1、第一节第一节 分类和原理分类和原理第二节第二节 薄层色谱薄层色谱 第三节第三节 纸色谱法纸色谱法 一、分类一、分类1.1.薄层色谱法；薄层色谱法；2.2.纸色谱法纸色谱法;3.3.薄层电泳法；薄层电泳法；第一节第一节 分类和原理分类和原理 纸层析和薄层层析也属于色谱分析法。但与其纸层析和薄层层析也属于色谱分析法。但与其它色谱方法不同的是在分离过程中一般不使用它色谱方法不同的是在分离过程中一般不使用动力源。纸层析和薄层层析流动相的移动是依动力源。纸层析和薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用。靠毛细作用。将试样点在色谱滤纸或层析板的一端，并将试样点在色谱滤纸或层析板的一端，并将该端浸在作为流动相的溶
2、剂（常称之为将该端浸在作为流动相的溶剂（常称之为展开剂展开剂）中，随着溶剂向上的移动，经过）中，随着溶剂向上的移动，经过试样点时，带动试样向上运动。原理与柱试样点时，带动试样向上运动。原理与柱色谱相同。色谱相同。二、参二、参 数数 Rf=L/Lo R Rf f值在值在0.20.20.80.8之间一般，在之间一般，在0.30.30.50.5之间最佳之间最佳(一）定性参数：一）定性参数：比移值比移值 :溶质移动距离与流动相移动距离之比溶质移动距离与流动相移动距离之比原原点点前前沿沿相对比移值相对比移值 Rr=Rf(i)/Rf(s)=Li/Ls（二）相平衡参数（二）相平衡参数（二）相平衡参数（二）相
3、平衡参数（二）相平衡参数（二）相平衡参数分配系数和容量因子分配系数和容量因子分配系数和容量因子分配系数和容量因子分配系数和容量因子分配系数和容量因子 R R 流动相中停留的时间分数，单位时间内流动相中停留的时间分数，单位时间内 一个分子在流动相中出现的几率。一个分子在流动相中出现的几率。RR也可表示组分分子在面上移动的速度。也可表示组分分子在面上移动的速度。(1-R)/R=Xs/Xm=CsVs/(CmVm)=KVs/Vm=kR=1/(1+k)Rf L/L0=ut ut/u u0 0t t=R=1/(1+k)（三）面效参数：三）面效参数：理论塔板数理论塔板数 n=16(L/W)2 塔板高度塔板高
4、度 H=L0/n（四）分离参数：（四）分离参数：分离度：分离度：R=(L2-L1)/(W1+W2)/2=2d/(W1+W2)1 分离数分离数SN:(R1.177时）时）Rf=0到到Rf=1容纳斑容纳斑点数点数 SN=L0/(b0+b1)-1 b b0 0和和b b1 1是通过测定其它组分的是通过测定其它组分的RfRf值和半峰宽，二者在一定值和半峰宽，二者在一定点样量范围内成直线关系，用回归方程求得。点样量范围内成直线关系，用回归方程求得。Rf=0时组分的半峰宽时组分的半峰宽 Rf=1时组分的半峰宽时组分的半峰宽一、类型：一、类型：吸附色谱、分配色谱吸附色谱、分配色谱 1 1、吸附色谱、吸附色谱
5、：固定相为吸附剂。：固定相为吸附剂。A A、B B两组分在两组分在 薄层板上经过薄层板上经过 第二节第二节 薄层色谱薄层色谱 解解 吸吸再吸附再吸附再解吸再解吸 吸附由于两组分在固定相的吸附能力不同，展开剂对由于两组分在固定相的吸附能力不同，展开剂对两组的溶解能力的不同，即吸附系数不同，移动两组的溶解能力的不同，即吸附系数不同，移动速度不同。速度不同。极性大的组分迁移速度慢，极性大的组分迁移速度慢，R Rf f小。小。2 2 2 2 2 2、分配色谱：、分配色谱：、分配色谱：、分配色谱：、分配色谱：、分配色谱：利用试样中各组分在固定相与流动相之间的分配系数的利用试样中各组分在固定相与流动相之间
6、的分配系数的不同，各组分在板上的迁移速度不同而获得分离的薄层不同，各组分在板上的迁移速度不同而获得分离的薄层色谱法。色谱法。正相色谱正相色谱：流动相的极性比固定相的极性小。：流动相的极性比固定相的极性小。例：例：Si-OH表面吸附表面吸附17水为固定相，水为固定相，极性较强，流动相用弱极性溶剂极性较强，流动相用弱极性溶剂正相正相分配分配色谱。色谱。极性大的组分极性大的组分R Rf f小小。反相色谱反相色谱：流动相的极性比固定相的极性大。流动相的极性比固定相的极性大。极性大的组分极性大的组分R Rf f大。大。二、二、二、二、二、二、吸附剂，展开剂吸附剂，展开剂吸附剂，展开剂吸附剂，展开剂吸附剂
