1、第十四章第十四章 酶免疫技术酶免疫技术第一节第一节 酶免疫技术原理及分类酶免疫技术原理及分类 一、技术原理一、技术原理 二、分类二、分类第二节酶免疫技术要点第二节酶免疫技术要点 一、酶和酶作用底物一、酶和酶作用底物 二、酶标记抗体或抗原二、酶标记抗体或抗原 三、固相载体三、固相载体第三节酶联免疫吸附试验第三节酶联免疫吸附试验 一、基本原理一、基本原理 二、方法类型及反应原理二、方法类型及反应原理第四节第四节 酶免技术应用酶免技术应用小结小结标记免疫技术标记免疫技术=抗原抗体反应抗原抗体反应示踪物标记示踪物标记灵敏性灵敏性特异性特异性标记免疫技术的主要特点：标记免疫技术的主要特点：高特异性、高灵
2、敏性高特异性、高灵敏性免疫技术免疫技术+标记技术标记技术一、标记免疫技术一、标记免疫技术标记免疫技术标记免疫技术 v标记免疫技术指用标记免疫技术指用示踪物示踪物标记抗体或抗原进行的抗原标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应；抗体反应；v并并借助借助于荧光显微镜，射线测量仪，酶标检测仪，电于荧光显微镜，射线测量仪，酶标检测仪，电子显微镜和发光免疫测定仪等精密子显微镜和发光免疫测定仪等精密仪器仪器，对实验结果，对实验结果直接镜检直接镜检观察观察或进行自动化或进行自动化测定测定；v可以在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗可以在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行原抗体反应进行定性和
3、定位研究定性和定位研究；v也可对体液中的半抗原、抗原或抗体进行也可对体液中的半抗原、抗原或抗体进行定性和定量定性和定量测定。测定。标记免标记免疫技术疫技术免疫测免疫测定技术定技术免疫组免疫组化技术化技术示踪物及示踪物及标记技术标记技术酶免疫技术酶免疫技术荧光免疫技术荧光免疫技术放射免疫技术放射免疫技术化学发光技术化学发光技术金免疫技术金免疫技术生物素生物素-亲和素免亲和素免疫放大技术疫放大技术 放射免疫技术放射免疫技术发光免疫技术发光免疫技术酶免疫技术酶免疫技术三大经典标记技术三大经典标记免疫技术三大经典标记免疫技术v核心试剂核心试剂:酶标记的抗体或抗原酶标记的抗体或抗原v酶标物特点：酶标物特
4、点：免疫学活性免疫学活性 酶对底物的催化活性酶对底物的催化活性抗原抗体反应的特异性抗原抗体反应的特异性+酶高效催化反应的专一性、酶高效催化反应的专一性、放大性放大性二、酶免技术原理及特点二、酶免技术原理及特点v免疫技术：免疫技术：Ag+Ab AgAb v酶标记的免疫技术：酶标记的免疫技术：Ag*+Ab Ag*Ab v标记物的作用有二：标记物的作用有二：一是便于观察反应结果，一是便于观察反应结果，二是提高测定的敏感性二是提高测定的敏感性 特点：特点：灵敏度高、特异性强、灵敏度高、特异性强、准确性好准确性好酶标记试剂能够较长时酶标记试剂能够较长时间保持稳定间保持稳定操作简便。操作简便。原理：原理：
5、酶标抗体（抗原）与抗原酶标抗体（抗原）与抗原（抗体）的特异性反应（抗体）的特异性反应酶对底物的显色反应酶对底物的显色反应对抗原或抗体进行定位、对抗原或抗体进行定位、定性或定量的测定分析定性或定量的测定分析 酶免技术原理及特点酶免技术原理及特点三、酶免疫技术分类三、酶免疫技术分类 酶酶免免疫疫技技术术酶免疫组化酶免疫组化酶免疫测定酶免疫测定均均 相相非均相非均相（异相）（异相）固相酶免疫测定固相酶免疫测定液相酶免疫测定液相酶免疫测定组织切片或其它标本中抗原的定位组织切片或其它标本中抗原的定位 液体标本中抗原或液体标本中抗原或抗体的定性和定量抗体的定性和定量用于小分子激素和半抗原（如药物）的测定用
