细菌。液、淋巴液、组织液等体液中生长繁殖的细菌。n胞内菌胞内菌又分两
38、种，即又分两种，即兼性胞内菌兼性胞内菌和和专性胞内菌专性胞内菌。兼性胞内菌是指在宿主体内，主要寄居在细胞兼性胞内菌是指在宿主体内，主要寄居在细胞内生长繁殖，在体外无活细胞的培养基中亦可内生长繁殖，在体外无活细胞的培养基中亦可生长。专性胞内菌则不论在体内体外，都必须生长。专性胞内菌则不论在体内体外，都必须在活细胞内生长繁殖在活细胞内生长繁殖 一、布氏杆菌属：布氏杆菌n有羊、牛、猪、鼠、绵羊和犬有羊、牛、猪、鼠、绵羊和犬6 6个种，个种，2020个生物型。个生物型。n是引起多种动物和人发病的病原。是引起多种动物和人发病的病原。1.形态与染色n球杆状，无鞭毛，不形成芽孢。球杆状，无鞭毛，不形成芽孢。
39、n革兰氏阴性。革兰氏阴性。2.培养及生化特性培养及生化特性n此属细菌此属细菌专性需氧专性需氧，但许多菌株，尤其是在初，但许多菌株，尤其是在初代分离培养时尚需代分离培养时尚需5%-10%CO25%-10%CO2。最适生长温度。最适生长温度3737，最适，最适pHpH为为6.6-7.46.6-7.4。n泛酸钙和内消旋泛酸钙和内消旋赤藓糖醇赤藓糖醇可刺激某些菌株生长。可刺激某些菌株生长。n大多数菌株在初次培养时生长缓慢，在大多数菌株在初次培养时生长缓慢，在48h48h内内罕见形成菌落，常需罕见形成菌落，常需5-10d5-10d甚至甚至20-30d20-30d，但实，但实验室长期传代保存的菌株，培养验
40、室长期传代保存的菌株，培养48-72h48-72h即可生即可生长良好。长良好。n普通培养基上生长缓慢；在含有普通培养基上生长缓慢；在含有35%35%的甘油或的甘油或血液、血清、葡萄糖的培养基中生长更好；血液、血清、葡萄糖的培养基中生长更好；n菌落特点菌落特点n甘油琼脂：细小、光滑、圆形、湿润、粘稠的灰白甘油琼脂：细小、光滑、圆形、湿润、粘稠的灰白色渐至灰黄色菌落色渐至灰黄色菌落n血琼脂：血琼脂：不溶血不溶血n马铃薯培养基：蜂蜜状粘稠菌苔，颜色由淡黄色马铃薯培养基：蜂蜜状粘稠菌苔，颜色由淡黄色淡褐色淡褐色深褐色；对鉴定有价值深褐色；对鉴定有价值n孔雀绿酸性复红培养基上，形成淡绿色菌落孔雀绿酸性复
41、红培养基上，形成淡绿色菌落n麦康凯上不能生长麦康凯上不能生长n在液体培养基中呈轻微浑浊生长，无菌膜。在液体培养基中呈轻微浑浊生长，无菌膜。但培养日久，可形成菌环，有时形成厚的菌膜；但培养日久，可形成菌环，有时形成厚的菌膜；在固体培养基上，菌落可以分为在固体培养基上，菌落可以分为n光滑（光滑（S S）型菌落）型菌落n粗糙（粗糙（R R）型菌落）型菌落n粘胶状的粘液（粘胶状的粘液（M M）型菌落）型菌落3致病性和毒力因子n将本属分为该属现包括将本属分为该属现包括6 6个种个种2020个生物型，个生物型，n马尔他布氏杆菌马尔他布氏杆菌（Br.melitensisBr.melitensis）生物型）生
