1、biopharmaceutics or biopharmaceuticalsbiochemical drugsbiotechnology drugsbiological products药药物物化化学学药药物物生生物物药药物物中中药药生生化化药药物物生生物物技技术术药药物物生生物物制制品品动动物物植植物物微微生生物物提提取取现现代代生生物物技技术术生生命命基基本本物物质质及及衍衍生生物物降降解解物物大大分分子子的的结结构构修修饰饰物物生生物物-化化学学半半合合成成2.2.基因工程药物基因工程药物：以以DNADNA重组技术生产的蛋白质、多肽、重组技术生产的蛋白质、多肽、酶、激素、疫苗、单克隆抗体
2、和细胞生长酶、激素、疫苗、单克隆抗体和细胞生长因子类药物。因子类药物。二、种类二、种类氨基酸、多肽与蛋白质类氨基酸、多肽与蛋白质类酶类与辅酶类酶类与辅酶类多糖类多糖类脂质类脂质类核酸及其降解物和衍生物核酸及其降解物和衍生物类药物类药物1 1生化药物生化药物 6.6.安全性检查安全性检查 7.7.效价（含量）测定：效价（含量）测定：理化法理化法：有效成分的含量：有效成分的含量 效价测定和酶活力测定：效价测定和酶活力测定：有效成分有效成分 的生物活性的生物活性第二节第二节 质量检验的基本程序与方法质量检验的基本程序与方法（一）理化鉴别法一）理化鉴别法 1.1.化学鉴别法化学鉴别法：例：溶菌酶例：溶
3、菌酶 -CONH-+Cu-CONH-+Cu2+2+络合显色络合显色药药物物 +试试剂剂现现象象颜颜色色沉沉淀淀牛牛 纤纤 维维 蛋蛋 白白 原原牛牛 凝凝 血血 酶酶蛋蛋 白白 结结 块块尿尿 激激 酶酶牛牛 纤纤 维维 蛋蛋 白白 溶溶 酶酶 原原结结 块块 溶溶 解解：气气 泡泡 上上 升升5.5.电泳法电泳法：以肝素鉴别为例。以肝素鉴别为例。OOOOOOHCOO-OSO3-HNSO3-CH2OSO3-与国家肝素标准品对照，其移动位置相应。与国家肝素标准品对照，其移动位置相应。（二）杂质检查二）杂质检查 一般杂质检查一般杂质检查 特殊杂质检查：原料药纯度分析特殊杂质检查：原料药纯度分析 生
4、产过程中杂质的检查生产过程中杂质的检查 1.1.原料药纯度分析原料药纯度分析：多糖类多糖类-低聚糖、核酸、蛋白质低聚糖、核酸、蛋白质 酶类药物酶类药物-酶催化反应基本产物的分析，酶催化反应基本产物的分析，具有一定活性的其他有关酶的检查。具有一定活性的其他有关酶的检查。无菌试验：活菌无菌试验：活菌 基因工程药物中可能杂质与污染物检查基因工程药物中可能杂质与污染物检查 来源于宿主细胞的残留来源于宿主细胞的残留DNADNA，外源性杂质，外源性杂质 致突变试验致突变试验 生殖毒性试验生殖毒性试验第三节第三节 常用定量分析方法及其应用常用定量分析方法及其应用 2.2.HPLCHPLC法法 1 1）RP-
5、HPLCRP-HPLC：柱前衍生化自动测定氨基酸：柱前衍生化自动测定氨基酸 柱：柱：RPRP1818，柱温：柱温：48 48 流动相：流动相：A-0.05%TFAA-0.05%TFA；B-B-乙腈乙腈-异丙醇（异丙醇（4 4：1 1）梯度洗脱梯度洗脱 荧光检测器：荧光检测器：exex=280nm=280nm340nm,340nm,emem=430nm=430nmN(CH3)2SO2ClR-NH2SO2NHRN(CH3)2+2 2）HPIECHPIEC 测定对象：蛋白质，多肽测定对象：蛋白质，多肽 柱：离子交换键合相柱：离子交换键合相 流动相：流动相：0.3mol/L0.3mol/L1.0mol
