1、实验基础知识实验基础知识/基本技能培训基本技能培训实验目的实验目的 谨记实验室规程谨记实验室规程 认识分子生物学实验的主要仪器设备认识分子生物学实验的主要仪器设备 掌握分子生物学实验仪器设备基本技能掌握分子生物学实验仪器设备基本技能目目 录录前言：分子生物学实验规程前言：分子生物学实验规程第一节：分子生物学实验设备第一节：分子生物学实验设备第二节：分子生物学基本技术第二节：分子生物学基本技术第三节：实验安排第三节：实验安排前前 言言分子生物学实验规程分子生物学实验规程实验规程实验规程 严格遵守生命科学中心制定的安全规则。严格遵守生命科学中心制定的安全规则。发现实验室发现实验室/楼内任何地方有危
2、害安全之人、事、楼内任何地方有危害安全之人、事、物等，必须立即向有关人员反映并作紧急处理。物等，必须立即向有关人员反映并作紧急处理。1)穿着规定穿着规定 必须按规定穿戴必须按规定穿戴工作服工作服。进行危害物质、挥发性有机溶机、特定化学物质进行危害物质、挥发性有机溶机、特定化学物质等化学药品操作实验，必须要穿戴防护具（防护等化学药品操作实验，必须要穿戴防护具（防护口罩口罩、防护、防护手套手套、防护、防护眼镜眼镜）。）。长发及松散衣服妥善长发及松散衣服妥善固定固定。实验规程实验规程2)饮食规定饮食规定 禁止在实验室禁止在实验室吃喝吃喝食物且使用化学药品后食物且使用化学药品后需先洗净双手方能进食。需
3、先洗净双手方能进食。严禁在实验室内吃严禁在实验室内吃口香糖口香糖。禁止使用实验室仪器冷藏禁止使用实验室仪器冷藏/加热食物。加热食物。实验规程实验规程3)药品操作相关规定：药品操作相关规定：操作危险性药品请操作危险性药品请务必遵守务必遵守操作守则或遵操作守则或遵照老师操作流程进行实验，勿自行更换实照老师操作流程进行实验，勿自行更换实验流程。验流程。识记清楚药品危害性，避免危害发生。识记清楚药品危害性，避免危害发生。实验规程实验规程4)用电安全相关规定：用电安全相关规定：按照规定（电压、功率）合理用电。按照规定（电压、功率）合理用电。手上有水或潮湿请勿接触电器用品或电器设备。手上有水或潮湿请勿接触
4、电器用品或电器设备。掌握主要仪器、设备的性能和操作方法，严格按掌握主要仪器、设备的性能和操作方法，严格按操作操作规程规程操作。操作。最后离开实验室务必随手将不用的水、电等开关最后离开实验室务必随手将不用的水、电等开关关闭。关闭。如：擦拭、维修过程中要关闭电源如：擦拭、维修过程中要关闭电源实验规程实验规程5)环境卫生相关规定：环境卫生相关规定：注重环境卫生，并须保持整洁。注重环境卫生，并须保持整洁。化学物溢满地面或工作台时应立即选用合适的方化学物溢满地面或工作台时应立即选用合适的方法擦拭冲洗干净。法擦拭冲洗干净。严格区分严格区分开污染区和洁净区开污染区和洁净区。污染区：戴手套操作。污染区：戴手套
5、操作。洁净区：徒手操作。洁净区：徒手操作。实验要求实验要求 1)详细详细记录记录和和分析分析实验结果，并按时提交实验结果，并按时提交实验报告实验报告；2)实验中一定要处处用实验中一定要处处用心心、勤动、勤动手手，多，多问问为什么；为什么；3)仔细仔细操作操作和和观察；观察；4)保留好每一步的保留好每一步的实验样品实验样品，在确准的情，在确准的情况下才能当废液扔掉。况下才能当废液扔掉。第一节第一节分子生物学实验设备分子生物学实验设备分子生物学实验设备分子生物学实验设备 1)温度控制系统温度控制系统 2)实验用水处理系统实验用水处理系统 3)消毒系统消毒系统 4)计量系统计量系统 5)离心设备离心
6、设备 6)电泳装置电泳装置 7)凝胶成像系统凝胶成像系统 8)PCR仪仪 9)生物培养设施生物培养设施 10)蛋白质检测设备蛋白质检测设备 11)其他设备其他设备温度控制系统温度控制系统 环境温控：大部分的分子生物学实验都要求在环境温控：大部分的分子生物学实验都要求在一定的温度下进行操作，为了保持这些条件，实验一定的温度下进行操作，为了保持这些条件，实验室应装备室应装备空调空调等。等。药品、试剂、样品等的保存：不同药品、试剂、药品、试剂、样品等的保存：不同药品、试剂、样品要求在不同的温度下保存，实验室必须备有样品要求在不同的温度下保存，实验室必须备有44、2020、8080的的冰柜冰柜/箱箱，