42、物型1313、n流产布氏杆菌流产布氏杆菌（Br.abortusBr.abortus）生物型）生物型1919n猪布氏杆菌猪布氏杆菌（Br.suisBr.suis）生物型）生物型1515n绵羊布氏杆菌绵羊布氏杆菌（Br.ovisBr.ovis）n沙林鼠布氏杆菌沙林鼠布氏杆菌（Br.neotomaeBr.neotomae）n犬布氏杆菌犬布氏杆菌（Br.canisBr.canis）6 6个种。个种。毒力差异毒力差异n在不同种别和生物型，甚至同型细菌的在不同种别和生物型，甚至同型细菌的不同菌株之间毒力差异明显。不同菌株之间毒力差异明显。n对豚鼠的致病性顺序是对豚鼠的致病性顺序是n马尔他布氏杆菌马尔他布氏
43、杆菌猪布氏杆菌猪布氏杆菌流产布氏流产布氏杆菌沙林鼠布氏杆菌杆菌沙林鼠布氏杆菌犬布氏杆菌犬布氏杆菌绵羊布氏杆菌。绵羊布氏杆菌。n引致多种动物和人的布氏杆菌病。细菌引致多种动物和人的布氏杆菌病。细菌可经气溶胶传可经气溶胶传播播，是潜在的生物武器。，是潜在的生物武器。n本菌本菌不产生外毒素，但有毒性较强的内毒素不产生外毒素，但有毒性较强的内毒素。n光滑型的流产布氏杆菌入侵机体粘膜屏障后，光滑型的流产布氏杆菌入侵机体粘膜屏障后，被吞噬被吞噬细胞吞噬细胞吞噬成为成为胞内寄生菌胞内寄生菌，并在淋巴结生长繁殖形成，并在淋巴结生长繁殖形成感染灶。感染灶。n潜伏期潜伏期2 2周至周至7 7个月，一旦侵入血流，则
44、出现菌血症，个月，一旦侵入血流，则出现菌血症，由于由于内毒素的作用致使机体发热内毒素的作用致使机体发热。n之后细菌定位于之后细菌定位于网状内皮系统、乳腺及生殖器网状内皮系统、乳腺及生殖器官。官。n在妊娠中期，细菌在富含在妊娠中期，细菌在富含赤藓醇赤藓醇的胎盘绒毛膜及其周的胎盘绒毛膜及其周边大量繁殖，导致坏死性胎盘炎，致使孕畜流产。边大量繁殖，导致坏死性胎盘炎，致使孕畜流产。4.4.微生物学诊断微生物学诊断n鉴于布氏杆菌病有可能由实验室感染所鉴于布氏杆菌病有可能由实验室感染所致，所以发达国家规定凡涉及本菌的致，所以发达国家规定凡涉及本菌的样样本检测本检测，均应在，均应在生物安全生物安全2 2级实
45、验室级实验室进行，进行，凡涉及凡涉及本菌的培养本菌的培养，则需在，则需在生物安全生物安全3 3级级实验室实验室内操作。内操作。n布氏杆菌病常表现为慢性或隐性感染，布氏杆菌病常表现为慢性或隐性感染，其诊断和检疫主要其诊断和检疫主要依靠血清学检查依靠血清学检查及及变变态反应检查态反应检查。细菌学检查仅用于发生流。细菌学检查仅用于发生流产的动物和其它特殊情况。产的动物和其它特殊情况。（1）细菌学检查）细菌学检查n病料最好用病料最好用采集采集流产胎儿的胃内容物、流产胎儿的胃内容物、肺、肝和脾以及流产胎盘和羊水等。肺、肝和脾以及流产胎盘和羊水等。n也可采用阴道分泌物、乳汁、血液、精也可采用阴道分泌物、乳
46、汁、血液、精液、尿液以及急宰病畜的子宫、乳房、液、尿液以及急宰病畜的子宫、乳房、精囊、睾丸、附睾、淋巴结、骨髓和其精囊、睾丸、附睾、淋巴结、骨髓和其它有局部病变的器官。它有局部病变的器官。n显微镜检查显微镜检查 病料病料可可直接涂片直接涂片染色镜检染色镜检，作革兰氏和柯兹洛夫斯基染色镜检。作革兰氏和柯兹洛夫斯基染色镜检。（2）分离培养鉴定 n无污染病料无污染病料:可直接划线接种于前述适宜培养基，可直接划线接种于前述适宜培养基，n污染病料污染病料:则应接种到加有放线菌酮则应接种到加有放线菌酮0.1mg/ml0.1mg/ml、杆菌肽、杆菌肽25 IU/ml25 IU/ml、多粘菌素、多粘菌素B 6
