1、二、理化性质二、理化性质一、概述一、概述三、提取与分离三、提取与分离第四章第四章 黄酮类化合物黄酮类化合物四、结构鉴定四、结构鉴定黄酮化合物是植物中分布最广的一类物质黄酮化合物是植物中分布最广的一类物质,几乎几乎每种植物中都有。每种植物中都有。据估计，经植物光合作用所固定的碳据估计，经植物光合作用所固定的碳2%转变为转变为黄酮类化合物或与其密切相关的其他化合物，大部黄酮类化合物或与其密切相关的其他化合物，大部分的鞣质也是由黄酮类化合物转变来的。分的鞣质也是由黄酮类化合物转变来的。黄酮对植物的生长黄酮对植物的生长,发育发育,开花开花,结果以及抵御结果以及抵御异物的侵袭其着重要的作用异物的侵袭其着
2、重要的作用.由于其分布广由于其分布广,部分化部分化合物在植物中较高合物在植物中较高,而且多数化合物容易以结晶形而且多数化合物容易以结晶形式获得式获得,所以他是较早被人类发现的一类天然产物所以他是较早被人类发现的一类天然产物.很早已前 黄酮主要用作染料19世纪后 开始化学和生理活性研究1974 黄酮化合物1674 苷苷元 902,苷7221978 22001980 2721 1999 64672006 9000 黄酮类化合物具有一定生理活性,虽然不及生物碱作用强,由于分布广泛,种类繁多,因此这类化合物的研究比较广泛和深入,是天然产物中的一类重要的化合物.OOHOHOOHOHOHOOHOHOHO黄
3、芩素OHOOHOHO新橙皮糖基OOHOHOHOHOHOH （一）、定义（一）、定义 黄酮类化合物黄酮类化合物(flavonoids)：是是泛指两个泛指两个苯环苯环（A-A-与与B-B-环）通过中环）通过中 央央三碳链三碳链相互联结而成的一系列化合物。相互联结而成的一系列化合物。即即 结构结构一、一、概述概述OO12345678OO12345678123456OO12345678123456色原酮2苯基色原酮C6C3C6 OO12345678OO12345678123456OO12345678123456色原酮2苯基色原酮C6C3C6一、一、概述概述OO12345678OO12345678123
4、456OO12345678123456色原酮2苯基色原酮C6C3C6OO12345678OO12345678123456OO12345678123456色原酮2苯基色原酮C6C3C6基本母核：黄酮类化合物多具有颜色，在植物体内大黄酮类化合物多具有颜色，在植物体内大 部分与糖结合成甙，一部分以游离形式存在。部分与糖结合成甙，一部分以游离形式存在。而且生理活性多种多样，引起了国内外的广而且生理活性多种多样，引起了国内外的广重视，研究进展很快。重视，研究进展很快。如如 芦丁：降低血管通透性芦丁：降低血管通透性 银杏叶提取物：降低血胆固醇银杏叶提取物：降低血胆固醇一、一、概述概述 （二）分类（二）分类
5、 分类依据：分类依据：a：中央三碳链的氧化程度、中央三碳链的氧化程度、b：B-环联接位置（环联接位置（2-或或3-位）位）c：三碳链是否构成环状：三碳链是否构成环状 可将重要的天然黄酮类化合物分类如下所示。可将重要的天然黄酮类化合物分类如下所示。一、一、概述概述 （二）分类（二）分类1.黄酮及黄酮醇黄酮及黄酮醇 三碳链部分结构三碳链部分结构 黄酮类黄酮类 (flavones)黄酮醇黄酮醇(flavonol)OOOHOO一、一、概述概述 （二）分类（二）分类1.黄酮及黄酮醇黄酮及黄酮醇 一、一、概述概述OrhaOglcHOOHOHOHOOOHHOOHOHOHOQ Qu ue er rc ce e
6、t ti in nR Ru ut ti in n芦芦丁丁槲槲皮皮素素OrhaOglcHOOHOHOHOOOHHOOHOHOHOQ Qu ue er rc ce et ti in nR Ru ut ti in n芦芦丁丁槲槲皮皮素素OOHOHOHO黄芩素黄芩素 （二）分类（二）分类2.二氢黄酮及二氢黄酮醇二氢黄酮及二氢黄酮醇二氢黄酮类二氢黄酮类二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类花色素类花色素类 (anthocyanidins)OOOOO H一、一、概述概述 （二）分类（二）分类2.二氢黄酮及二氢黄酮醇二氢黄酮及二氢黄酮醇一、一、概述概述OCH3OHCH3OHOOH杜鹃素OOHOHOOHOHOH二氢槲皮素
