1、选修三专题一基因工程的基本操作程序（优选）选修三专题一基因工程的基本操作程序基因的结构（补充知识）基因的结构（补充知识）非编码区非编码区非编码区非编码区编码区编码区与与RNARNA聚合酶结合位点聚合酶结合位点启动子启动子终止子终止子RNARNA聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结聚合酶能够识别调控序列中的结合位点，并与其结合。合。转录开始后，转录开始后，RNARNA聚合酶沿聚合酶沿DNADNA分子移动，并以分子移动，并以DNADNA分子分子的一条链为模板合成的一条链为模板合成RNARNA。转录完毕后，转录完毕后，RNARNA链释放出来，紧接着链释放出来，紧接着RNARNA聚合酶也从聚合
2、酶也从DNADNA模板链上脱落下来。模板链上脱落下来。1 1、编码区：能转录相应的信使、编码区：能转录相应的信使RNARNA，能编码蛋白质的序列。，能编码蛋白质的序列。2 2、非编码区、非编码区 ：调控遗传信息表达的核苷酸序列：调控遗传信息表达的核苷酸序列(启动子、启动子、终止子），不编码蛋白质。终止子），不编码蛋白质。一、原核细胞的基因结构一、原核细胞的基因结构二、真核细胞的基因结构二、真核细胞的基因结构编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区 内含子内含子 外显子外显子 启动子启动子终止子终止子基因的结构（补充知识）基因的结构（补充知识）与与RNARNA聚合酶结合位点聚合酶结合位点1
3、1、编码区、编码区2 2、非编码区、非编码区 ：调控遗传信息表达的核苷酸序列：调控遗传信息表达的核苷酸序列(启动子、启动子、终止子），不编码蛋白质。终止子），不编码蛋白质。外显子：能编码蛋白质的序列外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列5一、目的基因的获取一、目的基因的获取v获取目的基因的方法获取目的基因的方法（一）从基因文库中获取目的基因（一）从基因文库中获取目的基因v基因组文库基因组文库v部分基因文库（部分基因文库（cDNA文库）文库）（二）利用（二）利用PCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因（三）人工合成法（三）人工合成法（DNA合成仪）合成仪
4、）v反转录法和化学合成法反转录法和化学合成法6基因文库基因文库v 将含有某种生物不同基因的许多将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入受体菌的群体中储存，片断，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。的基因，称为基因文库。限制酶限制酶基因组基因组DNA基因重组基因重组转化细菌转化细菌体外包装体外包装1)基因组文库基因组文库(Genomic library)是指将某种生物体的全部基因组是指将某种生物体的全部基因组DNADNA用限制性内切酶或机械力量用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的切割成一定长度范围的DNADNA
5、片段，片段，再与合适的载体在体外重组后，再与合适的载体在体外重组后，导入受体菌的群体中储存，这个导入受体菌的群体中储存，这个群体就称为该生物基因组文库。群体就称为该生物基因组文库。其目的是分离有用的目的基因和其目的是分离有用的目的基因和保存某种生物的全部基因。保存某种生物的全部基因。（一）从基因文库中直接获取（一）从基因文库中直接获取1.1.基因文库基因文库（一）从基因文库中直接获取（一）从基因文库中直接获取1.1.基因文库基因文库 是由生物的某一特定器是由生物的某一特定器官或特定发育时期细胞内的官或特定发育时期细胞内的mRNAmRNA经体外反转录后形成的经体外反转录后形成的互补互补DNADN
6、A片段，与载体连接片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做这种生这个受体菌群就叫做这种生物的物的cDNAcDNA文库，只包含一种文库，只包含一种生物的一部分基因。生物的一部分基因。2)cDNA文库文库(cDNA library)基因重组基因重组反转录酶反转录酶mRNAmRNAcDNAcDNA9农杆菌移向植物细胞伤口处2、非编码区：调控遗传信息表达的核苷酸序列(启动子、终止子），不编码蛋白质。部分基因文库（cDNA文库）如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明珠蛋白基因已进入其中。将目的基因导入微生物细胞需要注意的是农杆菌中不同的菌株，侵染能力有差别，在基因