7、需要在更低温度下保存，需要在更低温度下保存的样品，则须使用的样品，则须使用液氮罐液氮罐。药品、试剂、药品、试剂、样品等的样品等的取放取放温度控制系统温度控制系统 低温操作可以用低温操作可以用制冰机制冰机制冰块降温；制冰块降温；对于需在较高温度下进行的操作，则可对于需在较高温度下进行的操作，则可使用使用烘箱烘箱、微波炉、恒温水浴锅、恒温微波炉、恒温水浴锅、恒温空气摇床空气摇床等。等。实验用水实验用水 一次蒸馏水：水经过一次蒸馏，一次蒸馏水：水经过一次蒸馏，不挥发的组分不挥发的组分残残留在容器中被除去，留在容器中被除去，挥发的组分挥发的组分（氨、二氧化碳、有（氨、二氧化碳、有机物）进入蒸馏水的初始
8、馏分中，通常只收集馏分的机物）进入蒸馏水的初始馏分中，通常只收集馏分的中间部分，约占中间部分，约占6060。多次蒸馏水：在一次蒸馏水中加入碱性高锰酸钾多次蒸馏水：在一次蒸馏水中加入碱性高锰酸钾溶液，除去溶液，除去有机物和二氧化碳有机物和二氧化碳；加入非挥发性的酸；加入非挥发性的酸（硫酸或磷酸），使（硫酸或磷酸），使氨氨成为不挥发的铵盐。成为不挥发的铵盐。无（去）离子水：指除去了呈离子形式杂质后的无（去）离子水：指除去了呈离子形式杂质后的纯水。主要指采用离子交换树脂处理方法，应用离子纯水。主要指采用离子交换树脂处理方法，应用离子交换树脂去除水中的阴离子和阳离子，但水中仍然存交换树脂去除水中的阴离
9、子和阳离子，但水中仍然存在可溶性的有机物。在可溶性的有机物。实验用水处理系统实验用水处理系统实验用水实验用水 超纯水：既将水中的超纯水：既将水中的导电介质导电介质几乎完全去除，又将几乎完全去除，又将水中不离解的水中不离解的胶体物质胶体物质、气体气体及及有机物有机物均去除均去除至很低程至很低程度度的水。的水。超纯水中除了水分子超纯水中除了水分子(H(H2 20)0)外，几乎没有什么杂质。外，几乎没有什么杂质。各种用水，在贮存中都会被污染：各种用水，在贮存中都会被污染：塑料容器塑料容器会产生有紫外吸收的有机物；会产生有紫外吸收的有机物；玻璃和金属容器玻璃和金属容器会产生金属离子的污染；会产生金属离
10、子的污染；长时间放置长时间放置更会使水长菌，空气中更会使水长菌，空气中COCO2 2会溶入水中。会溶入水中。所以贮存一定要隔绝空气，密封盖严，必要时贮存所以贮存一定要隔绝空气，密封盖严，必要时贮存在冰箱的冷藏室中；最好使用在冰箱的冷藏室中；最好使用“新鲜的水新鲜的水”。实验用水处理系统实验用水处理系统分子生物学实验用水分子生物学实验用水 普通蒸馏水、二次蒸馏水、无普通蒸馏水、二次蒸馏水、无/去离子水、超纯水。去离子水、超纯水。实验用水处理系统实验用水处理系统 常用的灭菌方法：高温、高压灭菌、紫外线常用的灭菌方法：高温、高压灭菌、紫外线照射、火焰焚烧、过滤除菌、酒精等试剂浸泡消照射、火焰焚烧、过
11、滤除菌、酒精等试剂浸泡消毒等，因此实验室必须配备各种无菌处理设备。毒等，因此实验室必须配备各种无菌处理设备。常用的灭菌仪器设备：常用的灭菌仪器设备：高压灭菌锅高压灭菌锅、紫外灯紫外灯、酒精灯酒精灯、滤膜滤膜等。等。消毒系统消毒系统 常用的定量系统有：称量系统、液体体积度常用的定量系统有：称量系统、液体体积度量系统、量系统、pHpH测定系统、液体溶质定量系统等。测定系统、液体溶质定量系统等。称量仪器：最常用的是称量仪器：最常用的是电子天平电子天平。酸碱度酸碱度pHpH测量仪器：最常用的是测量仪器：最常用的是pHpH试纸试纸和和pHpH计计。计量系统计量系统液体体积度量仪器：常用的有各种液体体积度
12、量仪器：常用的有各种量筒量筒、移液移液管管、容量瓶容量瓶、移液器移液器。计量系统计量系统 液体溶质定量仪器：主要有液体溶质定量仪器：主要有紫外紫外分光光度分光光度计和计和可见可见分光光度计等。分光光度计等。计量系统计量系统实验用离心机分为实验用离心机分为制备性制备性离心机和离心机和分析性分析性离心机。离心机。制备性离心机主要用于制备性离心机主要用于分离分离各种生物材料。各种生物材料。离心方法是分离和制备生物大分子最常用的手段。离心方法是分离和制备生物大分子最常用的手段。制备性离心机可分为三类制备性离心机可分为三类:低速低速、高速（冷冻）高速（冷冻）、超速超速离心机。离心机。离心设备离心设备 电
13、泳是生化实验中最常用最重要的实验技术电泳是生化实验中最常用最重要的实验技术之一，主要用于分析、鉴定，也可用于制备。之一，主要用于分析、鉴定，也可用于制备。电泳装置由电泳装置由电泳仪电泳仪和和电泳槽电泳槽两部分组成。两部分组成。电泳仪：电泳时提供一定的电压和电流电泳仪：电泳时提供一定的电压和电流 电泳槽：电泳槽：凝胶电泳系统的核心部分，根据电凝胶电泳系统的核心部分，根据电泳的原理，凝胶都是放在两个缓冲腔之间，电场泳的原理，凝胶都是放在两个缓冲腔之间，电场通过凝胶连接两个缓冲腔。通过凝胶连接两个缓冲腔。电泳装置电泳装置 电泳槽：核酸或蛋白质的电泳定性电泳槽：核酸或蛋白质的电泳定性/定量分析定量分析
