1、第二章 血栓与止血的一般检验本章目录第一节第一节 血栓与止血的基本知识血栓与止血的基本知识 第二节第二节 血栓与止血常用实验血栓与止血常用实验 第三节第三节 血栓与止血检验的质量控制及新血栓与止血检验的质量控制及新进展进展第一节 血栓与止血的基本知识一、血管壁的止血功能 二、血小板止血功能三、血液凝固机制 四、抗凝系统和纤维蛋白溶解系统一、血管壁的止血功能（一）血管壁结构1内膜层 由单层的内皮细胞组成。2中膜层 包括基底膜、平滑肌、弹力纤维和胶原，介于内皮细胞和外膜层之间。3外膜层 主要由结缔组织组成，是血管壁与组织之间的分界层。一、血管壁的止血功能（二）血管壁的止血功能1局部血管受损时血管收
2、缩伤口缩小血流减慢或阻断血流。2血管受损暴露出胶原激活血小板血小板发生粘附、聚集和释放反应形成血小板血栓堵塞伤口。3受损的内皮细胞释放组织因子启动外源性凝血系统；同时暴露的胶原纤维激活内源凝血系统加强了止血作用。二、血小板止血功能（一）血小板的生成（二）血小板的形态与结构（三）血小板的功能（四）血小板的止血机制二、血小板止血功能（一）血小板的生成1.骨髓中的成熟巨核细胞的胞质脱落血小板（PLA）脾(1/3脾池化)循环血。2.血小板的寿命约为714天，每天大约要更新总量的1/10。衰老的血小板大多在脾中被清除。二、血小板止血功能（二）血小板的形态与结构 1 血小板的形态 血小板是最小的血细胞，直
3、径为24m，厚0.51.5m，容积为68fl，是有折光的扁圆形小体。正常时呈圆盘状，被激活后可伸出伪足。二、血小板止血功能（二）血小板的形态与结构 1 血小板的形态 在瑞氏染色的血涂片上，血小板常三五成群分布，大小不一，呈圆形、椭圆形或不规则的形状，无核，胞质外缘通常染成粉红色,内含紫红色嗜天青颗粒。平均每个油镜视野一般可见510个血小板。二、血小板止血功能（二）血小板的形态与结构 2血小板的超微结构 （1）表面结构：由多糖复合物和血小板膜组成。多糖复合物主要是由糖蛋白构成的多种血小板受体。血小板膜主要由磷脂、胆固醇、糖脂和膜蛋白组成。二、血小板止血功能（二）血小板的形态与结构 2血小板的超微
4、结构 （2）骨架蛋白：位于血小板表面膜下层，由微管、许多微丝(由肌动蛋白、肌球蛋白组成)和膜下丝组成，它们与维持血小板形态、血小板伸展变形和血小板的收缩功能有密切关系。二、血小板止血功能（二）血小板的形态与结构 2血小板的超微结构 （3）细胞器和内容物：主要有颗粒、致密颗粒及溶酶体等，它们含有一些活性物质和多种蛋白水解酶，与血小板的分泌、释放功能有关。二、血小板止血功能（二）血小板的形态与结构 2血小板的超微结构 （4）特殊膜系统：主要是开放管道系统及致密管道系统，它们与血小板的分泌(释放)功能有重要关系。二、血小板止血功能（三）血小板的功能1粘附功能 2聚集功能 3释放反应 4促凝功能 5血
5、块收缩功能 二、血小板止血功能（四）血小板的止血机制 第一阶段：血管收缩血流缓慢血小板被激活粘附聚集形成较松软的止血栓子；第二阶段：血小板释放促凝物质加速形成凝血块形成坚实的止血栓子。三、血液凝固机制（一）血液凝固（二）血液凝固机制 三、血液凝固机制（一）血液凝固 血液由流动状的液体变为胶冻状的血块称为血液凝固。血液凝固包括三个基本的生化反应：凝血酶原激活物的形成；凝血酶原激活物在钙离子的参与下使凝血酶原转变为有活性的凝血酶；可溶性的纤维蛋白原在凝血酶的作用下转变为不溶性的纤维蛋白。三、血液凝固机制（二）血液凝固机制1凝血因子 2凝血途径 三、血液凝固机制（二）血液凝固机制 1凝血因子 参与凝
6、血过程的有关因子统称为凝血因子。迄今为止，发现参与凝血的因子共有14个，其中用罗马数字编号的有12个（从，其中是的活化形式），未编号的是激肽释放酶原（PK）和高分子量激肽原（HMWK）。凝血因子名称同义名血浆浓度主要合成部位生化特性功能存在情况血清 Ba2SO4吸附血浆 贮存血浆HKPK纤维蛋白原凝血酶原组织因子前加速素前转变素抗血友病因子(AHF)血浆凝血激酶成分(PTC)stuart因子血浆凝血激酶前质(PTA)Hageman因子纤维蛋白稳定因子(FSF)高分子量激肽原(HMWK)激肽释放酶原(PK)20004000100051021051052.92.571.55.0肝细胞肝细胞内皮 巨