7、异黄酮类异黄酮类 二氢异黄酮类二氢异黄酮类 OOOO一、一、概述概述（二）分类（二）分类3.异黄酮及二氢异黄酮异黄酮及二氢异黄酮 一、一、概述概述（二）分类（二）分类3.异黄酮及二氢异黄酮异黄酮及二氢异黄酮OOHOOH大豆素大豆素 查耳酮类查耳酮类 二氢查耳酮类二氢查耳酮类 一、一、概述概述（二）分类（二）分类4.查耳酮及二氢查耳酮类查耳酮及二氢查耳酮类 OOHOHO 一、一、概述概述（二）分类（二）分类4.查耳酮及二氢查耳酮类查耳酮及二氢查耳酮类 OHOOHOHO新橙皮糖基柑橘苷二氢查耳酮柑橘苷二氢查耳酮2-羟基查耳酮羟基查耳酮一、一、概述概述（二）分类（二）分类4.查耳酮及二氢查耳酮类查耳
8、酮及二氢查耳酮类OHO126126H+OH-OO二氢黄酮二氢黄酮一、一、概述概述OOOHOHOglcOHOHOOHOHOglcOHOOOHOOglcOH新红花苷（无色）新红花苷（无色）初期初期 淡黄色淡黄色红花苷（黄色）红花苷（黄色）中期中期 深黄色深黄色醌式红花苷（红色）醌式红花苷（红色）后期后期 红色红色（二）分类（二）分类 5.橙酮类（噢橙酮类（噢 类）类）OOCH一、一、概述概述OOHOHOOH硫磺菊素 （二）分类（二）分类6.花色素类花色素类 及黄烷醇类及黄烷醇类 花色素类花色素类 黄烷黄烷-3-醇类醇类 黄烷黄烷-3,4-二醇二醇类类 一、一、概述概述OOH+OOHOHOOH （二
9、）分类（二）分类6.花色素类花色素类 及黄烷醇类及黄烷醇类 一、一、概述概述O+OHOHOHOHOHOOHOHOHOHOHOH矢车菊素无色矢车菊素 （二）分类（二）分类7.鱼藤酮类鱼藤酮类 一、一、概述概述OOO146811OOO6a12a123456897101112OOOOHOOOOHOCH3OOOOOO Amorphigenolb 12-a-羟醛鱼滕酮羟醛鱼滕酮(12a-hydroxyretenoids)2-hydroxypachyrrhigoneC 脱氢鱼滕酮脱氢鱼滕酮(dehydroretenoids)a 鱼滕酮鱼滕酮(retenoids)OOOOOO dehydrolineoneO
10、OO146811OOO （二）分类（二）分类8.紫檀素类紫檀素类 一、一、概述概述OO146811OOOHOOOHOHMeO a.6a-羟基紫檀素羟基紫檀素(6a-hydroxypetercarpans)b.紫檀烯紫檀烯(petercarpenes)OO146811 （二）分类（二）分类9.双苯吡酮类双苯吡酮类(酮类酮类)一、一、概述概述OOOOHOHOHOHOOHOHOHOHO异芒果素 （二）分类（二）分类9.双苯吡酮类双苯吡酮类(酮类酮类)一、一、概述概述OOOH OOCOOHO （二）分类（二）分类9.高异黄酮类高异黄酮类 一、一、概述概述OO13589（二）分类（二）分类10.其他类其
11、他类 少数黄酮类化合物结构较为复杂，如水飞蓟素少数黄酮类化合物结构较为复杂，如水飞蓟素(silybin)(silybin)为黄酮木脂体类化合物。为黄酮木脂体类化合物。水飞蓟素OOOHOOOHOCH3CH2OHOHHO一、一、概述概述 而榕碱而榕碱(ficine)(ficine)及异榕碱及异榕碱(isoficine)(isoficine)则为生物则为生物碱型黄酮。碱型黄酮。HHNCH3NCH3R2R1异榕碱榕碱 OOOHR1HOR2一、一、概述概述一、一、概述概述OOR1OOHOR2OR3OOHOOHOR4OHOOOHOOHOHHHOAcHHHOCH2OOOHOOHOMeOCOOHOHOHOHO
12、HOOOHOOHOHHHOAcHHHOCH2OOOHOOHOMeOCOOHOHOHOHOOOHHOOHOHO-ara-(2-1)-rhmOHOCH2OHOHOHOOHOOHHOOOHHOCH2OHOH其他分类方法；其他分类方法；平面型分子：黄酮、黄酮醇、查耳酮、花色素类平面型分子：黄酮、黄酮醇、查耳酮、花色素类 非平面型分子：二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮非平面型分子：二氢黄酮、二氢黄酮醇、异黄酮一、一、概述概述二、理化性质二、理化性质一、概述一、概述三、提取与分离三、提取与分离第四章第四章 黄酮类化合物黄酮类化合物四、结构鉴定四、结构鉴定 1、性状性状 黄酮类化合物多为结晶性固体，少数（如黄酮
13、甙类）黄酮类化合物多为结晶性固体，少数（如黄酮甙类）为无定形粉末。为无定形粉末。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质2、颜色颜色 黄酮的色原酮部分无色，在黄酮的色原酮部分无色，在2-2-位上引入苯位上引入苯环后，即形成交叉共轭体系，使共轭链延长，环后，即形成交叉共轭体系，使共轭链延长，因而呈现出颜色。因而呈现出颜色。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质OO-OO-+OO-+2、颜色颜色 黄酮、黄酮醇及其甙类：多显灰黄黄酮、黄酮醇及其甙类：多显灰黄黄色，黄色，查耳酮：黄查耳酮：黄橙黄色，橙黄色，异黄酮：显微黄色，异黄酮：显微黄色，二氢黄酮、二氢黄酮醇：不显色。二氢