7、工程中需要加以选择使用。若出现杂交带，表明目的基因已转录出mRNA是由生物的某一特定器官或特定发育时期细胞内的mRNA经体外反转录后形成的互补DNA片段，与载体连接后储存在一个受体菌群中，这个受体菌群就叫做这种生物的cDNA文库，只包含一种生物的一部分基因。RNA聚合酶与启动子结合基因枪法（微弹轰击法）因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。（二）利用PCR技术扩增目的基因双子叶植物和裸子植物受伤时，伤口分泌酚类吸引农杆菌（一）从基因文库中直接获取必须构建上述元件的主要理由是启动子决定了双链的模板链显微注射法：将基因表达载体提纯，用显微仪
8、注近年来，也有报道该菌对单子叶植物也有侵染能力。cDNA文库与基因组文库的区别文库与基因组文库的区别文库类型文库类型cDNA文库文库基因组文库基因组文库文库大小文库大小小小大大基因中启动子（具有启动基因中启动子（具有启动作用的作用的DNA片段）片段）无无有有基因中内含子（位于编码基因中内含子（位于编码蛋白质序列内的非编码蛋白质序列内的非编码DNA片段）片段）无无有有基因多少基因多少某种生物的某种生物的部分基因部分基因某种生物的全某种生物的全部基因部基因物种间的基因交流物种间的基因交流可以可以部分基因可以部分基因可以2.2.基因文库的构建方法基因文库的构建方法：直接分离法直接分离法供体细胞中的供
9、体细胞中的DNADNA许多许多DNADNA片段片段运载体运载体限制酶限制酶受体细胞受体细胞产生特定性状产生特定性状导入导入外源外源DNADNA扩增扩增目的基因目的基因分离分离(鸟枪法鸟枪法)（一）从基因文库中直接获取（一）从基因文库中直接获取多用于原核生物多用于原核生物逆转录法逆转录法目的基因的信使目的基因的信使RNARNA目的基因目的基因化学合成法化学合成法肽链氨基酸序列肽链氨基酸序列信使信使RNARNA序列序列基因的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因目的基因合成合成逆转录逆转录2.2.基因文库的构建方法基因文库的构建方法（一）从基因文库中直接获取（一）从基因文库中直接获取人工合成法（真核生
10、物）人工合成法（真核生物）推测推测推测推测单链单链DNADNA合成合成12（二二）利用利用PCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因vPCR 多聚酶链式反应多聚酶链式反应v1988年年 穆里斯等人穆里斯等人v在生物体外复制特定在生物体外复制特定DNA片断的核酸合成技片断的核酸合成技术，由此可获得大量目的基因。术，由此可获得大量目的基因。13PCR技术原理技术原理v在了解在了解DNA一级结构基础上设计引物，一级结构基础上设计引物，DNA多聚酶可识别并结合引物，以单链多聚酶可识别并结合引物，以单链DNA为模为模板板,dNTP为底物，合成其互补链，通过反复为底物，合成其互补链，通过反复变性，反复合成互补
11、链的过程，达到变性，反复合成互补链的过程，达到DNA扩扩增的目的。增的目的。（二）利用（二）利用PCR扩增目的基因扩增目的基因1 1、过程、过程高温变性（解旋为单链）高温变性（解旋为单链）低温退火（引物与单链互补结合）低温退火（引物与单链互补结合）适温延伸（在适温延伸（在TaqTaq酶的作用下合成酶的作用下合成 与模板互补的与模板互补的DNADNA双链）双链）重复循环重复循环PCR循环变性如果想将一个抗病毒基因转入小麦，也可以用农杆菌，但要注意两点要选择合适的农杆菌菌株，因为不是所有的农杆菌菌株都可以侵染单子叶植物；P15思考与探究41、编码区：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质的序列。核心
12、考点、双基考题部分与模板互补的DNA双链）基因中启动子（具有启动作用的DNA片段）（一）从基因文库中直接获取基因的结构（补充知识）（2）将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明珠蛋白基因已进入其中。显微注射法：将基因表达载体提纯，用显微仪注若出现杂交带，表明目的基因已转录出mRNA将目的基因导入植物细胞2、化学合成法获得目的基因的过程基因中内含子（位于编码蛋白质序列内的非编码DNA片段）内含子：不能编码蛋白质的序列使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。从雌性
