1、固定化胰蛋白酶壳聚糖床的制备以及在纯化固定化胰蛋白酶壳聚糖床的制备以及在纯化大豆胰蛋白酶抑制因子中的应用大豆胰蛋白酶抑制因子中的应用报告人：刘冶学号：2012207245n大豆产品在东亚来说是很受欢迎的产品，它营养丰富且均衡。但是，豆科植物种子中会包含一些抗营养因子，其中主要的抗营养因子即为胰蛋白酶抑制因子,简称SBTI.nSBTI能够引起被喂食未加工过的大豆蛋白的牲畜产生胰腺膨胀反应，这种现象产生的原因在于小肠表面产生了过多的缩胆囊素，即肠促胰酶肽所致。nSBTI属于丝氨酸蛋白酶抑制因子，包括Kunitz trypsin inhibitor(KTI)和Bowman-Birk trypsin
2、inhibitor(BBTI)两类，前者Mr20kDa,后者Mr8-10kDa n我们从大豆研磨液中分离出来的BBTI是一种强力的胰凝乳蛋白酶抑制剂，纯化的BBTI经研究表明，BBTI还具有杀菌活性，抑制HIV-1的反转录活性。此外，在Sprgue-Dawley鼠中发现，它还能有效抑制乙酰基亚硝基脲引起的神经系统瘤.实验流程实验流程交联壳聚糖床的制备 环氧氯丙烷对交联壳聚糖床的活化 胰蛋白酶的固定化 SBTI粗品的制备 天然胰蛋白酶酶活鉴定 固定化胰蛋白酶酶活鉴定 SBTI的亲和分离 纯化产品效果的SDS-PAGE鉴定 Crosslinking of chitosan by glutarald
3、ehydeScheme 1Scheme 2Trypsin coupling reaction by epichlorohydrinResultsIsolation and purification protocol for crude trypsin inhibitor from soybean seedsFTIR spectra of chitosan(a),chitosan beads(b),chitosanbeads activated with epichlorohydrin(c)and trypsin-immobilisedchitosan beads(d).Scanning ele
4、ctron micrographs of crosslinked chitosanparticles.Particle size distribution of chitosan beads determined by laser particle size analyserAffinity chromatography of SBTI by trypsin-immobilisedchitosan beads(0.2mol L1 borax/borate(pH 7.8)as equilibrium and washing buffer,HCl/H2O solution as eluent,pH
5、 gradient elution at flow rate of 30mL h1,7.5mL per tube).SDS-PAGE of crude and purified trypsin inhibitor from soybean seeds(Coomassie brilliant blue R-250 staining):A,crude SBTI extract;B,purified SBTI;C,molecular weight markers.Effect of pH on SBTI adsorption by free and immobilised trypsin.Effect of temperature on SBTI adsorption by free and immobilised trypsin.以大豆胰蛋白酶抑制因子为研究对象，通过胰蛋白酶固定以大豆胰蛋白酶抑制因子为研究对象，通过胰蛋白酶固定化，利用亲和层析技术，使得从大豆研磨后的粗溶液中提化，利用亲和层析技术，使得从大豆研磨后的粗溶液中提取胰蛋白酶抑制因子的比率达到取胰蛋白酶抑制因子的比率达到33.3%。并通过。并通过SDS-PAGE进行鉴定，鉴定显示能够得到一条分子量在进行鉴定，鉴定显示能够得到一条分子量在8.3kDa的比较单一的蛋白条带的比较单一的蛋白条带.