7、核细胞等肝 巨核细胞等肝细胞肝细胞肝细胞肝细胞肝细胞肝细胞肝细胞肝 内皮细胞肝细胞二聚体SP VKD因子辅因子因子a辅因子SP VKD因子a辅因子SP VKDSP VKDSPSP四聚体接触活化反应辅因子与HK形成复合物凝块结构酶原细胞辅因子血浆辅因子酶原血浆辅因子酶原酶原酶原酶原转酰氨基作用血浆辅因子酶原 无 有 有很少 无 有-无 有 无有 无 有无 有 无有 无 有有 无 有有 较少 有有 有 有有 有 有 有 有 有有 有 有三、血液凝固机制（二）血液凝固机制 2凝血途径 内源性凝血途径 外源性凝血途径 共同途径四、抗凝系统和纤维蛋白溶解系统（一）抗凝系统（二）纤维蛋白溶解系统（一）抗凝
8、系统 1细胞抗凝作用 （1）单核-吞噬细胞系统 （2）血管内皮细胞 （3）肝细胞四、抗凝系统和纤维蛋白溶解系统四、抗凝系统和纤维蛋白溶解系统（一）抗凝系统 2抗凝因子（1）抗凝血酶（AT-）（2）蛋白C系统 1）蛋白C（PC 2）蛋白S（PS）3）血栓调节蛋白（TM）4）蛋白C抑制物（PCI）四、抗凝系统和纤维蛋白溶解系统（一）抗凝系统 2抗凝因子（3）组织因子途径抑制物（TFPI）TFPI是血浆中一种新发现的抗凝蛋白，由血管内皮细胞、巨核细胞、肝细胞和血小板合成，是组织因子、因子和因子的天然抑制物，在维持正常凝血中发挥关键的生理作用。四、抗凝系统和纤维蛋白溶解系统（二）纤维蛋白溶解系统四、抗
9、凝系统和纤维蛋白溶解系统（二）纤维蛋白溶解系统纤溶系统的激活途径四、抗凝系统和纤维蛋白溶解系统（二）纤维蛋白溶解系统纤维蛋白的降解过程四、抗凝系统和纤维蛋白溶解系统（二）纤维蛋白溶解系统纤维蛋白原和纤维蛋白降解产物目标形成性测试血管壁是如何参与止血的?1局部血管受损时血管收缩伤口缩小血流减慢或阻断血流。2血管受损暴露出胶原激活血小板血小板发生粘附、聚集和释放反应形成血小板血栓堵塞伤口。3受损的内皮细胞释放组织因子启动外源性凝血系统；同时暴露的胶原纤维激活内源凝血系统加强了止血作用。血小板的形态是怎样的?血小板是最小的血细胞，直径为24m，厚0.51.5m，容积为68fl，是有折光的扁圆形小体。
10、正常时呈圆盘状，被激活后可伸出伪足。在瑞氏染色的血涂片上，血小板常三五成群分布，大小不一，呈圆形、椭圆形或不规则的形状，无核，胞质外缘通常染成粉红色,内含紫红色嗜天青颗粒。平均每个油镜视野一般可见510个血小板。内源性途径和外源性途径凝血活酶的生成有何不同?内源性途径参与的因子多，反应复杂，全部过程约需要38min而外源性途径参与的因子少反应迅速，全部过程约需10S；内源性途径凝血活酶的磷脂表面由PF3提供，而外外源途径凝血活酶的磷脂表面是由因子的磷脂部分提供。内源性凝血系统的始动因子是：（）A凝血因予 B凝血因子C凝血因子 D凝血因子IE凝血因子CE正常止血机理与哪些因素有关?A血小板的质和
11、量B血管壁的结构和功能 C凝血因子D神经和体液的调解E以上都是 祝贺你完成本部分内容的学习！再见！第二节 血栓与止血常用实验一、毛细血管脆性实验 CFT二、出血时间测定 BT三、血块收缩试验（CRT）四、凝血时间测定 CT五、活化部分凝血活酶时间测定aptt第二节 血栓与止血常用实验六、血浆凝血酶原时间测定 PT七、血浆凝血酶时间测定 TT八、血浆纤维蛋白（原）测定Fbg九、血浆纤维蛋白（原）降解产物 fdp十、血浆D-二聚体测定一、血小板计数（PLt）【原理】用稀释液将血液稀释一定倍数，混匀后充入计数池内，在显微镜下计数一定体积内的血小板数，经过计算求出每升血液中血小板数。二、出血时间测定【
12、原 理】出血时间（BT）是指在一定条件下，人为刺破皮肤毛细血管后，从血液自行流出到自然停止所需的时间。出血时间测定主要是反映血管壁的结构和功能、血小板数量和质量以及血小板与毛细血管之间相互作用的试验。二、出血时间测定【器 材】1血压计2出血时间测定器为双刀片弹簧装置，两把刀片每片长均为6mm，深为1mm。3干净滤纸4秒表二、出血时间测定【操 作】1.将血压计袖带缚于上臂，加压。2在肘前窝凹下二横指处常规消毒，轻轻绷紧皮肤，置出血时间测定器使它贴于皮肤表面，按其按钮，使刀片由“测定器”内刺入皮肤，同时启动秒表。3每隔半分钟，用干净滤纸吸取流出血液，直至出血自然停止，按停秒表计时。二、出血时间测定
13、【注意事项】1刀片长度与前臂平行，以保持伤口与神经、血管走向一致。2滤纸吸去血液时，避免与伤口接触，更不能挤压伤口。3患者在测定前一周停止服用抗血小板药物如阿司匹林等。4当时间大于20min时，应停止测定，并压迫止血。二、出血时间测定【参考值】6.882.08min二、出血时间测定【临床意义】1出血时间延长 见于 血小板数量减少如特发性血小板减少性紫癜、血栓性血小板减少性紫癜；血小板功能异常如血小板无力症；血管壁及结构异常如遗传性出血性毛细血管扩张症、维生素C缺乏症；某些凝血因子缺乏，如血管性血友病（VWD）和弥散性血管内凝血（DIC）。二、出血时间测定【临床意义】2出血时间缩短 主要见于血栓