13、动物取出卵（体内或体外受精）农杆菌移向植物细胞伤口处二、基因表达载体的构建PCR循环变性PCR循环变性18PCR循环退火19PCR循环延伸20PCR循环延伸21PCR循环延伸22PCR循环延伸231 1、过程、过程（二）利用（二）利用PCR扩增目的基因扩增目的基因（二）利用（二）利用PCR扩增目的基因扩增目的基因2 2、条件、条件已知基因的核苷酸序列、已知基因的核苷酸序列、四种四种dNTPdNTP、引物引物TaqDNATaqDNA聚合酶聚合酶使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增4 4、结果、结果耐高温耐高温3 3、方式：、方式：以指数方式扩增，即以指
14、数方式扩增，即_（n n为扩增循环的次数）为扩增循环的次数）2 2n n适宜的温度和适宜的温度和PHPH值值26作业：必修二 课时作业（十六）P9927请你描述请你描述1、鸟枪法构建基因文库的过程2、化学合成法获得目的基因的过程3、逆转录法获得目的基因的过程4、PCR技术过程28二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建v使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。和发挥作用。v基因表达载体基因表达载体目的基因目的基因启动子启动子终止子终止子标记基因标记基因复制原点复制
15、原点29在生物体外复制特定DNA片断的核酸合成技术，由此可获得大量目的基因。重组表达载体DNA溶于缓冲液与感受态细胞混合（一）从基因文库中直接获取选修三专题一基因工程的基本操作程序农杆菌的Ti质粒上的T-DNA整合到植物细胞染色体的DNA上（一）从基因文库中直接获取与模板互补的DNA双链）转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并以DNA分子的一条链为模板合成RNA。在植物授粉后，花粉形成的花粉管还没愈合前，剪去柱头，滴加DNA（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。（一）从基因文库中直接获取若出现杂交带，表明目的基因已插入染色体的DNA中与模板互补的DNA双链）启动子决定了双
16、链的模板链重组表达载体DNA溶于缓冲液与感受态细胞混合繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。外显子：能编码蛋白质的序列（一）从基因文库中直接获取适温延伸（在Taq酶的作用下合成二、基因表达载体的构建近年来，也有报道该菌对单子叶植物也有侵染能力。目的基因启动子终止子标记基因目的基因启动子终止子标记基因v启动子启动子基因（目的）的首端，有特殊结构的基因（目的）的首端，有特殊结构的DNA片断，片断，RNA聚合酶识别和结合的部位聚合酶识别和结合的部位启动子决定了双链的模板链启动子决定了双链的模板链v终止子终止
17、子基因（目的）的尾端，转录终止信号基因（目的）的尾端，转录终止信号v标记基因标记基因为了鉴别受体细胞中是否含目的基因，从为了鉴别受体细胞中是否含目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来而将含有目的基因的细胞筛选出来30由由RNA聚合酶所催化的转录聚合酶所催化的转录RNA聚合酶识别启动子聚合酶识别启动子RNA聚合酶与启动子结合聚合酶与启动子结合RNA合成开始合成开始RNA转录到终止子转录到终止子RNA聚合酶从模板链上脱落聚合酶从模板链上脱落3132三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞v转化转化目的基因进入受体细胞内，并且在受体细目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和
18、表达的过程胞内维持稳定和表达的过程v方法方法将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞33将目的基因导入植物细胞将目的基因导入植物细胞v农杆菌转化法农杆菌转化法v基因枪法（单子叶植物）基因枪法（单子叶植物）v花粉管通道法花粉管通道法34农杆菌的特点农杆菌的特点双子叶植物和裸子植物受伤时，双子叶植物和裸子植物受伤时，伤口分泌酚类吸引农杆菌伤口分泌酚类吸引农杆菌农杆菌移向植物细胞伤口处农杆菌移向植物细胞伤口处农杆菌的农杆菌的Ti质粒上的质粒上的T-DNA整合整合到植物细胞染色体的到植物细胞染色体的DNA上