6、/L1.0mol/L的盐的缓冲液。的盐的缓冲液。梯度洗脱：盐的浓度增大。尽量避免使用卤梯度洗脱：盐的浓度增大。尽量避免使用卤 素类盐素类盐 特点：特点：可回收活性蛋白可回收活性蛋白。灌灌注注色色谱谱预预添添充充柱柱分分析析型型F F系系列列：用用于于B Bi io oC CA AD D工工 作作站站或或中中压压系系统统M M系系列列：用用于于B Bi io oC CA AD D工工作作站站和和 传传统统H HP PL LC C的的分分离离纯纯化化P P系系列列：用用于于低低压压、B Bi io oC CA AD D 工工作作站站或或中中压压系系统统制制备备型型H H系系列列：用用于于B Bi
7、io oC CA AD D工工作作站站 和和传传统统H HP PL LC C系系统统（POROS 10）灌灌注注色色谱谱预预添添充充柱柱反反相相柱柱阴阴离离子子交交换换柱柱阳阳离离子子交交换换柱柱亲亲和和色色谱谱柱柱活活化化的的亲亲和和色色谱谱柱柱疏疏水水性性相相互互作作用用色色谱谱柱柱R2 2酶活力测定法酶活力测定法 1 1）基本原理：）基本原理：酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力测定实质上是测定一个被酶所催化的化酶活力测定实质上是测定一个被酶所催化的化学反应速度。酶反应速度越快所表示的酶活力学反应速度。酶反应速度越快所表示的酶活力越高。越高。酶反
8、应进程曲线酶反应进程曲线 纵坐标为底物或产物的变化纵坐标为底物或产物的变化量，横坐标为反应时间，曲线斜率表示反应速量，横坐标为反应时间，曲线斜率表示反应速度。从酶反应进程曲线求得反应的初速度。度。从酶反应进程曲线求得反应的初速度。酶浓度曲线酶浓度曲线 纵坐标为反应速度，横坐标为酶纵坐标为反应速度，横坐标为酶量。通过酶浓度曲线检验反应测定系统是否适量。通过酶浓度曲线检验反应测定系统是否适宜。宜。酶活力测定的酶活力测定的要求：要求：测得的反应速度测得的反应速度必须和酶浓度有线性的比例关系，这必须和酶浓度有线性的比例关系，这也是检验酶反应和测定系统是否适宜、也是检验酶反应和测定系统是否适宜、正确的标
9、准。正确的标准。3 3）测定方法：测定方法：取样测定法：取样测定法：酶酶反反应应不不同同的的时时间间取取样样终终止止反反应应测测定定酶酶变变性性剂剂：5 5%三三氯氯醋醋酸酸 3 3%高高氯氯酸酸 其其它它酸酸、碱碱、醇醇类类加加热热：使使酶酶失失效效示例：胰蛋白酶效价测定示例：胰蛋白酶效价测定胰蛋白酶胰蛋白酶 肽键、酰氨键、酯键（碱性氨基酸）肽键、酰氨键、酯键（碱性氨基酸）水解速率：酯键酰氨键肽键水解速率：酯键酰氨键肽键供试品溶液：供试品溶液：50506060单位单位/ml/ml底物溶液：底物溶液：N-N-苯甲酰苯甲酰-L-L-精氨酸乙酯精氨酸乙酯 浓度：浓度：A A：0.5750.575.
10、0585.0585N-N-苯甲酰苯甲酰-L-L-精氨酸乙酯精氨酸乙酯 N-N-苯甲酰苯甲酰-L-L-精氨酸精氨酸H2N-C-NHCH2CH2CH2-CH-COOC2H5NHNH-CO-酶活性单位酶活性单位：在最适的条件下，每分钟能在最适的条件下，每分钟能转化一个微摩尔底物的酶量定为一个活性转化一个微摩尔底物的酶量定为一个活性单位。单位。测定测定：空白：底物溶液空白：底物溶液 +0.001mol/L HCl+0.001mol/L HCl供供试试品品溶溶液液 +底底物物溶溶液液计计时时摇摇匀匀25.0。C+0.5。C测测定定：每每隔隔 3 30 0 s s，读读取取A A，共共 5 5 m mi in n A A每分钟改变每分钟改变0.0030.003，相当于，相当于1 1个胰蛋个胰蛋白酶单位。白酶单位。供试液的供试液的A A每分钟改变每分钟改变A1-A2T0.003:1A1-A2T=:XA1-A20.003TA1-A20.003TWP=A1A20.003 T W