14、前状态或血栓栓塞性疾病，如心肌梗死、脑血管疾病、DIC的高凝血期、妊娠高血压综合征、糖尿病伴血管病等，均可因血管壁损害，血小板或凝血因子活性过度增强所致。小结 血小板计数是临床常用以观察血栓与止血功能的检验项目。血小板稀释液应能有效地阻止凝血，防止血小板黏附、聚集变形碎裂和尽快固定血小板形态的作用。针刺应稍深，使血流通畅；拭去第一滴血后，首先采血作血小板计数；操作应迅速；采取标本后应在1 h内计数完毕；要充分混匀，充入计数池后一定要静置1015min；计数时光线要适中，不可太强。出血时间测定主要是反映血管壁的结构和功能、血小板数量和质量以及血小板与毛细血管之间相互作用的试验。给一患者作血小板计
15、数，取血给一患者作血小板计数，取血20l20l加加至至0.38ml0.38ml许汝和稀释液中，充液计数中央许汝和稀释液中，充液计数中央大格内大格内5 5个中方格的血小板数为个中方格的血小板数为6262个，求个，求该患者的血小板数：（该患者的血小板数：（）A A3l3l10109 9L BL B626210109 9L L C C9.39.3lOlO9 9L DL D12.412.410109 9L L E E以上都不是以上都不是B B出血时间异常可见于：（出血时间异常可见于：（）A A因子因子 缺乏缺乏 B B血小板计数明显减少血小板计数明显减少C C血小板功能异常血小板功能异常D D血管异常
16、血管异常E E药物影响药物影响(阿司匹林阿司匹林)BCDEBCDE三、凝血时间测定 三、凝血时间测定（一）试管法全血凝固时间测定【原理】静脉血离体后至完全凝固所需的时间称为凝血时间（CT），是反映内源凝血系统各凝血因子活性的筛选试验。三、凝血时间测定（一）试管法全血凝固时间测定【操作】1取内径为8mm小试管3支，编号1、2、3。2顺利地抽取待测者静脉血3ml，（自血液入针头开始计时），去掉针头，分别沿试管内壁依次注入血液lml，置37水浴中。三、凝血时间测定（一）试管法全血凝固时间测定【操作】33min后，每隔半分钟将第1管倾斜1次，直至将试管倒置血液不流动 4依次观察第2管，第2管凝固后，再
17、观察第3管。第3管血液凝固时停止计时，即为凝血时间。三、凝血时间测定（一）试管法全血凝固时间测定【注意事项】1玻璃试管应清洁干燥。2静脉采血应顺利。3倾斜试管的角度应以30为宜，且动作要轻。三、凝血时间测定（一）试管法全血凝固时间测定【参考值】412min三、凝血时间测定（二）硅管法全血凝固时间测定【原理】同试管法CT测定。但不同的是所用试管均应涂硅油，故称为硅管凝血时间（SCT）。三、凝血时间测定（二）硅管法全血凝固时间测定【试剂】1硅油（二甲基二氯硅烷）2石油醚（化学纯）三、凝血时间测定（二）硅管法全血凝固时间测定【操作】1将硅油2ml与石油醚98ml混合，将内径为8mm洁净玻璃试管浸泡于
18、该溶液内，使试管的内壁均匀涂上硅油后，倒置于试管架上晾干。再置200250烘箱内2h，冷却后用蒸馏水冲净，烘干即为硅管。通常只能用23次。2其余操作同试管法CT测定。三、凝血时间测定（二）硅管法全血凝固时间测定 【参考值】1530min（三）活化凝血时间测定【原理】同试管法CT测定。试管中加入白陶土-脑磷脂的混悬液以充分激活因子，并为凝血反应提供丰富的催化表面，以提高本试验的敏感性。它是内源性凝血系统敏感的筛选试验之一。三、凝血时间测定三、凝血时间测定（三）活化凝血时间测定【试剂】1脑磷脂商品试剂240g/L白陶土悬液 3巴比妥缓冲液 440g/L白陶土一脑磷脂悬液三、凝血时间测定（三）活化凝
19、血时间测定 【操作】1在含40g/L白陶土-脑磷脂悬液0.2ml的小试管中注入待检者全血O.5ml，轻轻混合2其余操作步骤同试管法CT测定。三、凝血时间测定（三）活化凝血时间测定【参考值】1.12.1min三、凝血时间测定（三）活化凝血时间测定【注意事项】1静脉采血时要一针见血，尽量减少组织液和空气混入，不应有溶血。2水浴温度要恒定。3倾斜动作要轻，角度要小（约30）。4本试验试管法不甚敏感，仅能检出：C水平2的重型血友病患者。三、凝血时间测定（三）活化凝血时间测定【临床意义】1凝血时间延长 见于较明显的因子、减少的血友病A和血友病B，凝血因子XI缺乏症；严重的纤维蛋白原和凝血酶原缺乏、因子V