19、上35农杆菌转化法农杆菌转化法转入转入农杆菌农杆菌36双子叶植物和裸子植物受伤时，双子叶植物和裸子植物受伤时，伤口分泌酚类吸引农杆菌伤口分泌酚类吸引农杆菌带有目的基因的农杆菌带有目的基因的农杆菌Ti质粒转移至受体细胞质粒转移至受体细胞目的基因得以稳定维持和表达目的基因得以稳定维持和表达目的基因插入到植物细胞染色体的目的基因插入到植物细胞染色体的DNA上上37基因枪法（微弹轰击法）基因枪法（微弹轰击法）v利用压缩气体产生的利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，打入受体细胞中，使目的基因与其整合使目的基因与其整合并表达的方法
20、。并表达的方法。v单子叶植物，成本高单子叶植物，成本高38花粉管通道法花粉管通道法v在植物授粉后，花粉形成的花粉管还没愈合在植物授粉后，花粉形成的花粉管还没愈合前，剪去柱头，滴加前，剪去柱头，滴加DNA（含目的基因），（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞。v转基因抗虫棉转基因抗虫棉v简便经济简便经济39将目的基因导入动物细胞将目的基因导入动物细胞-显微注射法显微注射法显微注射法：将基因表达载体提纯，用显微仪注显微注射法：将基因表达载体提纯，用显微仪注 射到受精卵中射到受精卵中40目的基因启动子终止子标记基因P15思考与探究2选修三专题一基因
21、工程的基本操作程序2、非编码区：调控遗传信息表达的核苷酸序列(启动子、终止子），不编码蛋白质。利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。目的基因得以稳定维持和表达如果想将一个抗病毒基因转入小麦，也可以用农杆菌，但要注意两点要选择合适的农杆菌菌株，因为不是所有的农杆菌菌株都可以侵染单子叶植物；在了解DNA一级结构基础上设计引物，DNA多聚酶可识别并结合引物，以单链DNA为模板,dNTP为底物，合成其互补链，通过反复变性，反复合成互补链的过程，达到DNA扩增的目的。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；
22、人工合成法（真核生物）生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达；含有目的基因的DNA片段用放射性同位素作标记基因的结构（补充知识）选修三专题一基因工程的基本操作程序必须构建上述元件的主要理由是3、逆转录法获得目的基因的过程将目的基因导入动物细胞-显微注射法用同位素、荧光分子或化学发光剂等对DNA单链进行标记将目的基因导入动物细胞显微注射法将目的基因导入动物细胞显微注射法将含有目的基因的表达载体提纯，将含有目的基因的表达载体提纯，DNA 13gmL从雌性动物取出卵（体内或体外受精）从雌性动物取出卵（体内或体外受精）显微注射显微注射含目的基因的受精卵，移植到雌
23、性动含目的基因的受精卵，移植到雌性动物的输卵管或子宫内，使其发育物的输卵管或子宫内，使其发育41将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞v原核生物（大肠杆菌）原核生物（大肠杆菌）繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少42将目的基因导入微生物细胞将目的基因导入微生物细胞用用Ca2处理细菌处理细菌感受态细胞：增大细胞壁的通透性，感受态细胞：增大细胞壁的通透性，吸收周围环境中吸收周围环境中DNA分子分子重组表达载体重组表达载体DNA溶于缓冲液溶于缓冲液与感受态细胞混合与感受态细胞混合在一定温度下促进感受态细胞吸收在一定温度下促进感受态细胞吸收DNA分子分子4
24、3本堂课作业：下发资料1.11.2 核心考点、双基考题部分国庆作业：下发资料：高考题44四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定v检测转基因生物染色体的检测转基因生物染色体的DNA上是否插入上是否插入了目的基因了目的基因DNA分子杂交技术分子杂交技术v检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNA分子杂交技术分子杂交技术v检测目的基因是否翻译成蛋白质检测目的基因是否翻译成蛋白质抗原抗体杂交抗原抗体杂交分子水平的检测分子水平的检测45检测转基因生物染色体的检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因上是否插入了目的基因vDNA分子杂交技术分子杂交技术探针探针含有目的基因的含
