1、第十三章革兰氏阳性产芽孢杆菌优选第十三章革兰氏阳性产芽孢杆菌炭疽芽孢杆菌(B.anthracis)简称炭疽杆菌，是人类、各种家畜和野生动物炭疽病的病原体，该菌在兽医学和医学上均占有相当重要的地位。一、主要生物学特性（一）形态及染色G大杆菌（510m），无鞭毛，不运动。动物体内 常35个菌体连成短链，外有荚膜，不形成芽孢。培养基中 形成长链，形成芽孢。普通培养基中不形成荚膜，但在含血液、血清的培养基，CO2环境中培养则形成荚膜。炭疽杆菌典型形态炭疽杆菌培养物涂片炭疽杆菌的芽孢炭疽杆菌形成芽孢的条件 有充分的O2 2535 有一定的湿度 中性或弱碱性环境由于炭疽杆菌在体外可形成芽孢，所以，我国兽医
2、法规定禁止解剖死于炭疽的动物尸体。实验动物 小白鼠、豚鼠、家兔均易感人 肠炭疽、肺炭疽或皮肤炭疽Perfringens type A)恶性水肿，人食物中毒梭菌是一群G大杆菌，均能形成芽孢，芽孢直径多超过菌体横经，芽孢位于菌体中央时，使菌体膨胀变形呈梭形，故名梭状芽孢杆菌，简称梭菌。三、气肿疽梭菌(C1.杨苷发酵 肉毒毒素是一类锌结合蛋白质，具蛋白酶活性，性质稳定，是毒性最强的神经麻痹毒素之一。此病主要发生于幼牛(6个月3岁)，通过消化道或创伤感染而发病，症状主要是在肌肉丰满部位发生气性水肿，触诊时有捻发音。大多数菌株可产生双层溶血环。本动物发病特点 马皮下组织恶性水肿 幼牛肌肉气性水肿毒性作用
3、主要是损伤微血管的内皮，增强微血管的通透性，改变血液循环动力学，损害肾脏功能，干扰糖代谢，血液呈高凝状态，易形成感染性休克和弥漫性血管内凝血，最后导致动物死亡。死于炭疽的牛瘤胃鼓气，天然孔流血，肛门突出干燥皮毛上的芽孢，可存活10年以上。C型毒素主要引起禽类、马、牛、羊者LF结合才有毒性作用。5IUml，串珠反应简称炭疽杆菌，是人类、各种家畜和野生动物炭疽病的病原体，该菌在兽医学和医学上均占有相当重要的地位。C型菌 羊猝狙(struck)（二）生长要求及培养特性 1、生长要求37、有氧、普通培养基 2、培养特性 普通琼脂 形成灰白色、不透明、大而扁平、表面干燥、边缘呈卷发状的菌落。血 琼 脂
4、不溶血，个别菌株可轻微溶血。普通肉汤 24h后，上部液体透明，管底有白 色絮状沉淀，轻摇试管，沉淀物徐 徐上升，卷绕成团而不散开。明胶穿刺 倒松树状生长，明胶上部逐渐液化 呈漏斗状。青霉素培养基 0.5IUml，串珠反应炭疽杆菌在普通琼脂培养基上形成的卷发样菌落炭疽杆菌在血琼脂培养基上形成的菌落（三）抵抗力 本菌繁殖体的抵抗力并不强，与一般细菌相似。75515min即可将其杀死。但该菌的芽孢抵抗力特别强。煮15min通常不能将其杀死，需高压或干烤方能将其杀死。干燥皮毛上的芽孢，可存活10年以上。土壤被其污染，传染性常可保持2030年。（四）抗原结构 1、荚膜抗原 为半抗原，成分为多肽，仅见于有
