1、目的与要求 掌握遗传多态性的概念、分类及检出方法 了解遗传多态性的医学意义 熟悉基因突变的概念及类型 了解基因突变与疾病的关系遗传多态性 多态性多态性(Polymorphism):群体中经常存在的两种或两种以上较常见的变异型或等位基因，其中最罕见的一种在人群中不少于1%。多态性表现形式多态性表现形式蛋白质、酶的多态结合珠蛋白：HP-1、HP2-1、HP2-2；G6PD有3种类型；抗原多态性：红细胞抗原ABO型；HLA的多态性；多态性表现形式多态性表现形式 续染色体多态：染色体的细胞遗 传学形态随体的有无、次溢痕的大小、以及带纹的变异等。多态性表现形式多态性表现形式 续 DNA多态多态 (分子水
2、平的遗传多态分子水平的遗传多态)碱基变异：1/1000bp点多态重复序列多态(STR、VNTR等)限制性片断片断长度多态性(RFLP)-Restriction fragment length polymorphism DNA序列的改变，甚至于一个核苷酸变化，就可能引起某个限制性内切酶切点的丢失或产生，导致酶切片段长度的变化。检测技术：PCR-RFLP酶切 (琼脂糖)电泳 Southern Blot RFLP的局限性：单个碱基改变引起酶切位点的出现或消失，“能切”与“不能切”两种情况，“多态性”信息量低；现有的限制性内切酶不能检测出所有的核苷酸的改变；分布不均VNTR和新一代的RFLP-VNTR
3、(Variable number tandem repeats)基因组中存在的小卫星DNA是由短的DNA序列串联重复组成，重复次数在人群中高度变异，当用限制酶切割VNTR区域时，只要酶切位点不在重复区，就可以得到各种长度不同的片段。也称为暗修复（dark repair）。DNA链中碱基之间互相替换。侏儒、视网膜萎缩。同义突变（same sense mutation）造成个体间的生物化学组成的遗传学差异，一在自然状态下发生突变的频率很低氨基酸 终止子 酪氨酸and C2b?中性突变：变异后果轻微，对机体效应不明一般分为两大类静态突变和动态突变。DNA序列的改变，甚至于一个核苷酸变化，就可能引起某
4、个限制性内切酶切点的丢失或产生，导致酶切片段长度的变化。检测技术：PCR-RFLP静态突变（static mutation）是在一定条件下生物各世代中以相对稳定的频率发生的基因突变。基因突变是生物变异的根本来源，是生物多样性的物质基础，为生物的进化提供了最初的原材料。细胞内存在着一种光复活酶。Is AF2 the father of C2a?and C2b?Is AF1 the father of C1?M1=First MotherC1=First ChildAF1=Alleged FatherM2=Second MotherC2a=Second ChildC2b=Third ChildAF
5、2=Alleged Father 2单核苷酸多态（SNP）-single nucleotide polymorphism 基因组内特定核苷酸位置上存在两种不同的碱基，其中最少的一种在群体中的频率不小于1%,平均每隔100-300bp有一多态位点.单核苷酸多态性的特征 二态的遗传变异 多为转换，C T CG二核苷酸处集中分布C T单核苷酸多态性的类型与作用位于基因编码区同义变异 （synonymous）错义变异 （missense）无义变异 （nonsense）提前终止 （stop codon）基因突变是生物变异的根本来源，是生物多样性的物质基础，为生物的进化提供了最初的原材料。复杂疾病或过程的