20、和因子X缺乏等；应用肝素等抗凝药物；循环血液中存在病理性抗凝物。三、凝血时间测定（三）活化凝血时间测定【临床意义】2凝血时间缩短 见于 血液呈高凝状态时，如DIC早期（高凝期）；血栓性疾病。3本试验（特别是ACT法）也是监护体外循环肝素用量的较好指标之一。四、血块收缩试验（CRT）（一）全血定量法 【原理】血液凝固后，血小板收缩蛋白使血小板伸出伪足，附着于纤维蛋白束上。当伪足向心性收缩，使纤维蛋白网眼缩小，将网隙中的血清挤出。计算在一定条件下析出的血清量占原有血量的百分数，表示血块收缩程度，可间接反映血小板的功能。本试验为血小板功能诊断的筛选试验。四、血块收缩试验（CRT）（一）全血定量法【器
21、材】15ml刻度离心管2软木塞中央部位插有一根长14cm下端呈槌形玻璃棒四、血块收缩试验（CRT）（一）全血定量法 【操作】1采静脉血5ml，拔去针头，沿管壁徐徐注入5ml刻离心管。2插入玻棒，使槌形下端插入血中，将软木塞盖好管口，置37水浴（或温育箱）温育。四、血块收缩试验（CRT）（一）全血定量法【操作】3当血液完全凝固后1h，将血块轻轻分离，使其脱离管壁，并将血块提起，弃去。4将离心管经RCFl600g（3000r/min）离心10min后观察析出的血清量和有形成分体积。四、血块收缩试验（CRT）%100)5()(%)血浆比容全血量血清量血块收缩率mlml（一）全血定量法【计算】（血浆比
22、容=100-红细胞比容）【参考值】4864四、血块收缩试验（CRT）（一）全血定量法【临床意义】1血块收缩40表明收缩不良，见于血小板无力症、血小板减少症；血块收缩显著减退，见于严重凝血因子缺乏和凝血障碍、纤维蛋白原或凝血酶原严重减少、红细胞增多症等。2血块收缩过度 见于先天性凝血因子缺乏症、严重贫血。四、血块收缩试验（CRT）（二）血浆定量法 【原理】在富含血小板的血浆中加入氯化钙或凝血酶，使血浆凝固形成凝块，测定析出血清的体积可反映血小板收缩功能。四、血块收缩试验（CRT）（二）血浆定量法【器材和试剂】1刻度小试管2O.05moL/L氯化钙溶液或20U/ml凝血酶溶液3O.109moL/L
23、枸橼酸钠抗凝剂四、血块收缩试验（CRT）（二）血浆定量法【操作】1静脉采血1.8ml，以0.109mol/L枸橼酸钠溶液0.2ml抗凝。2以RCFl77g（1000r/min）离心10min，制备富含血小板血浆（PRP）。四、血块收缩试验（CRT）（二）血浆定量法【操作】3吸取PRP0.6ml加入刻度小试管内，置37水浴中温育3min后，加入0.05mol/L CaCl2或20/ml凝血酶0.2ml。4混匀后，置37水浴中温育2h。用玻璃棒将血浆凝块轻轻弃除，观察析出血清的体积。四、血块收缩试验（CRT）（二）血浆定量法【计算】血块收缩率（）=100 血清量（ml）全血量（5ml）血浆比容四、
24、血块收缩试验（CRT）（二）血浆定量法【参考值】血块收缩率40。【临床意义】同定量法。五、活化部分凝血活酶时间测定五、活化部分凝血活酶时间测定【原理】在37下以白陶土激活因子和，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板，以提供凝血的催化表面，在Ca2+参与下，观察乏血小板血浆凝固所需时间即称为活化部分凝血活酶时间（APTT）。是内源性凝血系统较敏感和常用的筛选试验。五、活化部分凝血活酶时间测定【试剂】1APTT试剂（含白陶土或脑磷脂）20.109mol/L枸橼酸钠溶液30.025mol/L氯化钙溶液4正常人冻干血浆五、活化部分凝血活酶时间测定【操作】1静脉血 1.8ml+0.109mol/L枸橼酸钠
25、0.2mlRCFl600g（3000r/min），离心10min分离乏血小板血浆。2待检血浆0.1ml+APTT试剂0.1ml37水浴3min，其间轻轻振摇数次。五、活化部分凝血活酶时间测定【操作】3加入经37预温的 O.025mol/L氯化钙溶液0.1ml，立即开启秒表，置水浴中不断的振摇，约30s时取出试管，并倾斜试管观察，至出现纤维蛋白丝时停止记时，重复两次取平均值。4同时按上法测定正常对照。五、活化部分凝血活酶时间测定【注意事项】静脉采血应顺利完成，血液与抗凝剂要充分混匀，避免产生微小凝块。抽血后应在两小时内完成。血液离心速度和时间应达到要求，以尽可能除去血小板。若正常对照APTT延长