14、黄酮、二氢黄酮醇：不显色。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质 2、颜色颜色 在上述黄酮、黄酮醇分子中，尤其在在上述黄酮、黄酮醇分子中，尤其在7-7-位及位及4-4-位引入位引入OHOH及及OCHOCH3 3等供电基后，化合物的颜等供电基后，化合物的颜色加深，但在其它位置引入色加深，但在其它位置引入OHOH、OCHOCH3 3等供电基等供电基影响较小。影响较小。花色甙及其甙元的颜色随花色甙及其甙元的颜色随pH不同而改变，一般不同而改变，一般显红色显红色(pH 7)、紫色、紫色(pH8.5)、蓝色、蓝色(pH 8.5)等颜色。等颜色。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理
15、化性质 3、旋光性旋光性 甙元中，二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄甙元中，二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷及黄烷醇具有手性碳，具旋光性，烷醇具有手性碳，具旋光性，其余黄酮类无旋其余黄酮类无旋光性。光性。甙类结构中含糖的部分结构，故均有旋光性，甙类结构中含糖的部分结构，故均有旋光性，且多为左旋。且多为左旋。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质 二氢黄酮类二氢黄酮类二氢黄酮醇类二氢黄酮醇类 (flavanones)(flavanones)(flavanonols)(flavanonols)黄烷黄烷-3,4-3,4-二醇类二醇类 (flavan-3,4-diols)(flavan-3,4-d
16、iols)OOOOOHOOHOH二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质 黄烷黄烷-3-3-醇类醇类 (flavan-3-ols)(flavan-3-ols)OOHOOOHO芸香糖OHHO芦丁D(+)葡萄糖（)（)OOHHHHOHOHOHHOOHH二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质4、溶解度溶解度 一般来说，一般来说，游离甙元：游离甙元：难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、醋酸乙 酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。非平面型亲水性酯、乙醚等有机溶剂及稀碱液中。非平面型亲水性大于平面型分子。大于平面型分子。花色甙元（花青素）类：花色甙
17、元（花青素）类：以离子形式存在，水溶度较大。黄酮类甙元分子以离子形式存在，水溶度较大。黄酮类甙元分子中羟基数越多，水中的溶解度越大。中羟基数越多，水中的溶解度越大。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质 4、溶解度溶解度黄酮甙类：黄酮甙类：水溶性比相应甙元为大；糖链越长，则水溶水溶性比相应甙元为大；糖链越长，则水溶度越大，一般易溶于热水、甲醇、乙醇等强极性溶度越大，一般易溶于热水、甲醇、乙醇等强极性溶剂中，但难溶或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。剂中，但难溶或不溶于苯、氯仿等有机溶剂中。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质 5、酸碱性酸碱性酸性酸性 黄酮类化合物因分子
18、中多含有黄酮类化合物因分子中多含有游离酚羟基游离酚羟基，故显故显酸性，可溶于碱性溶液中。酸性强弱顺序依次为：酸性，可溶于碱性溶液中。酸性强弱顺序依次为：7 7，4-4-二二OH OH 7-7-或或4-OH4-OH 一般酚一般酚OH OH 5-OH 5-OH。此性质。此性质可用于提取、分离及鉴定工作可用于提取、分离及鉴定工作。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质 5、酸碱性酸碱性碱性碱性 黄酮类化合物分子中黄酮类化合物分子中-吡喃酮环上的吡喃酮环上的1-1-位氧原子，位氧原子，因有未共用的电子对，故表现微弱的碱性，可与强无因有未共用的电子对，故表现微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫
