1、下颌前突与正常人群中下颌前突与正常人群中Nell-1基因基因单核苷酸多态性位点单核苷酸多态性位点rs61150458的的研究研究专 业：口腔正畸学导 师：王小琴 教授研 究 生：赵 华前言材料与方法结果讨论结论前言 MP有家族聚集倾向MP可能为常染色体显性遗传病 局部因素有一个影响MP的主基因且符合孟德尔遗传 多因素影响 Gheriani Marazita 许多学者Ricardo Silviene 2003年 2007年19世纪 2007年，余兴华等人对MP患者和正常下颌患者进行了生长激素受体基因单核苷酸多态性分析。另外还有许多学者在研究与下颌骨发育有关的基因，比如ShhNell-1Ptc等。
2、结果发现了一个位于第10外显子的1673位SNP位点碱基突变类型为腺嘌呤(A)胞嘧啶(C)。国内研究现状Nell-1基因目前对 Nell-1 基因的研究主要集中在骨组织工程学方面，基因改变研究未见报道。本实验对105例（实验组60例，对照组45例）受试者的Nell-1基因SNP位点rs61150458进行了初步研究。SNP位点基因GC蛋白质Glu Asp 天冬氨酸谷氨酸研究目的材料与方法仪器及材料PCR扩增仪 紫外凝胶分析系统 凝胶电泳仪 Hinf 限制性内切酶 引物 厂家深圳泰立仪器仪表有限公司 UVP Hoefer Scientific Instruments Fermentas life
3、 sciences 生工生物工程有限公司 实验试剂与仪器研究对象研究对象 满足以下条件的进行头颅侧位片测量：l 均为汉族人，且没有异族通婚史 l 双侧颌面对称，无面部畸形 l 无不良习惯及替牙障碍 l 均为成年人，无外伤史，无手术史 纳入标准纳入标准对照组(正常)：SNA、SNB、ANB、上颌长、上颌位置、MP-FH 在正常范 围之内，2ANB4实验组(MP)：SNA、上颌长、上颌位置、MP-FH在正常范围之内，ANB0。实验组60人对照组45人采静脉血5ml提取全部DNA设计相应目的基因的引物PCR扩增目的基因Hinf 酶切统计学分析实验步骤DNA提取目的基因引物的设计目的基因引物的设计50
4、LPCR反应体系 试剂名称10BufferMgCl2(25mM)dNTP(10mM)上游引物(10M)下游引物(10M)Taq酶模板DNA三蒸水剂量5L4L1L1L1L0.4L10L28LPCR反应参数 预热预热变性变性退火退火延伸延伸循环次数循环次数温度（温度（）94949494565672723636次次时间时间2min2min20s20s30s30s30s30s 1 SspI aat|att13 1 tctttccctaatatttg 61 MboII n|nnnnnnntcttc84 61 NdeII|gatc83 61 MboI|gatc83 HinfI g|antc101 61 1
5、21 MboII n|nnnnnnntcttc167121 181 cgctgc 酶的确定 Hinf 5 G A N T C 3 3 C T N A G 5 统计学分析 结 果电泳结果目的基因扩增产物200bpMarker目的基因实验组酶切后凝胶电泳图 100bp200bpGG型酶切后片段长度：83bp、134bp；CC型酶切后片段长度：217bp GC型酶切后片段长度：83bp、134bp、217bp对照组酶切后凝胶电泳图 100bp200bpGG型酶切后片段长度：83bp、134bp；CC型酶切后片段长度：217bp GC型酶切后片段长度：83bp、134bp、217bp等位基因频率分析等
6、位基因频率分析 组别实验组对照组等位基因基因GCGC频数41192817频率0.670.330.620.38X20.426P0.514 注：P0.05，即实验组与对照组之间等位基因频率差异无显著性。基因型分析基因型分析 组别实验组对照组基因型GGGCCCGGGCCC频数321810231012频率0.520.300.180.510.220.27X21.835P0.400 注：P0.05，即实验组与对照组之间的基因型分布差异无显著性。讨 论Nell-1基因的特点MP的致病原因与Nell-1基因无关。由于样本量有限，其代表性有限。MP的致病原因与Nell-1的该SNP位点的变异无关。结果分析由于实
7、验组与对照组的病例有限，对Nell-1基因与MP患者的内在联系需增加样本量做进一步的研究，对其它位点及二者之间的内在联系仍需深入探讨。Nell-1基因的rs61150458多态性位点在中国汉族MP人群与正常人群之间的等位基因频率及基因型分布差异无显著性，尚不能认为MP的致病原因与该位点的变异有关。12主要参考文献主要参考文献 1 Alexander AE,McNamara JA Jr,Franchi L,.Semilongitudinal cephalometric study of craniofacial growth in untreated Class III malocclusion
8、 J.Orthod Dentofacial Orthop,2009,135(6):1-14 2 Baccetti T,Rey D,Oberti G,.Long-term outcomes of Class III treatment with mandibular cervical headgear followed by fixed appliances J.Angle Orthod,2009.79(5):828-234 5 Watanabe M,Suda N,Ohyama K.Mandibular prognathism in Japanese families ascertained t