5、毒菌株，与毒力有关。此抗原的抗体无保护作用，但其反应性较特异，可用于血清学鉴定，如荚膜肿胀试验及免疫荧光抗体法等检测的就是这种抗原。2、菌体抗原 成分为多糖，与毒力无关，但性质稳定，经腐败和高温处理不被破坏，可与炭疽阳性血清发生沉淀反应，故可用于皮毛等畜产品的检验。3、保护性抗原（PA）是一种胞外蛋白质抗原，为炭疽毒素的组成成分之一，具有免疫原性，能使机体产生抗炭疽杆菌感染的保护力。4、芽孢抗原 是芽孢外膜层含有的抗原决定簇，它与皮质一起组成炭疽芽孢的特异性抗原，具有免疫原性和血清学诊断价值。者LF结合才有毒性作用。病料涂片干燥后，在10%的福尔马林溶液或在0.由于炭疽杆菌在体外可形成芽孢，所
6、以，我国兽医法规定禁止解剖死于炭疽的动物尸体。本菌可致各种家畜、野兽和人类的炭疽病。呈漏斗状。肉毒毒素是一类锌结合蛋白质，具蛋白酶活性，性质稳定，是毒性最强的神经麻痹毒素之一。anthracis)A、B、E及F型毒素引起人的食物中毒。简称炭疽杆菌，是人类、各种家畜和野生动物炭疽病的病原体，该菌在兽医学和医学上均占有相当重要的地位。本属有74个正式种和100多个位置不定的种。而气肿疽与恶性水肿是由细菌感染引起，诊断应进行细菌学检查。novyi type B)黑疫干燥皮毛上的芽孢，可存活10年以上。死于炭疽的牛瘤胃鼓气，天然孔流血，肛门突出培养56 h即呈均匀浑浊，并产生大量气体。该菌至少可产生2
7、0种外毒素，毒素以小写希腊字母表示，其中、和是主要致死毒素，其余为次要致死毒素和非致死性毒素。取回肠内容物，加510倍灭菌生理盐水稀释，离心沉淀取上清液，即检样。C型菌 羊猝狙(struck)受害肌肉常呈暗红色到黑色，并常伴有跛行，故又称为黑腿病(Blackleg)。土壤被其污染，传染性常可保持2030年。二、致病性（一）毒力因子1、荚膜 增强细菌的抗吞噬能力，有利于细菌扩散。2、炭疽毒素(anthrax toxin)包括水肿毒素及致死毒素两种。毒性作用主要是损伤微血管的内皮，增强微血管的通透性，改变血液循环动力学，损害肾脏功能，干扰糖代谢，血液呈高凝状态，易形成感染性休克和弥漫性血管内凝血，
8、最后导致动物死亡。炭疽毒素由三种亚单位构成。水肿因子（edema factor,EF）致死因子（lethal factor,LF）保护性抗原（protective antigen,PA）三者单独存在均无毒性，只有PA与EF或者LF结合才有毒性作用。（二）所致疾病 本菌可致各种家畜、野兽和人类的炭疽病。主要通过消化道传染，但也可经呼吸道及皮肤创伤或通过吸血昆虫传播。草食动物 急性败血症肉食动物 胃肠炎、咽炎杂食动物 慢性咽喉肿胀或隐性感染 人 肠炭疽、肺炭疽或皮肤炭疽实验动物 小白鼠、豚鼠、家兔均易感死于炭疽的牛瘤胃鼓气，天然孔流血，肛门突出病猪咽喉部肿大死于炭疽的牛脾脏显著肿大 人的皮肤炭疽三
9、、微生物学诊断死于炭疽的病畜尸体严禁剖检。炭疽尸体特征变化天然孔出血、血凝不良、尸僵不全、腹部鼓胀、可视粘膜发绀、皮下结缔组织呈黄色胶样浸润。确诊可作细菌学检查和血清学检查。（一）细菌学检查（一）细菌学检查1 1、病料采集、病料采集 生前水肿液或血液生前水肿液或血液死后耳朵死后耳朵肠炭疽粪便肠炭疽粪便若已错剖畜尸，可采取脾、肝等进行检验，若已错剖畜尸，可采取脾、肝等进行检验，尸体就地深埋尸体就地深埋2 2米以下，表面用米以下，表面用20%20%的石灰的石灰乳消毒。乳消毒。2、镜检 病料涂片干燥后，在10%的福尔马林溶液或在0.1%升汞中浸泡1015分钟，然后用美蓝或瑞氏染色法染色镜检，如发现有
