1、 项目项目7 7 鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 解决的问题：解决的问题：u我们为什么要制备鸡胚流感疫苗？我们为什么要制备鸡胚流感疫苗？u我们什么设备和物料制备鸡胚流感我们什么设备和物料制备鸡胚流感 疫苗？疫苗？u我们怎么制备鸡胚流感疫苗？我们怎么制备鸡胚流感疫苗？u我们怎么证明制备的鸡胚流感疫苗我们怎么证明制备的鸡胚流感疫苗 质量合格质量合格,可以应用于临床？可以应用于临床？u还有什么其他相关知识需要拓展还有什么其他相关知识需要拓展?问题一问题一我们为什么要制备鸡胚流感疫我们为什么要制备鸡胚流感疫苗苗？项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 接收到工作任务接收到工作任务 你
2、所在的工作组你所在的工作组是生物制品公司的一是生物制品公司的一个个研发助理或生产一研发助理或生产一线员工线员工，你们接到的，你们接到的任务就是在任务就是在1212月月2020日日要研发或生产一种鸡要研发或生产一种鸡胚流感疫苗，并需要胚流感疫苗，并需要协助质量管理部门协助质量管理部门,确保制备的疫苗是合确保制备的疫苗是合格品格品,可应用于临床。可应用于临床。项目背景项目背景甲型甲型h1n1h1n1流感疫苗流感疫苗 主要应用主要应用 专门用于预防甲型H1N1流感 病毒（此前也曾被称为猪流感）称为猪流感）的疫苗。主要操作主要操作 单批疫苗生产需经历病毒接 种、病毒培养、病毒灭活、纯化、裂解 、配比、
3、分包装及批签发等步骤。主要剂型主要剂型 鼻腔喷雾剂、肌肉注射剂项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 病毒性疫苗基本概念病毒性疫苗基本概念定义：定义：用病毒制成，进入人体后，使机体自身产生抵抗相应病毒能力用病毒制成，进入人体后，使机体自身产生抵抗相应病毒能力的生物制品，称为病毒类疫苗。的生物制品，称为病毒类疫苗。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 培养的培养的组织来组织来源和制源和制造方法造方法动物培养疫苗动物培养疫苗基因重组疫苗基因重组疫苗鸡胚培养疫苗鸡胚培养疫苗细胞培养疫苗细胞培养疫苗理化理化性质性质灭活与减毒活疫苗灭活与减毒活疫苗液体与冻干液体与冻干全病毒、裂
4、解、亚单全病毒、裂解、亚单位位 佐剂与无佐剂疫苗佐剂与无佐剂疫苗用途用途狂犬疫苗狂犬疫苗流行性感冒疫苗流行性感冒疫苗脊髓灰质炎疫苗脊髓灰质炎疫苗乙肝疫苗乙肝疫苗问题二问题二我们什么设备和物料制备鸡胚流我们什么设备和物料制备鸡胚流感疫苗？感疫苗？设备和材料设备和材料 设备或材料设备或材料数量数量设备或材料设备或材料数量数量流感弱毒毒种流感弱毒毒种1 1支（共用）支（共用）1010日龄鸡胚日龄鸡胚2 2个（每组）个（每组）孵化器孵化器1 1个（共用）个（共用）照蛋箱照蛋箱1 1个（共用）个（共用）蛋架蛋架1 1个（共用）个（共用）打孔器打孔器1 1套（每组）套（每组）注射器（注射器（1mL)1mL
5、)3 3支（每组）支（每组）镊子镊子3 3个（每组）个（每组）碘酊碘酊1 1瓶（每组）瓶（每组）酒精棉酒精棉若干（每组）若干（每组）酒精灯酒精灯3 3个（每组）个（每组）剪刀剪刀3 3把（每组）把（每组）眼科镊眼科镊3 3把（每组）把（每组）灭菌疫苗瓶灭菌疫苗瓶5 5个（每组）个（每组）灭菌吸管灭菌吸管1010支（每组）支（每组）固体石蜡固体石蜡1 1瓶（共用）瓶（共用）菌种菌种 培养基培养基 项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 器具器具 问题三问题三我们怎么制备鸡胚流感疫苗我们怎么制备鸡胚流感疫苗？鸡胚接收前处理鸡胚接收前处理 打开孵化机设定温度打开孵化机设定温度37.837
6、.8，湿度为，湿度为70%70%。第一步第一步 鸡胚的接收鸡胚的接收拆盘拆盘 观察鸡胚是否干净，有无裂痕，把合格的摆放到空观察鸡胚是否干净，有无裂痕，把合格的摆放到空盘上，气室向上。盘上，气室向上。照检照检 在照检灯下，将照蛋器罩压在鸡胚气室上，沿气室在照检灯下，将照蛋器罩压在鸡胚气室上，沿气室边缘画弧线。边缘画弧线。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 消毒消毒 浸泡消毒槽内浸泡消毒槽内1-2min1-2min，捞出放在桌子上。再由消毒，捞出放在桌子上。再由消毒人员摆放到蛋车上，推入人员摆放到蛋车上，推入37.837.8的孵化器中。的孵化器中。鸡胚的消毒鸡胚的消毒 将将1010
