1、第六章第六章 黄酮类化合物黄酮类化合物知识识要求：掌握黄酮类黄酮类化合物的基本构构造、结构类结构类型、理化性质质、提取分离的方法 熟悉黄酮类黄酮类化合物的性状状和鉴鉴定的基本知识识 了解紫外光谱谱、核磁共振谱谱在黄酮类黄酮类化合物结构鉴结构鉴定中的应应用。能力要求;熟练练掌握槐米中黄酮类黄酮类化合物的提取技术术 学会学会应应用化学学方法、色谱鉴谱鉴定黄酮类黄酮类化合物的操作技术术 黄酮类化合物广泛存在于自然界，其数量之黄酮类化合物广泛存在于自然界，其数量之多位于多位于天然酚性化合物天然酚性化合物之首。之首。主要分布在双子叶植物及裸子植物中。主要分布在双子叶植物及裸子植物中。多与糖结合成多与糖结
2、合成苷苷，少部分以游离形式存在。，少部分以游离形式存在。因大部分呈因大部分呈黄色并具有酮基黄色并具有酮基，故称为黄酮，故称为黄酮 第一节第一节 结构类型结构类型 两个具有酚羟基的苯环（两个具有酚羟基的苯环（A与与B环环）通过）通过中央三碳链中央三碳链相互连接相互连接 6O5432187654321分类依据：分类依据：三碳链氧化程度三碳链氧化程度 B B环（苯基）连接位置（环（苯基）连接位置（2-2-或或3-3-位）位）三碳链是否构成环状三碳链是否构成环状6C-3C-6CA AB BC C黄酮类（flavones）OOHOOHOHOHluteolin木犀草素，存在于忍冬藤、菊花、浮萍中，具有抗菌
3、木犀草素，存在于忍冬藤、菊花、浮萍中，具有抗菌作用。作用。黄酮醇类黄酮醇类 槲皮素槲皮素(quercetin)具有抗炎、止咳祛痰等作用。具有抗炎、止咳祛痰等作用。降低血压、增强毛细血管抵抗力、扩张冠状动脉；降低血压、增强毛细血管抵抗力、扩张冠状动脉；芦丁芦丁(rutin)是槲皮素的是槲皮素的O芸香糖苷。用于芸香糖苷。用于治疗毛细管脆弱引起的出血病，并用作高血压及动治疗毛细管脆弱引起的出血病，并用作高血压及动脉硬化的辅助治疗剂。脉硬化的辅助治疗剂。RUTINOOOHHOOHOHOrutinoseOOOHHOOHOHOHQUERCETIN芦丁芦丁槲皮素槲皮素 豆科植物豆科植物 槐中药槐中药槐米中含
4、有芦丁和槐米中含有芦丁和槲皮素。槲皮素。二氢黄酮类二氢黄酮类OOOHOCH3rutinose O橙皮苷(hesperidin),具有Vp样作用4二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类 水飞蓟素是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合成的水飞蓟素是二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合成的黄酮木脂素类成分。具有保肝作用，用于治疗急、慢黄酮木脂素类成分。具有保肝作用，用于治疗急、慢性肝炎及肝硬化，代谢中毒性肝损伤。性肝炎及肝硬化，代谢中毒性肝损伤。OOHOOHOHOOCH2OHOHOCH3水飞蓟素(SILYBIN)5查尔酮类查尔酮类 查尔酮为查尔酮为苯甲醛缩苯苯甲醛缩苯乙酮类化合物乙酮类化合物，其邻羟基，其邻羟基衍生物可视为衍生物
5、可视为二氢黄酮二氢黄酮的的异构体，二者可相互转化。异构体，二者可相互转化。查耳酮654321654321OOHHOOOHO邻 羟 基 查 耳 酮二 氢 黄 酮 二氢黄酮的吡喃酮二氢黄酮的吡喃酮环芳香性低，在碱的作环芳香性低，在碱的作用下易开环生成用下易开环生成6-6-羟羟基查耳酮，由无色转为基查耳酮，由无色转为深黄色，后者经酸化又深黄色，后者经酸化又能转化为原来的二氢黄能转化为原来的二氢黄酮。酮。红花在开花初期，花冠呈淡黄色；开花中期，花红花在开花初期，花冠呈淡黄色；开花中期，花冠呈深黄色；开花后期或采收干燥过程中由于酶的作冠呈深黄色；开花后期或采收干燥过程中由于酶的作用，氧化成红色。用，氧化
6、成红色。SO2氧化酶异构化醌式红花苷(红色)红花苷(carthamone)(黄色)新红花苷(neo-carthamin)(无色)OHOOOOglcOHOHOHOHOOglcOHOOHOHOOglcOH第一个发现的查耳酮类植物成分第一个发现的查耳酮类植物成分6异黄酮类异黄酮类(isoflavones)取代基7,4-二OH4-OH,7-glc7,4-二OH,8-C-glc化合物名称大豆素大豆苷葛根素OOHOOH 主要存在于豆科、鸢尾科等植物中。主要存在于豆科、鸢尾科等植物中。如葛根主要含有下列几种异黄酮类如葛根主要含有下列几种异黄酮类成分。成分。葛根总黄酮具有扩冠、增加冠脉流量及葛根总黄酮具有扩冠