19、酸、盐酸等生成（机酸，如浓硫酸、盐酸等生成（金羊）盐金羊）盐，但生成的，但生成的（金羊）（金羊）盐不稳定，加水可分解。盐不稳定，加水可分解。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质 6、显色反应显色反应1）盐酸盐酸-镁粉（或锌粉）反应：镁粉（或锌粉）反应：二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质OOHCl-MgOOH+红色 6、显色反应显色反应1）盐酸盐酸-镁粉（或锌粉）反应：镁粉（或锌粉）反应：多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红酮醇类化合物显橙红紫红色，少数显紫紫红色，少数显紫蓝蓝色。色。查耳酮、橙酮、儿茶素类不显色
20、。异黄查耳酮、橙酮、儿茶素类不显色。异黄酮类一般不显色。酮类一般不显色。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质 6、显色反应显色反应2）四氢硼钠（钾）反应：四氢硼钠（钾）反应：NaBHNaBH4 4是对是对二氢黄酮类化合物二氢黄酮类化合物专属性较专属性较高的一种还原剂。与二氢黄酮类化合物产高的一种还原剂。与二氢黄酮类化合物产生红生红 紫色。其它黄酮类化合物均不显色。紫色。其它黄酮类化合物均不显色。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质 6、显色反应显色反应3）铝盐：铝盐：生 成 的 络 合 物 多 为 黄 色生 成 的 络 合 物 多 为 黄 色（max=415nm
21、），并有荧光），并有荧光，可用于定性可用于定性及定量分析。常用试剂为及定量分析。常用试剂为1%1%三氯化铝或硝三氯化铝或硝酸铝溶液。酸铝溶液。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质 6、显色反应显色反应4）锆盐：锆盐：多用多用2%2%二氯氧化锆（二氯氧化锆（ZrOClZrOCl2 2）甲醇溶液。黄酮类）甲醇溶液。黄酮类化合物分子中有化合物分子中有游离的游离的3-3-或或5-OH5-OH存在时，均可反应生存在时，均可反应生成黄色的锆络合物。成黄色的锆络合物。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质OOOOHOHOHHOZrOH2OCl 6、显色反应显色反应4）锆盐：锆盐
22、：3-OH，4-酮基络合物的稳定性酮基络合物的稳定性 5-OH，4-酮基络合物（仅二氢黄酮醇除外酮基络合物（仅二氢黄酮醇除外）。）。当反应当反应液中接着加入枸橼酸后，液中接着加入枸橼酸后，5-5-羟基黄酮的黄色溶羟基黄酮的黄色溶液显著褪色，而液显著褪色，而3-3-羟基黄酮溶液仍呈鲜黄色羟基黄酮溶液仍呈鲜黄色（锆（锆枸橼酸反应）。枸橼酸反应）。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质 6、显色反应显色反应5）镁盐：镁盐：二氢黄酮、二氢黄酮醇类与醋酸镁的甲醇二氢黄酮、二氢黄酮醇类与醋酸镁的甲醇溶液，加热可显天蓝色荧光，若具有溶液，加热可显天蓝色荧光，若具有C5-OHC5-OH，色泽更为
23、明显。色泽更为明显。而黄酮、黄酮醇及异黄酮类等而黄酮、黄酮醇及异黄酮类等则显黄则显黄橙黄橙黄褐色。褐色。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质 6、显色反应显色反应6）硼酸显色反应硼酸显色反应：在无机酸或有机酸存在条件下，在无机酸或有机酸存在条件下，5-5-羟基黄羟基黄酮及酮及2-2-羟基查耳酮羟基查耳酮可与硼酸反应，呈亮黄色可与硼酸反应，呈亮黄色并带黄绿色荧光。并带黄绿色荧光。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质OOH 6、显色反应显色反应7）氯化锶（氯化锶（SrCl2）：）：在氨性甲醇溶液中，可与分子中具有在氨性甲醇溶液中，可与分子中具有邻二邻二酚羟基酚羟基结