7、日龄合格胚从孵化器中运到层流罩的入蛋口前，用日龄合格胚从孵化器中运到层流罩的入蛋口前，用除菌的除菌的0.1%0.1%新洁尔灭均匀喷洒消毒后，用新洁尔灭均匀喷洒消毒后，用5%5%碘酒消毒鸡蛋的碘酒消毒鸡蛋的接种点，接种点在划线上方接种点，接种点在划线上方0.10.1至至0.20.2处。消毒后转入层流罩处。消毒后转入层流罩交给打孔人员。交给打孔人员。第二步第二步 鸡胚的接种鸡胚的接种打孔打孔 用打孔器在每个鸡胚接种点处打一个小孔，以可以看清楚用打孔器在每个鸡胚接种点处打一个小孔，以可以看清楚为准，打孔的顺序为由上到下，由左到右，打孔时力度要适为准，打孔的顺序为由上到下，由左到右，打孔时力度要适中，
8、如有打破将其放在事先准备好的空盘上。中，如有打破将其放在事先准备好的空盘上。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 接种接种 将连续流注射器的针头垂直插向已打好的接种孔内（即鸡将连续流注射器的针头垂直插向已打好的接种孔内（即鸡胚尿囊内）。胚尿囊内）。第二步第二步 鸡胚的接种鸡胚的接种项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 接种后将卵壳外的钻孔用石蜡封好，接种后将卵壳外的钻孔用石蜡封好，置于置于37.837.8孵化器内孵化。孵化器内孵化。处理立瓶处理立瓶 安装时把安装时把5 5升立瓶口包装纸松开，打开管道灭菌袋，取出升立瓶口包装纸松开，打开管道灭菌袋，取出管道，一手拿管道
9、，一手掀开管道，一手拿管道，一手掀开5 5升立瓶包装纸，把管道放进立升立瓶包装纸，把管道放进立瓶中按紧塞子。瓶中按紧塞子。第三步第三步 鸡胚液的收获鸡胚液的收获灭菌灭菌 用用0.1%0.1%新洁尔灭均匀喷洒鸡胚表面新洁尔灭均匀喷洒鸡胚表面,再用再用75%75%酒精喷洒表酒精喷洒表面，由入蛋口交给层流罩内负责削壳人员。面，由入蛋口交给层流罩内负责削壳人员。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 削壳削壳 用大镊子上部三分之一处敲击鸡胚壳气室部位。沿气室用大镊子上部三分之一处敲击鸡胚壳气室部位。沿气室边缘敲出一道长缝后，用镊子尖沿气室边缘剥开，注意不要边缘敲出一道长缝后，用镊子尖沿气室
10、边缘剥开，注意不要将气室弄破，剥下的蛋壳让其掉入大平皿中。将气室弄破，剥下的蛋壳让其掉入大平皿中。收获收获 第一步，连接管道：取一单根管道的进气口，一端连接第一步，连接管道：取一单根管道的进气口，一端连接真空泵，另一端连接空气过滤滤器，空气过滤滤器的另一端真空泵，另一端连接空气过滤滤器，空气过滤滤器的另一端连接管道的进气口，用止血钳卡住出液口，打开收获头处的连接管道的进气口，用止血钳卡住出液口，打开收获头处的包装，开始收获。包装，开始收获。第三步第三步 鸡胚液的收获鸡胚液的收获 第二步，收获：先握住小镊子插进尿囊腔中，松开小镊子第二步，收获：先握住小镊子插进尿囊腔中，松开小镊子把尿囊膜划开一个
11、小口，把收获头插进去吸干尿囊液。把尿囊膜划开一个小口，把收获头插进去吸干尿囊液。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 第三步，收获的顺序是由下到上、由左到右逐一收取，收第三步，收获的顺序是由下到上、由左到右逐一收取，收到到3.6L3.6L刻度后换取另一瓶，安装同上刻度后换取另一瓶，安装同上 物品处理物品处理 将连有硅胶管道的传液盖、滤器、止血钳、西林瓶、西林将连有硅胶管道的传液盖、滤器、止血钳、西林瓶、西林瓶塞、蠕动泵、电子天平，所需灭活剂等放入层流罩内。瓶塞、蠕动泵、电子天平，所需灭活剂等放入层流罩内。第四步第四步 鸡胚收获液的灭活鸡胚收获液的灭活灭活灭活 将连有硅胶管道的传液
12、盖安装在盛灭活剂的桶上，盛将连有硅胶管道的传液盖安装在盛灭活剂的桶上，盛1M1M柠檬酸三钠溶液的桶与蠕动泵连接，桶放在电子天平上。盛柠檬酸三钠溶液的桶与蠕动泵连接，桶放在电子天平上。盛1 1：200200福尔马林溶液的桶与计量泵连接，用量筒进行校准泵的福尔马林溶液的桶与计量泵连接，用量筒进行校准泵的速度调节为速度调节为280ml280ml左右左右/分钟。分钟。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 第五步第五步 无菌分装无菌分装观看观看FlashFlash问题四问题四我们怎么证明制备的鸡胚流感疫我们怎么证明制备的鸡胚流感疫苗质量合格苗质量合格,可以应用于临床？可以应用于临床？质量检