6、基因定位调控序列突变：使蛋白质合成的速度或效率发生改变，进而影响着这些蛋白质的功能，并引起疾病。除碱基替换外，点突变的另一种形式就是移码突变。DNA分子中的某一个终止密码突变为编码氨基酸的密码，从而使多肽链的合成至此仍继续下去，直至下一个终止密码子为止，形成超长的异常多肽链。碱基变异：1/1000bp亚硝酸引起DNA碱基对的改变用途：个体识别、亲子鉴定基因突变的后果 续基因突变 产生新的基因多为转换，C T子比正常纯合子对抗疟疾；同义变异 （synonymous）家系图谱和实验结果的对照关系用于显示孟德尔遗传方式。同义突变（same sense mutation）单核苷酸多态性的类型与作用 续
7、位于非基因编码区或基因间隔区基因剪接 （gene splicing）转录调控 （transcript regulation）非编码RNA（noncoding RNA）DNA 多态的检测方法限制性片断长度多态性限制性片断长度多态性(RFLP)单链构象多态性单链构象多态性（SSCP）变性梯度凝胶电泳变性梯度凝胶电泳（DGGE）等位基因特异的寡核苷酸杂交等位基因特异的寡核苷酸杂交（ASO）DNA 多态的检测方法 续 DNA芯片芯片 DNA测序测序 DHPLC 质谱法质谱法遗传多态的医学意义和应用遗传多态的医学意义和应用 连锁分析与基因定位连锁分析与基因定位 疾病的关联分析疾病的关联分析 复杂疾病或过
8、程的基因定位复杂疾病或过程的基因定位 法医学应用法医学应用:个人识别，个人识别，亲权鉴定等亲权鉴定等遗传多态的医学意义和应用遗传多态的医学意义和应用 续疾病发病的分子遗传机理的阐明疾病发病的分子遗传机理的阐明 镰刀血红蛋白贫血镰刀血红蛋白贫血环境因子易感基因的检出环境因子易感基因的检出 指导用药和药物设计指导用药和药物设计 肝酯酶基因启动子区的一个多态与他汀类降血脂的效果肝酯酶基因启动子区的一个多态与他汀类降血脂的效果有高度的相关性有高度的相关性（Zambon A,et al Circulation,2001,103(6):792-798）参考文献张思仲张思仲.人类基因组的单核苷酸多态性及其医
9、学应用人类基因组的单核苷酸多态性及其医学应用,中华医学遗传学杂志中华医学遗传学杂志1999,16(2):119-121.张思仲张思仲.基因多态性研究与遗传性疾病基因多态性研究与遗传性疾病,中华中华医学遗传学杂志医学遗传学杂志2000,80(9):654-656.基因突变的概念 基因突变(gene mutation)是指基因组DNA分子某些碱基或其顺序发身改变.生物进化的基础生物进化的基础基因突变基因突变 产生新的基因产生新的基因 遗传病产生的原因遗传病产生的原因基因突变的分子机制基因突变的分子机制n一般分为两大类静态突变和动态突变。静态突变静态突变（static mutation）是在一定条件
10、下生物各世代中以相对稳定的频率发生的基因突变。可分为点突变和片段突变。点突变点突变（point mutation）DNADNA链中一个或一对碱基发生的改变。它有两种形式：碱基替换和移码突变。碱基替换碱基替换（base substitutionbase substitution）:DNA链中碱基之间互相替换。n转换转换（transition）:嘌呤与嘌呤之间，或嘧啶与嘧啶之间的替换。n颠换颠换（transvertion）:嘌呤与嘧啶之间的替换。羟胺（hydroxylamine，HA）人类基因组的单核苷酸多态性及其医学应用,中华医学遗传学杂志1999,16(2):119-121.了解基因突变与疾病