14、时的凝胶支架。时的凝胶支架。电泳槽又分为电泳槽又分为水平水平电泳槽和电泳槽和垂直垂直电泳槽。电泳槽。电泳装置电泳装置 是分子生物学实验中的重要是分子生物学实验中的重要观测仪器观测仪器，几乎全几乎全部的实验结果部的实验结果都需要经由凝胶成像系统来观察。都需要经由凝胶成像系统来观察。可用于观察分析各种透明或不透明的电泳图像，可用于观察分析各种透明或不透明的电泳图像，包括包括琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳检测检测DNADNA结果的观察、结果的观察、PCRPCR产物产物的检测观察，的检测观察，垂直板凝胶电泳垂直板凝胶电泳检测基因多态性的银检测基因多态性的银染胶、染胶、蛋白胶蛋白胶、斑点印迹斑点印迹（RN
15、A/RNA/蛋白质检测）结果蛋白质检测）结果的观察等。的观察等。凝胶成像系统凝胶成像系统紫外分析仪紫外分析仪 用于检测许多主要生物大分子物质如蛋用于检测许多主要生物大分子物质如蛋白质、核苷酸等。白质、核苷酸等。PCR(Polymerase Chain Reaction)PCR(Polymerase Chain Reaction)是指聚合是指聚合酶链式反应。其反应是用酶链式反应。其反应是用DNADNA聚合酶在聚合酶在体外大量扩体外大量扩增增DNADNA片段的一种方法。片段的一种方法。PCRPCR仪就是将此方法实现了仪就是将此方法实现了自动化操作自动化操作的一的一种仪器，是分子生物学实验种仪器，是
16、分子生物学实验常用和必备常用和必备的设备。的设备。PCRPCR仪包括普通仪包括普通PCRPCR仪、仪、梯度梯度PCRPCR仪仪、荧光定、荧光定量量PCRPCR仪。仪。PCR仪仪 超净工作台超净工作台 恒温培养箱恒温培养箱生物培养设施生物培养设施 蛋白电泳槽和转印槽蛋白电泳槽和转印槽-用于用于western-blottingwestern-blotting实验实验蛋白质检测设备蛋白质检测设备 酶标仪酶标仪-用于用于ELISA ELISA（酶联免疫吸附实验）实验。（酶联免疫吸附实验）实验。蛋白质检测设备蛋白质检测设备 实验室除以上常规设备和设施外，还必须装实验室除以上常规设备和设施外，还必须装备下
17、列一些常用设备：备下列一些常用设备：A.A.通风柜通风柜：用于有害和有毒气体的操作。：用于有害和有毒气体的操作。B.B.组织打碎机和匀浆器：用于各种生物材料、动组织打碎机和匀浆器：用于各种生物材料、动植物组织和细胞的破碎。（植物组织和细胞的破碎。（研钵研钵）C.C.超声清洗机超声清洗机：用于各种器皿、移液管和自动取：用于各种器皿、移液管和自动取液器吸头的清洗和高效液相色谱仪所用流动相的脱液器吸头的清洗和高效液相色谱仪所用流动相的脱气等。气等。其它设备其它设备 其它设备其它设备 D.D.冰冻干燥机冰冻干燥机：用于生物大分子水溶液的冰冻干燥，：用于生物大分子水溶液的冰冻干燥，可由其水溶液直接制得固
18、体干粉。可由其水溶液直接制得固体干粉。E.E.机械和水环式机械和水环式真空泵真空泵：用于旋转蒸发器和各种真：用于旋转蒸发器和各种真空抽气操作。空抽气操作。F.F.冷室冷室:4-10:4-10的冷室，工作人员可以在其中进的冷室，工作人员可以在其中进行各种柱层析、各种电泳、生物大分子的提取和分离、行各种柱层析、各种电泳、生物大分子的提取和分离、透析等操作，并可以贮存各种生物制品和生化试剂。透析等操作，并可以贮存各种生物制品和生化试剂。G.G.暗室暗室:主要用于一些避光的实验，如显影。主要用于一些避光的实验，如显影。H.H.基因导入仪基因导入仪：用于向受体生物细胞中导入基：用于向受体生物细胞中导入基
19、因。常用的导入仪有：电导入仪、基因枪、激因。常用的导入仪有：电导入仪、基因枪、激光和超声导入仪、原生质体融合仪等。光和超声导入仪、原生质体融合仪等。I.I.高效液相色谱仪高效液相色谱仪和和毛细管电泳仪毛细管电泳仪：用于各种：用于各种生物大分子的分析与鉴定。生物大分子的分析与鉴定。其它设备其它设备 第二节第二节分子生物学基本技术分子生物学基本技术分子生物学基本技术分子生物学基本技术-使用方法及注意事项使用方法及注意事项 1)温度控制系统温度控制系统 2)实验用水处理系统实验用水处理系统 3)消毒系统消毒系统 4)计量系统计量系统 5)离心设备离心设备 6)电泳装置电泳装置 7)凝胶成像系统凝胶成