26、，提示APTT试剂质量不佳，应重新配制。五、活化部分凝血活酶时间测定【参考值】男性：（373.3）s，女性（37.52.8）s。待检者的测定值较正常对照值延长超过10s以上才有病理意义。五、活化部分凝血活酶时间测定【临床意义】基本与凝血时间意义相同。1.APTT延长 见于因子、和血浆水平减低，如血友病A、B及凝血因子、缺乏症；因子减少还见于部分血管性血友病（vWD）患者；严重的凝血酶原、因子V、因子X和纤维蛋白原缺乏；纤溶活性增强；血循环中有异常抗凝物质。五、活化部分凝血活酶时间测定【临床意义】2APTT缩短 见于高凝状态，如弥散性血管内凝血的高凝血期；血栓性疾病，如心肌梗死、不稳定性心绞痛、
27、脑血管病变、糖尿病伴血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成、妊娠高血压综合征和肾病综合征以及重灼伤等。3肝素治疗的监测：一般以APTT值维持在正常对照的1.53.O倍为宜。C C对凝血时间最有影响的因素是：（）A血小板数量 B血小板功能C血浆凝血因子 D血管壁的完整性E血管壁的收缩功能C C下列哪项不是测定内源系统凝血因子缺乏的试验：（）A凝血时间 B血浆复钙时间C凝血酶时间 D凝血酶原消耗试验E凝血活酶生成试验 在37下以白陶土激活因子和，以脑磷脂（部分凝血活酶）代替血小板，以提供凝血的催化表面，在Ca2+参与下，观察乏血小板血浆凝固所需时间即称为活化部分凝血活酶时间（APTT）。APTT测定的原
28、理是怎样的?六、血浆凝血酶原时间测定七、血浆凝血酶时间测定六、血浆凝血酶原时间测定六、血浆凝血酶原时间测定六、血浆凝血酶原时间测定一期法【原理】在待检血浆中加入过量的组织凝血活酶和Ca2+，使凝血酶原转变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。观察血浆凝固所需时间即血浆凝血酶原时间（PT）。该试验是外源性凝血系统的筛选试验。六、血浆凝血酶原时间测定【器材和试剂】1秒表、塑料试管、塑料注射器、恒温水浴箱20.109mol/L枸橼酸钠3组织凝血活酶浸出液40.025mol/L氯化钙溶液六、血浆凝血酶原时间测定【操作】1制备乏血小板血浆(同APTT)。2取小试管1支，加入待测血浆和组织凝血活酶浸出
29、液各0.1ml，37预温，再加入已在37水浴中预温的0.025mol/L氯化钙溶液0.1ml，立即开启秒表，不断轻轻倾斜试管，记录至液体停止流动所需要的时间。重复以上操作23次，取平均值即凝血酶原时间。3必须同时按上述步骤测定正常对照。六、血浆凝血酶原时间测定【报告方式及参考值】直接报告患者及正常对照PT秒数，参考值为1114s，患者PT值比正常对照延长或缩短3为异常；报告凝血酶原时间比值（PTR），参考值为0.821.15；当PT用于监测口服抗凝剂时，则必须同时报告国际标准化比值（INR），INR=PTRISI。ISI为国际敏感指数，ISI值愈低，则INR愈准确。六、血浆凝血酶原时间测定【注
30、意事项】1抗凝剂的选择及用量 用0.109mol/L枸橼酸钠。在红细胞比容（Hct）(20%或)55%时，抗凝剂量=0.00185拟采血量（ml）（100-患者Hct）2抽血要顺利，抗凝要充分，不可有凝块或溶血。采血管应加盖。六、血浆凝血酶原时间测定【注意事项】3采血后要在l2h内完成，置4冰箱保存不能超过4h，-20下可放置两周。4选用ISI2.0s的组织凝血活酶为宜。5测定标本时，每份标本作双份测定，严格按试剂和仪器说明书要求进行测定，水浴温度应稳定控制在（371）。六、血浆凝血酶原时间测定【临床意义】1PT延长或PTR增加 见于先天性因子、缺乏症和低（无）纤维蛋白原血症；获得性凝血因子缺
31、乏见于DIC、原发性纤维蛋白溶解症、维生素K缺乏症、血循环中有抗凝物质如口服抗凝剂、肝素和FDP存在。六、血浆凝血酶原时间测定【临床意义】2PT缩短或PTR降低 见于先天性因子V增多症、口服避孕药、高凝状态和血栓病等。3监测口服抗凝剂的用量 一般人INR以1.82.5s为宜，不超过3.0s。七、血浆凝血酶时间测定七、血浆凝血酶时间测定【原理】于待检血浆中加入标准化的凝血酶溶液后，在凝血酶的作用下，使纤维蛋白原形成纤维蛋白，使血浆凝固所需的时间为凝血酶时间（TT）。当待检血浆中抗凝物质增多时，TT延长。七、血浆凝血酶时间测定【试剂】10.109mol/L枸橼酸钠2凝血酶溶液七、血浆凝血酶时间测定