24、构的黄酮类化合物生成绿色结构的黄酮类化合物生成绿色 棕色乃至棕色乃至黑色沉淀。黑色沉淀。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质 6、显色反应显色反应8）碱性试剂显色反应：碱性试剂显色反应：在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察在日光及紫外光下，通过纸斑反应，观察样品用氨蒸气和其他碱性试剂处理后的色变深样品用氨蒸气和其他碱性试剂处理后的色变深的情况。的情况。当分子中有邻二酚羟基取代或当分子中有邻二酚羟基取代或3,4-二二羟基取代时，在碱液中很快氧化，最后生成绿羟基取代时，在碱液中很快氧化，最后生成绿棕色沉淀。棕色沉淀。二、二、黄酮类化合物的理化性质黄酮类化合物的理化性质 说明各化合物
25、的结构类型说明各化合物的结构类型C COOHOHOOHHOOHD DOOOOHOCH3OOHHOOHOHB BOOHOHOOHHOOglcrhaA AOHOOOHHOHOOHOH练习练习 说明各化合物的结构类型说明各化合物的结构类型C COOHOHOOHHOOHD DOOOOHOCH3OOHHOOHOHB BOOHOHOOHHOOglcrhaA AOHOOOHHOHOOHOH练习练习C COOHOHOOHHOOHD DOOOOHOCH3OOHHOOHOHB BOOHOHOOHHOOglcrhaA AOHOOOHHOHOOHOH练习1.黄酮类化合物结构中有一个带_性的氧原子，能与_形成yang盐
26、。2.黄酮类化合物就整个分子而言，由于具有多个_基，故呈_ _性，能溶于_性水液中。其酸性强弱顺序依次为_。3.黄酮类化合物的基本骨架为_，其主要结构类型是依据_、_ _及_某特点而分类。选择题1.某中药的甲醇提取液，HCl-Mg粉反应时，溶液显酱红色，而加HCl后升起的泡沫呈红色，则该提取液中可能含有：A.异黄酮 B.查耳酮 C.橙酮 D.黄酮醇2.四氢硼钠是一种专属性较高的还原剂，只作用于：A.黄酮 B.二氢黄酮（醇）C.异黄酮 D.查耳酮3.与醋酸镁显天蓝色荧光的化合物为：A.二氢黄酮 B.黄酮 C.黄酮醇 D.异黄酮4.某化合物有：四氢硼钠反应呈紫红色；氯化锶反应阳性；锆-枸椽酸反应黄
27、色褪去等性质，则该化合物应为：(1)(2)(3)(4)HOOHOOOHOHHOOHOOOHOHOHHOOHOHOHOOHOOHOOOH判断正误1.能与盐酸-镁粉产生橙红色反应的化合物一定 是黄酮类化合物。2.与锆-枸椽酸反应产生阳性结果的化合物是 5-羟基黄酮。3.黄酮类化合物在7，4位连有-OH后，酸性增强。4.黄酮类化合物多为有色物质，因其色原酮部分 具有颜色。5.与FeCl3显色的反应为黄酮类化合物的专属反应。6.黄酮类化合物5-OH较一般酚-OH酸性弱。二、理化性质二、理化性质一、概述一、概述三、提取与分离三、提取与分离第四章第四章 黄酮类化合物黄酮类化合物（一）提取（一）提取黄酮甙类
28、以及极性稍大的甙元黄酮甙类以及极性稍大的甙元：一般可用丙酮、醋酸：一般可用丙酮、醋酸 乙酯、乙醇提取。乙酯、乙醇提取。一些多糖甙类可用沸水提取一些多糖甙类可用沸水提取。花青素类化合物：花青素类化合物：在提取时，可加入少量酸（在提取时，可加入少量酸（0.1%0.1%盐盐 酸，应当慎用，避免发生水解）。酸，应当慎用，避免发生水解）。大多数黄酮甙元：大多数黄酮甙元：宜用氯仿、乙醚、醋酸乙酯等中极宜用氯仿、乙醚、醋酸乙酯等中极性溶剂提取，性溶剂提取，而对多甲氧基黄酮类游离甙元，甚至可而对多甲氧基黄酮类游离甙元，甚至可用苯等低极性溶剂进行提取。用苯等低极性溶剂进行提取。三、三、黄酮类化合物的提取与分离黄
29、酮类化合物的提取与分离 1.溶剂萃取法溶剂萃取法 利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选利用黄酮类化合物与混入的杂质极性不同，选用不同溶剂进行萃取可达到精制纯化目的。用不同溶剂进行萃取可达到精制纯化目的。例如植物叶子的醇浸液，可用石油醚处理，以便除例如植物叶子的醇浸液，可用石油醚处理，以便除去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素。去叶绿素、胡萝卜素等脂溶性色素。而某些药料水溶液则可加入多倍量浓醇，以沉淀除而某些药料水溶液则可加入多倍量浓醇，以沉淀除去蛋白质、多糖类等水溶性杂质。去蛋白质、多糖类等水溶性杂质。三、三、黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离 1.溶剂萃取法溶剂萃取法 三、三、黄