13、查质量检查项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 疫苗的安全性疫苗的安全性 疫苗的有效性疫苗的有效性 问题五问题五还有什么其他相关知识需要拓还有什么其他相关知识需要拓展展?拓展知识一、细菌性疫苗拓展知识一、细菌性疫苗各种细菌图片各种细菌图片项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 鼠疫杆菌鼠疫杆菌霍乱弧菌霍乱弧菌炭疽杆菌炭疽杆菌拓展知识一、细菌性疫苗拓展知识一、细菌性疫苗项目项目8 8鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 工艺流程及环境区域划分工艺流程及环境区域划分质量控制要点质量控制要点生产管理要点生产管理要点其他疫苗举例其他疫苗举例项目项目8 8鸡胚流感疫苗的制备鸡胚
14、流感疫苗的制备 项目项目8 8鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 项目项目8 8鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （一）工艺流程及环境区域划分（一）工艺流程及环境区域划分 菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*A B C原液合并 杀菌 原液收获*G F E半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 返回返回包装项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工
15、序A A 菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*A B C原液合并 杀菌 原液收获*G F E半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序A：菌种与菌种鉴定用的诊菌种与菌种鉴定用的诊断血清应经过国家食品药品监督断血清应经过国家食品药品监督管理局的批准，由国家的药品检管理局的批准，由国家的药品检定机构或国家指定单位分发定机构或国家指定单位分发。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 o 参照书上26页图3-1 菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种
16、接种*A B C原液合并 杀菌 原液收获*G F E半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序B：项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序B B工序工序B:B:（1 1）应建立原始种子批：记录种子的历史、来源及生物学特）应建立原始种子批：记录种子的历史、来源及生物学特性。性。（2 2）种子批制度建立：）种子批制度建立：o （传代、扩增）（传代、扩增）（传代、扩增）（传代、扩增）o原始种子批原始种子
17、批 主代种子批主代种子批 工作种工作种子批子批要求：各种子批间要保持：生物学特性一致。要求：各种子批间要保持：生物学特性一致。（3 3）种子批检定：培养特性、血清学特征、毒力试验、）种子批检定：培养特性、血清学特征、毒力试验、免疫力试验、抗原性试验免疫力试验、抗原性试验项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序B B 菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*A B C原液合并 杀菌 原液收获*G F E半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全
18、柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序C：微生物鉴别，微生物鉴别，包括菌型、纯度及包括菌型、纯度及其他特殊鉴别试验其他特殊鉴别试验项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序C C 菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*A B C原液合并 杀菌 原液收获*G F E半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序D：微生物纯微生物纯度检查，浓度检查度检查，浓度检查项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡
19、胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序D D 菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*A B C原液合并 杀菌 原液收获*G F E半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序E：微生物纯度微生物纯度检查检查项目项目8 8鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序E E项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序E E 菌种筛选*种子批
20、的建立和检定*菌种接种*A B C原液合并 杀菌 原液收获*G F E半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序F：无菌试验无菌试验项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序F F 菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*A B C原液合并 杀菌 原液收获*G F E半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物
21、安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序G：原液检查，包括镜原液检查，包括镜检查杂菌、效价或活性测定、检查杂菌、效价或活性测定、无菌试验、浓度测定、免疫无菌试验、浓度测定、免疫力试验。力试验。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序G G 菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*A B C原液合并 杀菌 原液收获*G F E半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序H：原液保存在原液保存
22、在2-8 。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序H H 菌种筛选*种子批的建立和检定*菌种接种*A B C原液合并 杀菌 原液收获*G F E半成品配制#分装#I扩大培养D原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序I：半成品及成品的坚半成品及成品的坚定按有关标准进行定按有关标准进行。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序I I返回返回o（1 1）符合现行的）符合现
23、行的中华人民共和国药典中华人民共和国药典、中国中国生物制品主要原辅材料质量标准生物制品主要原辅材料质量标准o（2 2）用到的化学试剂必须为化学纯以上。）用到的化学试剂必须为化学纯以上。o（3 3）对供应商要有审查）对供应商要有审查o 请问：请问：对原料药的供应商我们要审查什么？对原料药的供应商我们要审查什么？对提供直接接触药品的包装材料的供应商我们要审查对提供直接接触药品的包装材料的供应商我们要审查什么？什么？对提供包装材料印刷的供应商我们要审查什么？对提供包装材料印刷的供应商我们要审查什么？项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点（三）生产管理要点-原料及辅料原
24、料及辅料o 应严格清洗，经应严格清洗，经高压灭菌高压灭菌方可使用方可使用。o 桌式高压灭菌锅桌式高压灭菌锅 全自动蒸汽高压灭菌锅全自动蒸汽高压灭菌锅 项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点（三）生产管理要点-生产用器具生产用器具o 问题问题:o 生产及检定用的动物应符合：生产及检定用的动物应符合：级？级？答：清洁级答：清洁级问题：请回忆清洁级动物的定义和简写？问题：请回忆清洁级动物的定义和简写？项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点（三）生产管理要点生产及检定用动物生产及检定用动物o（1 1）疫苗的菌株应具有典型的形态、培养和生化
25、特）疫苗的菌株应具有典型的形态、培养和生化特性。性。o（2 2）菌株的培养和接种要在专门的设备中进行，严）菌株的培养和接种要在专门的设备中进行，严格操作和防止污染。格操作和防止污染。o（3 3）冷干菌种在开启时，应作全面鉴定。）冷干菌种在开启时，应作全面鉴定。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点（三）生产管理要点-制造疫苗的菌株制造疫苗的菌株 生产用的培养基应适合所培养细菌的生长，严禁在培养生产用的培养基应适合所培养细菌的生长，严禁在培养基中添加对人体有害的物质基中添加对人体有害的物质。项目项目8 8鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点（三