32、【操作】1制备乏血小板血浆(同APTT)。2取待检血浆0.1ml置于小试管内，于37水浴中温育5min。3加入凝血酶溶液0.1ml，同时开动秒表，直至血浆凝固为止。4重复上述操作23次，取均值。5同时作正常血浆对照。七、血浆凝血酶时间测定【注意事项】1分离血浆后最好立即测定，室温下放置不得超过3h。2不宜用EDTA盐和肝素作抗凝剂。3加凝血酶溶液前要充分混匀。七、血浆凝血酶时间测定【参考值】参考值1618s，比正常对照延长3s以上为异常。七、血浆凝血酶时间测定【临床意义】1凝血酶时间延长见于血中AT-活性明显增高或血中有肝素和类肝素物质存在。2DIC纤溶亢进期、低（无）纤维蛋白原血症及异常纤维
33、蛋白原血症时，亦均可有TT结果延长。3TT亦可用于粗略监测肝素抗凝治疗患者血浆中的肝素用量。小结 在待检血浆中加入过量的组织凝血活酶和Ca2+，观察血浆凝固所需时间即血浆凝血酶原时间（PT）。该试验是外源性凝血系统的筛选试验。测定时要注意抗凝剂的选择及用量、抽血要顺利、采血及时测定、水浴温度应稳定控制在（371）。PT延长或PTR增加见于、缺乏症和低（无）纤维蛋白原血症。于待检血浆中加入标准化的凝血酶溶液后，在凝血酶的作用下，使纤维蛋白原形成纤维蛋白，使血浆凝固所需的时间为凝血酶时间（TT）。当待检血浆中抗凝物质增多时，TT延长。血浆凝血酶原时间测定的原理是怎样的?在待检血浆中加入过量的组织凝
34、血活酶和Ca2+，使凝血酶原转变为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。观察血浆凝固所需时间即血浆凝血酶原时间（PT）。该试验是外源性凝血系统的筛选试验。血浆凝血酶原时间检测的凝血因子为：（）A凝血因子、B凝血因子、II C凝血因子、D凝血因子、E凝血因子、A 于待检血浆中加入标准化的凝血酶溶液后，在凝血酶的作用下，使纤维蛋白原形成纤维蛋白，使血浆凝固所需的时间为凝血酶时间（TT）。什么是凝血酶时间?A.A.凝血酶时间延长，可因凝血酶时间延长，可因FDPFDP增多或纤维增多或纤维 蛋白蛋白 原减少原减少B.B.凝血酶时间延长，做纠正试验时间并不缩短凝血酶时间延长，做纠正试验时间并不缩短,表表
35、示存在肝素抗凝物质示存在肝素抗凝物质C.C.凝血酶时间延长，见于凝血酶时间延长，见于AT-AT-活性明显增高活性明显增高D.:CD.:C增高主要见于高凝状态和血栓性疾病增高主要见于高凝状态和血栓性疾病E.E.肝病时凝血酶时间也延长肝病时凝血酶时间也延长C以下哪项不正确以下哪项不正确:():()八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（一）血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（3P试验，凝固法）（二）FDP胶乳颗粒凝集试验（FDP胶乳凝集法）（三）D-二聚体定性试验八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（一）血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（3P试验）【原理】在凝血酶的作用下，纤维蛋白原释放出肽A肽B后转变为纤维蛋白单体
36、（FM），FM与纤维蛋白降解产物（FDP）形成可溶性复合物。硫酸鱼精蛋白可使该复合物中的FM游离出来，后者又自行聚合呈肉眼可见的纤维状、絮状或胶冻状。八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（一）血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（3P试验）【原理】这种不需要凝血酶而发生凝固的现象，称为血浆鱼精蛋白副凝固试验，简称3P试验。本试验是对纤溶的简易筛选试验。八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（一）血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（3P试验）【试剂】10.109mol/L枸橼酸钠溶液。2.10g/L硫酸鱼精蛋白溶液（pH6.5）八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（一）血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（3P试验）【操作】1制备
