1、蛋白免疫快速诊断应用技术文档ppt1、个人所从事的行业和专业的限制1）医学专业、生物专业、化学专业（人）2）临床免疫类检验试剂（人用）的开发3）对客户/临床需求有所了解2、有可能找到的共同点1）所采用技术方法具有共同点2）为了共同的目标为人类健康服务一、免疫学技术的范畴免疫学技术的范畴1、对具有免疫活性物质的定性、定量测定2、对免疫系统的组成成分的数量、状态的测定一、免疫学技术的应用特点免疫学技术的应用特点1、对象“包罗万象”2、方法“兼容并蓄”一、抗原的概念与属性抗原的概念与属性1 1、免疫原性、免疫原性可识别、可反应性（诱导机体产生免疫应答的特性）2 2、免疫反应性、免疫反应性 选择结合性
2、（和免疫应答产物特异性结合的特性）一、抗原抗体反应的特点抗原抗体反应的特点1、特异性2、可逆性3、适合比例性一、免疫学检测技术评价标准免疫学检测技术评价标准1、Specificity（特异）2、Sensitivity（敏感）3、Simplicity（简便）4、Safety（安全）5、Saving（节约）尿妊娠试纸（HCG)的产品研发准备NC膜的作用：针对检验、我们能做什么二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来需要一台荧光显微镜，且有熟练显微镜操作的人员一、免疫检测基础知识及免疫检测技术的进展综述3、Simplicity（简便）尿妊娠试纸（HCG)部分材料的工艺和质量控制尿妊娠试纸（HCG)的反
3、应原理图2、对免疫系统的组成成分的数量、状态的测定3、Simplicity（简便）尿妊娠试纸（HCG)部分材料的工艺和质量控制硝酸纤维膜的分类标准(m和s)三、快速免疫层析技术的应用介绍如何去开发一个胶体金层析产品一、免疫检测技术的进展免疫检测技术的进展1、经典的免疫分析技术凝集反应、沉淀反应、溶血反应、补体结合实验特点：成本低、技术简单、结果易于判断，但不易于实现自动化。2、现代的免疫分析技术荧光免疫标记、放射性免疫标记、酶免疫标记、镧系（稀土）元素免疫标记、胶体颗粒标记、临床化学免疫分析技术、发光免疫标记、流式免疫微球技术及生物传感器技术等。特点：灵敏、特异、快速、易于测定及实现自动化。二
4、、快速免疫检测技术的过去、现状和未来POCTPOCT概念的引入概念的引入POCTPoint of Care Testing 不需要固定的场地、不需要太多的时间、也不需要特定的地方、在没有实验室设备的条件下也能完成检测。检测可在患者身边或者靠近患者的地方完成。Tests desgined to be at or near the site where the patient is located,that do not require permanent space,and that are performed outside the physical facilities of the cli
5、nical laboratory.(美国病理家学会 College of American Pathologists）二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来POCTPOCT技术已使用了上千年技术已使用了上千年1、约公元前1500年法老的私人医生注意到有些人的尿液吸引了很多蚂蚁，而另一些人的尿液则没有。2、后来发现这种现象与尿液中的葡萄糖浓度有关二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来美国美国FDAFDA对简便实验的定义对简便实验的定义1988年美国临床实验室改良法案：临床豁免权1、全自动化仪器直接使用未处理过的标本/毛细管血（指尖血）、鼻拭子或尿液；2、对标本只需进行基本的、无技术要求的处理，包
6、括去污；3、对试剂只需要进行基本的、无技术要求的处理，例如，将试剂A和试剂B混匀4、分析步骤不需要操作者干预5、不需要技巧或专门知识二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来美国美国FDAFDA对简便实验的定义对简便实验的定义6、无需电子或机械设备保养7、所得结果不需要操作者校准、解释和计算8、结果易读，例如阳性或阴性，直接读出数值，线条很明显或无线条存在，即等级明显9、试验性能可与可溯源的参考方法相比较10、有用户可看懂的快速参考指南 二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来POCTPOCT的术语的术语1、护理点/床边/即时检验（Point of Care Testing)2、近患者检验(Near
7、 Patient Testing)3、医务室检验(Physicians Office Testing)4、床边检验(Beside Testing)5、实验室外检验(Extra-laboratory Testing)6、分散检验(Decentralized Testing)7、机构外检验(Offsite Testing)8、辅助检验(Ancillary Testing)9、替换点检验(Alternative Site Testing)二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来不需要专业的操作者 需要专业的操作者三、快速免疫层析技术的应用介绍二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来前者为一塑料小盒，其中