7、，展开剂吸附剂，展开剂（一）（一）吸附剂吸附剂(层析板层析板):吸附色谱固定相，吸附色谱固定相，用专门的涂布器把浆状的吸附剂（硅胶或氧化铝，用专门的涂布器把浆状的吸附剂（硅胶或氧化铝，101040m40m）均匀地涂在长条形玻璃板上（厚度）均匀地涂在长条形玻璃板上（厚度0.150.150.50.5mmmm），干燥，干燥活化活化后即可使用。后即可使用。1 1 硅胶硅胶：表面带有表面带有 硅醇基硅醇基 极性基团极性基团各组分的极性基团与硅醇基形各组分的极性基团与硅醇基形成氢键的能力不同而被分离成氢键的能力不同而被分离氢键氢键活化去水，增加吸附位点。活化去水，增加吸附位点。活化去水，增加吸附位点。活化
8、去水，增加吸附位点。活化去水，增加吸附位点。活化去水，增加吸附位点。2 2、氧化铝：、氧化铝：氧化铝氧化铝酸性酸性中性中性碱性碱性pH4.0pH7.5pH9.0吸附剂的活度与含水量的关系吸附剂的活度与含水量的关系吸附剂的活度与含水量的关系吸附剂的活度与含水量的关系吸附剂的活度与含水量的关系吸附剂的活度与含水量的关系活性级活性级硅胶含水量硅胶含水量氧化铝含水量氧化铝含水量005315625103815活化去水，增加吸附位点。活化去水，增加吸附位点。（二）展开剂（二）展开剂（二）展开剂（二）展开剂（二）展开剂（二）展开剂(溶剂溶剂溶剂溶剂溶剂溶剂)：由一种或多种溶剂按一定比例组成。由一种或多种溶剂
9、按一定比例组成。*非极性非极性极性极性极性极性非极性非极性不活泼不活泼活泼活泼ABCABC1 1 制备：涂板，活化，样品制备：涂板，活化，样品处理处理三、三、操作方法操作方法：2 2 点样：用微量注射器或玻点样：用微量注射器或玻 璃毛细管吸璃毛细管吸 取一定量试样取一定量试样点在原点上。试样点的直径点在原点上。试样点的直径一般应小于一般应小于5 5mmmm。可并排可并排点多个试样同时展开。点多个试样同时展开。(24mm，0.010.1%,nmL)3 3 3 3 3 3 展开展开展开展开展开展开：随时间随时间随时间随时间随时间随时间t t t t t t延长，展开速度变慢延长，展开速度变慢延长，
10、展开速度变慢延长，展开速度变慢延长，展开速度变慢延长，展开速度变慢边缘效应边缘效应边缘效应边缘效应边缘效应边缘效应,先饱和先饱和先饱和先饱和先饱和先饱和.4 显色、检测显色、检测:有些组份在紫外光照射下产生荧有些组份在紫外光照射下产生荧光，可在紫外灯下用铅笔将组份斑点描绘出光，可在紫外灯下用铅笔将组份斑点描绘出来。常用的显色方法有喷洒显色剂、碘蒸气来。常用的显色方法有喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等。熏或氨水熏等。四四 定性，定量定性，定量 1 1 定性：定性：R Rf f 2 2 定量：定量：洗脱法洗脱法:洗脱，收集，用其他方法检测洗脱，收集，用其他方法检测直接定量法：直接定量法：荧光荧光,可
11、见可见,紫外透过率紫外透过率五、五、五、五、五、五、高效薄层色谱法高效薄层色谱法高效薄层色谱法高效薄层色谱法高效薄层色谱法高效薄层色谱法 吸附剂颗粒小，吸附剂颗粒小，吸附剂颗粒小，吸附剂颗粒小，吸附剂颗粒小，吸附剂颗粒小，n n n n n n大，大，大，大，大，大，R R R R R R高高高高高高六六 薄层扫描薄层扫描线形扫描：线形扫描：斑点规则，斑点规则，浓度均匀。浓度均匀。曲折形扫描：曲折形扫描：斑点不规则，斑点不规则，浓度不均匀。浓度不均匀。第三节第三节 纸色谱法纸色谱法一一.纸色谱法的分离原理：分配色谱纸色谱法的分离原理：分配色谱纸纸载体。吸附水为固定相，正相色谱载体。吸附水为固定
12、相，正相色谱平板色谱简单、方便、及操作费用低，平板色谱简单、方便、及操作费用低，可以在一块层析板上同时展开多个试样及可以在一块层析板上同时展开多个试样及将多条滤纸同时展开。将多条滤纸同时展开。特点及应用特点及应用优点优点 采用方形薄层板还可以方便的进行二维展开采用方形薄层板还可以方便的进行二维展开 即按一般方法展开后，改变方向和展开剂即按一般方法展开后，改变方向和展开剂 再次展开，进一步改善分离效果。再次展开，进一步改善分离效果。试样一般不需要经过预处理即可分离。试样一般不需要经过预处理即可分离。应用：应用：平板色谱法在染料、农药、医药、有机酸碱类平板色谱法在染料、农药、医药、有机酸碱类化合物、糖类化合物、氨基酸、蛋白质及中化合物、糖类化合物、氨基酸、蛋白质及中草药中有效成分的分离分析中经常被使用。草药中有效成分的分离分析中经常被使用。也可以用于无机离子的分离。还经常作为高也可以用于无机离子的分离。还经常作为高效液相色谱的一种预试方法。效液相色谱的一种预试方法。缺点缺点 分离效率较低，不适用挥发性试样分离。分离效率较低，不适用挥发性试样分离。定性定量不便。定性定量不便。