37、乏血小板血浆(同APTT)。2取O.5ml乏血小板的枸橼酸钠抗凝血浆（PPP）放人试管中，置37水浴中3min。3检查血浆确系完全清晰时，加10g/L硫酸鱼精蛋白溶液O.05ml混匀，置37水浴中15min。4准确15min时，立即在光亮处倾斜试管，观察结果。八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（一）血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（3P试验）【结果判断】1强阳性 有明显的纤维蛋白丝或絮状或呈胶冻状。2阳性 血浆中有细或粗颗粒状沉淀出现。3阴性 血浆清晰不变，无不溶解物产生。八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（一）血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（3P试验）【参考值】正常人为阴性。八、血浆纤维蛋白（原）降解
38、产物测定（一）血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（3P试验）【注意事项】1本试验只能用柠檬酸钠抗凝。2抽血不顺利、抗凝不完全、严重贫血、标本保存于冰箱、到时未立即观察结果等均会导致假阳性结果。3若水浴温度太低或纤维蛋白原的含量过低都会造成假阴性结果。八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（一）血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（3P试验）【临床意义】13P阳性见于DIC早期或中期。但在大出血，如创伤、手术、咯血时，或样本置冰箱后可呈假阳性，败血症、恶性肿瘤等也可出现阳性。23P阴性见于DIC晚期和原发性纤维蛋白溶解症八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（二）FDP胶乳颗粒凝集试验 【原理】用特异性纤维蛋白（原）的D
39、、E碎片抗体标记胶乳颗粒，此抗体-胶乳颗粒结合物与待检血清混合，如血清中含有纤维蛋白（原）降解产物，特别是D碎片、E碎片，则发生抗原抗体反应，导致胶乳颗粒凝集。八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（二）FDP胶乳颗粒凝集试验【试剂】110 U/ml凝血酶210万U/ml抑肽酶3胶乳悬液4FDP阴性对照液。5FDP阳性对照液。6样本稀释液八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（二）FDP胶乳颗粒凝集试验【操作】1静脉血lml+抑肽酶5l+凝血酶10l37水浴1h3000r/min离心8min分离血清。2用样本稀释液分别将待检血清作l:4和1:10稀释。八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（二）FDP胶乳
40、颗粒凝集试验【操作】3取上述稀释血清各100l于载玻片上，滴加胶乳悬液100l，充分混合，2min后观察结果。4胶乳凝集成块为阳性，无任何凝集块分布均匀为阴性。八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（二）FDP胶乳颗粒凝集试验【参考值】血清含量10mg/L；尿液含量为0。八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（二）FDP胶乳颗粒凝集试验【临床意义】1原发性纤溶亢进时，FDP含量可明显增高。2高凝状态、弥散性血管内凝血、肺栓塞、器官移植的排异反应、妊娠高血压综合征、恶性肿瘤，心、肝、肾疾病及静脉血栓、溶栓治疗等所致的继发性纤溶亢进时，FDP含量升高。八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（三）D-二聚体定性