10、荚膜的竹节状大杆菌，即可作出初步诊断。4、动物试验 将被检材料制成15悬液，皮下注射小鼠、豚鼠或家兔。动物通常于注射后2472h死于败血症。剖检可见注射部位胶样浸润及脾脏肿大等病理变化。取血液、脏器涂片镜检，当发现竹节状有荚膜的大杆菌时，即可诊断。第二节 梭菌属(Clostridium)可用普通琼脂或血琼脂平板，得到的纯培养物可作以下鉴定肉毒梭菌是一种腐生性的G大杆菌，专性厌氧。杨苷发酵 本属细菌均为厌氧菌，绝大多数严格厌氧，少数可在微氧环境生长。取回肠内容物，加510倍灭菌生理盐水稀释，离心沉淀取上清液，即检样。分布于土壤、污水、海洋沉积物、腐烂的植物、动植物产品、人和其他动物及昆虫的肠道、
11、人与动物的伤口及软组织感染灶。A型所致气性坏疽的微生物学诊断，主要依靠细菌分离鉴定。根据毒素抗原性的差异，分为7个型。用于牛、马、驴、骡、骆驼、绵羊、山羊和猪。Perfringens type A)恶性水肿，人食物中毒实验动物 小白鼠、豚鼠、家兔均易感毒性作用主要是损伤微血管的内皮，增强微血管的通透性，改变血液循环动力学，损害肾脏功能，干扰糖代谢，血液呈高凝状态，易形成感染性休克和弥漫性血管内凝血，最后导致动物死亡。D型毒素是南非和澳大利亚牛、绵羊症，人、禽类坏死性肠炎1%升汞中浸泡1015分钟，然后用美蓝或瑞氏染色法染色镜检，如发现有荚膜的竹节状大杆菌，即可作出初步诊断。草食动物 急性败血症
12、G大杆菌（510m），无鞭毛，不运动。可用于治疗，或在发生炭疽的疫区作紧急预防。Perfringens type D)绵羊、山羊、牛肠毒血症septiccum)恶性水肿、羊快疫（二）血清学检查 多用已知抗体检查被检的抗原。如炭疽环状沉淀反应（Ascoli氏反应）协同凝集试验串珠荧光抗体检查琼脂扩散试验酶标SPA间接染色法四、免疫防治1、号炭疽芽孢苗 用于牛、马、驴、骡、骆驼、绵羊、山羊和猪。注射后14d即可产生坚强免疫力，免疫期一年。2、无毒炭疽芽孢苗 适用于牛、马、驴、骡、绵羊和猪，免疫期一年。此苗对山羊反应强烈，可引起严重局部反应，有的甚至发生死亡，故禁用于山羊。3、抗炭疽血清 可用于治疗
13、，或在发生炭疽的疫区作紧急预防。第二节 梭菌属(Clostridium)梭菌是一群G大杆菌，均能形成芽孢，芽孢直径多超过菌体横经，芽孢位于菌体中央时，使菌体膨胀变形呈梭形，故名梭状芽孢杆菌，简称梭菌。本属细菌均为厌氧菌，绝大多数严格厌氧，少数可在微氧环境生长。本属有74个正式种和100多个位置不定的种。分布于土壤、污水、海洋沉积物、腐烂的植物、动植物产品、人和其他动物及昆虫的肠道、人与动物的伤口及软组织感染灶。多数为非病原菌，约有30梭菌具有弱致病性，约有10种梭菌具有强致病性，多为人兽共患病病原。常见病原梭菌及其所致疾病 细菌种型细菌种型 所致疾病所致疾病 产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌A A型型