7、、增加冠脉流量及降低心肌耗氧量等作用。大豆素具有类降低心肌耗氧量等作用。大豆素具有类似罂粟碱的解痉作用。似罂粟碱的解痉作用。大豆苷、葛根素及大豆素均能缓解大豆苷、葛根素及大豆素均能缓解高血压患者的头痛等症状。高血压患者的头痛等症状。7 7二氢异黄酮类二氢异黄酮类/紫檀素类紫檀素类紫檀素OOOOCH3O8 8双黄酮类双黄酮类 由二分子黄酮衍生物聚合生成的二聚物，多分由二分子黄酮衍生物聚合生成的二聚物，多分布于裸子植物中。银杏中含有多种双黄酮，如银布于裸子植物中。银杏中含有多种双黄酮，如银杏素。杏素。GINKGETINOOOHCH3OOCH3OHHOOHOO银杏叶片（舒血宁片）银杏叶片（舒血宁片）
8、作用与用途作用与用途 活血化瘀，活血化瘀，通脉舒络通脉舒络。用于动脉硬化。用于动脉硬化及高血压病所致的冠状动及高血压病所致的冠状动脉供血不全、心绞痛，心脉供血不全、心绞痛，心肌梗塞、脑血管痉挛等以肌梗塞、脑血管痉挛等以及动脉血管供血不良所引及动脉血管供血不良所引起的疾患起的疾患.银杏叶片提取物被法国、银杏叶片提取物被法国、德国列为降血压特效药德国列为降血压特效药、天然药品；被日本列为抗天然药品；被日本列为抗衰老、治老年痴呆症特效衰老、治老年痴呆症特效药品。药品。9花色素类花色素类 使花、叶、果、茎等呈现蓝、使花、叶、果、茎等呈现蓝、紫、红等颜色的色素。以苷的形式紫、红等颜色的色素。以苷的形式存
9、在于细胞液中，经水解可生成苷存在于细胞液中，经水解可生成苷元元花色素及糖。花色素及糖。矢车菊苷元(兰色)花青素母核OHOOHOHOHO10黄烷黄烷-3-醇醇(flavan-3-ols)及黄烷及黄烷-3，4-二醇二醇(flavan-3,4-diols)类类(+)儿茶素(-)表儿茶素OHOOHOHHOHHOHHOHOOHOHOHOHH11双苯吡酮类双苯吡酮类87654321异芒果素(isomengiferin)OOHOHOOHOHglc水龙骨科植物石韦中的异芒果素具有止咳祛痰的功效。水龙骨科植物石韦中的异芒果素具有止咳祛痰的功效。12橙酮类橙酮类OCHHOOHOHO硫磺菊素硫磺菊素(sulphur
10、etinsulphuretin)黄酮类化合物的生物活性黄酮类化合物的生物活性 1.1.对对心血管系统心血管系统的作用的作用 Vp样作用：芦丁、橙皮苷等有样作用：芦丁、橙皮苷等有Vp样样作作用，能降低血管脆性及异常通透性，可用，能降低血管脆性及异常通透性，可用作防治高血压及动脉硬化的辅助治疗用作防治高血压及动脉硬化的辅助治疗剂。剂。扩冠作用：芦丁、槲皮素、葛根素、扩冠作用：芦丁、槲皮素、葛根素、人工合成的力可定人工合成的力可定。降血脂及胆固醇：木犀草素降血脂及胆固醇：木犀草素 治疗冠心病或活血化淤类中药含有黄酮类治疗冠心病或活血化淤类中药含有黄酮类芦丁片芦丁片 芦丁是从中国所独有的国槐的花蕾中芦
11、丁是从中国所独有的国槐的花蕾中提取的植物药，也称提取的植物药，也称维生素维生素P，具有降低毛具有降低毛细血管的异常通透性和脆性的作用，是心细血管的异常通透性和脆性的作用，是心脑血管保护药，国内用于心脑血管药品制脑血管保护药，国内用于心脑血管药品制剂的主要成分，国外还大量用于食品添加剂的主要成分，国外还大量用于食品添加剂和化妆品。剂和化妆品。2.抗肝脏毒作用抗肝脏毒作用 从水飞蓟种子中得到的从水飞蓟种子中得到的水飞蓟素具有保肝作用，用水飞蓟素具有保肝作用，用于治疗急、慢性肝炎、肝硬于治疗急、慢性肝炎、肝硬化及多种中毒性肝损伤。化及多种中毒性肝损伤。（+）-儿茶素儿茶素(catergen)也可抗肝
12、脏毒作用，治疗脂也可抗肝脏毒作用，治疗脂肪肝及因半乳糖胺或四氯化肪肝及因半乳糖胺或四氯化碳等引起的中毒性肝损伤。碳等引起的中毒性肝损伤。水水飞飞蓟蓟 3.抗炎抗炎 芦丁及其衍生物羟乙基芦丁、二氢芦丁及其衍生物羟乙基芦丁、二氢槲皮素等具抗炎作用。槲皮素等具抗炎作用。4.抗菌及抗病毒作用抗菌及抗病毒作用 如木樨草素、黄芩苷、黄芩素如木樨草素、黄芩苷、黄芩素 5.解痉作用解痉作用 异甘草素、大豆素：解除平滑肌痉挛；异甘草素、大豆素：解除平滑肌痉挛；大豆苷、葛根素及葛根总黄酮可缓解高血大豆苷、葛根素及葛根总黄酮可缓解高血压患者的头痛等症状；压患者的头痛等症状；杜鹃素、川陈皮素、槲皮素、山奈酚、芫杜鹃素