9、hrough orthognathically treated patientsJ.Orthod Dentofacial Orthop,2005,128(4):466-470 6 Chang HP,Tseng YC,Chang HE.Treatment of mandibular prognathism J.Formos Med Assoc,2006,105(10):781-790 7 T.Yamaguchi,S.B.Park,A.Narita,.Genome-wide Linkage Analysis of Mandibular Prognathism in Korean and Japan
10、ese PatientsJ.Dent Research,2005,84(3):255-259 8 Frazier BS,Rincon RR,Zhou J,.Evidence of linkage in a Hispanic cohort with a Class dentofacial phenotypeJ.Dent Res,2009,88(1):56-60 9王豫蓉,余兴华,戴红卫,等.生长激素受体基因单核苷酸多态性在下颌前突与正常人群中的分布研究J.2008,33(12):1522-1524 10 Cowan CM,Cheng S,Ting K,.Nell-1 induced bone f
11、ormation within the distracted intermaxillary suture J.Bone,2006,28(1):48-58 11 Zhang X,Kuroda S,Carpenter D,.Craniosynostosis in transgenic mice overexpessing Nell-1J.Clin Invest,2002,112(6):861-870 12 Cowan CM,Shi Y Y,Aalamioo,.Adipose-derived adult stromal cells heal critical-size mouse calvarial
12、 defectsJ.Nat Biotechnol,2004,22(5):560-567 12 Zhang X,Carpenter D,Bokui N,.Overexpression of Nell-1,a craniosynostosis-associated gene,induces apoptosis in osteoblasts during craniofacial developmentJ.Bone Miner Res,2003,18(12):2126-2134 13 Lieberm an JR,Daluiski A,Einhom TA.The role of growth fact
13、or in the repair of bone.Biology and clinical applicationsJ.Bone Joint Surg,2002,84-A(6):1032-1044 14 A.A.El-Gheriani,B.S.Maher,A.S.El-Gheriani,.Marazita Segregation Analysis of Mandibular Prognathism in Libya J.Dent Research 2003,82(7):523-527 15 Ricardo Machado Cruz,Henrique Krieger,Ricardo Ferrei
14、ra,.Major Gene and Multifactorial Inheritanceof Mandibular Prognathism J.American Medical Genetics,2008,146A(1):71-77 16 Stockton DW,Das P,Goldenberg M,.Mutation of Pax9 is associated with oligodontiaJ.Nat Genet.2000,24(1):18-19 17 Zhou J,Lu Y,Gao XH,.The growth hormone receptor gene is associated w
15、ith mandibular height in a Chinese populationJ.Dent Res,2005,84(11):1052-1057 18 Zhang X,Kuroda S,Carpenter D,.Craniosynostosis in transgenic mice overexpressing Nell-1 J.Clin Invest,2002,110(6):861-870 19 Lander ES.The new genomics:global views of biologyJ.Science,1996,274(5287):536-539 20 David G,
16、Wang.Large-scale identification mapping and genotyping of single nuclotide polymorphisms in the human genomeJ.Science,1998,280(5366):1077-1082 21 Lai E.Application of SNP technologies in medicine:lessons leamed and future challengesJ.Genome Res,2001,11(6):927-929 22 Sachidanandam R,Weissman D,Schmidt SC,.A map of human genome sequence variation eontaining 1.42 million single nucleotide polymorphisms J.Nature,2001,409(6822):928-933 23 Fomage M,Doris PA.Use of single nucleotide polymorphisms for gene discovery in hypertensionJ.Curr Hypertens Rep,2000,2(1):23-31 致谢