14、(C.Perfringens type AC.Perfringens type A)恶性水肿，人食物中毒恶性水肿，人食物中毒 产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌B B型型(C.Perfringens type BC.Perfringens type B)羔羊痢，驹、绵羊、山羊肠毒血症羔羊痢，驹、绵羊、山羊肠毒血症 产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌C C型型(C.Perfringens type CC.Perfringens type C)羊猝狙，犊牛、羔羊、仔猪肠毒血羊猝狙，犊牛、羔羊、仔猪肠毒血 症，人、禽类坏死性肠炎症，人、禽类坏死性肠炎 产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌D D型型(C.Perfringens ty
15、pe DC.Perfringens type D)绵羊、山羊、牛肠毒血症绵羊、山羊、牛肠毒血症 产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌E E型型(C.Perfringens type EC.Perfringens type E)犊牛、羔羊痢疾犊牛、羔羊痢疾 气肿疽梭菌气肿疽梭菌(C.chauvoeiC.chauvoei)气肿疽气肿疽 腐败梭菌腐败梭菌(C.septiccum)恶性水肿、羊快疫恶性水肿、羊快疫 诺维梭菌诺维梭菌A A型型(C.novyi type AC.novyi type A)恶性水肿恶性水肿 诺维梭菌诺维梭菌B B型型(C.novyi type BC.novyi type B)黑疫黑疫 诺
16、维梭菌诺维梭菌C C型型(C.novyi type CC.novyi type C)水牛骨髓炎水牛骨髓炎 溶血梭菌溶血梭菌(C.haemoiyticumC.haemoiyticum)牛、羊细菌性血红素尿牛、羊细菌性血红素尿 肉毒梭菌肉毒梭菌A AF F型型(C.Botulinum type AC.Botulinum type AF F)动物和人肉毒中毒症动物和人肉毒中毒症 阿根廷梭菌阿根廷梭菌(C.argentinenseC.argentinense)人肉毒中毒症（阿根廷）人肉毒中毒症（阿根廷）破伤风梭菌破伤风梭菌(C.tetaniC.tetani)破伤风破伤风 艰难梭菌艰难梭菌(C.diff
17、iciieC.difficiie)人、犬、猪、驹肠炎、腹泻人、犬、猪、驹肠炎、腹泻 梭菌病的分类及诊断梭菌病，按性质和症状大致可分为5类。气肿疽与恶性水肿快疫与类快疫痢疾与肠炎食物中毒破伤风除第一类外，其余主要是由细菌毒素所致，所以诊断重点应是毒素检查。而气肿疽与恶性水肿是由细菌感染引起，诊断应进行细菌学检查。一、产气荚膜梭菌(Cl.perfringens)又名魏氏梭菌、产气荚膜杆菌。该菌是羔羊痢、羊猝狙和羊肠毒血症的病原体，也可引起人恶性水肿。（一）形态及染色（一）形态及染色 G大杆菌，长约l.319.0m，单独散在。无鞭毛。芽孢位于菌体中央，使菌体膨胀呈梭形。多数菌株可形成荚膜。（二）生长