25、有目的基因的DNA片段用放射性同位素作标记片段用放射性同位素作标记转基因生物的基因组转基因生物的基因组DNA待测待测若出现杂交带，表明目的基因已插入染色体的若出现杂交带，表明目的基因已插入染色体的DNA中中462.检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNAv分子杂交技术分子杂交技术探针探针含有目的基因的含有目的基因的DNA片段用放射性同位素作标记片段用放射性同位素作标记从转基因生物中提取从转基因生物中提取mRNA待测待测若出现杂交带，表明目的基因已转录出若出现杂交带，表明目的基因已转录出mRNA473.检测目的基因是否翻译成蛋白质检测目的基因是否翻译成蛋白质v抗原抗体杂交抗原抗体
26、杂交若出现杂交带，表明目的基因已形若出现杂交带，表明目的基因已形成蛋白质产品成蛋白质产品484.个体生物学水平的鉴定个体生物学水平的鉴定v抗虫或抗病的接种实验，以确定是否具有抗抗虫或抗病的接种实验，以确定是否具有抗性以及抗性的程度性以及抗性的程度v有的基因工程产品需要与天然产品的功能进有的基因工程产品需要与天然产品的功能进行活性比较，以确定转基因产品的功能活性行活性比较，以确定转基因产品的功能活性是否与天然产品相同是否与天然产品相同49DNA探针探针将双链DNA解开用同位素、荧光分子或化学发光剂等对DNA单链进行标记抽取病人的组织或体液，将DNA分离出来使DNA解旋查出疾病将DNA探针引入到化
27、验样品中分析遗留在样品中的DNA探针50v利用基因的特性破案利用基因的特性破案51生物材料生物材料DNAmRNA限制酶切割一定大小范围DNA基因组文库PCR反转录cDNAcDNA文库获取目的基因人工合成52P151.作为基因工程表达载体，只需含有目作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？的基因就可以完成任务吗？为什么？v答不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并答不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。必须构建上述元件的主要理由是子和标记基因等。必须构建上述元
28、件的主要理由是v生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达；因的启动子才能比较有利于基因的表达；v通过通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中无法转录；码序列导入受体生物中无法转录；v目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记；目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记；v为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调控元件，如增强子等；其他调控元件，如增强子等；v有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什
29、有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因（或做么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因（或做成目的基因与标识基因的融合基因），如绿色荧光蛋成目的基因与标识基因的融合基因），如绿色荧光蛋白基因等。白基因等。53P15思考与探究思考与探究2v提示农杆菌可分为根瘤农杆菌和发根农杆菌，在植提示农杆菌可分为根瘤农杆菌和发根农杆菌，在植物基因工程中以根瘤农杆菌的物基因工程中以根瘤农杆菌的Ti质粒介导的遗传转化质粒介导的遗传转化最多。根瘤农杆菌广泛存在于双子叶植物中。据不完最多。根瘤农杆菌广泛存在于双子叶植物中。据不完全统计，约有全统计，约有93属属643种双子叶
30、植物对根瘤农杆菌敏种双子叶植物对根瘤农杆菌敏感。裸子植物对该菌也敏感。当这些植物被该菌侵染感。裸子植物对该菌也敏感。当这些植物被该菌侵染后会诱发肿瘤。近年来，也有报道该菌对单子叶植物后会诱发肿瘤。近年来，也有报道该菌对单子叶植物也有侵染能力。也有侵染能力。v根瘤农杆菌侵染植物是一个非常复杂的过程。根瘤根瘤农杆菌侵染植物是一个非常复杂的过程。根瘤农杆菌具有趋化性，即植物的受伤组织会产生一些糖农杆菌具有趋化性，即植物的受伤组织会产生一些糖类和酚类物质吸引根瘤农杆菌向受伤组织集中。研究类和酚类物质吸引根瘤农杆菌向受伤组织集中。研究证明，主要酚类诱导物为乙酰丁香酮和羧基乙酰丁香证明，主要酚类诱导物为乙