20、像系统1)温度控制系统温度控制系统 冰箱冰箱/柜的使用：柜的使用：门（随手关，关严）门（随手关，关严）电源（防止不小心关闭）电源（防止不小心关闭）微波炉：微波炉：要用微波炉专用要用微波炉专用容器容器（不能加热金属、（不能加热金属、密封密封物）；物）；不要让微波炉不要让微波炉空转空转；微波炉微波炉工作时工作时不要将不要将眼睛眼睛紧靠微波炉紧靠微波炉5厘米之内去观看微厘米之内去观看微波炉工作波炉工作-眼睛对微波最敏感，以免受到不必要的伤害；眼睛对微波最敏感，以免受到不必要的伤害；防灼伤！不要徒手拿容器、不要把容器口冲着人！防灼伤！不要徒手拿容器、不要把容器口冲着人！1)温度控制系统温度控制系统 制
21、冰机的使用制冰机的使用：（水（水-进水、排水；电）进水、排水；电）1不论何种原因停机时，不得连续不论何种原因停机时，不得连续启动启动，要每隔，要每隔5分钟分钟再启动，以免损坏压缩机！再启动，以免损坏压缩机！2定时定时检查检查进、出水管接头，以便处理可能泄露的少量进、出水管接头，以便处理可能泄露的少量余水！余水！3不用时，应不用时，应排排掉内胆内余水，用干净的布掉内胆内余水，用干净的布擦擦干储冰箱干储冰箱内胆！内胆！5在对制冰机进行在对制冰机进行清洁清洁、检查及一周以上不用时，请拔、检查及一周以上不用时，请拔掉掉电源电源插头。插头。1)温度控制系统温度控制系统 液氮罐（液氮生物容器液氮罐（液氮生
22、物容器）的使用：）的使用：液氮是一种超低温液体液氮是一种超低温液体(-196)，如溅到皮肤上会引起类，如溅到皮肤上会引起类似烧伤一样的冻伤，在灌充和取出液氮时应特别似烧伤一样的冻伤，在灌充和取出液氮时应特别注意注意。液氮罐主要结构：内胆、真空夹层（液氮罐主要结构：内胆、真空夹层（容器真空封口接头容器真空封口接头）、）、外壳、颈管、专用罐盖。外壳、颈管、专用罐盖。注意：注意：1、液氮罐只用于盛装液氮，不允许盛装其他液体；、液氮罐只用于盛装液氮，不允许盛装其他液体；2、严防冲击和碰撞；、严防冲击和碰撞；3、操作及取放冷冻物品时，请注意要轻拿轻放；、操作及取放冷冻物品时，请注意要轻拿轻放；4、长期贮
23、存时，需要定期补充液氮。、长期贮存时，需要定期补充液氮。保持容器夹层真空的保持容器夹层真空的关键部件关键部件，用户用户不得不得擅自擅自打开打开容器真空封容器真空封口接头口接头 1)温度控制系统温度控制系统 烘箱的使用：烘箱的使用：是利用电热丝隔层加热使物体干燥的设备。是利用电热丝隔层加热使物体干燥的设备。适用于比室适用于比室温度温度高高5300（有的高（有的高200）范围的烘培、干）范围的烘培、干燥、热处理等，灵敏度通常为燥、热处理等，灵敏度通常为1。基本结构基本结构一般由箱体、电热系统和自动控温系统三部分组成。一般由箱体、电热系统和自动控温系统三部分组成。注意：注意：1、每次每次使用前要根据
24、烘干物品要求使用前要根据烘干物品要求确定合适确定合适的温度；的温度；2、物品不能、物品不能排列排列太密，以免影响热气流动、散热；太密，以免影响热气流动、散热；3、保证鼓风机正常运转；、保证鼓风机正常运转；4、需要、需要观察观察工作室内样品情况时，可透过工作室内样品情况时，可透过玻璃门玻璃门观察。观察。但但箱门箱门以少开为好，以免影响恒温。特别是以少开为好，以免影响恒温。特别是200以上时，开以上时，开箱门可能使玻璃门骤冷而破裂。箱门可能使玻璃门骤冷而破裂。不允许整夜使用！不允许整夜使用！1)温度控制系统温度控制系统 恒温水浴锅、恒温空气摇床：恒温水浴锅、恒温空气摇床：根据需要设置根据需要设置温
25、度温度；恒温水浴锅中要保持足够的水量。恒温水浴锅中要保持足够的水量。分子生物学基本技术分子生物学基本技术 1)温度控制系统温度控制系统 2)实验用水实验用水处理系统处理系统 3)消毒系统消毒系统 4)计量系统计量系统 5)离心设备离心设备 6)电泳装置电泳装置 7)凝胶成像系统凝胶成像系统防污染防污染3)消毒系统消毒系统 高压灭菌锅高压灭菌锅 1 在主体腔内加入在主体腔内加入适量适量的清水，将灭菌物品放入灭菌器内；的清水，将灭菌物品放入灭菌器内；2 盖好盖好（注意密封胶圈）顶盖后必须（注意密封胶圈）顶盖后必须拧紧拧紧顶盖；顶盖；3 打开灭菌器的热源，开启打开灭菌器的热源，开启排气阀排气阀排完空