13、、川陈皮素、槲皮素、山奈酚、芫花素、羟基芫花素：止咳祛痰。花素、羟基芫花素：止咳祛痰。6.雌性激素样作用雌性激素样作用 大豆素大豆素(daidzein)等异黄酮具有雌性激素等异黄酮具有雌性激素样作用，可能与它们的结构与己烯雌酚结样作用，可能与它们的结构与己烯雌酚结构类似。构类似。己 烯 雌 酚HOOH大 豆 素(dadzein)OOHOOH7.清除人体自由基作用清除人体自由基作用 黄酮类化合物多具有黄酮类化合物多具有酚羟基酚羟基，易氧，易氧化成醌类而提供氢离子，故有显著的抗化成醌类而提供氢离子，故有显著的抗氧化特点。氧化特点。另外还有降血脂、血糖，抗动脉粥样另外还有降血脂、血糖，抗动脉粥样硬化
14、及抗癌抗突变等作用。硬化及抗癌抗突变等作用。第二节第二节 理化性质及颜色反应理化性质及颜色反应 一、性状一、性状 1.多为多为结晶性固体结晶性固体，少为（如黄酮苷类），少为（如黄酮苷类）无定形粉末。无定形粉末。2.旋光性：游离苷元中，除旋光性：游离苷元中，除二氢黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷、黄烷醇二氢黄酮醇、黄烷、黄烷醇有旋光外，其余有旋光外，其余无旋光性。无旋光性。苷类由于结构中引入糖的分子，均有旋光苷类由于结构中引入糖的分子，均有旋光性，且多为性，且多为左旋左旋。3.3.颜色：颜色：与与 分子中是否存在分子中是否存在交叉共轭体系交叉共轭体系 助色团的数目助色团的数目 取代基的位置有关。
15、取代基的位置有关。色原酮部分原本无色，但在色原酮部分原本无色，但在2 2位引入苯环后，位引入苯环后，即形成交叉共轭体系，且通过电子的转移，重即形成交叉共轭体系，且通过电子的转移，重排，使共轭链延长，而表现出颜色。排，使共轭链延长，而表现出颜色。OOOOOO 黄酮、黄酮醇及苷类黄酮、黄酮醇及苷类 灰黄灰黄-黄色黄色 查耳酮查耳酮 黄黄-橙黄色橙黄色 二氢黄酮、二氢黄酮醇二氢黄酮、二氢黄酮醇 无色无色 异黄酮异黄酮 微黄色微黄色 其中，其中，黄酮、黄酮醇及苷类、查耳酮黄酮、黄酮醇及苷类、查耳酮等因分子等因分子中存在交叉共轭体系，在中存在交叉共轭体系，在7,4位引入位引入-OH,-OCH3等供电子基
16、团则促进电子移位、重排，使化合物颜等供电子基团则促进电子移位、重排，使化合物颜色加深。色加深。花色苷及其苷元花色苷及其苷元的颜色随的颜色随pH的不同而改变：的不同而改变：呈现呈现红（红（pH8.5）二、溶解度二、溶解度 1.游离游离苷元苷元难溶或不溶于水，易溶于难溶或不溶于水，易溶于MeOH,EtOH,EtOAc,Et2O 黄酮、黄酮醇及查耳酮是黄酮、黄酮醇及查耳酮是平面型分子平面型分子，分子堆砌紧密，分子间引力较大，分子堆砌紧密，分子间引力较大，更难溶更难溶于水于水。R=H，二氢黄酮，二氢黄酮R=OH，二氢黄酮醇，二氢黄酮醇O OO OH HR R23二氢黄酮、二氢黄酮醇二氢黄酮、二氢黄酮醇
17、是非平面型分子，是非平面型分子，分子排列不紧密，分子间引力降低，有利分子排列不紧密，分子间引力降低，有利于水分子进入，对水的溶解度较大。于水分子进入，对水的溶解度较大。花色苷元（花青素）类花色苷元（花青素）类虽系平面型分子，虽系平面型分子，但因以但因以离子形式离子形式存在，具有盐的通性，故亲存在，具有盐的通性，故亲水性较强，水溶度较大。水性较强，水溶度较大。花青素二氢黄酮X-或OH-OORHOH 黄酮苷元引入黄酮苷元引入羟基越多羟基越多，水溶性越强，羟基，水溶性越强，羟基甲基化后，则增加在有机溶剂中的溶解度。甲基化后，则增加在有机溶剂中的溶解度。如一般黄酮类化合物如一般黄酮类化合物(多羟基化合
18、物多羟基化合物)不溶于不溶于石油醚中，可与脂溶性杂质分开，但石油醚中，可与脂溶性杂质分开，但川陈皮素川陈皮素（5,6,7,8,3,4-5,6,7,8,3,4-六甲氧基六甲氧基黄酮）却可溶于石黄酮）却可溶于石油醚。油醚。2.2.黄酮类化合物的羟基苷化后，水溶性相应增黄酮类化合物的羟基苷化后，水溶性相应增大，而在有机溶剂中的溶解度相应减小。黄酮苷大，而在有机溶剂中的溶解度相应减小。黄酮苷一般易溶于一般易溶于H H2 2O,O,MeOHMeOH,EtOHEtOH等，难溶或不溶于等，难溶或不溶于苯，氯仿等。苯，氯仿等。同同一苷元一苷元，3-O-葡萄糖苷的水溶度葡萄糖苷的水溶度7-O-葡萄葡萄糖苷糖苷（