41、试验 D-二聚体（D-Dimer）是交联纤维蛋白分子降解的碎片，具有抗原性。其包括胶乳凝集试验和酶联免疫分析方法。八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（三）D-二聚体定性试验 胶乳凝集试验 【原理】以抗D-二聚体单克隆抗体标记固相载体胶乳颗粒，在此胶乳颗粒抗体结合物中加入待检血浆，如血浆中的D-二聚体含量O.5g/ml，则胶乳颗粒发生凝集反应。八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（三）D-二聚体定性试验 【试剂】市售D-二聚体胶乳抗体试剂盒八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（三）D-二聚体定性试验 【操作】1静脉血1.8ml+0.2ml 0.109mol/L枸橼酸钠1600g（3000r/min）
42、离心5min分离血浆。2按说明书将待检血浆1:5稀释，分别取稀释标本和未稀释标本20l，加入抗D-二聚体胶乳颗粒结合物中，迅速混匀，置室温2min观察结果。八、血浆纤维蛋白（原）降解产物测定（三）D-二聚体定性试验【参考区间】0.4g/ml九、自动血凝仪的应用九、自动血凝仪的应用（一）自动血凝仪的检测方法及原理（二）血凝仪的种类（三）自动血凝仪的临床应用九、自动血凝仪的应用(一)自动血凝仪的检测方法及原理 1生物学方法 （1）光学法:当血浆在样品杯中逐渐凝固，纤维蛋白原转变成纤维蛋白时，一束光通过样品杯时，其透射光和散光的强度也会随之变化。九、自动血凝仪的应用(一)自动血凝仪的检测方法及原理
43、1生物学方法 （2）粘度法:又称磁珠法，检测时在待测标本中加入小磁珠，利用变化的磁场使小磁珠产生运动，随着血浆的凝固，血浆的粘稠度增加，小磁珠摆幅逐渐减小，仪器内的电磁传感器测定小磁珠的不同震荡幅度，计算出血浆的凝固时间。九、自动血凝仪的应用(一)自动血凝仪的检测方法及原理 1生物学方法 （3）电流法:利用血浆标本中纤维蛋白具有的导电性，将电极插入标本中，利用两电极之间，电流的通、断来判断纤维蛋白是否形成，以此确定凝固终点。九、自动血凝仪的应用(一)自动血凝仪的检测方法及原理 2其他方法 （1）免疫学方法:以被检物质作为抗原与相对应的抗体发生特异性结合反应，从而对被检物进行定量的方法。（2）生
44、物化学法:通过测定产色物质的吸光度来推算所测定物质的含量。九、自动血凝仪的应用（二）血凝仪的种类 半自动 全自动九、自动血凝仪的应用（三）自动血凝仪的临床应用 血小板功能检测 凝血因子缺乏之筛选试验及确诊试验 凝血因子含量测定 抗凝和纤溶相关的实验诊断 还可测定一些参数如：凝血因子分析（、）；蛋白C及活性蛋白；狼疮抗凝物；蛋白C和S抗凝物等。第三节 血栓与止血检验的质量控制及新发展一、血栓与止血检验的质量控制二、血栓与止血的新进展第三节 血栓与止血检验的质量控制及新发展一、血栓与止血检验的质量控制（一）分析前质量控制（二）分析中的质量控制（三）分析后的质量控制一、血栓与止血检验的质量控制（一）
45、分析前质量控制 1实验方法的选择 2标本的采取与保存 3试剂的应用 4仪器的校正与监控 5药物影响 一、血栓与止血检验的质量控制（二）分析中的质量控制 1操作者素质 2操作规范化 3建立适当的参考区间 一、血栓与止血检验的质量控制（三）分析后的质量控制 1加强实验室与临床的信息交流 2检测结果的评价 二、血栓与止血的新进展 1新检测项目的建立和应用 2优化组合检测项目 3自动化检测不断发展 4分子生物学和遗传学检测不断发展 小结 通过检测纤溶降解产物来推测纤溶活性，目前常用的测定方法有血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验、FDP胶乳颗粒凝集试验、D-二聚体测定三种。自动血凝仪的出现和应用，使得止血和血栓
46、项目检查变得简便、准确、可靠，检测原理有生物学方法、免疫学方法、生物化学法等。血栓与止血的质量控制是保证血栓与止血检验结果准确的重要措施。包括分析前质量控制、分析中质量控制和分析后质量控制。C C3P试验中,硫酸鱼精蛋白的作用是:()A.与血浆蛋白结合而发生凝固 B促进纤维蛋白原转变为纤维蛋白凝幽 C使纤维蛋白单体与FDP复合物发生分离、纤维蛋白单体聚合凝固 D加强凝血酶的作用 E具有抗血浆素原的作用，抑制纤维D-二聚体定性试验的胶乳凝集试验的原理是怎样的?以抗D-二聚体单克隆抗体标记固相载体胶乳颗粒，在此胶乳颗粒抗体结合物中加入待检血浆，如血浆中的D-二聚体含量O.5g/ml，则胶乳颗粒发生凝集反应。祝贺你完成本章内容的学习！制作：温爱丽制作：温爱丽 须建须建 胡建新胡建新