26、气后（约在水沸腾排完空气后（约在水沸腾后后10 min15 min）关闭排气阀；）关闭排气阀；4 将压力升至将压力升至102.9 kPa(1.05 kg/),温度要求达温度要求达121,维维持到规定时间（根据物品性质以及有关情况确定持到规定时间（根据物品性质以及有关情况确定,一般一般20 min30 min）;5 灭菌结束后灭菌结束后,要待要待压力压力恢复到恢复到零位零位后开盖取物。后开盖取物。对对液体液体进行灭菌，容器不能密封、进行灭菌，容器不能密封、体积体积不能超过容积的不能超过容积的2/3；灭菌结束后不能打开灭菌结束后不能打开排气排气阀（尤其是上排气阀）。阀（尤其是上排气阀）。分子生物学
27、基本技术分子生物学基本技术 1)温度控制系统温度控制系统 2)实验用水处理系统实验用水处理系统 3)消毒系统消毒系统 4)计量系统计量系统 5)离心设备离心设备 6)电泳装置电泳装置 7)凝胶成像系统凝胶成像系统4)计量系统计量系统-质量质量电子天平电子天平 对对环境环境高度敏感的精密电子测量仪器高度敏感的精密电子测量仪器,使用时应小心操作使用时应小心操作,台台面应无明显振动面应无明显振动,不要放在空调口。不要放在空调口。注意：注意：1 调整调整底角螺丝底角螺丝使水平指示器的气泡居中。使水平指示器的气泡居中。2 使用精密电子天平前最好使用精密电子天平前最好热机热机1520分钟，以确保正分钟，以
28、确保正确读取电子天平的数值。确读取电子天平的数值。3 称量物品前先按（称量物品前先按（归零归零）键；称样时关上天平小门。）键；称样时关上天平小门。4 称物品时，勿超过精密电子天平的称物品时，勿超过精密电子天平的最大称量最大称量，且需将物，且需将物品放于品放于称盘中心称盘中心，需，需轻拿轻放轻拿轻放，不要冲击称盘。，不要冲击称盘。5 严禁有腐蚀性的称物严禁有腐蚀性的称物直接接触直接接触称盘与天平面板。称盘与天平面板。6 使用完毕后，要使用完毕后，要清理清理称盘、面板，保持仪器清洁。称盘、面板，保持仪器清洁。4)计量系统计量系统-体积体积 依称量需要选择合适的器皿依称量需要选择合适的器皿-各种量筒
29、、移液管、容量瓶。各种量筒、移液管、容量瓶。移液器：移液器：量程包括：量程包括：0.1-2.5 ul，0.5-10 ul，10-100 ul，20-200ul，100-1000 ul，500-5000 ul。单道可调移液器、多道可调移液器、单道可调移液器、多道可调移液器、电子调节电子调节/显示移液器。显示移液器。Tip头头/吸头吸头/枪头：枪头：10 ul（白），（白），200 ul（黄），（黄），1 000 ul（蓝），（蓝），5 000 ul（白）。（白）。移液器使用方法及注意事项移液器使用方法及注意事项:1.设定移液体积设定移液体积 从小量程调节至大量程时，逆时针旋转刻度；从小量程调节至
30、大量程时，逆时针旋转刻度；应先调至超过设定体积刻度，再回调至设定体积，这样可以应先调至超过设定体积刻度，再回调至设定体积，这样可以保证移液器的精确度。保证移液器的精确度。2装配移液枪头装配移液枪头 将移液枪垂直插入吸头，左右旋转半圈，上紧即可。将移液枪垂直插入吸头，左右旋转半圈，上紧即可。忌用忌用移液器撞击吸头的方法是非常不可取的，长期这样移液器撞击吸头的方法是非常不可取的，长期这样 操作会导致移液器的零件因撞击而松散。操作会导致移液器的零件因撞击而松散。移液器使用方法及注意事项移液器使用方法及注意事项:3吸液及放液吸液及放液 垂直垂直吸液：吸液吸液：吸液前前排空气体，吸头排空气体，吸头尖端尖
31、端浸入液面浸入液面3mm以下以下慢吸慢放慢吸慢放；放液放液时如果量很小则应吸头尖端可靠容器内壁。时如果量很小则应吸头尖端可靠容器内壁。绝不允许绝不允许突然松开，以防溶液吸入过快而冲入移液器内腐蚀突然松开，以防溶液吸入过快而冲入移液器内腐蚀柱塞。柱塞。4吸有液体的移液枪吸有液体的移液枪不应平放不应平放，枪头内的液体很容易污染枪，枪头内的液体很容易污染枪内部而可能导致枪的弹簧生锈。内部而可能导致枪的弹簧生锈。5移液枪在每次实验后应将刻度调至移液枪在每次实验后应将刻度调至最大最大，让弹簧回复原型，让弹簧回复原型以延长移液枪的使用寿命。以延长移液枪的使用寿命。移液器使用方法及注意事项移液器使用方法及注