30、酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离乙醇浸膏乙醇浸膏乙醚萃取液乙醚萃取液水液水液萃取液萃取液溶于水，乙醚萃取乙酸乙酯或正丁醇萃取黄酮苷元黄酮苷 2.碱提取酸沉淀法碱提取酸沉淀法 黄酮类大多具有酚羟基，有弱酸性，易溶于碱性水，黄酮类大多具有酚羟基，有弱酸性，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，再于碱水提取液中加入酸，故可用碱性水提取，再于碱水提取液中加入酸，黄酮黄酮甙元及水溶性较小的黄酮甙甙元及水溶性较小的黄酮甙类即可沉淀析出。此法简类即可沉淀析出。此法简便易行，如芦丁、橙皮甙、黄芩甙的提取都应用了这便易行，如芦丁、橙皮甙、黄芩甙的提取都应用了这个方法。个方法。三、三、黄酮类化合物的提取与
31、分离黄酮类化合物的提取与分离槐米滤液药渣芦丁6倍H2O，煮沸，石灰乳调pH8，煮沸20-30分钟，趁热过滤沉淀4倍H2O，煮沸20-30分钟，趁热过滤滤液60-70度，盐酸调pH5-6，静置，抽滤重结晶 三、三、黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离 在用碱酸法进行提取纯化时，在用碱酸法进行提取纯化时，应当注意所用碱液应当注意所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性下，尤其加热进破坏黄浓度不宜过高，以免在强碱性下，尤其加热进破坏黄酮母核。在加酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成酮母核。在加酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成（金羊）盐，（金羊）盐，致使析出的黄酮类化合物又重新溶解，致使析出的黄
32、酮类化合物又重新溶解，降低产品收率。降低产品收率。当药料中含有大量果胶、粘液等不溶性杂质时，如当药料中含有大量果胶、粘液等不溶性杂质时，如花、果类药材，宜用花、果类药材，宜用石灰乳或石灰水石灰乳或石灰水代替其它碱性代替其它碱性水溶液进行提取，以使上述含羟基的杂质生成钙盐沉水溶液进行提取，以使上述含羟基的杂质生成钙盐沉淀，不致溶出。这也有利于黄酮类化合物的纯化处理。淀，不致溶出。这也有利于黄酮类化合物的纯化处理。三、三、黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离3.大孔吸附树脂法大孔吸附树脂法 植物的水或稀醇提取液加入到大孔吸附树脂柱植物的水或稀醇提取液加入到大孔吸附树脂柱上，先用水洗去杂
33、质，再用不同浓度的乙醇依次洗脱，上，先用水洗去杂质，再用不同浓度的乙醇依次洗脱，用用HCl-Mg粉反应检测，即可得到较纯的黄酮类成分，粉反应检测，即可得到较纯的黄酮类成分，最后用浓醇洗柱至完全。最后用浓醇洗柱至完全。三、三、黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离 （二）、分离二）、分离 1.柱层析法柱层析法 分离黄酮类化合物常用的吸附剂或载体有分离黄酮类化合物常用的吸附剂或载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉硅胶、聚酰胺及纤维素粉等。等。此外，也有用此外，也有用氧化铝、氧化镁氧化铝、氧化镁及硅藻土及硅藻土等。等。三、三、黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离 （1）.硅胶柱层析硅胶
34、柱层析：此法应用范围最广，此法应用范围最广，主要适于分离异黄酮、主要适于分离异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（或乙酰化）二氢黄酮、二氢黄酮醇及高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类的黄酮及黄酮醇类。少数情况下，在加水去活化少数情况下，在加水去活化后也可用于分离极性较大的化合物，如多羟基黄后也可用于分离极性较大的化合物，如多羟基黄酮醇及其甙类等。酮醇及其甙类等。常用洗脱系统常用洗脱系统:苷元苷元:氯仿氯仿-甲醇甲醇 苷苷:氯仿氯仿-甲醇甲醇-水水 乙酸乙酯乙酸乙酯-丙酮丙酮-水水 三、三、黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离（2）.聚酰胺柱层析：聚酰胺柱层析：对分离黄酮类化合
