分子生物学-DNA复制课件.ppt

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1、第一节 DNA复制DNA复制复制 亲代双链亲代双链DNADNA分子在分子在DNADNA聚合酶的作用下,分别以聚合酶的作用下,分别以 各单链各单链 DNADNA分子为模板,聚合与自身碱基可以互补分子为模板,聚合与自身碱基可以互补 配对的游离的配对的游离的dNTPdNTP,合成出两条与亲代合成出两条与亲代DNADNA分子完分子完 全相同的子代全相同的子代DNADNA分子的过程分子的过程。一、一、DNA的半保留复制的半保留复制2023-1-91概念:概念:复制过程中各以双螺旋复制过程中各以双螺旋DNA的其中一条链为模的其中一条链为模 板合成其互补链,新生的互补链与母链构成子板合成其互补链,新生的互补

2、链与母链构成子 代代DNA分子分子。亲代DNA子代新和成的链子代半保留复制2023-1-92二、二、DNA的双向复制 1、原核生物 原核生物的基因组是环状DNA,只有一个复制起始点;复制时DNA起始点向两个方向解链,形成两个反向相反的复制叉,称为双向复制。复制时双链打开,分成两段,各自作为模板,子链沿模板延长所形成的Y字型结构称为复制叉。在原核生物双向复制中,DNA被描述为型。352023-1-93535335复制方向双向复制型2、真核生物 真核生物染色体DNA有多个复制起始点,两个起始点之间的DNA片段称为复制子,复制子是独立完成复制的功能单位。三、DNA 复制的半不连续性DNA复制时,以3

3、-5走向为模板链的合成方向为5-3,与复制叉方向一致,称为前导链;另一条以5-3走向为模板链的合成链走向与复制叉移动方向相反,称为滞后链,其合成是不连续的,故先形成许多不连续的片段(冈崎片段),最后连成一条完整的DNA链。前导链连续复制滞后链不连续复制,就是复制的半不连续性。2023-1-94四、DNA复制体系2023-1-95DNA的复制(动画)滑动夹子滑动夹子DNA解旋解旋酶酶DNA引物酶DNA聚合酶DNA聚合酶HDNA连接酶2023-1-96UUUACCATCCGGGCCCCCAAAAAATTTTTTGGGGGGTGTTCCCAAATGTGGGTCCCCAAATGTTCCCAAATGTG

4、GGTCCCCAAAGCCCCCAAAAAATTTTTTGGGGGGDNA解旋酶打开DNA双链引物酶合成引物(RNA),为复制准备2023-1-97UUUACCATCCCGGGCCCCCAAAAAATTTTTTGGGGGGTGTTCCCAAATGTGGGTCCCCAAAUUGTGTTCCCAAATGTGGGTCCCCAAAGCCCCCAAAAAATTTTTTGGGGGG先导链后随链2023-1-98UUUACCATCCCGGTGCCCCCAAAAAATTTTTTGGGGGGTGTTCCCAAATGTGGGTCCCCAAAUUTTGGG GGGCCCCCA AAAATAAAGGGCCCCCAAA

5、AAATTTTTTGGGGGGTGTTCCCAAATGTGGGTCCCCAAA先导链后随链DNA聚合酶合成DNA片段2023-1-99UUUACCATCCGGT TGCCCCCAAAAAATTTTTTGGGGGGTGTTCCCAAATGTGGGTCCCCAAATTGGGCCCGG GGGCCCCCA AAAATAGTGCCCCCAAAAAATTTTTTGGGGGGAACUUGCTAAAGG后随链先导链后随链继续合成新的引物,然后合成新的片段冈崎片段冈崎片段TGTTCCCAAATGTGGGTCCCCAAA2023-1-910UUUACCATCCGGT TGCCCCCAAAAAATTTTTTGGG

