1、 实验五 白细胞分类计数 一、实验目的 掌握显微镜外周血白细胞分类计数（DLC）的方法；掌握外周血各类白细胞的正常形态。二、实验原理 将血液制成细胞分布均匀的血涂片，用瑞氏染液染色，根据各类细胞的形态特点和颜色差异将白细胞区别并进行计数。通常计数100个白细胞，计算得出各种白细胞所占的百分率。三、实验器材与试剂 器材：显微镜，香柏油，擦镜纸，清洁液 试剂：Wright 染液。四、实验标本：制备良好的血涂片 五、操作步骤 1.制备血涂片：按照正确的操作方法制备血涂片 2.染色：用Wright 染液对血涂片染色，冲洗干净，自然干燥后备用。3.低倍镜观察：低倍镜下观察全片，包括白细胞飞分布和染色情况
2、。4.油镜观察：选择血涂片体尾交界处细胞分布均匀、着色良好的区域，滴加 1滴香柏油，按一定的方向顺序对所见到的每个白细胞进行分类，并用白细胞分类计数器做好记录，共计数 100个白细胞。5.计算：求出各类白细胞所占的百分率。6.报告方式：百分率（%）。六、参考区间 WBC 百分率（%）绝对值（109/L）中性杆Nst 15 0.040.50 中性分Nsg 5070 2.007.00 嗜酸性 E 0.55 0.050.50 嗜碱性B 01 00.10 淋巴 L 2040 0.804.00 单核M 38 0.120.80 七、注意事项 1.计数区域：以体尾交界处最佳。2.分类方法：遵循一定的方向，以
3、“城垛式”连续进行，避免主观选择视野；结果的记录可采用计数器、手工画“正”字或“+”。3.计数的白细胞数：白细胞总数在（3.015.0）109/L之间者，分类计数 100个白细胞；总数在15.0109/L以上时，计数200个；总数低于3.0109/L时，应选用两张血涂片计数 50100个白细胞。4.计数结果：用各类白细胞的百分率乘以白细胞总数，即可求得每升血液中各类白细胞数量的绝对值。5.血涂片中有有核红细胞时，应逐个计数，但不计入100个白细胞内，以分类 100个白细胞过程中见到的有核红细胞个数来报告，并注明其所属阶段。6.分类中还应注意观察成熟红细胞、血小板的形态、染色及其分布情况，注意有
4、无寄生虫（如疟原虫）及其他异常所见。外周血各类白细胞的正常形态 白细胞 粒细胞 淋巴细胞 单核细胞 一、白细胞的组成 中性粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 白细胞是机体抵抗病原微生物等异物入侵的主要防线 全能干细胞 髓系干细胞 淋巴系干细胞 粒-单核系祖细胞 T淋巴系祖细胞 B淋巴系祖细胞 原粒细胞 T原淋巴细胞 B原淋巴细胞 分叶核粒细胞 单核细胞 T淋巴细胞 B淋巴细胞 浆细胞 GM-CSF T幼淋巴细胞 B幼淋巴细胞 早幼粒细胞 中幼粒细胞 晚幼粒细胞 杆状核粒细胞 幼单核细胞 原单核细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 中性粒细胞（Neutrophil，N）具有趋化、变形、黏附、吞噬、杀
5、菌作用，防御和抵抗病原菌侵袭 二、白细胞的功能 淋巴细胞（Lymphocyte，L）B细胞 浆细胞 生成Ab 体液免疫 T细胞 免疫活性物质 细胞免疫 单核细胞（Monocyte，M）吞噬，杀灭病原体 清除损伤或已死亡的细胞 处理抗原 嗜碱性粒细胞（Basophil，B）通过释放嗜碱性颗粒（组胺、肝素、慢反应物质等）参与超敏反应 嗜酸性粒细胞（Eosinophil，E）抑制嗜碱性粒细胞和肥大细胞合成和释放活性物质，吞噬其释出颗粒，破坏组胺，限制过敏反应 参与对寄生虫的免疫反应 1.中性粒细胞(N)?直径10-15um?胞质：粉红色，含较多细小均匀的紫红色中性颗粒。?胞核：染色不均 三、白细胞正