19、立体障碍使分子的平面性降低）（立体障碍使分子的平面性降低）三、酸碱性三、酸碱性 1.酸性酸性 黄酮类化合物多具有酚羟基而呈酸性，可黄酮类化合物多具有酚羟基而呈酸性，可溶于碱性水液，吡啶，甲酰胺及二甲基甲溶于碱性水液，吡啶，甲酰胺及二甲基甲酰胺。酰胺。酸性强弱顺序：酸性强弱顺序：7,4-二羟基二羟基 7,或或4羟基羟基 一般酚羟基一般酚羟基5-羟基羟基 此性质可用于提取、分离及鉴定工作。此性质可用于提取、分离及鉴定工作。374664736473OHOOOOHHOHO+OHOHO-O+OHO-HO5,7,4-三羟基黄酮 2.碱性 -吡喃酮上的吡喃酮上的1-位氧原子上有未共用电子对，位氧原子上有未共
20、用电子对，表现微弱的碱性，可与强无机酸如浓硫酸，盐酸表现微弱的碱性，可与强无机酸如浓硫酸，盐酸生成生成yang盐，但极不稳定，加水即可分解。盐，但极不稳定，加水即可分解。黄酮类化合物溶于浓硫酸中生成的黄酮类化合物溶于浓硫酸中生成的yangyang盐常盐常表现特殊的颜色，可用于鉴别。表现特殊的颜色，可用于鉴别。H2OHClClOOHOO四、显色反应四、显色反应 (一一)还原反应还原反应 1.盐酸盐酸-镁粉（盐酸镁粉（盐酸-锌粉）反应锌粉）反应 黄酮、黄酮醇及二氢黄酮、二氢黄酮醇类黄酮、黄酮醇及二氢黄酮、二氢黄酮醇类在盐在盐酸酸-镁粉作用下，易被氢化还原，迅速生成红镁粉作用下，易被氢化还原，迅速生
21、成红-紫红紫红（个别有绿（个别有绿-兰色）兰色）:将样品溶于甲醇或乙醇，加少量将样品溶于甲醇或乙醇，加少量镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，1-2分钟内（必要时微分钟内（必要时微热）即可出现颜色。多显橙红热）即可出现颜色。多显橙红-紫红色，少数兰紫红色，少数兰-紫色，紫色，B环有环有-OH或或OCH3取代时取代时，颜色随之加深，颜色随之加深，查耳酮、查耳酮、橙酮、儿茶素类则不反应橙酮、儿茶素类则不反应。花色素及部分查耳酮、橙酮等在浓盐酸酸性条花色素及部分查耳酮、橙酮等在浓盐酸酸性条件下也会发生色变，故须件下也会发生色变，故须先做一空白对照先做一空白对照。2.四氢硼钠反应四氢硼
22、钠反应 与与二氢黄酮（醇）类化合物二氢黄酮（醇）类化合物产生红产生红-紫紫色。色。取样品取样品10mg溶于甲醇，加溶于甲醇，加NaBH4 10mg，再滴加再滴加1%浓盐酸或浓硫酸，呈浓盐酸或浓硫酸，呈红红-紫色。紫色。其他黄酮类化合物均不显色。其他黄酮类化合物均不显色。（二）金属盐类试剂的络合反应（二）金属盐类试剂的络合反应 黄酮类化合物分子结构中多有黄酮类化合物分子结构中多有3-OH,4=O;5-OH,4=O;邻二酚羟基邻二酚羟基，常可与铝盐、，常可与铝盐、铅盐、锆盐、镁盐等试剂生成有色络合物。铅盐、锆盐、镁盐等试剂生成有色络合物。OHOH结果：颜色，沉淀结果：颜色，沉淀用途：鉴定，结构测定
23、，提取分离用途：鉴定，结构测定，提取分离OOH45OOHO341.铝盐铝盐 1%AlCl3或或Al(NO3)3：生成络合物为生成络合物为黄色黄色(max=415nm)，并有，并有荧光。荧光。2.锆盐锆盐:2%二氯氧化锆甲醇液二氯氧化锆甲醇液 观察颜色2%枸橼酸甲醇液黄色1ml2%ZrOCl210ml甲醇溶样品0.5-1mg黄色不褪黄色褪去2%枸橼酸黄色锆络合物 锆盐3-OH,4=O5-OH,4=O3-OH3-OH，4-4-酮基络合物稳定性酮基络合物稳定性5 5OHOH，4-4-酮基络合物酮基络合物原因：原因：ClH2OOHOOHOHOHOOZrO543OHOOOHOHOORutinoseZr
24、OClH2O543 3.镁盐镁盐 醋酸镁甲醇液醋酸镁甲醇液作显色剂，可在纸上进行。作显色剂，可在纸上进行。二氢黄酮（醇）类显天蓝色荧光，若具有二氢黄酮（醇）类显天蓝色荧光，若具有C5-OH，色泽更明显。而黄酮、黄酮醇及异色泽更明显。而黄酮、黄酮醇及异黄酮类则显黄黄酮类则显黄-橙黄橙黄-褐色。褐色。4.氯化锶氯化锶(SrCl2)使具有使具有邻二酚羟基邻二酚羟基的黄酮显绿的黄酮显绿-棕色棕色-黑黑色沉淀。色沉淀。5.氯化铁氯化铁(FeCl3)检查检查酚羟基酚羟基。多数黄酮类化合物具有酚羟基，可产生多数黄酮类化合物具有酚羟基，可产生正反应，生成绿、蓝、黑、紫等颜色。正反应，生成绿、蓝、黑、紫等颜色。