6、GGGTGTTCCCAAATGTGGGTCCCCAAATTGGGCCCGG GGGCCCCCA AAAATAGTGCCCCCAAAAAATTTTTTGGGGGGAACUUGCTAAAGGTGTTCCCAAATGTGGGTCCCCAAADNA聚合酶H切除引物片段,并填补缺口,留下一个小缺口(红色区域)2023-1-911UUUACCATCCGGT TGCCCCCAAAAAATTTTTTGGGGGGTGTTCCCAAATGTGGGTCCCCAAATTGGGCCCGG GGGCCCCCA AAAATAGTGCCCCCAAAAAATTTTTTGGGGGGAACUUGCTAAAGGTGTTCCCAAAT

7、GTGGGTCCCCAAA解旋酶脱下,DNA复制完成2023-1-912DNARNA蛋白质蛋白质转录转录翻译翻译逆转录逆转录中中 心心 法法 则则2023-1-913 中心法则的遗传流向有中心法则的遗传流向有5条途径条途径 1、DNADNA:DNA复制复制 (以(以DNA为模板合成为模板合成DNA)2、RNA RNA:RNA复制复制 (以(以RNA为模板合成为模板合成RNA)3、DNA RNA:DNA转录转录 (以(以DNA为模板合成为模板合成RNA)4、RNA DNA:反反(逆逆)转录转录 (以(以RNA为模板合成为模板合成DNA)5、RNA Protein:翻译翻译2023-1-914 复

8、制复制:亲代DNA或RNA在一系列酶的作用下,生成与亲代相同的子代DNA或RNA的过程。转录转录:以DNA为模板,按照碱基配对原则将其所含的遗传信息传给RNA,形成一条与DNA链互补的RNA的过程。翻译翻译:亦叫转译,以mRNA为模板,将mRNA的密码解读成蛋白质的AA顺序的过程。逆转录逆转录:以RNA为模板,在逆转录酶的作用下,生成DNA的过程。2023-1-915+RNA+RNA+DNA-DNA-RNA+RNA+DNA-DNA-DNA+DNA+v病毒病毒RNARNA的逆转录过程的逆转录过程 (以前病毒形式引起整合到宿主细(以前病毒形式引起整合到宿主细胞胞DNADNA中而使细胞恶性转化)中而

9、使细胞恶性转化)单链病毒单链病毒RNARNA RNA-DNARNA-DNA杂交分子杂交分子 双链双链DNADNA(前病毒)(前病毒)逆转录酶逆转录酶逆转录酶逆转录酶v 逆转录酶是多功能酶:逆转录酶是多功能酶:RNARNA指导的指导的DNADNA聚合酶活性聚合酶活性 DNADNA指导的指导的DNADNA聚合酶活性聚合酶活性v逆转录酶也和逆转录酶也和DNADNA聚合酶一样,沿聚合酶一样,沿5533方向方向合成合成DNADNA,并要求短链,并要求短链RNARNA作引物。作引物。cDNAcDNA:几乎所有真核生物几乎所有真核生物mRNAmRNA分子的分子的33末端都有末端都有一段一段polyApoly

10、A,当加入寡聚当加入寡聚dTdT作为引物时,作为引物时,mRNAmRNA就可作就可作为模板,在逆转录酶催化下在体外合成与其互补的为模板,在逆转录酶催化下在体外合成与其互补的DNADNA,称为,称为cDNAcDNA。逆转录酶发现的理论和实践意义:逆转录酶发现的理论和实践意义:不能把不能把“中心法则中心法则”绝对化,遗传信息也可以从绝对化,遗传信息也可以从RNA传递到传递到DNA。促进了分子生物学、生物化学和。促进了分子生物学、生物化学和病毒学的研究,为肿瘤的防治提供了新的线索。目病毒学的研究,为肿瘤的防治提供了新的线索。目前逆转录酶已经成为研究这些学科的工具。前逆转录酶已经成为研究这些学科的工具。19831983年,发现人类免疫缺陷病毒(年,发现人类免疫缺陷病毒(human immune deficience human immune deficience virus,HIVvirus,HIV),感染感染T T淋巴细胞后即杀死细胞,造成宿主机体免疫系淋巴细胞后即杀死细胞,造成宿主机体免疫系统损伤,引起艾滋病(统损伤,引起艾滋病(acquired immunodeficiency acquired immunodeficiency syndrome,AIDSsyndrome,AIDS)

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