1、癫痫大鼠模型制作癫痫大鼠模型制作 1概述l 癫痫的概念、发病机制癫痫的概念、发病机制l 癫痫持续状态癫痫持续状态l 氯化锂氯化锂-匹罗卡品癫痫模型制备原理匹罗卡品癫痫模型制备原理l 氯化锂氯化锂-匹罗卡品癫痫模型制作方法匹罗卡品癫痫模型制作方法l 不同的癫痫模型制备方法不同的癫痫模型制备方法2癫痫（癫痫（epilepsy）l是一组由已知或未知病因所引起，脑部神经元高度同步化，且常具有自限性的异常放电导致，以反复发作性、短暂性、通常为刻板性的中枢神经系统功能丧失为特征的综合征。临床可表现为运动、感觉、意识、行为和自主神经等不同程度的障碍。3发病机制发病机制1.离子通道学说离子通道学说l 各种病因
2、基因表达异常神经递质异常引起离子通道结构和功能异常离子异常跨膜运动神经元异常放电神经元间的扩布引起癫痫发作 (1)沉默突触的激活 (2)突触囊泡的快速回收4发病机制发病机制l2.异常网络学说异常网络学说l突触的可塑性：随着癫痫的反复发作，初期可逆性的突触异常连接逐渐成为固定的新连接苔藓纤维“芽生”l突触功能异常：生长锥-整合素系统功能异常（肌动蛋白、磷酸化TAU蛋白环路传导并放大疾病信号，改变痫性放电传播方向，避开了内源性抗癫痫系统对其的抑制作用，导致癫痫反复发作）5发病机制发病机制l3.脑电图上痫性放电与临床发作脑电图上痫性放电与临床发作l异常神经元放电进入局部神经网络受兴奋或抑制神经元增益
3、或抑制异常电流增大或降低l异常电流增大至一定程度脑电图上的痫性放电l电流增加到足以冲破脑的抑制功能，或脑内对其抑制作用减弱时临床上的癫痫发作6发病机制发病机制l现有研究资料支持脑电图上的痫性放电是以兴奋性谷氨酸为代表的脑内兴奋功能增强的结果，临床上的癫痫发作除兴奋功能增强外，还有-氨基丁酸（GABA）为代表的脑内抑制功能绝对或相对减弱有关7发病机制发病机制l4.不同类型癫痫发作的可能机制：不同类型癫痫发作的可能机制：l异常放电被局限在某一脑区，临床上就表现为局灶性发作l痫性放电波及双侧脑部则出现全面性癫痫l异常放电传到丘脑神经元被抑制，则出现失神发作8癫痫的动物模型癫痫的动物模型较理想的癫痫模
4、型：较理想的癫痫模型：应具有和人类癫痫相似的发生、发展过程。特征：特征：（1）具有诸如神经细胞丢失、胶质细胞增生、轴突丝状芽生和突触重建等人类癫痫相似的病理学基础；（2）在初始刺激与自发性癫痫发作之间有较为固定的潜伏期（数天至数周）；（3）模型在一定时间内保持大脑神经元兴奋性持续增高。9癫痫持续状态（癫痫持续状态（SE）大鼠模型）大鼠模型l癫痫持续状态（status epilepticus,SE）是指一次癫痫发作持续30分钟以上，或连续多次发作、发作间期意识或神经功能未恢复至通常水平。任何类型癫痫均可出现癫痫持续状态，但通常是指全面强直阵挛发作持续状态。10Lithium-Pilocarpin
5、e模型：模型：lLithium-Pilocarpine模型模型发生发展过程与人类颞叶癫痫高度相似，具有相同的病理学基础，近年来一直被认为是研究颞叶癫痫的理想模型。11目前尚未清楚。主要是通过激动乙酰胆碱受体来实现，匹罗卡品注射后，激发了脑内乙酰胆碱能受体，对脑胆碱能M受体的刺激可引起持续性的全身强直-阵挛发作。脑胆碱能M受体同G蛋白耦联，G蛋白将受体的刺激信号传递给磷脂酶C，磷脂酶C水解膜磷脂4,5二磷酸-磷脂酰肌醇，使其分解为两种第二信使三磷酸肌醇（IP3）和二脂酰甘油（DG），这两种物质可刺激神经元。亦有研究提示，匹罗卡品亦激活了NMDA受体、代谢性谷氨酸受体，导致了脑内兴奋性系统激活，出
6、现癫痫发作。匹罗卡品致癫痫持续状态模型的机制：匹罗卡品致癫痫持续状态模型的机制：12l通过抑制肌醇单磷酸酶来阻断磷酸-磷脂酰肌醇循环中IP3酶解成肌醇，导致循环降解产物第二信使IP3和DG可利用度降低及脑内肌醇水平的降低，这与匹罗卡品的作用相协同，可减少匹罗卡品的用量，降低致痫动物的死亡率。氯化锂的作用机制：氯化锂的作用机制：13l实验动物：健康成年SD大鼠，在室温、自然光环境下给予充足的食物和水，自然夜昼循环。l实验药品：氯化锂、匹罗卡品、丁溴东莨菪碱l实验方案：取健康成年SD大鼠，给予氯化锂(127mg/kg)腹腔注射，24小时后，腹腔注射M胆碱受体阻滞剂丁溴东莨菪碱(1mg/kg)，30
7、min后腹腔注射1%的匹罗卡品（30mg/kg）；观察大鼠的行为表现。模型制作方法模型制作方法14模型制作方法模型制作方法l观察大鼠发作情况，根据Racine分级标准，若无发作或发作未达到级,则每隔30min腹腔注射PILO 10mg/（kg次),直至出现癫痫持续状态为止。l达到级发作，持续30min以上可认为是癫持续状态,级以上发作并存活者可作为成功的癫痫持续状态模型。15Racine分级标准分级标准l大鼠癫痫发作症状采用大鼠癫痫发作症状采用Racine分级标准：分级标准：l 0级：无抽搐发作l级：面部抽搐和孤立性肌阵挛l级：全身性阵挛抽搐l级：全身性阵挛抽搐，伴站立l级：全身性强直-阵挛抽搐，伴站立和跌倒l级：反复的级发作呈SE或抽搐致死16Lithium-Pilocarpine模型优点模型优点l1.有效致痫剂量与致死剂量之间跨度大，安全性好l2.致痫过程清晰，伴随出现的生物行为改变具有特异性l3.自发性痫性发作持续时间较长，边缘叶神经病理损害轻而齿状回外层颗粒细胞轴突发芽现象明显l4.致痫鼠生存率高17其他常见的癫痫发作类型的动物模型其他常见的癫痫发作类型的动物模型l1.青霉素模型l2.海人酸模型l3.戊四氮模型l4.电刺激点燃模型l5.马桑内酯点燃模型l6.-GHB模型l7.金属诱导模型1819