8、填满吸水性物质，面上紧贴放置一片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝酸纤维膜，标记结合物为免疫金。调节样品等。2、对免疫系统的组成成分的数量、状态的测定调节样品等。尿妊娠试纸（HCG)的产品研发准备主要由两部分组成：膜渗滤装置和标记结合物。二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来1、特异性的单克隆抗体免疫学技术的应用特点三、快速免疫层析技术的应用介绍需要一段已知的DNA序列二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来看看发生了什么变化？看看发生了什么变化？不需要专业的操作者 需要专业的操作者不需要专业的装置 需要专业的装置二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来POCTPOCT产品都在哪里应用产品
9、都在哪里应用日间病房救护车医生研究室血库社区卫生诊所环境实验室健康义诊家庭康复机构消防队康复中心二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来为什么要推动为什么要推动POCTPOCT产品？产品？护理过程最佳化病人护理产出灾难救助测试平台法规要求工业吸引力劳动力问题二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来POCTPOCT产品的优点产品的优点操作人员不需要技术背景周转时间的改善提高了治疗的忠诚度检测越好，做的越频繁样品量少经济利益 减少住院天数 减少并发症二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来POCTPOCT产品的优点：周转时间产品的优点：周转时间摘自Price,BMJ2001的文章试验试验实验室实验室PO
10、CT分钟（变化分钟（变化%）尿液分析尿液分析404-36（90）妊娠妊娠785-71（94）葡萄糖葡萄糖106-4（60）二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来POCTPOCT产品的缺陷产品的缺陷操作者无技术背景结果质量差，与实验室结果有一定差异不经济资料不便记录调研：我们要做采用什么平台技术针对检验、我们能做什么4、Safety（安全）三、快速免疫层析技术的应用介绍特点：成本低、技术简单、结果易于判断，但不易于实现自动化。POCT技术已使用了上千年-吸附一定量的标结合物颗粒；三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（HCG)的产品研发准备注入足够溶液到槽内，将不同批次膜每隔1cm做一次标记（
11、总长大于4cm）并放到倾斜支架，整个支架下端放入溶液槽，膜开始吸液，计时。1、全自动化仪器直接使用未处理过的标本/毛细管血（指尖血）、鼻拭子或尿液；美国FDA对简便实验的定义免疫学检测技术评价标准特点：灵敏、特异、快速、易于测定及实现自动化。二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来当前当前POCT POCT 的应用（的应用（1 1）1、乳胶凝集试验实验时间为10-15分钟快速、基本不需要仪器试剂可以冷冻敏感性差8-10%的反应结果不好解释2、直接荧光抗体试验30-60分钟，需要多个步骤需要有昂贵的荧光显微镜及熟练的操作人员二、快速免疫检测技术的过去、现状和未
12、来当前当前POCT POCT 的应用（的应用（2 2）3、FISH(荧光原位杂交）需要一段已知的DNA序列需要一台荧光显微镜，且有熟练显微镜操作的人员步骤多，实验时间为1-2小时4、免疫层析（渗滤）试验敏感性高、特异性强总实验时间5-15分钟不需要仪器、也不需要基本的培训样品不需要特殊处理 免疫层析（渗滤）产品是继尿试纸条和血糖试条之后，当前最为受欢迎的POCT 产品二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来免疫渗滤试验免疫渗滤试验 主要由两部分组成：膜渗滤装置和标记结合物。前者为一塑料小盒，其中填满吸水性物质，面上紧贴放置一片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝酸纤维膜，标记结合物为免疫金
13、。二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来免疫层析试验免疫层析试验 免疫层析法中滴加在膜一端的样品溶液受膜的毛细管作用(基于层析作用的横流（lateral flow）)向另一端移动。移动过程中被分析物 与固定在膜上某一区域的受体(抗原或者抗体)结合而被固相化，无关物质则越过该区域而被分离，然后通过标记物显色来判定试验结果，以胶体金为标记物的实验称为胶体金免疫层析试验。二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来POCTPOCT的未来的未来？微流体技术？纳米技术？三、快速免疫层析技术的应用介绍能用来做什么能用来做什么传染病抗原或抗体测定肿瘤标志物测定激素测定农药残留测定抗生素测定毒素测定药物滥用（毒品）
14、测定三、快速免疫层析技术的应用介绍针对检验、我们能做什么针对检验、我们能做什么传染病抗原或抗体测定肿瘤标志物测定？激素测定农药残留测定抗生素测定毒素测定药物滥用（毒品）测定 立足需求，充分考虑和整合各种优势资源！立足需求，充分考虑和整合各种优势资源！三、快速免疫层析技术的应用介绍我们要怎么去做我们要怎么去做调研：我们要做采用什么平台技术平台建设：我们建立快速免疫层析技术平台项目：我们要做什么项目？准备：我们拥有了哪些资源，我们还缺少什么资源？三、快速免疫层析技术的应用介绍免疫层析技术平台免疫层析技术平台硬件：实验室；设备；生产车间？软件：SOP?人员：专业培训、团队建设三、快速免疫层析技术的应