6、常形态?按胞核的形态分为：N杆状核（Nst）N分叶核（Nsg）核径最窄处大于最宽处1/3为杆状核，核型多样，可呈C形、S形、V形或不规则形。核径最窄处小于最宽处1/3为分叶核，细胞分25叶，甚至5叶以上。中性粒细胞 杆状核杆状核 分叶核分叶核 2.嗜酸性粒细胞（E）?形态：略大于中性粒细胞?胞浆：胞浆内充满粗大、整齐、均匀、排列紧密、有立体感的桔红色嗜酸性颗粒?胞核：长呈分叶状，二叶居多，呈眼镜状，偶见34叶,染色质粗，染深紫红色。嗜酸性粒细胞（血涂片）3.嗜碱性粒细胞（B）?胞体呈圆形，略小于中性粒细胞?胞浆：含粗大但大小不一、分布不均匀的紫黑色嗜碱性颗粒，颗粒常覆盖于核上，致使核的轮廓与结
7、构模糊不清?胞核：核分叶不明显，形态不规则。嗜碱性粒细胞 （血涂片）颗粒特点大小不一分布不均嗜碱性强 4.淋巴细胞（L）?形态：直径6-15um，分为大L和小L。?胞核：圆形或肾形，深紫红色。染色质粗糙，排列均匀，大淋巴细胞核常偏于一侧。?胞浆：小淋巴极少,浆内无颗粒，常呈裸核。大淋巴胞浆丰富 ，呈透明蓝色，常有少量粗大、大小不均的紫红色嗜天青颗粒。淋巴细胞（血涂片）5.单核细胞（M）?形态：为外周血中最大的细胞，直径15-25um 胞体呈圆形或不规则形。?胞浆：丰富，染淡蓝色或灰蓝色，呈毛玻璃样半透明。胞浆内含大量细小、弥散分布的灰尘样淡紫红色嗜天青颗粒，可见空泡。?胞核：细胞核大，呈不规则
8、圆形、肾形、马蹄形或不规则分叶，有时折叠扭曲。染色质细致、疏松如网状，染为淡紫红色。五类白细胞五类白细胞 外周血正常白细胞形态特征 细胞 直径（m）形态 胞质 细胞核形 染色质 中性杆状核 1015 圆形 粉红色。颗粒量多、细小、均匀、紫红色 弯曲呈杆状、带状、蜡肠样 粗糙，深紫红色 中性分叶核 1015 圆形 粉红色。颗粒量多、细小、均匀、紫红色 分25叶。杆状58%，2叶3035%，3叶4050%，4叶1520%，5叶0.5%，6叶0%粗糙，深紫红色 嗜酸性粒细胞 1315 圆形 着色不清。颗粒橘黄、粗大、整齐排列、均匀充满胞质 多分2叶，眼镜形 粗糙，深紫红色 嗜碱性粒细胞 1012 圆
9、形 着色不清。颗粒紫黑色、量少、大小不均、排列杂乱、可盖于核上 核形因颗粒遮盖而不清晰 粗糙，深紫红色 淋巴细胞 615 圆形或椭圆形 透明、淡蓝色、多无颗粒，大淋巴细胞可有少量粗大、不均匀紫红色颗粒 圆形、椭圆形、肾形 深紫红色，粗糙成块，核外缘光滑 单核细胞 1220 圆形、椭圆形或不规则形 半透明、灰蓝色或灰红色。颗粒细小、尘土样紫红色 肾形、山字形、马蹄形、扭曲折叠不规则形 疏松网状，淡紫红色，有膨胀和立体起伏感 四、一些异常结构及细胞的认识四、一些异常结构及细胞的认识 1.核左移核左移 外周血中杆状核粒细胞增多或出现 晚幼粒、中幼粒、早幼粒细胞 2.核右移：核右移：主要见于主要见于营
10、养性巨幼细胞营养性巨幼细胞性贫血、恶性贫血等 3.毒性变化毒性变化?大小不均：病程长的化脓性炎症?中毒颗粒：化脓菌感染及大面积烧伤?空泡：败血症?Dohle小体（蓝斑）：是核和胞质发育不平衡表现?退行性变：核固缩、核肿胀、核溶解 中中性性粒粒细细胞胞大大小小不不均均 大小不均 中性粒细胞中毒颗粒 中毒颗粒：粗大、大小不等、分布不均匀的紫黑色或深紫红色颗粒。中性粒细胞退行性变 退行性变 中性粒细胞空泡性变：中性粒细胞空泡性变：中性粒细胞胞质内出中性粒细胞胞质内出现一个或数个空泡 空泡 杜勒小体杜勒小体：中性粒细胞胞质毒性变化保留：中性粒细胞胞质毒性变化保留的局部嗜碱性区域，呈圆形、梨形、云雾状，天蓝色或灰蓝色 杜勒体?异异形淋巴巴细胞 型（空泡型）型（单核细胞型）型（幼稚细胞型）
