1、微生物标本采集微生物标本采集 快速、准确、效能标本质量微生物检验结果质量正确选择、采集、运输错误的标本 错误的结果错误的治疗 快速、准确、效能研究表明，分析前和分析后是当代检研究表明，分析前和分析后是当代检验误差的主要来源。验误差的主要来源。有报道，有有报道，有93%93%的实验室误差来自的实验室误差来自分析前，分析前阶段的质量控制是整分析前，分析前阶段的质量控制是整个检验质量控制中一个容易被忽视却个检验质量控制中一个容易被忽视却非常重要的环节。非常重要的环节。它是获得准确实验结果的重要保证。它是获得准确实验结果的重要保证。快速、准确、效能标本采集的规范化是微生物检验分析前质量控制的重要内容之
2、一。快速、准确、效能标本规范化采集的重要性 正确采集、处理与运送细菌培养的标本直接关系正确采集、处理与运送细菌培养的标本直接关系到致病菌培养的正确性与阳性率的高低，是临床到致病菌培养的正确性与阳性率的高低，是临床细菌检验成功的关键。细菌检验成功的关键。标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，标本质量的好坏直接影响诊断结果的正误，不当不当的标本可导致假阴性、假阳性结果的出现，因此的标本可导致假阴性、假阳性结果的出现，因此标本采集与处理的规范化是准确、及时地向临床标本采集与处理的规范化是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础。提供重要的临床感染信息的基础。好的微生物检验标本可提升实验室工作效
3、率及病好的微生物检验标本可提升实验室工作效率及病患照顾质量，降低医疗成本。患照顾质量，降低医疗成本。快速、准确、效能国内微生物标本的采集目前存在的问题：如痰培养污染口腔大量细菌：如肺炎链球菌等在口腔可能为定植菌，但它有是大叶性肺炎常见致病菌。尿培养：大肠埃希菌常是尿路感染菌，但尿袋常污染这种细菌，采样方法不规范时，会污染这种细菌。快速、准确、效能正确运送方式 标本因冷藏及pH改变或在氧气中暴露，可能减少很多种细菌的存活时间 苛养菌-脑膜炎球菌，淋病奈瑟菌脑膜炎球菌，淋病奈瑟菌 ，流感嗜血杆菌，肺炎链球菌 肠道菌-沙门菌，志贺氏菌，沙门菌，志贺氏菌，霍乱弧菌，空肠弯曲菌及厌养菌 定量评价细菌数量
4、的培养（尿标本）（运送时间）对环境敏感菌株在运送中数量快速减少时，如果运送时间太对环境敏感菌株在运送中数量快速减少时，如果运送时间太长，其它菌则成倍增长，目标细菌可同其它菌一起过度生长。长，其它菌则成倍增长，目标细菌可同其它菌一起过度生长。需进行细菌学检测的所有标本，应在收集后2 2小时内送到实小时内送到实验室验室 快速、准确、效能准确报告培养结果局限性可能造成假阴性结果的原因 采集和运输标本不理想(可能控制的)延误了培养时间；病原菌数量很少，或标本量不够检出(敏感度)WBC、其他身体免疫因子或使用抗生素抑制生长 在当时所有培养方法不能培养的微生物(局限性)快速、准确、效能临床医生要合理用好两
5、种数据1.1.本地区、本单位病原流行病学资本地区、本单位病原流行病学资料，指导经验用药。料，指导经验用药。（微生物室、院（微生物室、院感办、临床科室）感办、临床科室）2.2.药敏试验报告，纠正经验用药。药敏试验报告，纠正经验用药。重视病原学检查重视病原学检查,尽可能在应用抗尽可能在应用抗菌药物之前留取标本送检菌药物之前留取标本送检.以提高病以提高病原学诊断率原学诊断率,为选药和调整药物提供为选药和调整药物提供依据依据.快速、准确、效能一、标本采集和处理的原则 可能致病源，收集到越多越好，保持其活性 非无菌部位，避免污染:消毒 减少增生:低温保存及使用输送培养基无菌部位 避免污染:确实消毒 快速
6、、准确、效能 发现感染应发现感染应及时及时采集微生物标本作病原学检查采集微生物标本作病原学检查 最好是病程最好是病程早期、急性期或症状典型早期、急性期或症状典型时，而且必时，而且必须在须在使用抗生素或其他抗菌药物之前使用抗生素或其他抗菌药物之前采集采集 标本采集时应标本采集时应严格无菌操作严格无菌操作，采集的标本应无外源，采集的标本应无外源性污染，减少或避免机体正常菌群及其它杂菌污染性污染，减少或避免机体正常菌群及其它杂菌污染 要收集要收集足够量足够量的标本的标本 标本采集后应标本采集后应立即立即送至微生物室送至微生物室 快速、准确、效能二、血液培养 病人出现以下临床表现，或同时具备以下几种临