25、6.6.铅盐铅盐 1%PbAc2或碱式醋酸铅水液。生成黄或碱式醋酸铅水液。生成黄-红色红色沉淀。色泽因羟基数目及位置不同而异。沉淀。色泽因羟基数目及位置不同而异。醋酸铅可沉淀具有醋酸铅可沉淀具有邻二酚羟基或兼有邻二酚羟基或兼有3-OH,4=O或或5-OH,4=O者。者。碱式醋酸铅沉淀能力要大得多，可沉淀一般碱式醋酸铅沉淀能力要大得多，可沉淀一般酚类化合物。酚类化合物。据此不仅可用于鉴定，也可用于提取及分离据此不仅可用于鉴定，也可用于提取及分离工作工作.（三）硼酸显色反应（三）硼酸显色反应 1 具有下列结构（具有下列结构（5-羟基黄酮，羟基黄酮，2-羟基查耳酮羟基查耳酮）2 有无机酸或有机酸存在
26、有无机酸或有机酸存在在草酸存在下，显黄色并带绿色荧光。在草酸存在下，显黄色并带绿色荧光。在枸橼酸丙酮存在条件下，只显黄色而无荧光在枸橼酸丙酮存在条件下，只显黄色而无荧光。CCCOOH（四）碱性试剂显色反应 日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用碱性试剂处理后的色变情况。品用碱性试剂处理后的色变情况。1.1.二氢黄酮类二氢黄酮类易在碱液中开环，转变成易在碱液中开环，转变成相应异构体相应异构体查耳酮类化合物，显橙查耳酮类化合物，显橙-红红色。色。HOHOHOOO 2.黄酮醇类黄酮醇类在碱液中先呈黄色，通入空在碱液中先呈黄色，通入空气后变为棕色，据此可与黄酮类区
27、别。气后变为棕色，据此可与黄酮类区别。3.黄酮类黄酮类化合物当分子中有化合物当分子中有邻二酚羟基邻二酚羟基取代或取代或3,4-二羟基取代二羟基取代时，在碱液中不时，在碱液中不稳定，很快氧化，由稳定，很快氧化，由黄色黄色深红色深红色绿绿棕色沉淀棕色沉淀。第第三节三节 提取分离提取分离一、提取一、提取 黄酮类化合物在花、叶、果等组织中，黄酮类化合物在花、叶、果等组织中，多以苷的形式存在；在木部坚硬组织中，多多以苷的形式存在；在木部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在；以游离苷元形式存在；根据化合物极性不同，溶解性不同，采用根据化合物极性不同，溶解性不同，采用不同溶剂提取。不同溶剂提取。1.苷元苷元 多
28、用多用CHCl3、Et2O、EtOAc等极性较小等极性较小溶剂提取；对于多溶剂提取；对于多OCH3的成分，用苯、石油的成分，用苯、石油醚提取；醚提取；对于极性大的成分，如查耳酮、橙酮、对于极性大的成分，如查耳酮、橙酮、双黄酮、羟基黄酮等，用双黄酮、羟基黄酮等，用EtOAc、EtOH、Me2CO、MeOH:H2O(1:1)等溶剂提取。等溶剂提取。2.苷类苷类 水或热水提取，（多糖苷在热水中水或热水提取，（多糖苷在热水中溶解度较大，在冷水中溶解度较小）；溶解度较大，在冷水中溶解度较小）；也可用也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。提取。3.含羟基的苷或苷元，可用含羟基的苷或苷元，可用碱水碱水提
29、取。提取。4.提取花青素类可加入少量酸提取花青素类可加入少量酸.常见的提取方法常见的提取方法（一）（一）碱溶酸沉法碱溶酸沉法 适用于适用于含酚羟基的化合物含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。，如槐米中芦丁的提取。常用碱液：常用碱液：饱和石灰水溶液、饱和石灰水溶液、5%Na5%Na2 2COCO3 3溶液及稀氢氧化钠溶液等溶液及稀氢氧化钠溶液等注意事项：注意事项：石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂质质 邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易被氧化，加硼砂保护被氧化，加硼砂保护 酸碱度不宜过大酸碱度不
