1、 胶体金标记技术胶体金标记技术 (Immunogold labeling technique)是以胶体金作为示是以胶体金作为示踪标记物，应用于踪标记物，应用于抗原抗体反应的一抗原抗体反应的一种新型免疫标记技种新型免疫标记技术。术。v制备高质量胶体金的注意事项vG区：金标特异性抗体(兔型)v1Mol/L K2CO30.v胶体金标记技术(Immunogold labeling technique)是以胶体金作为示踪标记物，应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。v要制备其它直径的金颗粒，则按表15-1所列的数字v75ml，继续煮沸约5min，出现橙红色。v（3）15nm、18nm20nm、30n
2、m或50nm胶体金颗粒的制备：取0.v要制备其它直径的金颗粒，则按表15-1所列的数字v45m）过滤，以除去其中的聚合物和其它可能混入的杂质。v患儿肺部感染系哪种病原体所致？如何快速诊断？v1Mol/L K2CO30.v将A液、B液分别加热至60，在电磁搅拌下迅速将v身形成免疫分析过程后的颜色标记vG区：金标特异性抗体(兔型)v根据需要迅速加入1枸橼酸三钠水溶液4ml、2.v75ml，继续煮沸约5min，出现橙红色。v身形成免疫分析过程后的颜色标记v示踪剂：以胶体金为指示剂，本v斑点金免疫渗滤测定法（dot immunogold filtration assay,DIGFA）此法原理是在硝酸纤
3、维膜下垫有吸水性强的垫料，即为渗滤装置。v金免疫法能测出抗体，如（制备高质量胶体金的注意事项制备高质量胶体金的注意事项 讨论分析讨论分析 v身形成免疫分析过程后的颜色标记vG区：金标特异性抗体(兔型)vA液：1HAuCl4水溶液1ml加入79ml双馏水中混匀。v75ml，继续煮沸约5min，出现橙红色。v根据需要迅速加入1枸橼酸三钠水溶液4ml、2.v这样制成的胶体金颗粒则分别为15nm、1820nm、30nm和50nmv免疫能检测出吗？，下一v否则影响生物大分子与金颗粒结合和活化后金颗粒的稳定性，不能获得预期大小的金颗粒。v（2）15nm胶体金颗粒的制备：取0.v金免疫法能测出抗体，如v掌握
4、金免疫标记技术原理和分类vA液：1HAuCl4水溶液1ml加入79ml双馏水中混匀。vG区：金标特异性抗体(兔型)v调整鞣酸及K2CO3的用量v斑点金免疫渗滤测定法（dot immunogold filtration assay,DIGFA）此法原理是在硝酸纤维膜下垫有吸水性强的垫料，即为渗滤装置。v1Mol/L K2CO30.v（1）玻璃器皿必须彻底清洗，最好是经过硅化处理的玻璃器皿，或用第一次配制的胶体金稳定的玻璃器皿，再用双馏水冲洗后使用。v合，再加胶体金标记的抗-HCG抗体，形成双抗体夹心复合v（1）玻璃器皿必须彻底清洗，最好是经过硅化处理的玻璃器皿，或用第一次配制的胶体金稳定的玻璃器
5、皿，再用双馏水冲洗后使用。v胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。标本标本G G区：金标特异性抗体区：金标特异性抗体(兔型兔型)C区：羊抗兔IgT区：标准抗原 吸水纸阴性结果 （制备高质量胶体金的注意事项制备高质量胶体金的注意事项 v一般作为定性，不易定量。v胶体金标记技术进一步发展应用于免疫转印、流式细胞术、液相免疫测定、固相斑点金银染色及斑点金免疫渗滤测定法等多种标记免疫检测方法v（2）15nm胶体金颗粒的制备：取0.v金免疫法能测出抗体，如v以双抗体夹心法HCG为例：标本中HCG与NC膜上抗-HCG结v金
6、免疫法能测出抗体，如v根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。v45m）过滤，以除去其中的聚合物和其它可能混入的杂质。v要制备其它直径的金颗粒，则按表15-1所列的数字v斑点金免疫渗滤测定法（dot immunogold filtration assay,DIGFA）此法原理是在硝酸纤维膜下垫有吸水性强的垫料，即为渗滤装置。v（2）15nm胶体金颗粒的制备：取0.v1Mol/L K2CO30.vB液加入A液中，溶液变蓝，继续加热搅拌至溶液变v此法制得的金颗粒的直径为5nm。
7、v斑点金免疫渗滤测定法（dot immunogold filtration assay,DIGFA）此法原理是在硝酸纤维膜下垫有吸水性强的垫料，即为渗滤装置。v胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。vFaulk和Taylor首创胶体金标记免疫电镜技术v（2）15nm胶体金颗粒的制备：取0.v要制备其它直径的金颗粒，则按表15-1所列的数字v1Mol/L K2CO30.v身形成免疫分析过程后的颜色标记v斑点金免疫渗滤测定法（dot immunogold filtration a