6、于小分子激素和半抗原（如药物）的测定 酶标记物与相应的抗原或抗体结合后，酶标记物与相应的抗原或抗体结合后，标记酶的活性会发生改变，标记酶的活性会发生改变，不用分离不用分离结合结合和游离酶标记物，和游离酶标记物，通过测定标记酶的活性通过测定标记酶的活性的改变，而确定抗原或抗体的含量。的改变，而确定抗原或抗体的含量。原理原理（一）、均相酶免疫测定（一）、均相酶免疫测定最具代表性的两种技术最具代表性的两种技术酶扩大免疫测定技术酶扩大免疫测定技术EMITEMITenzyme-mutiplied immunoassay technique克隆酶供体免疫测定克隆酶供体免疫测定 CEDIACEDIAclon
7、ed enzyme donor immunoassay 均相酶免疫测定均相酶免疫测定EMITEMIT示意图示意图毒品(如吗啡及其衍生物)+溶菌酶；酶底物(藤黄微球菌)。酶的活性与待测样品中抗原的量成正比，测定酶活性以标准曲线推算出待测抗原的量。CEDIACEDIA示意图示意图酶的活性与待测样品中抗原的量成反比。分类：分类：液相酶免疫测定液相酶免疫测定 固相酶免疫测定固相酶免疫测定 以聚苯乙烯等材料作为固相载体的酶联免疫吸附试以聚苯乙烯等材料作为固相载体的酶联免疫吸附试验（验（ELISAELISA）是目前最为常用的固相酶免疫测定是目前最为常用的固相酶免疫测定与均相不同与均相不同之处之处需分离游离
8、与结合的酶标记物需分离游离与结合的酶标记物（二）、非均相酶免疫测定（二）、非均相酶免疫测定第二节第二节ELISAELISA的技术要点的技术要点 基本原理v1.1.抗原或抗体的固相化抗原或抗体的固相化 ；v2.2.抗原或抗体的酶标记抗原或抗体的酶标记 ；v3.3.受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载
9、体上。此时固相上的酶量抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。三个核心试剂三个核心试剂 v免疫吸附剂（固相载体）免疫吸附剂（固相载体）v酶结合物酶结合物v酶的底物酶的底物 ELISAELISA试剂盒组分试剂盒组分v（1 1）已包被抗原或抗体的固相载体；）已包被抗原或抗体的固相
10、载体；v（2 2）酶标记的抗原或抗体（酶结合物）；）酶标记的抗原或抗体（酶结合物）；v（3 3）酶的底物；）酶的底物；v（4 4）阴性对照品和阳性对照品；）阴性对照品和阳性对照品；v（5 5）结合物及标本的稀释液；）结合物及标本的稀释液；v（6 6）洗涤液；）洗涤液；v（7 7）酶反应终止液。）酶反应终止液。标记酶的要求：标记酶的要求：纯度高纯度高、活性高活性高 性质稳定性质稳定 标记后不影响抗原或抗体的活性，也不降低酶的活性标记后不影响抗原或抗体的活性，也不降低酶的活性 酶催化底物的酶催化底物的显色信号显色信号易于判断和测量易于判断和测量 酶的反应产物稳定，检测简便、快速酶的反应产物稳定，检
11、测简便、快速 酶的底物易于配制保存，酶及底物安全、易得、价廉酶的底物易于配制保存，酶及底物安全、易得、价廉 一、酶和酶作用底物一、酶和酶作用底物辣根过氧化物酶（辣根过氧化物酶（HRPHRP）糖蛋白（主酶）（无色）糖蛋白（主酶）（无色）亚铁血红素（辅基）（暗棕色）亚铁血红素（辅基）（暗棕色）主酶与酶活性无关主酶与酶活性无关 辅基是酶的活性中心辅基是酶的活性中心RZRZ值：值：403nm 403nm（辅基）（辅基）与与275nm275nm（主酶）（主酶）ODOD值之比值之比 （2.5-3.02.5-3.0）能被能被58%-62%58%-62%饱和硫饱和硫酸铵沉淀，酸铵沉淀，pH3.5-pH3.5-
12、1212均较稳定均较稳定 ELISAELISA中应用最为广中应用最为广泛的标记用酶泛的标记用酶 常用酶常用酶酶和酶作用底物酶和酶作用底物碱性磷酸酶（碱性磷酸酶（APAP）菌源性菌源性AP AP 肠粘膜肠粘膜APAP 半乳糖苷酶（半乳糖苷酶（-Gal-Gal）用于均相酶用于均相酶免疫测定免疫测定 常用酶常用酶酶和酶作用底物酶和酶作用底物另：葡萄糖氧化酶、糖化酶、乙酰胆碱酯酶等另：葡萄糖氧化酶、糖化酶、乙酰胆碱酯酶等v底物选择：底物选择：1.1.底物应该是无色，经酶催化后有明显颜色变化；底物应该是无色，经酶催化后有明显颜色变化；2.2.所显色泽易于洗脱；所显色泽易于洗脱；3.3.显色后的产物要稳定