35、物来说，聚酰胺是较为对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺是较为 理想的吸附剂。可用于分离各种类型的黄酮类化理想的吸附剂。可用于分离各种类型的黄酮类化合物，包括甙及甙元、查耳酮与二氢黄酮等合物，包括甙及甙元、查耳酮与二氢黄酮等 三、三、黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离聚酰胺分离黄酮类化合物的原理：聚酰胺分离黄酮类化合物的原理：三、三、黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离CH2COHOCH2NCH2CCH2H2CCH2H2CN HHOOOHHOOH2CCNCH2H2CCH2H2CCH2CNH2C固 定 相 移动相聚酰胺分子中酰聚酰胺分子中酰胺基与黄酮类化胺基与黄酮类化合物分子
36、中羟基合物分子中羟基形成氢键缔合而形成氢键缔合而产生吸附作用。产生吸附作用。吸附力越大，越吸附力越大，越难洗脱。难洗脱。其吸附强度主要取决于以下几个方面：其吸附强度主要取决于以下几个方面：a：与黄酮类化合物分子中：与黄酮类化合物分子中酚羟基的数目酚羟基的数目有关，有关，酚羟基的数目越多，吸附力越强。酚羟基的数目越多，吸附力越强。三、三、黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离OOOHOHOHOHOHOOOHOHOHOH其吸附强度主要取决于以下几个方面：其吸附强度主要取决于以下几个方面：b：与酚羟基的位置有关，酚羟基所处的位置易形：与酚羟基的位置有关，酚羟基所处的位置易形 成分子内氢键，
37、则吸附力减弱。成分子内氢键，则吸附力减弱。三、三、黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离OOOHOHOOOHOCH3OH其吸附强度主要取决于以下几个方面：其吸附强度主要取决于以下几个方面：c：分子中芳香化程度越高、共轭双键多者则吸附：分子中芳香化程度越高、共轭双键多者则吸附 力强。力强。三、三、黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离OHOOHOCH3OHOHOOOHOCH3OHOH其吸附强度主要取决于以下几个方面：其吸附强度主要取决于以下几个方面：d：不同类型黄酮化合物，吸附强弱顺序为：不同类型黄酮化合物，吸附强弱顺序为：异黄酮异黄酮二氢黄酮醇二氢黄酮醇黄酮黄酮黄酮醇黄酮醇
38、 先后流出顺序一般是：先后流出顺序一般是：异黄酮异黄酮 二氢黄酮醇二氢黄酮醇 黄酮黄酮 黄酮醇黄酮醇 三、三、黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离OOOHOHOHOHOOOHOHOHOHOOOHOHOHOHOHOOOHOHOHOH其吸附强度主要取决于以下几个方面：其吸附强度主要取决于以下几个方面：e：甙元相同，吸附强弱顺序为：甙元相同，吸附强弱顺序为：叁糖甙叁糖甙双糖甙双糖甙单糖甙单糖甙甙元甙元 洗脱先后顺序一般是：洗脱先后顺序一般是：叁糖甙叁糖甙 双糖甙双糖甙 单糖甙单糖甙 甙元甙元 三、三、黄酮类化合物的提取与分离黄酮类化合物的提取与分离其吸附强度主要取决于以下几个方面：其吸附
39、强度主要取决于以下几个方面：f：与溶剂介质有关，溶剂与聚酰胺或黄酮类化合与溶剂介质有关，溶剂与聚酰胺或黄酮类化合 物形成氢键的能力越强物形成氢键的能力越强,则其洗脱能力越强则其洗脱能力越强.溶剂洗脱能力顺序：溶剂洗脱能力顺序：水水甲醇甲醇(乙醇乙醇)丙酮丙酮氢氧化钠水溶液氢氧化钠水溶液甲酰胺甲酰胺二二甲基酰胺甲基酰胺双糖苷双糖苷三糖苷三糖苷 （一）、层析法在黄酮类鉴定中的作用（一）、层析法在黄酮类鉴定中的作用1.1.纸层析纸层析(PPC)(PPC)第二相展开用水性溶剂，第二相展开用水性溶剂，苷元相同时，苷元相同时，Rf值与上相反，依次为：值与上相反，依次为：三糖苷三糖苷双糖苷双糖苷苷元苷元不同
40、结构类型的苷元，平面型分子不同结构类型的苷元，平面型分子Rf值小值小于非平面型分子。于非平面型分子。（一）、层析法在黄酮类鉴定中的作用（一）、层析法在黄酮类鉴定中的作用 2.2.薄层层析薄层层析(TLC)(TLC)）硅胶薄层）硅胶薄层 用于弱极性黄酮较好。用于弱极性黄酮较好。常用展开剂常用展开剂:甲苯甲苯:甲酸甲酯甲酸甲酯:甲酸（甲酸（5:4:1）；）；苯苯:甲醇（甲醇（95:5）苯苯:甲醇甲醇:冰醋酸（冰醋酸（35:5:5）等。）等。化合物极性越大化合物极性越大,Rf值越小值越小.（一）、层析法在黄酮类鉴定中的作用（一）、层析法在黄酮类鉴定中的作用 2.2.薄层层析薄层层析(TLC)(TLC