47、 IU/mlB 6 IU/ml和加有色素的选择性琼和加有色素的选择性琼脂平板。均一式接两套份，分别置大气环境及脂平板。均一式接两套份，分别置大气环境及5%10%5%10%CO2CO2环境，环境，3737培养。每培养。每3d3d观察一次，如有细菌生长，观察一次，如有细菌生长，可挑选可疑菌落做细菌鉴定；如无细菌生长，可继续可挑选可疑菌落做细菌鉴定；如无细菌生长，可继续培养至培养至30d30d后，仍无生长者方可认为阴性。后，仍无生长者方可认为阴性。n挑选可疑菌落，做涂片、染色和镜检，确定为疑似菌挑选可疑菌落，做涂片、染色和镜检，确定为疑似菌后进行纯培养，再以布氏杆菌抗血清（高免血清或后进行纯培养，再
48、以布氏杆菌抗血清（高免血清或A A、M M单相血清，如不凝时，可再用单相血清，如不凝时，可再用R R血清）作玻片凝集试血清）作玻片凝集试验。验。nPCRPCR法作快速诊断。法作快速诊断。（3）血清学检查）血清学检查n有多种检查方法，归纳起来不外乎血清中布氏杆菌抗有多种检查方法，归纳起来不外乎血清中布氏杆菌抗体检查和病料中布氏杆菌检查两类方法。体检查和病料中布氏杆菌检查两类方法。n用已知抗体可检查病料中是否存在布氏杆菌，或分离用已知抗体可检查病料中是否存在布氏杆菌，或分离培养物是否为布氏杆菌，比细菌学检查法简便快速，培养物是否为布氏杆菌，比细菌学检查法简便快速，因而具有较大实用价值。因而具有较大
49、实用价值。n荧光抗体技术荧光抗体技术n反向间接血凝试验反向间接血凝试验n间接炭凝集试验间接炭凝集试验n免疫酶组化法染色免疫酶组化法染色n动物在感染布氏杆菌动物在感染布氏杆菌715d可出现抗体，检测血清中可出现抗体，检测血清中的抗体是布氏杆菌病诊断和检疫的主要手段。的抗体是布氏杆菌病诊断和检疫的主要手段。（4）变态反应检查）变态反应检查n皮肤变态反应一般在感染后的皮肤变态反应一般在感染后的2025d出现，出现，因此不因此不适适宜作早期诊断。宜作早期诊断。n本法适于动物本法适于动物绵羊和山羊及猪绵羊和山羊及猪的大群检疫，主的大群检疫，主要用于绵羊和山羊，其次为猪。要用于绵羊和山羊，其次为猪。n检测
50、时，将布氏杆菌水解素检测时，将布氏杆菌水解素0.2ml注射于羊尾注射于羊尾根皱襞部或猪耳根部皮内，根皱襞部或猪耳根部皮内，24及及48h后各观察后各观察反应一次。反应一次。n若注射部发生红肿，即判为阳性反应若注射部发生红肿，即判为阳性反应。二、伯氏菌属二、伯氏菌属-鼻疽伯氏菌鼻疽伯氏菌n鼻疽伯氏菌旧名鼻疽假单胞菌，为马、鼻疽伯氏菌旧名鼻疽假单胞菌，为马、骡、驴等骡、驴等单蹄兽鼻疽单蹄兽鼻疽的病原，也能感染的病原，也能感染人，其他家畜和多种野生动物，人，其他家畜和多种野生动物，n是一种人兽共患的重要病原。是一种人兽共患的重要病原。n1.1.形态与染色：革兰氏阴性形态与染色：革兰氏阴性n2.2.培