13、，定量检测时所产生的有显色后的产物要稳定，定量检测时所产生的有色物质应是可溶的；色物质应是可溶的；4.4.价廉、易得、无毒。价廉、易得、无毒。酶和酶作用底物酶和酶作用底物HRPHRP的底物的底物 DHDH2 2+H+H2 2O O2 2 D+2H D+2H2 2O O HRPHRP供氢体供氢体DHDH2 2习惯上被称为底物习惯上被称为底物，底物有多种，底物有多种 H H2 2O O2 2为受氢体，为受氢体，HRPHRP对受氢体的专一性很高对受氢体的专一性很高 常用底物常用底物酶和酶作用底物酶和酶作用底物邻苯二胺邻苯二胺 OPDOPD四甲基联苯胺四甲基联苯胺 TMBTMB5-5-氨基水杨酸氨基水
14、杨酸5-ASA 5-ASA 2,2-2,2-氨基氨基-二二(3-(3-乙基乙基-苯并噻苯并噻唑啉磺酸唑啉磺酸-6)-6)铵盐铵盐 ABTSABTS常用底物常用底物酶和酶作用底物酶和酶作用底物OPDOPD反应后显反应后显橙黄色橙黄色，加酸终止反应后呈加酸终止反应后呈棕黄色棕黄色，测定波长，测定波长492nm492nm。不稳定，致。不稳定，致癌性。癌性。TMBTMB反应后显反应后显蓝色蓝色 ，加酸终止反应后变加酸终止反应后变为为黄色黄色,测定波长测定波长450nm450nm ，稳定，无，稳定，无致癌性，致癌性，ELISAELISA中应中应用最广泛的底物。用最广泛的底物。HRPHRP的常见底物的常见
15、底物 酶和酶作用底物酶和酶作用底物APAP的的底物底物-Gal-Gal的底物的底物 对对-硝基苯磷酸酯硝基苯磷酸酯（pNPP pNPP）4-4-甲基伞酮基甲基伞酮基-D-D半半-乳糖苷乳糖苷（4MUG 4MUG）经经APAP作用后的产物为黄色对作用后的产物为黄色对硝基酚，最大吸收峰波长为硝基酚，最大吸收峰波长为405 nm405 nm。酶作用后，生成高强度酶作用后，生成高强度荧光物荧光物 ，用荧光计测，用荧光计测量。量。常用底物常用底物酶和酶作用底物酶和酶作用底物酶免疫技术的核心组成部分酶免疫技术的核心组成部分 酶结合物酶结合物（conjugateconjugate）酶标记物酶标记物 通过化学
16、反应或免通过化学反应或免疫学反应，让酶与疫学反应，让酶与抗体或抗原形成的抗体或抗原形成的结合物结合物 二、酶标记的抗体或抗原二、酶标记的抗体或抗原（一）抗原或抗体v抗原要求纯度高，抗原性完整抗原要求纯度高，抗原性完整天然抗原、重组抗原和合成肽。天然抗原、重组抗原和合成肽。v抗体需要特异性好、效价高、亲合力强以及抗体需要特异性好、效价高、亲合力强以及比活性较高，能批量生产，易纯化。比活性较高，能批量生产，易纯化。多克隆和单克隆抗体。多克隆和单克隆抗体。v结合剂要求：结合剂要求：1.1.不影响酶及抗体或抗原活性；不影响酶及抗体或抗原活性；2.2.不产生干扰物质；不产生干扰物质；3.3.结合效率要高
17、；结合效率要高；4.4.不出现非特异性反应；不出现非特异性反应；5.5.易得、价廉。易得、价廉。（二）酶标记抗体或抗原（二）酶标记抗体或抗原制备方法要求制备方法要求技术方法简单、产率高，重复性好技术方法简单、产率高，重复性好标记反应不影响酶和抗原或抗体标记反应不影响酶和抗原或抗体的活性的活性酶标记物稳定酶标记物稳定 ，不形成聚合物，不形成聚合物酶标记抗体或抗原酶标记抗体或抗原制备方法制备方法过碘酸钠法（直接法）过碘酸钠法（直接法）常用于常用于HRPHRP标记抗体或抗原标记抗体或抗原 戊二醛交联法戊二醛交联法酶标记抗体或抗原酶标记抗体或抗原戊二醛交联法戊二醛交联法戊二醛分子中有两个相同的醛基，可