26、）生产管理要点-生产用培养基生产用培养基项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点（三）生产管理要点-生产用培养基生产用培养基o（1 1）收集的原液应作纯菌试验，合格后杀灭细菌，杀）收集的原液应作纯菌试验，合格后杀灭细菌，杀菌后通过试验检验是否有杂菌生长。菌后通过试验检验是否有杂菌生长。o试验如下：试验如下：取样接种不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基及普取样接种不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基及普通琼脂斜面各一管，至通琼脂斜面各一管，至3737培养培养5 5天，如有活菌，可加天，如有活菌，可加倍量复试一次，如有杂菌生长应废弃。倍量复试一次，如有杂菌生长应废弃。o（2 2）无菌试验
27、合格的合并原液）无菌试验合格的合并原液o 添加防腐剂为：适量苯酚或其他防腐剂添加防腐剂为：适量苯酚或其他防腐剂o 储存温度：储存温度：2-8 2-8 o 储存时间：采集之日至用于疫苗稀释不得少储存时间：采集之日至用于疫苗稀释不得少于于4 4个月。个月。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点（三）生产管理要点-原液原液返回返回o1 1、简介：、简介：o 流行性脑脊髓膜炎：分为流行性脑脊髓膜炎：分为A A、B B、C C三种流脑，三种流脑，A A群流脑为群流脑为我国主要致病菌群，我国主要致病菌群，B B、C C群流脑为欧美主要致病菌群。群流脑为欧美主要致病菌群。o
28、A A群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗主要预防：主要预防：A A群脑膜炎球群脑膜炎球菌引起的流行性脑脊髓膜炎。菌引起的流行性脑脊髓膜炎。（四）细菌疫苗举例（四）细菌疫苗举例AA群脑膜炎球菌群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗多糖灭活疫苗o2 2、历史：、历史：o 19441944年年KabatKabat开始用流脑多糖抗原进行志愿者试验。开始用流脑多糖抗原进行志愿者试验。o 19691969年年GotschlichGotschlich提取流脑提取流脑A A群多糖抗原接种人群免疫群多糖抗原接种人群免疫力可达数年。力可达数年。o 19671967年开始研究年开始研究-197-197年我国制备出符
29、合年我国制备出符合WHOWHO的的A A群群流脑多糖疫苗，一次注射反应轻微，免疫效果良好，流流脑多糖疫苗，一次注射反应轻微，免疫效果良好，流行病学效果达行病学效果达90%90%以上。以上。（四）细菌疫苗举例（四）细菌疫苗举例AA群脑膜炎球菌群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗多糖灭活疫苗流脑疫苗生产用菌株流脑疫苗生产用菌株 启开菌种、扩大培养启开菌种、扩大培养Co2罐培养罐培养18-20h转种于转种于50 000ml发酵罐，同期培养发酵罐，同期培养3-4h种入种入500 000ml发酵罐、通气培养发酵罐、通气培养6-8h培养物用甲醛或加热杀菌，上清加入培养物用甲醛或加热杀菌，上清加入Cetavlom，离心
30、去上清，收集沉淀复合物，离心去上清，收集沉淀复合物加等量加等量2mol/LCaCl2，使多糖解离，使多糖解离加加25%乙醇，提取多糖抗原原液乙醇，提取多糖抗原原液用无水乙醇及丙酮洗涤各用无水乙醇及丙酮洗涤各2次，收集沉淀多糖次，收集沉淀多糖用冷酚提取用冷酚提取2-3次，透析，再用无水乙醇及丙酮洗涤各次，透析，再用无水乙醇及丙酮洗涤各2次，进行多糖精制次，进行多糖精制加入乳糖作保护剂，冷冻干燥，使每人份含多糖抗原加入乳糖作保护剂，冷冻干燥，使每人份含多糖抗原30g、乳糖、乳糖2.5mg（四）细菌疫苗举例（四）细菌疫苗举例AA群脑膜炎球菌群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗多糖灭活疫苗（四）细菌疫苗举例（四）