8、ssay,DIGFA）此法原理是在硝酸纤维膜下垫有吸水性强的垫料，即为渗滤装置。v根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。v根据需要迅速加入1枸橼酸三钠水溶液4ml、2.v45m）过滤，以除去其中的聚合物和其它可能混入的杂质。v身形成免疫分析过程后的颜色标记v1Mol/L K2CO30.v示踪剂：以胶体金为指示剂，本vB液加入A液中，溶液变蓝，继续加热搅拌至溶液变v01HAuCl4水溶液100ml，加热煮沸。v了解金免疫检测的临床应用v45m）过滤，以除去其中的聚合物和其它
9、可能混入的杂质。v斑点金免疫渗滤测定法（dot immunogold filtration assay,DIGFA）此法原理是在硝酸纤维膜下垫有吸水性强的垫料，即为渗滤装置。v1Mol/L K2CO30.v斑点金免疫渗滤测定法（dot immunogold filtration assay,DIGFA）此法原理是在硝酸纤维膜下垫有吸水性强的垫料，即为渗滤装置。v1Mol/L K2CO30.v患儿，女，11岁，间断发热1周，伴咳嗽3天。v45m）过滤，以除去其中的聚合物和其它可能混入的杂质。v胶体金标记技术进一步发展应用于免疫转印、流式细胞术、液相免疫测定、固相斑点金银染色及斑点金免疫渗滤测定法
10、等多种标记免疫检测方法v斑点金免疫渗滤测定法（dot immunogold filtration assay,DIGFA）此法原理是在硝酸纤维膜下垫有吸水性强的垫料，即为渗滤装置。v调整鞣酸及K2CO3的用量v75ml，继续煮沸约5min，出现橙红色。v1Mol/L K2CO30.v1Mol/L K2CO30.v这样制成的胶体金颗粒则分别为15nm、1820nm、30nm和50nmvG区：金标特异性抗体(兔型)v调整鞣酸及K2CO3的用量v胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。vB液加入A液中，溶液变蓝，继续加
11、热搅拌至溶液变v75ml，继续煮沸约5min，出现橙红色。vG区：金标特异性抗体(兔型)vG区：金标特异性抗体(兔型)v制备高质量胶体金的注意事项v根据需要迅速加入1枸橼酸三钠水溶液4ml、2.v会金免疫标记物的制备操作v制备高质量胶体金的注意事项v胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。v根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。v（3）15nm、18nm20nm、30nm或50nm胶体金颗粒
12、的制备：取0.v1Mol/L K2CO3液0.v患儿，女，11岁，间断发热1周，伴咳嗽3天。v01HAuCl4水溶液100ml，加热煮沸。v身形成免疫分析过程后的颜色标记v45m）过滤，以除去其中的聚合物和其它可能混入的杂质。v金免疫法能测出抗体，如v调整鞣酸及K2CO3的用量v（2）15nm胶体金颗粒的制备：取0.vB液：1枸橼酸三钠4ml，1鞣酸0.vB液：1枸橼酸三钠4ml，1鞣酸0.v（5）氯金酸配成1水溶液在4可保持数月稳定，由于氯金酸易潮解，因此在配制时，最好将整个小包装一次性溶解。vG区：金标特异性抗体(兔型)vA液：1HAuCl4水溶液1ml加入79ml双馏水中混匀。v（1）玻
13、璃器皿必须彻底清洗，最好是经过硅化处理的玻璃器皿，或用第一次配制的胶体金稳定的玻璃器皿，再用双馏水冲洗后使用。v身形成免疫分析过程后的颜色标记v否则影响生物大分子与金颗粒结合和活化后金颗粒的稳定性，不能获得预期大小的金颗粒。v（2）15nm胶体金颗粒的制备：取0.v根据需要迅速加入1枸橼酸三钠水溶液4ml、2.v斑点金免疫渗滤测定法（dot immunogold filtration assay,DIGFA）此法原理是在硝酸纤维膜下垫有吸水性强的垫料，即为渗滤装置。vB液加入A液中，溶液变蓝，继续加热搅拌至溶液变v金免疫法能测出抗体，如v以双抗体夹心法HCG为例：标本中HCG与NC膜上抗-HC
14、G结v患儿肺部感染系哪种病原体所致？如何快速诊断？v会金免疫标记物的制备操作v制备高质量胶体金的注意事项vG区：金标特异性抗体(兔型)v45m）过滤，以除去其中的聚合物和其它可能混入的杂质。v身形成免疫分析过程后的颜色标记v调整鞣酸及K2CO3的用量v次课学习荧光免疫检测，vB液加入A液中，溶液变蓝，继续加热搅拌至溶液变v斑点金免疫渗滤测定法（dot immunogold filtration assay,DIGFA）此法原理是在硝酸纤维膜下垫有吸水性强的垫料，即为渗滤装置。v制备高质量胶体金的注意事项vG区：金标特异性抗体(兔型)vG区：金标特异性抗体(兔型)v患儿肺部感染系哪种病原体所致？如何快速诊断？v（2）试剂配制必须保持严格的纯净，所有试剂都必须使用双馏水或三馏水并去离子后配制，或者在临用前将配好的试剂经超滤或微孔滤膜（0.v1Mol/L K2CO30.v1Mol/L K2CO30.v金免疫法能测出抗体，如v（3）15nm、18nm20nm、30nm或50nm胶体金颗粒的制备：取0.v金免疫法能测出抗体，如v1Mol/L K2CO30.vG区：金标特异性抗体(兔型)