18、要求及培养特性 生长要求在厌氧，加葡萄糖、血液或血清的培养基中培养。培养特性生长迅速，8min繁殖一代。血琼脂形成灰白色、边缘整齐的圆顶状菌落或边缘呈锯齿状的大菌落。大多数菌株可产生双层溶血环。葡萄糖血清琼脂灰白色，半透明，“勋章”样的大菌落。厌氧肝汤培养56 h即呈均匀浑浊，并产生大量气体。（三）生化特性 最突出的是对牛乳培养基的“暴烈发酵”。第二节 梭菌属(Clostridium)主要根据镜检、分离培养、生化反应及动物试验等。人的皮肤炭疽人 肠炭疽、肺炭疽或皮肤炭疽天然孔出血、血凝不良、尸僵不全、腹部鼓胀、可视粘膜发绀、皮下结缔组织呈黄色胶样浸润。其余各型所致的疾病，均系细菌在肠道内产生毒
19、素所致，诊断重点是作肠毒素检查。青霉素培养基 0.除第一类外，其余主要是由细菌毒素所致，所以诊断重点应是毒素检查。第二节 梭菌属(Clostridium)A A 人、鸡、貂 蔬菜、水果、肉、鱼三、气肿疽梭菌(C1.2、培养 专性厌氧，产毒最适温度2530。血琼脂平板菌落 呈花边状 呈钮扣状novyi type A)恶性水肿2、炭疽毒素(anthrax toxin)肉毒梭菌是一种腐生性的G大杆菌，专性厌氧。其余各型所致的疾病，均系细菌在肠道内产生毒素所致，诊断重点是作肠毒素检查。普通肉汤 24h后，上部液体透明，管底有白（四）分型 该菌至少可产生20种外毒素，毒素以小写希腊字母表示，其中、和是主
20、要致死毒素，其余为次要致死毒素和非致死性毒素。根据主要致死毒素与其抗毒素的中和试验可将此菌分为A、B、C、D和E 5个型。（五）致病性 本菌致病的主要物质是其产生的毒素。A型菌 人气性坏疽和食物中毒B型菌 羔羊痢C型菌 羊猝狙(struck)D型菌 羊、牛的肠毒血症E型菌 犊牛、羔羊肠毒血症羊肠毒血症:肠道浆膜、粘膜充血、出血仔猪梭菌性肠炎，小肠严重出血（六）微生物学诊断 A型所致气性坏疽的微生物学诊断，主要依靠细菌分离鉴定。其余各型所致的疾病，均系细菌在肠道内产生毒素所致，诊断重点是作肠毒素检查。毒素检查方法 取回肠内容物，加510倍灭菌生理盐水稀释，离心沉淀取上清液，即检样。检样分成两份，
21、一份不加热，一份煮沸30 min，然后分别静脉注射家兔(12m1)或小鼠(0.10.3m1)。如不加热组动物死亡，加热组动物不死亡，证明有毒素存在。确定毒素的型，须进一步做毒素中和保护试验。中和试验方法 将未煮沸的上清液分为4份，每份1ml，分别加入B、C、D型抗毒素及生理盐水1ml，混合均匀后在37下作用40min，然后分别静脉注射小鼠或家兔一组，观察24h，记录各组动物的死亡及存活情况，判定菌型。此外，毒素检查亦可用PCR技术。（七）免疫防治 预防羔羊痢、猝狙、肠毒血症以及仔猪肠毒血症等，可用厌氧菌三联苗或五联苗。三联苗（快疫猝狙肠毒血症）五联苗（羊快疫猝狙肠毒血症羔羊痢疾 黑疫）五联菌苗
22、免疫期，除对羊快疫较短外，对其它四病可达一年。二、肉毒梭菌(C1.botulinum)肉毒梭菌是一种腐生性的G大杆菌，专性厌氧。该菌分布于土壤，海洋和湖泊的沉积物，哺乳动物、鸟类和鱼的肠道，饲料以及食品中。当有适宜营养且获得厌氧环境时，即可生长繁殖并产生肉毒毒素。人畜食入含此毒素的食品、饲料时即可发生肉毒中毒症(botulism)。（一）主要特性 1、形态染色 革兰氏阳性大杆状，形成芽孢，有 周鞭毛。2、培养 专性厌氧，产毒最适温度2530。血琼脂直径16mm不规则菌落，溶血3、肉毒毒素肉毒毒素是一类锌结合蛋白质，具蛋白酶活性，性质稳定，是毒性最强的神经麻痹毒素之一。该毒素可作用于胆碱能神经末