31、细菌疫苗举例AA群脑膜炎球菌群脑膜炎球菌多糖灭活疫苗多糖灭活疫苗返回返回拓展知识二、病毒性疫苗拓展知识二、病毒性疫苗项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 工艺流程及环境区域划分工艺流程及环境区域划分质量控制要点质量控制要点生产管理要点生产管理要点其他疫苗举例其他疫苗举例 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*A B 筛选细胞C （灭活疫苗）（灭活疫苗）病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤#（减毒活疫苗）（减毒活疫苗）G F E半成品配制#分装#I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 00
32、0级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 （一）工艺流程及环境区域划分（一）工艺流程及环境区域划分项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 返回返回 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*A B 筛选细胞C （灭活疫苗）（灭活疫苗）病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤#（减毒活疫苗）（减毒活疫苗）G F E半成品配制#分装#I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序A：菌种与菌种鉴定用的诊菌种与菌种鉴定用的诊
33、断血清应经过国家食品药品监督断血清应经过国家食品药品监督管理局的批准，由国家的药品检管理局的批准，由国家的药品检定机构或国家指定单位分发定机构或国家指定单位分发。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序A A 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*A B 筛选细胞C （灭活疫苗）（灭活疫苗）病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤#（减毒活疫苗）（减毒活疫苗）G F E半成品配制#分装#I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安
34、全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序B：项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序B B工序工序B:B:（1 1）应建立原始种子批：记录种子的历史、来源及生）应建立原始种子批：记录种子的历史、来源及生物学特性。物学特性。（2 2）种子批制度建立：种子批制度建立：o （传代、扩增）（传代、扩增）（传代、扩增）（传代、扩增）o原始种子批原始种子批 主代种子批主代种子批 工作种子批工作种子批要求：各种子批间要保持：生物学特性一致。要求：各种子批间要保持：生物学特性一致。（3 3）种子批检定：培养特性、鉴别试验、毒力试验、免）种子批检
35、定：培养特性、鉴别试验、毒力试验、免疫力试验、病毒滴度、病毒外源因子检测、无菌试验疫力试验、病毒滴度、病毒外源因子检测、无菌试验项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序B B 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*A B 筛选细胞C （灭活疫苗）（灭活疫苗）病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤#（减毒活疫苗）（减毒活疫苗）G F E半成品配制#分装#I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100
36、级级 工序工序C：病毒鉴定、包括细胞病毒鉴定、包括细胞病变、滴度及其他特殊鉴别病变、滴度及其他特殊鉴别试验试验项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序C C 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*A B 筛选细胞C （灭活疫苗）（灭活疫苗）病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤#（减毒活疫苗）（减毒活疫苗）G F E半成品配制#分装#I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序D：