30、宜过大 强碱：加热时易破坏黄酮母核强碱：加热时易破坏黄酮母核 强酸：生成强酸：生成yangyang盐而溶解盐而溶解二、溶剂提取法二、溶剂提取法 1 醇提取法醇提取法 乙醇和甲醇是最常用的提取溶剂。乙醇和甲醇是最常用的提取溶剂。60%左右的稀醇提取黄铜苷类左右的稀醇提取黄铜苷类 90-95%提取黄酮苷元提取黄酮苷元 石油醚石油醚可除去可除去醇提取液中的杂质如醇提取液中的杂质如叶绿叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素素、胡萝卜素等脂溶性色素2.水提取法 用热热水提取黄铜苷类黄铜苷类 其中蛋白质、多糖等大分子水溶性物质其中蛋白质、多糖等大分子水溶性物质可以用多倍量的可以用多倍量的浓醇浓醇沉淀除去沉淀除去3.
31、系统统溶剂剂提取法 实验实验室常用极极性由小到大的溶剂剂依次将将黄酮类黄酮类化合物按相应应的极极性顺顺序提取出来来二、分离二、分离（一）（一）pHpH梯度萃取法梯度萃取法酸性不同的黄酮苷元的分离酸性不同的黄酮苷元的分离酸性：酸性：7,4-OH7-或或 4-OH 一般一般Ar-OH 5-OH5%NaHCO3 5%Na2CO2 0.2%NaOH 4%NaOH（二）柱色谱法（二）柱色谱法1、聚酰胺层析：其原理是酰胺羰基与黄酮酚羟基形成氢键缔合而吸附，吸附能力与酚羟基多少、位置及氢键缔合力大小有关。吸 附 洗 脱 剂 解 吸 附 HO+HOCH3OOOCNHOH2CCH2H2CCH2H2CCONHHC
32、H3HOCH3OCNHH2CCH2H2CCH2H2CCONHHOOO 各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为：水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰胺，脲素水溶液。聚酰胺是分离黄酮聚酰胺是分离黄酮的理想吸附剂的理想吸附剂黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：苷元相同，洗脱先后顺序一般为：苷元相同，洗脱先后顺序一般为：三糖苷三糖苷 双糖苷双糖苷 单糖苷单糖苷 苷元苷元母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢 羟基位置的影响：具有羰基邻位羟基黄羟基位置的影响：具有羰基邻位羟基黄酮比具有对位（或间位）羟基黄酮先洗酮比具
33、有对位（或间位）羟基黄酮先洗脱下来脱下来不同类型的黄酮类化合物，先后流出顺序一不同类型的黄酮类化合物，先后流出顺序一般是：般是：异黄酮异黄酮 二氢黄酮醇二氢黄酮醇 黄酮黄酮 黄酮醇黄酮醇OOOHOHHOOHOHOOOHOHHOOHOOOHOHHOOHOOHOOHOHOH分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，故查耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。故查耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。OOH OO HO HO C H3O HO C H3O HOH OO H 极性移动相（含水极性移动相（含水 溶剂系统）洗脱时溶剂系统）洗脱时有机溶剂（如氯仿有机溶剂（如氯仿一甲醇）洗
34、脱时一甲醇）洗脱时 聚酰胺聚酰胺 非极性固定相非极性固定相 色谱行为色谱行为 类似反相分配色谱类似反相分配色谱 正相分配色谱正相分配色谱 苷极性苷元苷极性苷元 苷元极性苷苷元极性苷 苷先洗脱苷先洗脱 苷元易洗脱苷元易洗脱、硅胶层析、硅胶层析 适于分离异黄酮、二氢黄酮（醇）及适于分离异黄酮、二氢黄酮（醇）及高度甲基化（或乙醚化）的黄酮（醇）类高度甲基化（或乙醚化）的黄酮（醇）类对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及 其苷类，硅胶减活性使用其苷类，硅胶减活性使用对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、乙酰对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、乙酰化黄酮及二氢黄酮、异黄酮，则无须减化黄酮