23、梢，阻断乙酰胆碱的释放，导致肌肉麻痹。（二）细菌分型及所产毒素 菌型 毒素类型 最易感动物 毒素来源 A A 人、鸡、貂 蔬菜、水果、肉、鱼 B B 人 肉及肉制品、蔬菜、鱼 C C1、D 水禽 无脊椎动物 C C2、D 牛、马、貂、犬 尸体、青贮饲料 D C2、D 牛、绵羊 小动物尸体 E E 人、鱼类、野鸟 鱼及鱼制品、鱼塘污泥 F F 人 肝酱、鱼根据毒素抗原性的差异，分为7个型。（三）致病性 A、B型毒素引起马、牛、水貂等动物饲 料中毒和鸡软颈病。C型毒素主要引起禽类、马、牛、羊 以及水貂肉毒中毒症。D型毒素是南非和澳大利亚牛、绵羊 肉毒中毒的病因。A、B、E及F型毒素引起人的食物中毒
24、。（四）微生物学诊断 主要是检查肉毒毒素，定型用毒素中和试验。此外，也可用间接血凝试验或琼脂扩散试验检测毒素。（五）免疫防治 在动物肉毒中毒症常发地区，可用明矾沉淀类毒素作预防注射，有效免疫期可持续半年至一年，也可用氢氧化铝或明矾菌苗接种。三、气肿疽梭菌(C1.chauvoei)（一）病原性 又名费氏梭菌(Cl.feseri)，俗称黑腿病杆菌，为气肿疽的病原体。此病主要发生于幼牛(6个月3岁)，通过消化道或创伤感染而发病，症状主要是在肌肉丰满部位发生气性水肿，触诊时有捻发音。受害肌肉常呈暗红色到黑色，并常伴有跛行，故又称为黑腿病(Blackleg)。（二）诊断 主要根据镜检、分离培养、生化反应
25、及动物试验等。要注意与腐败梭菌鉴别。（三）免疫防治 菌苗有氢氧化铝甲醛菌苗和明矾甲醛菌苗两种。注射后14d能产生可靠免疫力，免疫期均为半年。四、腐败梭菌(CI.septicum)又名腐败杆菌、腐败弧菌、恶性水肿杆菌（一）病原性 该菌经创伤侵入动物体内可引起动物和人的 恶性水肿，经消化道感染可引起羊快疫。（二）诊断 主要是细菌学诊断，注意与气肿疽梭菌及其 它梭菌鉴别。（三）免疫防治 对羊快疫的免疫预防，我国现用厌氧菌三联 苗或五联苗。腐败梭菌与气肿疽梭菌的鉴别要点 项 目 腐 败 梭 菌 气肿疽梭菌 动物肝触片 菌体呈长丝状 散在、带芽孢大杆菌血琼脂平板菌落 呈花边状 呈钮扣状杨苷发酵 蔗糖发酵
26、 对家兔致病力 强 弱本动物发病特点 马皮下组织恶性水肿 幼牛肌肉气性水肿 五、诺维梭菌(C1.novyi)（一）分型 此菌可产生8种毒素，按其毒素的差异，可分为A、B、C 3个不同的菌型。溶血梭菌因产生的几种毒素与诺维梭菌相同，故曾称为D型诺维梭菌。（二）致病性 A型菌 人气性坏疽、动物恶性水肿B型菌 绵羊的黑疫C型菌 水牛骨髓坏死D型菌 牛细菌性血红蛋白尿病（三）微生物学诊断 可采用细菌学检查和毒素检查。（四）免疫防治 可用甲醛菌苗和厌氧菌五联苗预防。六、破伤风梭菌(C1.tetani)又名破伤风杆菌(Bacillus tetani)，是人畜破伤风的病原。本病以骨骼肌发生强直性痉挛为特征，故又称为强直症，此菌也因之称为强直梭菌。