31、酰丁香酮和羧基乙酰丁香酮，这些物质主要在双子叶植物细胞壁中合成，通常酮，这些物质主要在双子叶植物细胞壁中合成，通常不存在于单子叶植物中，这也是单子叶植物不易被根不存在于单子叶植物中，这也是单子叶植物不易被根瘤农杆菌侵染的原因。近年来还发现一些中性糖，如瘤农杆菌侵染的原因。近年来还发现一些中性糖，如54P15思考与探究思考与探究2vL阿拉伯糖、阿拉伯糖、D木糖等也有诱导作用。酚类物质和糖类物质既木糖等也有诱导作用。酚类物质和糖类物质既可以作为根瘤农杆菌的趋化物，又可以作为农杆菌中可以作为根瘤农杆菌的趋化物，又可以作为农杆菌中Ti质粒上质粒上Vir区（毒性区）基因的诱导物，使区（毒性区）基因的诱导
32、物，使Vir区基因活化，导致区基因活化，导致TDNA的加工和转移，从而侵染植物细胞。的加工和转移，从而侵染植物细胞。v需要注意的是农杆菌中不同的菌株，侵染能力有差别，在基需要注意的是农杆菌中不同的菌株，侵染能力有差别，在基因工程中需要加以选择使用。利用农杆菌侵染单子叶植物进行因工程中需要加以选择使用。利用农杆菌侵染单子叶植物进行遗传转化时，是需要加上述酚类物质的，同时单子叶植物种类遗传转化时，是需要加上述酚类物质的，同时单子叶植物种类不同，农杆菌侵染进行遗传转化的效果也有很大差异。不同，农杆菌侵染进行遗传转化的效果也有很大差异。v如果想将一个抗病毒基因转入小麦，也可以用农杆菌，但要如果想将一个
33、抗病毒基因转入小麦，也可以用农杆菌，但要注意两点要选择合适的农杆菌菌株，因为不是所有的农杆菌注意两点要选择合适的农杆菌菌株，因为不是所有的农杆菌菌株都可以侵染单子叶植物；要加趋化和诱导的物质，一般菌株都可以侵染单子叶植物；要加趋化和诱导的物质，一般为乙酰丁香酮等，目的是使农杆菌向植物组织的受伤部位靠拢为乙酰丁香酮等，目的是使农杆菌向植物组织的受伤部位靠拢（趋化性）和激活农杆菌的（趋化性）和激活农杆菌的Vir区（诱导）的基因，使区（诱导）的基因，使TDNA转转移并插入到染色体移并插入到染色体DNA上。上。55P15思考与探究思考与探究v3.利用大肠杆菌可以生产出人的胰岛素，联利用大肠杆菌可以生产
34、出人的胰岛素，联系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程系前面有关细胞器功能的知识，结合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人操作程序的基本思路，思考一下，若要生产人的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？的糖蛋白，可以用大肠杆菌吗？v提示有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链，提示有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链，这些糖链是在内质网和高尔基复合体上加工完这些糖链是在内质网和高尔基复合体上加工完成的，内质网和高尔基复合体存在于真核细胞成的，内质网和高尔基复合体存在于真核细胞中，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在中，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在大肠杆菌中生产这种糖蛋白是不可能的。大肠杆菌中生产
35、这种糖蛋白是不可能的。56P15思考与探究思考与探究4v基本操作如下基本操作如下v（1）从小鼠中克隆出）从小鼠中克隆出珠蛋白基因的编码序列珠蛋白基因的编码序列（cDNA）。）。v（2）将）将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。v（3）将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，）将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出大肠杆菌菌落，环素基因而死掉；如果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明则表明珠蛋白基因已进入其中。珠蛋白基因已进入其中。v（4）培养进入了）培养进入了珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎后从中提取体，破碎后从中提取珠蛋白。珠蛋白。