35、及二氢黄酮、异黄酮，则无须减活性。活性。3 3炭粉吸附法炭粉吸附法 适用于苷类的精制工作。适用于苷类的精制工作。植物的甲醇提取液加活性炭至吸附植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤得吸附苷的活性炭粉末。完全，过滤得吸附苷的活性炭粉末。依次用沸甲醇、沸水、依次用沸甲醇、沸水、7%酚酚/水、水、15%酚酚/醇洗脱，分步收集、检查、合并。醇洗脱，分步收集、检查、合并。大部分苷类可用大部分苷类可用7%酚酚/水洗下，经水洗下，经减压浓缩至小体积，乙醚除酚，余下水减压浓缩至小体积，乙醚除酚，余下水层经减压浓缩得较纯黄酮苷。层经减压浓缩得较纯黄酮苷。4.4.利用分子大小不同，用葡聚糖凝胶分子筛分离利用分子
36、大小不同，用葡聚糖凝胶分子筛分离 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大洗脱。大洗脱。分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大小小洗脱。洗脱。总的洗脱顺序：总的洗脱顺序：糖多的苷糖多的苷糖少的苷糖少的苷游离苷元（极性小游离苷元（极性小大）大）常用洗脱剂：常用洗脱剂：碱性水溶液，含盐水溶液碱性水溶液，含盐水溶液 醇及含水醇醇及含水醇 含水丙酮，甲醇氯仿含水丙酮，甲醇氯仿 第四节第四节 鉴定鉴定目前主要采用的方法有：目前主要采用的方法有：与标准品或与文献对照与标准品或与文献对照PPC或或TLC得到得到的的Rf值值分析对比样品在甲醇
37、溶液中及加入酸、分析对比样品在甲醇溶液中及加入酸、碱或金属盐类试剂后得到的碱或金属盐类试剂后得到的UV光谱光谱1.1.硅胶薄层色谱硅胶薄层色谱(TLC)(TLC)用于用于弱极性黄酮弱极性黄酮较好。较好。展开剂：展开剂：常用甲苯：甲酸甲酯：甲酸（常用甲苯：甲酸甲酯：甲酸（5：4：1）；）；苯：甲醇（苯：甲醇（95：5）或苯：甲醇：冰醋酸（）或苯：甲醇：冰醋酸（35：5：5）等。）等。.聚酰胺薄层色谱聚酰胺薄层色谱 适用范围广，可分离含游离酚羟基的黄适用范围广，可分离含游离酚羟基的黄酮或其苷类。酮或其苷类。常用展开系统：乙醇常用展开系统：乙醇:水（水（3:2）；丙酮）；丙酮:水（水（1:1）等。）
38、等。显色剂：紫外光；显色剂：紫外光；2%三氯化铝甲醇液；三氯化铝甲醇液；1%FeCl3/1%K3Fe(CN)6(1:1)混合液。混合液。二、纸色谱二、纸色谱 适合分离鉴定包括苷和苷元的各种黄酮类化合适合分离鉴定包括苷和苷元的各种黄酮类化合物物 苷类成分可采用苷类成分可采用双向纸色谱法双向纸色谱法，第一相展开采，第一相展开采用用醇性溶剂醇性溶剂，如，如BAW系统（正丁醇：醋酸：系统（正丁醇：醋酸：水水4：1：5上层）；第二相展开用上层）；第二相展开用水性溶剂水性溶剂，如氯仿：醋酸：水（如氯仿：醋酸：水（3：6：1）苷元则多采用醇性溶剂。苷元则多采用醇性溶剂。花色苷及其苷元，可用含盐酸或醋酸的溶剂
39、。花色苷及其苷元，可用含盐酸或醋酸的溶剂。Rf值与结构之间的关系：值与结构之间的关系：1、醇性展开剂开剂（1）苷苷元单单糖苷苷双双糖苷苷（2）分子中 羟羟基数数目增多，极极性增强，Rf值值相应减应减小，羟羟基甲基化后，极极性降低，Rf值值增大2、水性展开剂开剂（1）双双糖苷苷单单糖苷苷苷苷元。苷苷元几乎留于原点，苷类苷类Rf值值可在0.5以上，且糖链链越长长，则则Rf值值越大（2）平面型黄酮苷黄酮苷元几乎原点不同，非平面型黄酮苷黄酮苷元因亲亲水性较较强，Rf值较值较大显显色：（1）日光下观观察（2）紫外灯下观观察荧荧光（3）显显色剂显剂显色 常用显显色剂剂：1%三氯氯化铝铝甲醇溶液，氨氨熏、1
40、0%碳碳酸钠钠水溶液等一、紫外一、紫外-可见光谱可见光谱 可用于确定可用于确定黄酮母核类型黄酮母核类型及确定某些位置及确定某些位置是否含是否含有羟基。有羟基。一般程序：一般程序：测定样品在甲醇中的测定样品在甲醇中的UV谱以了解母核类型；谱以了解母核类型；在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测UV谱谱和可见光谱以了解和可见光谱以了解3,5,7,3,4有无羟基及邻二酚有无羟基及邻二酚羟基；羟基；苷类可水解后（或先甲基化再水解），再用上苷类可水解后（或先甲基化再水解），再用上法测苷元的法测苷元的UV谱以了解糖的连接位置。谱以了解糖的连接位置。第五节第五节 结构测定结