18、分别戊二醛分子中有两个相同的醛基，可分别与与HRPHRP和蛋白质分子中的氨基结合。该法和蛋白质分子中的氨基结合。该法有有一步法一步法和和二步法二步法。二步法标记效率比一。二步法标记效率比一步法高，酶标记物质量较均一。步法高，酶标记物质量较均一。酶标记抗体或抗原酶标记抗体或抗原v 一步法：一步法：将将2 25mg 5mg 纯抗体与纯抗体与5mgHRP 5mgHRP 混合于混合于0.1mol/L pH 6.8 0.1mol/L pH 6.8 的的磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液1ml 1ml 中，中，44下用同上缓冲液透析平衡。磁下用同上缓冲液透析平衡。磁力搅拌下加入力搅拌下加入1%1%戊二醛戊二醛0.0
19、5ml0.05ml，在室温下放置，在室温下放置2h2h，在，在44下用下用0.05mol/L pH 8.0 Tris 0.05mol/L pH 8.0 Tris 缓冲液透析平衡，即可。缓冲液透析平衡，即可。v 二步法：二步法：第一步将过量的戊二醛与酶反应，使酶仅与戊二醛结合；第一步将过量的戊二醛与酶反应，使酶仅与戊二醛结合；第二步是除去多余的戊二醛分子，加入免疫球蛋白，使第二步是除去多余的戊二醛分子，加入免疫球蛋白，使球蛋白上的氨基与已结合酶的戊二醛分子上的另一活性球蛋白上的氨基与已结合酶的戊二醛分子上的另一活性基团结合，形成一分子酶和一分子免疫球蛋白结合物。基团结合，形成一分子酶和一分子免疫
20、球蛋白结合物。纯化及鉴定纯化及鉴定标记完成后应除去反应液中的游离酶、标记完成后应除去反应液中的游离酶、游离抗体或抗原、酶聚合物以及抗体游离抗体或抗原、酶聚合物以及抗体或抗原聚合物，避免游离酶增加非特或抗原聚合物，避免游离酶增加非特异显色，以及游离抗体或抗原起竞争异显色，以及游离抗体或抗原起竞争作用而降低特异性染色强度作用而降低特异性染色强度 常用的纯化方法：常用的纯化方法：Sephadex G-200/G-150G-200/G-150过柱层析纯化过柱层析纯化50%50%饱和硫酸铵沉淀提纯饱和硫酸铵沉淀提纯酶标记抗体或抗原酶标记抗体或抗原固相抗体或抗原是非均相酶免技术中将固相抗体或抗原是非均相酶
21、免技术中将游离和结合的酶标记物迅速分离的最常游离和结合的酶标记物迅速分离的最常用方法用方法 固相抗体或抗原就是把抗体或抗原结合固相抗体或抗原就是把抗体或抗原结合到固相载体的表面到固相载体的表面 三、固相载体三、固相载体要求要求 吸附性能好吸附性能好 不参与化学反应不参与化学反应 不影响免疫反应性不影响免疫反应性 空白值空白值低、透明度高低、透明度高 固相方法简便易行，快速经济固相方法简便易行，快速经济种类种类塑料制品塑料制品（微量（微量反应板）反应板）微颗粒微颗粒膜载体膜载体 固相载体固相载体将抗原或抗体结合于固相载体将抗原或抗体结合于固相载体 一般一般ELISAELISA包被用的包被用的缓冲
22、液缓冲液都是偏都是偏碱性的碳酸盐缓冲液（碱性的碳酸盐缓冲液（pH9.6)pH9.6)，目，目的就是要让被包被的蛋白质暴露较的就是要让被包被的蛋白质暴露较多的阴性集团，更稳定的吸附到板多的阴性集团，更稳定的吸附到板子上。子上。包被包被coatingcoating包被与封闭包被与封闭用用1%1%5%5%的牛血清白蛋白或的牛血清白蛋白或5%5%20%20%小牛血小牛血清消除固相载体表面未结合的位点，消除非清消除固相载体表面未结合的位点，消除非特异性吸附特异性吸附封闭封闭blockingblocking洗涤液与稀释液洗涤液与稀释液v在板式在板式ELISAELISA中，常用的稀释液为含中，常用的稀释液为