37、细胞的来源、历史细胞的来源、历史明确，细胞形态观察，细胞明确，细胞形态观察，细胞鉴定及外源因子检测。鉴定及外源因子检测。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序D D 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*A B 筛选细胞C （灭活疫苗）（灭活疫苗）病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤#（减毒活疫苗）（减毒活疫苗）G F E半成品配制#分装#I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工
38、序工序E：细胞形态观察，细胞细胞形态观察，细胞鉴定及外源因子检测。鉴定及外源因子检测。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序E E 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*A B 筛选细胞C （灭活疫苗）（灭活疫苗）病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤#（减毒活疫苗）（减毒活疫苗）G F E半成品配制#分装#I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序F：病毒纯度检查，病毒病毒纯
39、度检查，病毒滴度测定、无菌试验。滴度测定、无菌试验。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序F F 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*A B 筛选细胞C （灭活疫苗）（灭活疫苗）病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤#（减毒活疫苗）（减毒活疫苗）G F E半成品配制#分装#I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序G：病毒原液检查，包病毒原液检查，包括：病毒滴度测定、无菌试括
40、：病毒滴度测定、无菌试验。验。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序G G 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*A B 筛选细胞C （灭活疫苗）（灭活疫苗）病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤#（减毒活疫苗）（减毒活疫苗）G F E半成品配制#分装#I 扩大细胞培养D病毒原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序H：原液保存在原液保存在-20 。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备
41、 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工序工序E E 原代细胞的制备或传代细胞复苏毒种筛选*种子批的建立和检定*毒种接种*A B 筛选细胞C （灭活疫苗）（灭活疫苗）病毒原液 病毒灭活 病毒的收获过滤#（减毒活疫苗）（减毒活疫苗）G F E半成品配制#分装#I 扩大细胞培养D 病毒原液保存H包装检定*100级或局部级或局部100级级 10 000级区级区 100 000级区级区#生物安全柜生物安全柜 为局部为局部100级级 工序工序I：半成品及成品的鉴定半成品及成品的鉴定按有关标准进行按有关标准进行。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （二）质量控制要点（二）质量控制要点-工
42、序工序I I返回返回o（1 1）符合现行的）符合现行的中华人民共和国药典中华人民共和国药典、中国中国生物制品主要原辅材料质量标准生物制品主要原辅材料质量标准o（2 2）用到的化学试剂必须为化学纯以上。）用到的化学试剂必须为化学纯以上。o（3 3）对供应商要有审查）对供应商要有审查 项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点（三）生产管理要点-原料与辅料原料与辅料o 生产及检定用的生产及检定用的动物动物应符合：清洁级应符合：清洁级 小鼠、豚鼠、鸡胚等小鼠、豚鼠、鸡胚等 项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点（三）生产管理要点-生产及检定