7、床表现时应采集血培养。1 发热（38）或低温（36）2 寒战 3 白细胞增多（1010/L，特别有“核左移”时）4 粒细胞减少（成熟的多形核白细胞110/L）5 血小板减少 6 昏迷 7 多器官衰竭 8 血压降低 9 呼吸加快 快速、准确、效能 几种特殊情况：1 可疑新生儿败血症时，除发热或低温外，很少培养出细菌，应增加尿液和脑脊液培养。2 老年菌血症病人可能不发热或不低温，如伴有身体不适、肌痛或中风，可能是感染性心内膜炎，也应采取血培养。3 骨髓培养与血液培养的送检指征是基本一致的，临床常规血液感染有指征时以抽取血培养为主。但当骨髓炎时或长期使用抗菌药物患者，抽取骨髓培养阳性率会远高于血培养
8、。快速、准确、效能 皮肤消毒和预防血培养污染皮肤消毒和预防血培养污染 要求和建议：要求和建议：建议使用碘酊或者洗必泰。碘酊、次氯酸和洗必太的消毒效果要胜于碘伏。碘酊和洗必泰的作用大致相等。消毒剂要求有足够的作用时间以保证消毒效果。碘酊要求 30 秒，碘伏要求 1.52 分钟。洗必泰要求的消毒作用时间与碘酊相等，而且没有过敏反应，消毒后不必擦去，但不能用于小于 2 个月的婴儿 快速、准确、效能皮肤消毒碘酊、次氯酸和洗必太的消毒效果要胜于碘伏。碘酊和洗必泰的作用大致相等。消毒剂要求有足够的作用时间以保证消毒效果。碘酊要求30 秒，碘伏要求1.52分钟。洗必泰要求的消毒作用时间与碘酊相等，而且没有过
9、敏反应，消毒后不必擦去，但不能用于小于2 个月的婴儿。快速、准确、效能培养瓶消毒程序(1)用 70酒精消毒血培养瓶橡皮塞子。(2)酒精作用 60s。(3)在血液注入血培养瓶之前，用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然后注入血液。快速、准确、效能 皮肤消毒后不可触摸穿刺点 血液由于菌量少和血液成分影响不建议直接涂片。抽取血液后，不要换针头，直接注入血培养瓶中，轻轻颠倒混匀，以防血液凝固。采血培养应尽量在抗菌药物使用之前，采集血培养（一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养），每次2瓶，同时作需氧和厌氧培养。因为研究已证实，多份血培养可以提高检测所有的菌血症和真菌血症以及帮助排除血培
10、养的假阳性。快速、准确、效能血培养的血量对于成年患者，当血培养的血量在 2-30ml的范围内，病原菌的阳性培养率与血量成正比。对于婴幼儿，抽血量不应超过患者总血量的1%。血标本量不足：血液体积少于血培养瓶标签上推荐血量的80%快速、准确、效能对于疑似菌血症者，建议采集2-3套血培养有研究表明一套血培养阳性率为65%，2套80%，3套96%快速、准确、效能为什么要送检厌氧瓶？为什么要送检厌氧瓶？正视厌氧瓶的功能！增加采血量 增加兼性厌氧菌的分离机会 增加厌氧菌的分离机会 提升阳性率！快速、准确、效能关于厌氧血培养瓶的使用研究中，使用“配对需氧/厌氧血培养瓶”比用“两个需氧血培养瓶”复现出更多的金
11、葡、肠杆菌科细菌和厌氧菌。推荐常规血培养包括配对的需氧/厌氧血培养瓶。当抽得的血少于推荐血量时，应该首先接种需氧瓶；剩余血液接种厌氧瓶。快速、准确、效能 快速、准确、效能关于厌氧血培养瓶的使用绝大多数需氧的致病菌都是兼性厌氧菌。坚持需氧加厌氧的双瓶培养，不仅可以获得双倍的血培养血量，还可以增加这些兼性厌氧菌的检出率。更何况，一些兼性厌氧菌在厌氧环境中得以更快的生长出来。因此，这些细菌的血培养可能在厌氧瓶中更早报告阳性或者只在厌氧瓶中生长。快速、准确、效能结论如果不送检厌氧瓶，将会损失如果不送检厌氧瓶，将会损失16%16%的的报阳机会！报阳机会！厌氧瓶更优于需养瓶更快报阳！厌氧瓶更优于需养瓶更快