11、的关系羟胺引起DNA碱基对的改变C1=First Child它有两种形式：碱基替换和移码突变。氨基酸 终止子 酪氨酸DNA链中一个或一对碱基发生的改变。基因突变是生物变异的根本来源，是生物多样性的物质基础，为生物的进化提供了最初的原材料。家系图谱和实验结果的对照关系用于显示孟德尔遗传方式。疾病发病的分子遗传机理的阐明例如,脆性X染色体综合症即是由于三核苷酸CCG重复序列的拷贝数增加所致。若与G配对，经一次复制后，就可以使原来的A-T对变换成G-C对DNA链中一个或一对碱基发生的改变。化学因素 续如果碱基替换影响的是密码子，则会产生同义突变、无义突变、错义突变和终止密码突变等遗传学效应；如果影响
12、的是非密码子区域，则产生几种不同的遗传学效果：无明确的遗传学效应、改变调控序列从而影响基因表达的调控、改变外显子-内含子接头处的序列从而影响外显子的加工拼接。基因突变的遗传学效应n同义突变同义突变（same sense mutation）碱基被替换之后，产生了新的密码子，但新旧密码子同义，所编码的氨基酸种类保持不变，因此同义突变并不产生突变效应。n无义突变无义突变（non-sense mutation）碱基替换使编码氨基酸的密码变成终止密码UAA、UAG或UGA。n错义突变错义突变（missense mutation）碱基替换使编码某种氨基酸的密码子变成编码另一种氨基酸的密码子，从而使多肽链的
13、氨基酸种类和序列发生改变。n终止密码突变终止密码突变（terminator codon mutation）DNA分子中的某一个终止密码突变为编码氨基酸的密码，从而使多肽链的合成至此仍继续下去，直至下一个终止密码子为止，形成超长的异常多肽链。DNA ATT 颠换 ATG mRNA UAA UAC 氨基酸 终止子 酪氨酸 移码突变移码突变（frame-shift mutation）n除碱基替换外，点突变的另一种形式就是移码突变。由于基因组DNA链中插入或缺失1个或几个碱基对，从而使自插入或缺失的那一点以下的三联体密码的组合发生改变，进而使其编码的氨基酸种类和序列发生变化。n碱基对插入和（或）缺失的
14、数目和方式不同，对其后的密码组合的改变的影响程度不同。n移码突变引起的最小变化是在DNA链上增加或减少一个遗传密码导致合成的多肽链多或少一个氨基酸，若大范围改变密码组合则会引起的整条多肽链的氨基酸种类及序列的变化。因而移码突变的后果往往是严重的，通常是导致一条或几条多肽链丧失活性或根本不能合成，进而严重影响细胞或机体的正常生命活动。影响非密码子区域的影响非密码子区域的突变突变n调控序列突变调控序列突变：使蛋白质合成的速度或效率发生改变，进而影响着这些蛋白质的功能，并引起疾病。n内含子与外显子剪辑位点突变内含子与外显子剪辑位点突变：GT-AG中的任一碱基发生置换而导致剪辑和加工异常，不能形成正确
15、的mRNA分子。片段突变片段突变n片段突变是片段突变是DNA链中某些小片段的链中某些小片段的碱基序列发生缺失、重复或重排。碱基序列发生缺失、重复或重排。动态突变(Dynamic mutation)n在人类基因组中有大量的重复序列在人类基因组中有大量的重复序列,如微卫如微卫星星DNADNA或称为短串联重复序列或称为短串联重复序列STR,STR,它们的重它们的重复次数变动很大复次数变动很大,有些有些STR,STR,尤其是三核苷酸尤其是三核苷酸重复重复,在靠近基因或位于基因序列中时在靠近基因或位于基因序列中时,它们它们的重复次数在一代一代传递过程中会发生明的重复次数在一代一代传递过程中会发生明显的增