43、用动物生产及检定用动物o细胞株：细胞株：生产用的细胞株应在一定的代次之内，据有生产用的细胞株应在一定的代次之内，据有明显的该细胞生物学特性，无污染。明显的该细胞生物学特性，无污染。o毒种：毒种：生产用的毒种经过生物学鉴定应无外源因子污染。生产用的毒种经过生物学鉴定应无外源因子污染。毒种的接种和培养应在专门的设备内进行，有些在国毒种的接种和培养应在专门的设备内进行，有些在国家认可的家认可的P2P2、P3P3o病毒储存：病毒储存：冻干病毒保存在冻干病毒保存在-20-20，液体病毒保存在，液体病毒保存在-6060以下。以下。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点（三）
44、生产管理要点-生产用细胞株和毒株生产用细胞株和毒株o 疫菌产品中的灭活剂和小牛血清含量应严格控制。疫菌产品中的灭活剂和小牛血清含量应严格控制。o 如：流感疫苗，如：流感疫苗，病毒病毒灭活剂灭活剂包括包括甲醛和一种汞甲醛和一种汞的衍生物的衍生物制成的消毒剂，而汞对儿童和胎儿的神经系统制成的消毒剂，而汞对儿童和胎儿的神经系统会造成不可逆的损害，因此会造成不可逆的损害，因此1212岁以下儿童不能使用全病岁以下儿童不能使用全病毒灭活毒灭活疫苗疫苗。项目项目7 7鸡胚流感疫苗的制备鸡胚流感疫苗的制备 （三）生产管理要点（三）生产管理要点-生产用灭火剂生产用灭火剂返回返回o主持人：主持人：田院士，刚才您谈
45、到多肽它既有治疗作用，又有预防作田院士，刚才您谈到多肽它既有治疗作用，又有预防作用。其实谈到预防作用的话，可能很多的观众非常关注用。其实谈到预防作用的话，可能很多的观众非常关注SARSSARS疫苗疫苗的研制情况。我听说现在国内一些科研人员，正在通过灭活和基的研制情况。我听说现在国内一些科研人员，正在通过灭活和基因重组两种方式研制相关的因重组两种方式研制相关的SARSSARS疫苗，并听说国内在灭活疫苗方疫苗，并听说国内在灭活疫苗方面取得了一些突破，你能不能给我们介绍一下情况。面取得了一些突破，你能不能给我们介绍一下情况。赵铠：赵铠：灭活疫苗研制，到目前为止我知道的灭活疫苗研制，到目前为止我知道的
46、这个这个SARSSARS病毒已经病毒已经能够在细胞上大量培养了，可以收获到很多病毒，这也是一个成能够在细胞上大量培养了，可以收获到很多病毒，这也是一个成绩。第二个，用一些化学药物已经证明可以把这个病毒杀死，不绩。第二个，用一些化学药物已经证明可以把这个病毒杀死，不但杀死但杀死 ，而且保留了它的抗原性，可以产生抗体，这个已经通过，而且保留了它的抗原性，可以产生抗体，这个已经通过实验证明实验证明了，比如说灭活的病毒在细胞上再培养，再给它传代，了，比如说灭活的病毒在细胞上再培养，再给它传代，没有差错没有差错 ，获得病毒。同时把灭活的病毒已经注入了猴子，猴子，获得病毒。同时把灭活的病毒已经注入了猴子，
47、猴子没有引起没有引起SARSSARS病症，病症，同时产生了抗体，所以灭活疫苗研制现在到同时产生了抗体，所以灭活疫苗研制现在到了这个阶段了这个阶段（四）细菌疫苗举例（四）细菌疫苗举例SARSSARS灭活疫苗灭活疫苗o主持人：主持人：何博士，请问你们在何博士，请问你们在SARSSARS疫苗研制的最新进展如何？疫苗研制的最新进展如何？美国艾伦美国艾伦戴蒙德艾滋病研究中心主任何大一：戴蒙德艾滋病研究中心主任何大一：4 4月中旬以来，我月中旬以来，我们在们在SARSSARS方面的工作不断取得进展，我们的主要工作就是推进疫方面的工作不断取得进展，我们的主要工作就是推进疫苗的研制，有很多同事正在努力研制若干
48、种疫苗，现在我们已经苗的研制，有很多同事正在努力研制若干种疫苗，现在我们已经合成了一种蛋白质，它可以附着在合成了一种蛋白质，它可以附着在SARSSARS病毒的外面。而且我们已病毒的外面。而且我们已经开始在动物身上做试验了，此外我们经开始在动物身上做试验了，此外我们还要研制出几种新的还要研制出几种新的SARSSARS疫苗。疫苗。o 如你所知，我们合成了短肽，如你所知，我们合成了短肽，它是一种蛋白质因子，本身它是一种蛋白质因子，本身存在于存在于SARSSARS病毒的特定部位，如果你把这种短肽置入病毒的特定部位，如果你把这种短肽置入(病毒病毒)样剂样剂中，它就会对中，它就会对SARSSARS病毒产生作用并抑制它的发展，病毒产生作用并抑制它的发展，当然目前短肽当然目前短肽还处在试验阶段，我们正在设法将它转移到某种动物身上，比如还处在试验阶段，我们正在设法将它转移到某种动物身上，比如猴子。我们知道猴子可以被猴子。我们知道猴子可以被SARSSARS病毒感染，我们将与中国医学科病毒感染，我们将与中国医学科学院合作，用短肽治疗感染学院合作，用短肽治疗感染SARSSARS病毒的猴子，当然这是下一步的病毒的猴子，当然这是下一步的工作。工作。（四）细菌疫苗举例（四）细菌疫苗举例SARSSARS基因工程疫苗基因工程疫苗
