1、会计学1结核分枝杆菌的核酸检测结核分枝杆菌的核酸检测第1页/共25页增加分子生物学阳性可以作为确诊标准，及强调病原学检查的重要性。3.4.2 分子生物学检查 结核分枝杆菌核酸检测阳性。4 诊断原则 肺结核的诊断是以病原学（包括细菌学、分子生物学）检查为主，结合流行病史、临床表现、胸部影像、相关的辅助检查及鉴别诊断等，进行综合分析做出诊断。以病原学、病理学结果作为确诊依据。5.3 确诊病例结核分枝杆菌核酸检测阳性，及胸部影像学检查支持即可确诊。第2页/共25页第3页/共25页抗酸染色抗酸染色每张检查每张检查3-5min3-5min或更长时间或更长时间阳性率低阳性率低因素之一因素之一荧光染色荧光染
2、色1.1.阳性率阳性率30%30%2.2.无法区分无法区分TBTB or NTBor NTB1.1.假阳性率高假阳性率高2.2.结合抗酸染色结合抗酸染色第4页/共25页结核菌需要先培养出来（2-6周）再加入不同浓度抗菌药物的培养基中继续培养4-8周报告药敏结果第5页/共25页n肺结核所有患者，包括儿童，当疑似肺结核并可咳痰时，应送2份痰做涂片镜检 或 1份痰做Xpert MTB/RIF检测对于涂阴疑似肺结核患者，应当使用Xpert MTB/RIF 或培养 进行诊断n耐药结核当患者具有耐药结核的风险，或者合并HIV感染，或者病情严重时，应使用Xpert MTB/RIF做初始诊断；n肺外结核所有患
3、者，包括儿童，怀疑有肺外结核时，应当采集相应的样本进行微生物学和组织学检查；优先推荐使用Xpert MTB/RIF 做初始诊断第6页/共25页第7页/共25页痰标本与处理液1：2混合吸取2ml处理样品到反应盒将反应盒放入检测模块（手工操作完成）标本自动清洗过滤超声裂解DNA提纯DNA和PCR反应试剂混合半巢式实时荧光定量核酸扩增检测打印检测报告获得检测结果时间：1小时50分钟系统内自动完成第8页/共25页“结核+利福平耐药”对多耐结核控制产生的效果最为显著。即便补充异烟肼耐药，能提升的效果有限。第9页/共25页环介导等温扩增仪（TB-LAMP）体外定性检测结核分枝杆菌复合群；在恒温条件下进行基
4、因扩增反应；4种引物识别6个区域，特异性高；扩增反应效率高，67，40min。主要优点在于对实验室仪器的依赖程度较小，而且试剂成本较低。第10页/共25页第11页/共25页Xpert MTB/RIFTB-LAMP结核杆菌结核杆菌DNA目的基因片段rpoBgryB及IS6110IS6110方法半巢式实时荧光PCR环介导恒温扩增实时荧光定量PCR时间2小时1小时2.5小时检测敏感度131菌条/ml100菌条/ml100010000菌条/ml优点全自动、同时检测利福平耐药基因、特异性高，生物安全性高67恒温扩增，扩增时间短，特异性高，生物安全性高适合大批量筛查，低费用缺点最多一次同时检测八个样本标本
5、用量较少，除痰标本以外的标本需进一步认证假阳性，易污染，需专业人员操作第12页/共25页脓肿物、吸出的脓液、创伤标本、大便标本、血液n结核分枝杆菌的核酸检测：结核分枝杆菌的核酸检测：痰液、支气管灌洗液、支气管抽吸物、肺穿刺物、肺活检标本、胃灌洗液、体液、组织、脓肿物、吸出的脓液、创伤标本、大便标本、血液（GeneXpert除外）、病理切片第13页/共25页第14页/共25页（3（3%NaCl）诱导痰或收集清晨胃液标本，或使用支气管镜采集支气管灌洗液标本。第15页/共25页通免污染环境分枝杆菌。（4）对难以诊断的病例推荐使用其他侵入性技术采集标本，比如细针穿刺、开放肺活组织检查，无菌条件下采集的
6、经支气管活检和其他活检标本，运输过程中，应加入0.51ml无菌的生理盐水。（5）支气管分泌物至少25ml；支气管肺泡灌洗液至少20-50ml。第16页/共25页n4.尿液尿液（1）采集标本前，应清洗外生殖器，推荐连续采集3天清晨中段尿于无菌容器中，用于培养的尿液标本至少需要40ml（2）只有在不能获得中段尿时，可以使用导尿术采集标本。（3）标本运送不及时，应冷藏保存。第17页/共25页lIFN-释放试验（T-SPOT.TB）标本：分离淋巴细胞需加入肝素抗凝，抗凝比例为100ml胸腹水加入0.8ml肝素，颠倒混匀。（2）标本尽可能快的运送到实验室（3）应提交足够量的样本，脑脊液5ml，胸水和腹水510ml。第18页/共25页（2）针对皮肤溃疡，宜从病变组织周边采集活检标本。（3）福尔马林溶液浸泡过的标本不能用于培养检查。（4）极少量的活检标本可以浸泡在少量无菌盐溶液中。第19页/共25页大便标本涂片的敏感性只有3234，不能根据涂片的结果决定是否进行培养。第20页/共25页第21页/共25页第22页/共25页第23页/共25页n阳性结果：患者存在结核感染，但是不能区别是否为活动性结核病。第24页/共25页感谢您的观看。感谢您的观看。第25页/共25页