12、报阳！快速、准确、效能危重病人的三级报告一级：报告培养阳性和涂片报告。一级：报告培养阳性和涂片报告。我们科室第一时间电话通知临床医生，并要我们科室第一时间电话通知临床医生，并要求医生开出细菌涂片医嘱（不需采样，只求医生开出细菌涂片医嘱（不需采样，只要送单），我们在细菌涂片报告上描述我要送单），我们在细菌涂片报告上描述我们意见。们意见。二级：报告确切涂片和培养初步报告（有二级：报告确切涂片和培养初步报告（有改变时）改变时）三级：正式鉴定和药敏报告三级：正式鉴定和药敏报告 快速、准确、效能三、痰标本培养 检查项目：痰常规培养及鉴定、嗜血杆菌培养、真菌培养及鉴定、痰液常规、真菌涂片、抗酸涂片 痰常规
13、培养及鉴定、嗜血杆菌培养、真菌培养及鉴定、痰液常规、真菌涂片、抗酸涂片可以同一标本送检。痰液的一般细菌培养需要同时进行痰液常规，痰液常规可以提示痰标本的初步信息，上皮细胞的多少提示痰标本留取污染口腔细菌的程度，影响着痰培养结果的可靠性。快速、准确、效能三、痰标本采集方法自然咳痰自然咳痰 以晨痰为佳。以晨痰为佳。用清水反复漱口，用清水反复漱口，用力咳出呼吸道用力咳出呼吸道深部的痰深部的痰，痰液直接吐入，痰液直接吐入无菌容器中，无菌容器中，尽快送检尽快送检。否则有的细菌。否则有的细菌（如肺炎球菌、流感嗜血杆菌）（如肺炎球菌、流感嗜血杆菌）在外界可在外界可能死亡。痰量极少者可用雾化吸入加温至能死亡。
14、痰量极少者可用雾化吸入加温至4545的的10NaClNaCl水溶液，使痰液易于排出。水溶液，使痰液易于排出。要求采到肺深部的痰液，不要唾液。要求采到肺深部的痰液，不要唾液。快速、准确、效能三、痰标本采集方法吸痰管取痰法吸痰管取痰法 对咳嗽乏力或昏迷对咳嗽乏力或昏迷病人，用吸痰管经鼻腔或口抵达气管病人，用吸痰管经鼻腔或口抵达气管腔内吸引痰液。双侧肺部感染伴人工腔内吸引痰液。双侧肺部感染伴人工气道如气管切开或气管插管患者，可气道如气管切开或气管插管患者，可用吸痰管经人工气道插至叶支气管水用吸痰管经人工气道插至叶支气管水平吸引痰液。平吸引痰液。支气管镜采集法、支气管肺泡灌洗等支气管镜采集法、支气管肺
15、泡灌洗等 快速、准确、效能三、痰标本的质量评估 痰培养前需做标本质量评估，即涂片进行细胞学筛选和细菌痰培养前需做标本质量评估，即涂片进行细胞学筛选和细菌学显微镜检查。明确唾液对标本的污染程度。并可初步判定学显微镜检查。明确唾液对标本的污染程度。并可初步判定是否有病原菌存在，病原菌的数量及其类别，有助于初步报是否有病原菌存在，病原菌的数量及其类别，有助于初步报告、选择培养基和对培养结果的综合分析。告、选择培养基和对培养结果的综合分析。一般认为，来自下呼吸道的合格痰标本应是含脓细胞和支气一般认为，来自下呼吸道的合格痰标本应是含脓细胞和支气管柱状上皮细胞较多，而受唾液污染严重的不合格标本则扁管柱状上
16、皮细胞较多，而受唾液污染严重的不合格标本则扁平鳞状上皮细胞较多。平鳞状上皮细胞较多。中华医学会呼吸病学分会制订的标准：痰直接涂片检查每低中华医学会呼吸病学分会制订的标准：痰直接涂片检查每低倍视野鳞状上皮细胞倍视野鳞状上皮细胞1010个、白细胞个、白细胞2525个。个。快速、准确、效能三、痰标本注意事项n以晨痰为好。最好在应用抗菌药物之前采集标本。采集后应立即送检，以防止某些细菌在外环境中死亡。室温下延搁数小时定植于口咽部的非致病菌呈过度生长而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率则明显下降。约有1/4-1/2肺部感染患者可能发生菌血症，应同时做血培养。快速、准确、效能四、尿培养 标本送检指征
17、：1.有典型的尿路感染症状；2.肉眼脓尿或血尿；3.尿常规检查表现为白细胞和/或亚硝酸盐阳性；4.不明原因的发热，无其他局部症状；5.留置导尿管的病人出现发热；6.膀胱排空功能受损；7.泌尿系统疾病手术前。快速、准确、效能四、尿培养检查项目：尿培养及菌落计数、真菌培养及鉴定、细菌涂片检查、抗酸杆菌、真菌涂片检查 快速、准确、效能四、尿培养采集方法 清洁中段尿：最好留取早晨清洁中段尿标本，嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后用肥皂水清洗会阴部，女性应用手分开大阴唇，男性应翻上包皮仔细清洗，再用清水冲洗尿道口周围；开始排尿，将前段尿排去，中段尿约10-20ml直接排入专用的无菌容器中，立即送检，2h内接