23、含0.05%0.05%吐吐温温-20-20磷酸缓冲盐水（磷酸缓冲盐水（PBS,pH7.4PBS,pH7.4）。）。终止液终止液 v常用的常用的HRPHRP反应终止液为硫酸。反应终止液为硫酸。v常用的常用的APAP反应终止液为碳酸钠。反应终止液为碳酸钠。四、固相酶免疫测定仪（酶标仪）四、固相酶免疫测定仪（酶标仪）v比色比色v测定波长、吸光度范围、光学系统、检测速测定波长、吸光度范围、光学系统、检测速度、震板功能、温度控制、定性和定量的软度、震板功能、温度控制、定性和定量的软件，自动洗板、温育、加样件，自动洗板、温育、加样v450nm450nm、492nm492nm、620nm620nm、630n
24、m630nm、650nm650nm、405nm405nm第三节酶联免疫吸附试验第三节酶联免疫吸附试验 底物显色底物显色定性或定量的分析定性或定量的分析原理原理包被包被反应反应加入待测抗体或加入待测抗体或抗原和酶标抗原抗原和酶标抗原或抗体或抗体洗涤洗涤使结合在固相上使结合在固相上的抗原抗体复合物的抗原抗体复合物与未结合的分离与未结合的分离1234一、基本原理一、基本原理终止终止5固相的抗原或抗体固相的抗原或抗体 酶标记物（酶结合物酶标记物（酶结合物）酶反应的底物酶反应的底物 三个必要试剂三个必要试剂 二、方法类型及反应原理二、方法类型及反应原理双抗体夹心法双抗体夹心法方法：方法：用已知抗体包被，
25、加入待检血清，再加酶用已知抗体包被，加入待检血清，再加酶标抗体，加底物显色标抗体，加底物显色应用：应用：二价或二价以上的较大分子抗原测定二价或二价以上的较大分子抗原测定 乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCGHCG等等ELISAELISA检测抗原的方法检测抗原的方法双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法测抗原+-E EE EE EE EE EE EE EE EE E竞争法竞争法 方法：方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色。应用：应用：
26、用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原（药用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原（药物、激素等）物、激素等）ELISAELISA检测抗原的方法检测抗原的方法竞争法测抗原竞争法测抗原+-E EE EE EE EE EE EE E2 2、加待检物、加待检物抗原与酶标抗抗原与酶标抗原竞争与抗体原竞争与抗体结合结合3 3、加酶作用、加酶作用的底物不显色的底物不显色或显色弱或显色弱3 3、加酶作用、加酶作用的底物显色的底物显色1 1、已知抗体包、已知抗体包被于载体表面被于载体表面1 1、已知抗体包、已知抗体包被于载体表面被于载体表面2 2、加待测物、加待测物和酶标抗原，和酶标抗原，酶标抗原与抗酶标抗原与抗体
27、结合体结合E E间接法间接法方法方法 用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标的抗人用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标的抗人IgGIgG（抗（抗抗体或二抗）加底物显色。抗体或二抗）加底物显色。优点优点 一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体应用应用 常用于常用于HCVHCV抗体、抗体、HIVHIV抗体和梅毒螺旋体抗体等的测定抗体和梅毒螺旋体抗体等的测定ELISAELISA检测抗体的方法检测抗体的方法间接法测抗体间接法测抗体-E EE EE EE EE EE EE EE EE E双抗原夹心法双抗原夹心法原理：原理：类似双抗体夹心法类似双抗体夹心法操作步骤操