32、意事项:6切忌切忌 吸液时吸液时突然松开；突然松开；吸有液体的移液枪吸有液体的移液枪平放；平放；所设量程不在移液器所设量程不在移液器量程范围量程范围内（会卡住机械装置，内（会卡住机械装置，损坏了移液器）；损坏了移液器）；严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体（如浓酸、严禁吸取有强挥发性、强腐蚀性的液体（如浓酸、浓碱、有机物等）；浓碱、有机物等）；使用完没有将刻度调至最大量程。使用完没有将刻度调至最大量程。分子生物学基本技术分子生物学基本技术 1)温度控制系统温度控制系统 2)实验用水处理系统实验用水处理系统 3)消毒系统消毒系统 4)计量系统计量系统 5)离心设备离心设备 6)电泳装置电泳装置 7
33、)凝胶成像系统凝胶成像系统 一般在低速离心时（转一般在低速离心时（转速小于速小于5000 r/min5000 r/min），离心），离心力的大小常用力的大小常用转速转速r/minr/min（rpmrpm）来表示，而超速离心来表示，而超速离心时则用时则用离心力离心力g g或或g g来表示。来表示。由于离心管从管口到旋由于离心管从管口到旋转中心的距离是不同的，所转中心的距离是不同的，所以在同样转速时，管口和管以在同样转速时，管口和管底所受到的离心力也有差别。底所受到的离心力也有差别。科技文献中离心力的数科技文献中离心力的数据通常是指其据通常是指其平均值，平均值，即离即离心管中点的离心力。心管中点的
34、离心力。旋转轴旋转轴34340 0rminravrmax5)5)离心设备离心设备 低速低速离心机离心机:最大转速最大转速6000 rpm6000 rpm左右，最大相对左右，最大相对离心力近离心力近60006000g g，通常不带冷冻系统。，通常不带冷冻系统。超速超速离心机：大于离心机：大于303010 000 r/min10 000 r/min，最大离心，最大离心力力600,000g600,000g，有，有驱动驱动和和速度控制速度控制系统，系统，温度温度控制系控制系统，统，真空真空系统（减少摩擦）。系统（减少摩擦）。超速离心机的出现，使生物科学的研究领域有了超速离心机的出现，使生物科学的研究领
35、域有了新的扩展，它能使过去仅仅在电子显微镜观察到的新的扩展，它能使过去仅仅在电子显微镜观察到的亚细胞器亚细胞器得到分级分离，还可以分离病毒、核酸、得到分级分离，还可以分离病毒、核酸、蛋白质和多糖等。蛋白质和多糖等。5)5)离心设备离心设备 高速（冷冻）高速（冷冻）离心机：最大转速为离心机：最大转速为20 000-25 20 000-25 000rpm000rpm（r/minr/min），最大相对离心力为），最大相对离心力为89 00089 000g g。通常配有各种通常配有各种角式角式转头、转头、荡平式荡平式转头、转头、微孔板微孔板转头等，一般都有转头等，一般都有制冷制冷系统，以消除高速旋转转
36、头系统，以消除高速旋转转头与空气之间摩擦而产生的热量，转速、温度和时间与空气之间摩擦而产生的热量，转速、温度和时间都可以严格准确地控制，并有都可以严格准确地控制，并有数字显示数字显示。一般分子实验室一般分子实验室必备必备的设备。的设备。5)5)离心设备离心设备 角式转头是指角式转头是指离心管腔离心管腔与与转轴转轴成一定倾角的转头。离心管成一定倾角的转头。离心管腔的中心轴与旋转轴之间的角度在腔的中心轴与旋转轴之间的角度在20-4020-40度度之间，角度越大分之间，角度越大分离效果越好。离效果越好。离心过程中，重心低，运转平衡，颗粒在沉降时先沿离心离心过程中，重心低，运转平衡，颗粒在沉降时先沿离
37、心力方向撞向离心管壁，然后再沿管壁滑向管底，因此管的一侧力方向撞向离心管壁，然后再沿管壁滑向管底，因此管的一侧就会出现颗粒沉积，此现象称为就会出现颗粒沉积，此现象称为“壁效应壁效应”。壁效应容易使沉降颗粒受突然变速所产生的对流扰乱，影壁效应容易使沉降颗粒受突然变速所产生的对流扰乱，影响分离效果。响分离效果。角式转头角式转头荡平式转头荡平式转头：这种转头有这种转头有4 4或或6 6个个自由活动的吊桶自由活动的吊桶（离心（离心套管），当转头静止时，吊桶垂直悬挂，当转套管），当转头静止时，吊桶垂直悬挂，当转头转速达到每分钟头转速达到每分钟200200到到800800转时，吊桶荡至水转时，吊桶荡至水平
38、位置。平位置。微孔板转头微孔板转头：这种转头可离心高达这种转头可离心高达 9696孔微孔板、标准酶孔微孔板、标准酶标板、标板、PCRPCR板等。板等。离心管主要用离心管主要用塑料塑料和和不锈钢不锈钢制成：制成：塑料离心管常用材料有塑料离心管常用材料有聚乙烯（聚乙烯（PEPE），），聚碳酸酯聚碳酸酯（PCPC），聚丙烯（），聚丙烯（PPPP）等，其中）等，其中PPPP管性能较好。管性能较好。塑料离心管的优点是透明（或半透明），硬度小，塑料离心管的优点是透明（或半透明），硬度小，可用穿刺法取出梯度。缺点是易变形，抗有机溶剂腐可用穿刺法取出梯度。缺点是易变形，抗有机溶剂腐蚀性差，使用寿命短。蚀性差，