16、加显的增加,从而导致某些疾病的发生从而导致某些疾病的发生,称为称为动动态突变态突变。例如例如,脆性脆性X X染色体综合症即是由染色体综合症即是由于三核苷酸于三核苷酸CCGCCG重复序列的拷贝数增加所致。重复序列的拷贝数增加所致。突变体：突变体：携带突变携带突变Gene的细胞或个体的细胞或个体野生型：野生型：未突变未突变Gene的细胞或个体的细胞或个体突变热点突变热点(Hot spots of mutation)：DNA分子中某些部位的突变频率大大高于分子中某些部位的突变频率大大高于平均数，这些部位称为突变热点。平均数，这些部位称为突变热点。基因突变的其它相关概念基因突变的其它相关概念人类基因组
17、的单核苷酸多态性及其医学应用,中华医学遗传学杂志1999,16(2):119-121.切除修复（excision repair）切除修复发生在复制之前，需要其它酶的参与。静态突变（static mutation）是在一定条件下生物各世代中以相对稳定的频率发生的基因突变。静态突变（static mutation）是在一定条件下生物各世代中以相对稳定的频率发生的基因突变。经两次复制后，C-G碱基对就变换成T-A碱基对。多态性表现形式 续显，从进化观点看中性突变DNA序列的改变，甚至于一个核苷酸变化，就可能引起某个限制性内切酶切点的丢失或产生，导致酶切片段长度的变化。核酸内切酶先在嘧啶二聚体附近切开
18、DNA单链，然后以另一条正常链为模板，按碱基互补原则补齐需切除部分的碱基序列，最后由核酸内切酶切去含嘧啶二聚体的片段，并由连接酶将断口与新合成的DNA片段连接起来。基因突变的其它相关概念等位基因特异的寡核苷酸杂交（ASO）了解基因突变与疾病的关系了解遗传多态性的医学意义DNA序列的改变，甚至于一个核苷酸变化，就可能引起某个限制性内切酶切点的丢失或产生，导致酶切片段长度的变化。诱发基因突变的因素诱发基因突变的因素 根据基因突变发生的原因，可将突变分为自发突变和诱发突变自发突变和诱发突变。在自然条件下，未经人工处理而发生的突变为自发突变自发突变（spontaneous mutation）。经人工处
19、理而发生的突变是诱发突变诱发突变（induced mutaion）。能诱发基因突变的各种内外环境因素统称为诱变剂诱变剂（mutagen）。物理因素物理因素 紫外线紫外线 紫外线的照射可使DNA顺序中相邻的嘧啶类碱基结合成嘧啶二聚体，最常见的为胸腺嘧啶二聚体（TT）。在复制或转录进行时，该处碱基配对发生错误，从而引起新合成的DNA或RNA链的碱基改变。紫外线诱发的胸腺嘧啶二聚体紫外线诱发的胸腺嘧啶二聚体 物理因素物理因素 续续电离辐射电离辐射 射线直接击中DNA链，DNA分子吸收能量后引起DNA链和染色体的断裂，片断发生重排，引起染色体结构畸变.。放射性污染化学因素化学因素羟胺羟胺（hydrox
20、ylamine，HA）可使胞嘧啶（C）的化学成分发生改变，而不能正常地与鸟嘌呤（G）配对，而改为与腺嘌呤（A）互补。经两次复制后，C-G碱基对就变换成T-A碱基对。化学污染羟胺引起DNA碱基对的改变 亚硝酸或含亚硝基化合物亚硝酸或含亚硝基化合物 可使碱基脱去氨基（-NH2）而产生结构改变，从而引起碱基错误配对。化学因素化学因素 续续亚硝酸引起DNA碱基对的改变 A被其脱去氨基后可变成次黄嘌呤（H），H不能再与T配对，而变为与C配对，经DNA复制后，可形成T-AC-G的转换烷化剂烷化剂 具有高度诱变活性的烷化剂，可将烷基（CH3-、C2H5-等）引入多核苷酸链上的任何位置，被其烷基化的核苷酸将产
21、生错误配对而引起突变。化学因素化学因素 续续烷化剂引起的DNA碱基对的改变 碱基类似物碱基类似物 某些碱基类似物可以取代碱基而插入DNA分子引起突变。化学因素化学因素 续续5-BU引起的DNA碱基对的改变 5-BU与腺嘌呤（A）和鸟嘌呤（G）均可配对。如果5-BU取代T以后一直保持与A配对，所产生的影响并不大；若与G配对，经一次复制后，就可以使原来的A-T对变换成G-C对5-bromo-2,4(1H,3H)-pyrimidinedione，5-BrU or 5-BU，5-Bromouracil 芳香族化合物芳香族化合物 吖啶类和焦宁类等扁平分子构型的芳香族化合物可以嵌入DNA的核苷酸序列中，导