28、作步骤：类似类似 应用：应用：乙型肝炎表面抗体乙型肝炎表面抗体ELISAELISA检测抗体的方法检测抗体的方法竞争法竞争法原理：原理：类似检测抗原的竞争法类似检测抗原的竞争法 应用应用：乙型肝炎病毒核心抗体乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)(HBcAb)和和乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒e e抗体抗体(HBeAb)(HBeAb)的检测的检测 ELISAELISA检测抗体的方法检测抗体的方法捕获法捕获法 应用：应用：病原体急性感染诊断中的病原体急性感染诊断中的IgMIgM型抗体型抗体 甲型肝炎甲型肝炎HAV-IgMHAV-IgM抗体抗体 乙型肝炎病毒核心乙型肝炎病毒核心HBc-IgMHBc-IgM抗体
29、抗体ELISAELISA检测抗体的方法检测抗体的方法捕获法捕获法 原理：原理：抗人抗人IgMIgM链抗体包被链抗体包被捕获待测标本中捕获待测标本中IgMIgM类抗体类抗体加入特异性抗原和酶标记特加入特异性抗原和酶标记特异性抗原的抗体异性抗原的抗体 底物显色底物显色 捕获法原理捕获法原理+-E EE EE EE EE E 1 1、固相化抗人、固相化抗人IgMIgM1 1、固相化抗人、固相化抗人IgMIgM2 2、加待测物、加待测物特异性特异性IgMIgM与与非特异性非特异性IgMIgM和抗人和抗人IgMIgM结合结合3 3、加特异性、加特异性抗原，与特异抗原，与特异性抗体结合性抗体结合4 4、加
30、酶标抗体、加酶标抗体与特异性抗原结与特异性抗原结合，加底物显色合，加底物显色2 2、加待测物、加待测物只有非特异性只有非特异性IgMIgM和抗人和抗人IgMIgM结合结合3 3、加特异性抗、加特异性抗原，不能与非原，不能与非特异性特异性IgMIgM结合结合4 4、加酶标抗体、加酶标抗体无抗原结合，无抗原结合，加底物不显色加底物不显色第四第四节节 酶免疫测定的应用酶免疫测定的应用均相酶免疫测定主要用于药物和小分均相酶免疫测定主要用于药物和小分子物质的检测。非均相免疫测定中的子物质的检测。非均相免疫测定中的ELISAELISA应用更为广泛，应用更为广泛，ELISAELISA广泛用于广泛用于传染病的
31、诊断，病毒如病毒性肝炎传染病的诊断，病毒如病毒性肝炎（甲肝抗体、（甲肝抗体、“乙肝三对乙肝三对”、丙肝抗、丙肝抗体、丁肝抗体、戊肝抗体）、风疹病体、丁肝抗体、戊肝抗体）、风疹病毒、疱疹病毒、轮状病毒等；细菌如毒、疱疹病毒、轮状病毒等；细菌如结核杆菌、幽门螺杆菌等。也用于一结核杆菌、幽门螺杆菌等。也用于一些蛋白质检测，如各种免疫球蛋白、些蛋白质检测，如各种免疫球蛋白、补体、肿瘤标志物（甲胎蛋白、癌胚补体、肿瘤标志物（甲胎蛋白、癌胚抗原、前列腺特异性抗原等）。抗原、前列腺特异性抗原等）。v酶免疫技术是标记免疫技术的一种，它是以酶标记的抗酶免疫技术是标记免疫技术的一种，它是以酶标记的抗原或抗体作为主
32、要试剂的免疫检测方法，在抗原与抗体原或抗体作为主要试剂的免疫检测方法，在抗原与抗体的特异性反应完成后，通过酶对底物的作用进一步提高的特异性反应完成后，通过酶对底物的作用进一步提高敏感性。酶免疫技术可分为酶免疫组织化学技术和酶免敏感性。酶免疫技术可分为酶免疫组织化学技术和酶免疫测定两大类疫测定两大类,后者根据抗原抗体反应后是否需要分离结后者根据抗原抗体反应后是否需要分离结合与游离的酶标记物而分为均相和非均相两种类型。合与游离的酶标记物而分为均相和非均相两种类型。v均相酶免疫测定主要用于小分子激素和半抗原的测定，均相酶免疫测定主要用于小分子激素和半抗原的测定，非均相酶免疫测定根据是否使用固相支持物，又可分为非均相酶免疫测定根据是否使用固相支持物，又可分为液相和固相酶免疫测定两种类型。最常用的是以聚苯乙液相和固相酶免疫测定两种类型。最常用的是以聚苯乙烯等材料作为固相载体的酶联免疫吸附试验（烯等材料作为固相载体的酶联免疫吸附试验（ELISAELISA）,其原理可以有夹心法、竞争法、间接法和捕获法等。其原理可以有夹心法、竞争法、间接法和捕获法等。小小 结结