15、用介绍如何去开发一个胶体金层析产品如何去开发一个胶体金层析产品 以尿妊娠试纸（以尿妊娠试纸（HCG)HCG)为例为例三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)的反应原理图的反应原理图双抗体夹心法 三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)的产品研发准备的产品研发准备1、生物材料的准备：配对的单克隆抗体（特异性针对HCG-,亚基)二抗2、主要生产材料硝酸纤维素膜（特定孔径、流速）样品垫结合垫吸收垫（吸水纸）、片材（PVC衬板）等三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)的研发准备的研发准备3、主要设备点膜仪喷金仪
16、干燥设备粘帖装置切刀 步骤多，实验时间为1-2小时需要一段已知的DNA序列m:指的是膜孔径，此说法实际上是沿用了一直以来的针对检验、我们能做什么美国FDA对简便实验的定义需要一台荧光显微镜，且有熟练显微镜操作的人员三、快速免疫层析技术的应用介绍二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来去除样品中杂质颗粒；三、快速免疫层析技术的应用介绍8、结果易读，例如阳性或阴性，直接读出数值，线条很明显或无线条存在，即等级明显POCT技术已使用了上千年4、床边检验(Beside Testing)3、FISH(荧光原位杂交）需要有昂贵的荧光显微镜及熟练的操作人员三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（
17、HCG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制1、特异性的单克隆抗体亲和力特异性稳定性三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制2、标记物与蛋白偶联颗粒大小颗粒的均一性颗粒的形状标记物与蛋白的最佳比例标记影响影响因素考虑三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制蛋白与胶体金的偶联：最佳pH测定：取若干1.5ml的试管，分别加入1ml胶体金用K2CO3将pH分别调为3，4，5，6，7，8，9，10；加入过量待标记蛋白；取96孔培
18、养板，按pH从高到低分别将上述胶体金分别取100l加入孔中，重复三次；每孔分别加入20l浓度为10%的NaCl溶液，混合，室温下放置10min；观察胶体金颜色变化，记录保持红色的最低pH三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制蛋白与标记物的偶联：最佳偶联比例确定：三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制3、样品垫 玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。样品垫的作用：减缓样品渗透速度，有利于样品在结合垫上均匀分布
19、；去除样品中杂质颗粒；调节样品等。样本垫可使用化学物质进行浸渍处理，从而减少样本差异，提高试验的灵敏度。通常可以将洗涤剂、粘性增强剂、阻滞剂及盐渗入样本垫然后加以干燥，该工艺可避免使用复杂辨识剂/追迹缓冲液的麻烦，使检测一步完成。三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制4、结合垫玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质，多种规格，批间稳定。结合垫的作用主要为：-吸附一定量的标结合物颗粒；-吸附并持续不断的将样品转移到NC膜上；-保持标结合物颗粒的稳定性；-保证标结合物颗粒定量完全释放等。三、快速免疫层析技术的应
20、用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制5、硝酸纤维素膜(Nitrocellulose)：推荐使用Millipore，S&S等国外公司的硝酸纤维素膜。NC膜的作用：-在检测线和对照线条带区域固定抗体；-样品在NC膜上流动并与试剂混合发生免疫反应；-反应在NC膜上显色，读检测结果 NC膜的重要参数：孔径、对称性、层析速度、蛋白结合力、强度、表面质量、厚度、批间均一性等。三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制 三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（H
21、CG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制 三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制-样品在NC膜上流动并与试剂混合发生免疫反应；30-60分钟，需要多个步骤换算情况大致为：8m=135s；二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来跑板时，理论上溶液呈水平线形式上吸，观测是否有波浪倾斜或包围润湿等反常现象。5ml的试管，分别加入1ml胶体金通常可以将洗涤剂、粘性增强剂、阻滞剂及盐渗入样本垫然后加以干燥，该工艺可避免使用复杂辨识剂/追迹缓冲液的麻烦，使检测一步完成。三、快速免疫层析技术的应用介绍8-10
22、%的反应结果不好解释前者为一塑料小盒，其中填满吸水性物质，面上紧贴放置一片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝酸纤维膜，标记结合物为免疫金。膜的物理性能主要是2个参数，膜厚度和宽度二、快速免疫检测技术的过去、现状和未来尿妊娠试纸（HCG)的产品研发准备5、硝酸纤维素膜(Nitrocellulose)：美国FDA对简便实验的定义三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制三、快速免疫层析技术的应用介绍尿妊娠试纸（尿妊娠试纸（HCG)HCG)部分材料的工艺和质量控制部分材料的工艺和质量控制谢谢观看！