39、使用寿命短。塑料离心管都有管盖，离心前塑料离心管都有管盖，离心前管盖管盖必须盖严，倒必须盖严，倒置不漏液。管盖有三种作用：置不漏液。管盖有三种作用：防止样品外泄。用于防止样品外泄。用于有放射性或强腐蚀性的样品时，这点尤其重要。有放射性或强腐蚀性的样品时，这点尤其重要。防防止样品挥发。止样品挥发。支持离心管，防止离心管变形。支持离心管，防止离心管变形。5)5)离心设备（耗材）离心设备（耗材）-离心管离心管5)5)离心设备离心设备-使用注意事项使用注意事项 1.1.离心机应离心机应放置放置在稳定的台面上，以防离心机在稳定的台面上，以防离心机滑动或振动，出现事故；滑动或振动，出现事故；2.2.离心前
40、必须仔细离心前必须仔细检查检查转头各孔内有无异物、转头各孔内有无异物、转头安装是否紧固。转头安装是否紧固。3.3.样品的样品的装载装载和和平衡平衡：使用离心机时，必须事：使用离心机时，必须事先在天平上精密地先在天平上精密地平衡平衡离心管和其内容物；当转头离心管和其内容物；当转头只是部分装载时，管子必须互相只是部分装载时，管子必须互相对称（保证平衡）对称（保证平衡）地放在转头中，以便使负载均匀地分布在转头的周地放在转头中，以便使负载均匀地分布在转头的周围。围。5)5)离心设备离心设备-使用注意事项使用注意事项 4.4.低温低温离心时，转头及离心机要预冷后再使用。离心时，转头及离心机要预冷后再使用
41、。5.5.装载装载溶液溶液时，要根据待离心液体的时，要根据待离心液体的性质性质及及体体积积选用适合的离心管，液体不得装得过多，以防离选用适合的离心管，液体不得装得过多，以防离心时甩出，造成转头不平衡、生锈或被腐蚀。心时甩出，造成转头不平衡、生锈或被腐蚀。6.6.开始离心后请不要立即走开，需等待离心机开始离心后请不要立即走开，需等待离心机达到设定转速后再离开，达到设定转速后再离开，注意观察注意观察期间是否有声音期间是否有声音异常；发现声音不正常时，要停机检查，排除故障异常；发现声音不正常时，要停机检查，排除故障（如离心管不对称、质量不等、离心机位置不水平（如离心管不对称、质量不等、离心机位置不水
42、平或螺帽松动等）后再工作。或螺帽松动等）后再工作。5)5)离心设备离心设备-使用注意事项使用注意事项 7.7.冷冻离心冷冻离心结束后结束后，关掉电源，敞开离心机盖子，关掉电源，敞开离心机盖子，擦拭离心机内壁，防止凝结的水气化成水引起生锈。擦拭离心机内壁，防止凝结的水气化成水引起生锈。8.8.离心中有液体溅出，需立刻离心中有液体溅出，需立刻清理清理，防止腐蚀和，防止腐蚀和生锈。生锈。9.9.离心时离心时不准不准搬动离心机、搬动离心机、不准不准开盖，开盖，不准不准用手用手停止转头。停止转头。10.10.每次停机后每次停机后再开机再开机的时间间隔不得少于的时间间隔不得少于5 5分钟，分钟，以免压缩机
43、堵转而损坏。以免压缩机堵转而损坏。1111、每次离心完成后，将、每次离心完成后，将转子转子取出，否则长时间取出，否则长时间放在轴上，可能锈死。放在轴上，可能锈死。分子生物学基本技术分子生物学基本技术 1)温度控制系统温度控制系统 2)实验用水处理系统实验用水处理系统 3)消毒系统消毒系统 4)计量系统计量系统 5)离心设备离心设备 6)电泳装置电泳装置 7)凝胶成像系统凝胶成像系统结构组成：结构组成：全敞开式不漏光全敞开式不漏光暗箱暗箱，防泄露紫外凝胶，防泄露紫外凝胶观察窗观察窗，自，自动升降折叠式白光平台及动升降折叠式白光平台及样品平台样品平台。全自动软件控制全自动软件控制光源光源选择、选择
44、、滤光片滤光片选择、选择、镜头镜头马达马达驱动变焦驱动变焦/聚焦以及聚焦以及图像捕获图像捕获使用注意：使用注意：开机顺序，先开凝胶成像系统，再开电脑控制软件。开机顺序，先开凝胶成像系统，再开电脑控制软件。凝胶成像系统的门、电脑不能用凝胶成像系统的门、电脑不能用污染的手套污染的手套接触。接触。照相后把废胶取出，并用较软的纸擦拭干净。照相后把废胶取出，并用较软的纸擦拭干净。7)7)凝胶成像系统凝胶成像系统第三节第三节实验安排实验安排实验安排实验安排 实验二实验二 组织组织DNA的提取的提取-（4课时）课时）实验三实验三 琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳-（2课时）课时）实验四实验四 PCR扩增扩增-（