22、致碱基插入或丢失的移码突变。化学因素化学因素 续续基因突变的一般特性基因突变的一般特性 多向性多向性 同一基因座上的基因可独立发生多次不同的突变而形成复等位基因 可逆性可逆性 突变的方向可逆,可以是正突变，也可以是回复突变 有害性有害性 突变会导致人类许多疾病的发生稀有性稀有性 在自然状态下发生突变的频率很低 随机性随机性可重复性可重复性基因突变的一般特性基因突变的一般特性DNA损伤的修复损伤的修复 生物体内存在着多种DNA修复系统，当DNA受到损伤时，在一定条件下，这些修复系统可以部分地修正DNA分子的损伤，从而大大降低突变所引起的有害效应，保持遗传物质的稳定性。紫外线引起的紫外线引起的DN
23、A损伤的修复损伤的修复光复活修复光复活修复（photoreactivation repair）细胞内存在着一种光复活酶。在可见光的照射下，光复活酶被激活，从而能识别嘧啶二聚体并与之结合，形成酶-DNA复合物，然后利用可见光提供的能量，解开二聚体，此后光复活酶从复合物中释放出来，完成修复过程，这一过程称为光复活修复。光复活修复的过程切除修复切除修复（excision repair）也称为暗修复（dark repair）。光在这种修复过程中不起任何作用。切除修复发生在复制之前，需要其它酶的参与。核酸内切酶先在嘧啶二聚体附近切开DNA单链，然后以另一条正常链为模板，按碱基互补原则补齐需切除部分的碱基
24、序列，最后由核酸内切酶切去含嘧啶二聚体的片段，并由连接酶将断口与新合成的DNA片段连接起来。n重组修复重组修复（recombination repair）含有嘧啶二聚体或其它结构损伤的DNA仍可进行复制，当复制到损伤部位时，DNA子链中与损伤部位相对应的部位出现缺口。复制结束后，完整的母链与有缺口的子链重组，使缺口转移到母链上，母链上的缺口由DNA聚合酶合成互补片段，再由连接酶连接完整，从而使复制出来的DNA分子的结构恢复正常。该过程发生在复制之后。Is AF1 the father of C1?基因突变是生物变异的根本来源，是生物多样性的物质基础，为生物的进化提供了最初的原材料。复杂疾病或过
25、程的基因定位错义突变（missense mutation）结合珠蛋白：HP-1、HP2-1、HP2-2；例如,脆性X染色体综合症即是由于三核苷酸CCG重复序列的拷贝数增加所致。动态突变(Dynamic mutation)C2a=Second Child如果影响的是非密码子区域，则产生几种不同的遗传学效果：无明确的遗传学效应、改变调控序列从而影响基因表达的调控、改变外显子-内含子接头处的序列从而影响外显子的加工拼接。无义变异 （nonsense）5-BU与腺嘌呤（A）和鸟嘌呤（G）均可配对。该过程发生在复制之后。移码突变（frame-shift mutation）基因突变是生物变异的根本来源，是
26、生物多样性的物质基础，为生物的进化提供了最初的原材料。检测技术：PCR-RFLP 重组修复的过程修复缺陷引起的疾病修复缺陷引起的疾病 修复系统本身是由一系列基因所编码的酶所组成的，修复系统的缺陷将使遗传物质的损伤不能得到尽快修复，突变将以各种形式存在并遗传下来，最终导致疾病的发生。修复缺陷与人类疾病修复缺陷与人类疾病着色性干皮病着色性干皮病(XP,xeroderma pigmentosum)位于位于1p的隐性基因控制，干性皮肤伴随的隐性基因控制，干性皮肤伴随神经神经系统疾病，由切除二聚体能力缺损造成。系统疾病，由切除二聚体能力缺损造成。Cockayne Syndrome(CS)侏儒、视网膜萎缩