41、构测定（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱（一）黄酮类化合物在甲醇溶液中的紫外光谱 多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：多数黄酮类化合物由两个主要吸收带组成：带带I在在300-400nm区间，由区间，由B环桂皮酰基系统环桂皮酰基系统的电子跃迁所引起；的电子跃迁所引起；OOOO 带带II在在220-280nm区间，由区间，由A环苯甲酰系环苯甲酰系统统的电子跃迁所引起。的电子跃迁所引起。OOOO 根据带根据带I I、带、带IIII的峰位及形状（或强度），的峰位及形状（或强度），推测黄酮类化合物结构类型。推测黄酮类化合物结构类型。带带II(240-285nm)（苯甲苯甲酰系统）酰系统）带带I(
42、300-400nm)桂皮酰系统桂皮酰系统类类 型型说说 明明 240-280304-350黄酮类黄酮类 -OH越多，越多，带带I带带II越红移越红移 带带IIII峰位主峰位主要受要受A A环氧取代环氧取代程度的影响，程度的影响，B环环3,4有有-OH基，带基，带II为为双峰（主峰伴双峰（主峰伴肩峰）肩峰）328-357黄酮醇类黄酮醇类(3-OR)352-385黄酮醇类黄酮醇类(3-OH)245-270270-295300-400异黄酮类异黄酮类二氢黄酮二氢黄酮（醇）（醇）B环上有环上有-OH,OCH3对带对带I影影响不大响不大 220-270340-390或或340-390(Ia)300-32
43、0(Ib)查耳酮查耳酮类类查耳酮查耳酮2-OH使带使带I向红移影向红移影响大响大370-430(3-4个小峰个小峰)橙酮类橙酮类 不不同同类类型型黄黄酮酮类类化化合合物物的的紫紫外外光光谱谱2 2加入诊断试剂后引起的位移及结加入诊断试剂后引起的位移及结构测定构测定加入试剂加入试剂带带IIII带带I I说明说明样品样品+MeOH220-285300-400两峰强度基本相同，具体位置与两峰强度基本相同，具体位置与母核上电负性取代基母核上电负性取代基(-OH,-OCH3)有关，有关，-OH,-OCH3越多，越长移越多，越长移 +NaOMe或或+NaOHA环有环有-OH，红红移小，无移小，无意义意义红
44、移红移 40-60nm（不变或增不变或增强）强）红移红移 50-60nm（下降）下降）有有4-OH，无，无3-OH 有有3-OH，无，无4-OH有有3,4-OH或或3,3,4-OH（衰衰减更快）减更快）7-OH带带I，II随加随加NaOMe时间时间延长，逐渐衰减延长，逐渐衰减 320-330nm有小峰有小峰+NaOAc(未熔融未熔融)5-20在长波一侧在长波一侧有明显肩峰有明显肩峰7-OH示有示有4-OH，但无，但无3-及及/或或7-OH解解 释释加入试剂加入试剂带带II带带I说明说明+NaOAc/H3BO3 5-10 12-30有有6,7-OH或或7,8-OH(5,6-OH无无)B环有邻二酚
45、羟基环有邻二酚羟基 AlCl3/HCl 60 50-60 35-55 17-20 0有有3-OH有有3,5-二二OH有有5-OH，无，无3-OH有有6-OR和和5-OH无无3-OH,5-OH或或6-OR存在存在AlCl3光谱光谱-AlCl3/HCl光谱光谱 紫移紫移30-4050-650B环有邻二酚羟基环有邻二酚羟基A,B环皆有邻二酚羟基环皆有邻二酚羟基A,B环皆无邻二酚羟基环皆无邻二酚羟基解解 释释说明：1）+NaOMe,OHOMe，红移 另有3,4-OH或3,3,4-OH时，在NaOMe作用下易氧化破坏，故峰有衰减。2）NaOAc为弱碱，仅使酸性较强的7-OH解离。OOOback3）HCl/H2OAlCl3Al3+OOOHOHOHOAl3+Al3+OOOOOHOOOOHOHHOOH形成络合物的能力：形成络合物的能力：黄酮醇黄酮醇3-OH 黄酮黄酮5-OH（二氢黄酮二氢黄酮5-OH）邻二酚羟基邻二酚羟基 二氢黄酮醇二氢黄酮醇5-OH邻二酚羟基和二氢黄酮醇邻二酚羟基和二氢黄酮醇5-OH在在酸性条件下不与酸性条件下不与AlCl3络合络合；但不在酸性条件下，五者皆与但不在酸性条件下，五者皆与Al3+络合；络合；形成形成络合物越稳定，红移越多。络合物越稳定，红移越多。4）二者相减可检测邻二酚羟基。）二者相减可检测邻二酚羟基。返回返回