45、2课时）课时）实验五聚丙烯酰胺凝胶电泳实验五聚丙烯酰胺凝胶电泳-（4课时）课时）实验六目的实验六目的DNA片段的纯化片段的纯化-（2课时）课时）实验七实验七 DNA重组重组-（4课时）课时）实验准备实验准备 准备试验准备试验(第一次试验拿上小眼科剪第一次试验拿上小眼科剪)打扫卫生打扫卫生 移液器：每组离开时检查移液器数目、是移液器：每组离开时检查移液器数目、是否归至最大量程；值日组最后走时再检查否归至最大量程；值日组最后走时再检查数目、量程。数目、量程。实验报告一实验报告一（电子版）（电子版）1组：分子生物学实验室规程组：分子生物学实验室规程 2组：电泳系统污染与非污染区操作规程组：电泳系统污
46、染与非污染区操作规程 3-6组：制作实验仪器使用注意事项简明标签？组：制作实验仪器使用注意事项简明标签？包括：冷藏柜、空调、制冰机、液氮罐、微波包括：冷藏柜、空调、制冰机、液氮罐、微波炉、培养箱、恒温水浴锅、移液器、离心机、炉、培养箱、恒温水浴锅、移液器、离心机、凝胶成像系统凝胶成像系统依依却却奔奔村村坊坊精精拼拼 命命丧丧抖抖磨磨希希精心精心 希望希望 依然依然 飞舞飞舞 拼命拼命 抖动抖动 寻找寻找 磨坊磨坊继续继续 奔跑奔跑 大惊失色大惊失色 千呼万唤千呼万唤 垂头丧气垂头丧气10 10 风筝风筝 10 10 风筝风筝 我们去放风筝。一个人用手托着，我们去放风筝。一个人用手托着，另一个人
47、牵着线，站在远远的地方，说另一个人牵着线，站在远远的地方，说声声“放放”，那线一紧一松，风筝就凌空，那线一紧一松，风筝就凌空飞起，渐渐高过树梢了。牵线人飞快地飞起，渐渐高过树梢了。牵线人飞快地跑起来。风筝越飞越高，在空中翩翩飞跑起来。风筝越飞越高，在空中翩翩飞舞着，我们快活地喊叫着，在田野里拼舞着，我们快活地喊叫着，在田野里拼命地奔跑。村里人看见了，说：命地奔跑。村里人看见了，说：“放得放得这么高！这么高！”10 10 风筝风筝 从早晨玩到下午，我们还是歇从早晨玩到下午，我们还是歇不下来，牵着风筝在田野里奔跑。不下来，牵着风筝在田野里奔跑。风筝越飞越高，似乎飞到了云彩上。风筝越飞越高，似乎飞到
48、了云彩上。兴奋快乐喜悦愉快兴奋快乐喜悦愉快乐滋滋美滋滋乐呵呵乐滋滋美滋滋乐呵呵欣喜若狂兴高采烈欣喜若狂兴高采烈 10 10 风筝风筝 从早晨玩到下午，我们还是歇从早晨玩到下午，我们还是歇不下来，牵着风筝在田野里奔跑。不下来，牵着风筝在田野里奔跑。风筝越飞越高，似乎飞到了云彩上。风筝越飞越高，似乎飞到了云彩上。10 10 风筝风筝 我们快活地喊叫着，在田野里我们快活地喊叫着，在田野里拼命地奔跑。拼命地奔跑。从早晨玩到下午，我们还是歇从早晨玩到下午，我们还是歇不下来，牵着风筝在田野里奔跑。不下来，牵着风筝在田野里奔跑。10 10 风筝风筝 忽然吹来一阵风，线嘣地断了。忽然吹来一阵风，线嘣地断了。风
49、筝在空中抖动了一下，便极快地风筝在空中抖动了一下，便极快地飞走了。我们大惊失色，千呼万唤，飞走了。我们大惊失色，千呼万唤，那风筝越来越小，倏地便没了踪影。那风筝越来越小，倏地便没了踪影。10 10 风筝风筝 忽然吹来一阵风，线嘣地断了。忽然吹来一阵风，线嘣地断了。风筝在空中抖动了一下，便极快地风筝在空中抖动了一下，便极快地飞走了。我们飞走了。我们大惊失色，千呼万唤大惊失色，千呼万唤，那风筝越来越小，倏地便没了踪影。那风筝越来越小，倏地便没了踪影。10 10 风筝风筝 忽然吹来一阵风，线嘣忽然吹来一阵风，线嘣地断了。风筝在空中抖动了地断了。风筝在空中抖动了一下，便极快地飞走了。我一下，便极快地飞
50、走了。我们大惊失色，们大惊失色，千呼万唤千呼万唤，那，那风筝越来越小，倏地便没了风筝越来越小，倏地便没了踪影。踪影。10 10 风筝风筝 1、默读、默读58自然段，画出表现自然段，画出表现“我们我们”心情的句子或词语。心情的句子或词语。2、想一想你从这些句子或词语中、想一想你从这些句子或词语中体会到了什么？体会到了什么？10 10 风筝风筝 我们都哭了，在田野里四处寻我们都哭了，在田野里四处寻找，找了半个下午，还是没有踪影。找，找了半个下午，还是没有踪影。我们垂头丧气地坐在田埂上，一抬我们垂头丧气地坐在田埂上，一抬头，看见远远的水面上半沉半浮着头，看见远远的水面上半沉半浮着一个巨大的木轮，不停