41、)）聚酰胺层析）聚酰胺层析 适用范围广，可分离含游离酚羟基或其苷类。适用范围广，可分离含游离酚羟基或其苷类。常用展开系统：常用展开系统：乙醇：水（乙醇：水（3：2）；）；丙酮：水（丙酮：水（1：1）等。）等。(二二)、紫外光谱在黄酮类鉴定中的应用、紫外光谱在黄酮类鉴定中的应用可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否含有可用于确定黄酮母核类型及确定某些位置是否含有羟基。羟基。一般程序：一般程序：测定样品在甲醇中的测定样品在甲醇中的UVUV谱以了解母核类型；谱以了解母核类型；在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测在甲醇溶液中分别加入各种诊断试剂后测UVUV谱和谱和可见光谱以了解可见光谱以了解3,5,
42、7,3,43,5,7,3,4有无羟基及邻二酚有无羟基及邻二酚羟基；羟基；苷类可水解后（或先甲基化再水解），再用上法苷类可水解后（或先甲基化再水解），再用上法测苷元的测苷元的UVUV谱以了解糖的连接位置谱以了解糖的连接位置。1、黄酮类化合物在甲醇中的、黄酮类化合物在甲醇中的UV谱特征谱特征溶剂：溶剂：MeOH+_ _OO_ _+OO带:200-280nm带:200-280nm带I:300-400nm带I:300-400nm四、黄酮类化合物的波谱四、黄酮类化合物的波谱 不同黄酮类化合物带不同黄酮类化合物带和带和带的峰位、峰形的峰位、峰形和吸收强度不同。借此可以判断黄酮的类型。和吸收强度不同。借此可
43、以判断黄酮的类型。四、黄酮类化合物的波谱四、黄酮类化合物的波谱黄酮类型带带(maxCH3OH,nm)黄酮类304350黄酮醇类（3-OH游离者）352385黄酮醇类（3-OH被取代者）328357如木犀草素与槲皮素:P67 在黄酮或黄酮醇母核上有羟基、甲氧基等供电子基取代时，可引起吸收带红移。B环氧取代，使带红移，对带影响较小。A环氧取代，使带红移，对带影响较小。黄酮或黄酮醇母核的羟基甲基化或苷化时，将引起相应吸收带紫移。如：芹菜素，合金欢素P68四、黄酮类化合物的波谱四、黄酮类化合物的波谱加入试剂加入试剂 带带II 带带I 说明说明 MeOH 240-285 300-400 两峰强度基本相同
44、，具体位置与两峰强度基本相同，具体位置与母核上电负性取代基母核上电负性取代基(-OH,-OCH3)有关，有关，-OH,-OCH3越多，越多，越长移越长移 NaOMe A环有环有-OH，红移小，红移小，无意义无意义 40-60nm（不变或不变或增强）增强）50-60nm（下降）下降）有有4-OH，无，无3-OH 有有3-OH，无，无4-OH 有有3,4-OH或或3,3,4-OH（衰减更快）（衰减更快）带带I，II随加随加NaOMe时间延长，逐渐衰减时间延长，逐渐衰减 2、加入诊断试剂后引起紫外吸收峰的位移及意义、加入诊断试剂后引起紫外吸收峰的位移及意义加入试剂加入试剂 带带II 带带I 说明说明
45、 NaOAc(未熔融未熔融)5-20 7-OH 在长波一在长波一侧有明显侧有明显肩峰肩峰有有4-OH，但无但无3-OH，7-OH有有4-OH N a O A c(熔融）熔融）红 移红 移 4 0-65nm,强强度下降度下降 N a O A c/H3BO3B环有邻二酚羟基环有邻二酚羟基A环有邻二酚羟基环有邻二酚羟基 5-10 12-30加入试剂加入试剂 带带II 带带I 说明说明 AlCl3光谱光谱-AlCl3/HCl光谱光谱AlCl3/HCl光谱光谱=AlCl3光谱光谱结构中无邻二酚羟基结构中无邻二酚羟基结构中可能有邻二酚羟基结构中可能有邻二酚羟基B环有邻二酚羟基环有邻二酚羟基AlCl3/HC
46、l光谱光谱 AlCl3光谱光谱 紫移紫移 30-40 紫移紫移 50-65A,B环皆可能有邻二酚羟基环皆可能有邻二酚羟基加入试剂加入试剂 带带II 带带I 说明说明 AlCl3光谱光谱-AlCl3/HCl光谱光谱AlCl3/HCl光谱光谱=MeOH光谱光谱无无3-OH及或及或5-OH可能有可能有3-OH及或及或5-OH只有只有5-OH有有5-OH同时，有同时，有6氧取代氧取代只有只有3-OHAlCl3/HCl光谱光谱MeOH光谱光谱 35-55 17-20 60 50-60示同时有示同时有3-OH，5-OH 一化合物的结构可能为下列三种结构之一，在UV光谱中，加入NaOAc时，带II出现520nm红移，加入AlCl3的光谱与AlCl3/HCl的光谱相同，则该化合物的结构可能为：OOOHHOOHOHOOHOOHOHOHOOOHHOOHOHOOOHHOOHOHOOHOOHOHOHOOOHHOOHOHCBAOOOHHOOHOOOHHOOHOH和ABOOOHHOOOOHHOOH和AB用UV法鉴别下列化合物：（1）（2）槲皮素-7-O-鼠李糖甙和槲皮素-3-O-鼠李糖甙 （3）