18、种。该方法简单、易行，是最常用的尿培养标本收集方法，但很容易受到会阴部细菌污染，应由医护人员采集或在医护人员指导下由患者正确留取。如需即时采样，应采集在膀胱停留4h以上的尿液，方法同上。快速、准确、效能四、尿培养采集方法留置导尿管收集尿液：利用留置导尿管采集标本时，应先消毒导尿管外部，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液，操作时应防止混入消毒剂，注意不能从尿液收集袋中采集尿液。快速、准确、效能四、尿培养注意事项 一般于晨起第一次尿液送检，如需即时采样，应采集在膀胱停留4h以上的尿液。应选在抗菌药物应用之前。标本采集后应及时送检、及时接种，室温下保存时间不得超过2h（夏季保存时间应适当缩短或
19、冷藏保存）,4冷藏保存时间不得超过8h，但应注意冷藏保存的标本不能用于淋病奈瑟菌培养。有一部分尿路感染患者可能发生菌血症，应同时做血培养。快速、准确、效能五、开放性感染标本 检查项目：脓性分泌物培养及鉴定、脐部分泌物真菌培养及鉴定、脐部分泌物细菌涂片检查、脐部分泌物抗酸杆菌涂片检查、脐部分泌物真菌涂片检查 快速、准确、效能五、开放性感染标本 采集方法：开放性感染和已溃破的化脓灶：先用灭菌生理盐水冲洗表面的污染菌（采样前要先进行表皮消毒，采组织肉芽上的新鲜分泌物，不能直接采脓苔中央），用灭菌拭子（采用前应用无菌盐水预湿）采取脓液及病灶深部的分泌物。注意尽量取化脓组织与正常组织交界处的脓汁，因为脓
20、汁中心的细菌大部分已死亡，交接处的活菌较多，会提高阳性率。所有脓性标本建议同时进行细菌涂片，通过涂片观察尽早了解细菌有关信息，如细菌分类，是否混和感染，白细胞情况、细菌侵袭还是定植等情况。快速、准确、效能六、封闭性脓液 深部脓肿常见不外乎肺脓肿（上呼吸道正常菌群混合感染、结核可能性均存在）、肝脓肿（肠道菌群混合、结核可能性）、腹腔脓肿（肠道菌混合可能性极大）、盆腔脓肿（肠道菌群、阴道菌群）；其它如肾脓肿、胰腺脓肿相对较少。脓液直接接种，不能增菌，即直接用注射器抽取或拭子采样（无法抽取或开放性时）。脓液标本建议同时进行细菌涂片，通过涂片观察尽早了解细菌有关信息，如细菌分类，是否混和感染，有无厌氧
21、菌，白细胞情况等 快速、准确、效能六、封闭性脓液检查项目：脓液普通培养及鉴定、脓液真菌培养及鉴定、脓液厌氧菌培养及鉴定、脓液细菌涂片检查、脓液抗酸杆菌涂片检查、脓液真菌涂片检查 快速、准确、效能七、粪便【标本送检指征】1 急性腹泻：大便次数明显增多，腹痛，里急后重，往往伴有发热，大便性状为粘液便或脓血便。2 慢性腹泻：大便次数多，多为稀便，伴有全身乏力等症状。3 无痛性大量水样便或米泔样稀便。4 先吐后泻：恶心、呕吐、腹痛、腹泻。有集体发病史，多为细菌性食物中毒所致。5 抗生素治疗后腹泻：常发生于长期抗生素治疗后，糊状便，排便次数增加。6 高热惊厥：通常为中毒性痢疾，多见于婴幼儿和小儿。快速、
22、准确、效能七、粪便【标本的采集方法】自然排便采集法：粪便先排入一干净容器中，调取有脓血粘液部位的粪便23g，液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内立即送检。直肠拭子法：如不易获得粪便时或排便困难的患不易获得粪便时或排便困难的患者者，可采用直肠拭子方法采集，取出后置于灭菌容器内立即送检。方法为将拭子前端用无菌生理盐水湿润，然后插入肛门约肛门约4-5cm4-5cm（幼儿约（幼儿约2-3cm2-3cm）处，轻轻旋转擦取直肠表面粘液表面粘液后退出。快速、准确、效能七、粪便【标本采集注意事项】采集时间：应在急性期采样，以提高检出率，最好在用药前。粪便标本不可被尿液污染，不可在地上或粪池内采样，不可用卫生纸收集（卫生纸可能抑制粪便中的某些致病菌生长）。标本运送过程中必须保证其安全，防止溢出，避免细菌污染。快速、准确、效能