27、。由缺损紫外线侏儒、视网膜萎缩。由缺损紫外线引起的引起的DNA损伤修复系统引起。损伤修复系统引起。共济失调毛细血管扩张症共济失调毛细血管扩张症 早老症早老症 修复缺陷与人类疾病修复缺陷与人类疾病 续续基因突变的后果基因突变的后果根据基因突变对机体的影响，有以下几种情况：根据基因突变对机体的影响，有以下几种情况：中性突变：中性突变：变异后果轻微，对机体效应不明变异后果轻微，对机体效应不明 显，从进化观点看显，从进化观点看中性突变中性突变造成个体间的生物化学组成的造成个体间的生物化学组成的遗传学差异遗传学差异，一，一 般对机体无影响；般对机体无影响；如：如：ABO血型，血型，HLA，同工酶等，同工
28、酶等有利于个体生存生育有利于个体生存生育。如：。如：Hbs突变基因杂合突变基因杂合 子比正常纯合子对抗疟疾；子比正常纯合子对抗疟疾；产生遗传易感性产生遗传易感性。如：肿瘤易感性；。如：肿瘤易感性；引起遗传病引起遗传病。每个健康人均有。每个健康人均有56个有个有 害突变；害突变；致死突变：致死突变：造成死胎、自然流产、生后造成死胎、自然流产、生后 夭折。夭折。基因突变的后果基因突变的后果 续续基因突变的意义 基因突变 点突变点突变（point mutation）DNADNA链中一个或一对碱基发生的改变。它有两种形式：碱基替换和移码突变。碱基替换碱基替换（base substitutionbase
29、 substitution）:DNA链中碱基之间互相替换。动态突变(Dynamic mutation)n在人类基因组中有大量的重复序列在人类基因组中有大量的重复序列,如微卫如微卫星星DNADNA或称为短串联重复序列或称为短串联重复序列STR,STR,它们的重它们的重复次数变动很大复次数变动很大,有些有些STR,STR,尤其是三核苷酸尤其是三核苷酸重复重复,在靠近基因或位于基因序列中时在靠近基因或位于基因序列中时,它们它们的重复次数在一代一代传递过程中会发生明的重复次数在一代一代传递过程中会发生明显的增加显的增加,从而导致某些疾病的发生从而导致某些疾病的发生,称为称为动动态突变态突变。例如例如,
30、脆性脆性X X染色体综合症即是由染色体综合症即是由于三核苷酸于三核苷酸CCGCCG重复序列的拷贝数增加所致。重复序列的拷贝数增加所致。DNA损伤的修复损伤的修复 生物体内存在着多种DNA修复系统，当DNA受到损伤时，在一定条件下，这些修复系统可以部分地修正DNA分子的损伤，从而大大降低突变所引起的有害效应，保持遗传物质的稳定性。用途：个体识别、亲子鉴定多态性(Polymorphism):物理因素 续CG二核苷酸处集中分布基因突变 产生新的基因氨基酸 终止子 酪氨酸每个健康人均有56个有基因突变(gene mutation)是指基因组DNA分子某些碱基或其顺序发身改变.动态突变(Dynamic mutation)DNA链中一个或一对碱基发生的改变。经两次复制后，C-G碱基对就变换成T-A碱基对。该过程发生在复制之后。修复缺陷与人类疾病 续A被其脱去氨基后可变成次黄嘌呤（H），H不能再与T配对，而变为与C配对，经DNA复制后，可形成T-AC-G的转换DNA链中一个或一对碱基发生的改变。产生遗传易感性产生遗传易感性。如：肿瘤易感性；。如：肿瘤易感性；引起遗传病引起遗传病。每个健康人均有。每个健康人均有56个有个有 害突变；害突变；致死突变：致死突变：造成死胎、自然流产、生后造成死胎、自然流产、生后 夭折。夭折。基因突变的后果基因突变的后果 续续基因突变的意义 基因突变
