1、链球菌的溶血性溶血性链球菌形态与染色：形态与染色：G G+球菌球菌,矛头矛头状状 ,成双排列，宽端相对成双排列，宽端相对，尖端向外，尖端向外,有荚膜有荚膜肺炎链球菌革兰染色有荚膜（2）胆汁-七叶苷试验：原理：B群溶血性链球菌能产生CAMP因子，该物质可促进金黄色葡萄球菌溶血素的活性，故在血琼脂平板上两菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明溶血区。结果：细菌生长且使得培养基变黄为阳性，不生长为阴性，肠球菌为阳性。结果：约1min后纸片呈红色为阳性，不变色为阴性。方法：先将病人血清5630min灭活，然后用生理盐水做1：15稀释。原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被适量的溶血素“O
2、”中和后，失去了正常水平量的抗体，多余抗“O”抗体与ASO胶乳试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。原理：B群溶血性链球菌能产生CAMP因子，该物质可促进金黄色葡萄球菌溶血素的活性，故在血琼脂平板上两菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明溶血区。原理：肠球菌有很强的耐盐能力，能在65g/L NaCl血清肉汤培养基中生长，而链球菌的耐盐能力较弱，在此培养基中不能生长。将菌株接种于血琼脂平板上，35孵育18-24h后观察菌落，记录菌落大小、形态、表面、边缘、透明及颜色、有无溶血及特点。结果：约1min后纸片呈红色为阳性，不变色为阴性。原理：胆汁或胆盐能活化肺炎链球菌的自溶酶，促进细菌细胞膜破损或菌体裂
3、解而自溶。营养要求高：血平板或含血清培养基；结果：出现恒定沉淀物为阳性。原理：胆汁或胆盐能活化肺炎链球菌的自溶酶，促进细菌细胞膜破损或菌体裂解而自溶。结果：细菌生长，且培养基变黑色或棕褐色为阳性，不变色为阴性。结果：出现恒定沉淀物为阳性。原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR），释放出-萘基酰胺，与PYR试剂作用形成红色复合物。同时设阳性对照和阴性对照。结果判断：平板法若菌落消失为阳性，不消失为阴性，试管法若液体由浑浊变透明为阳性，不透明为阴性，此试验是鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌的重要试验，后者阳性。肺炎链球菌荚膜染色特点18-24h后血平板上形后血平板
4、上形成灰白色、圆形、针成灰白色、圆形、针尖样的菌落。菌落周尖样的菌落。菌落周围有草绿色溶血环。围有草绿色溶血环。培养特性：培养特性：培养培养48h48h后，菌落有自溶现象，后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹菌落的中心会出现凹陷，像陷，像“肚脐肚脐”称脐称脐状凹陷。状凹陷。（3）65g/L NaCl生长试验：原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR），释放出-萘基酰胺，与PYR试剂作用形成红色复合物。原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR），释放出-萘基酰胺，与PYR试剂作用形成红色复合物。方法：取待检菌纯培养物接种于马尿酸钠
5、培养基，35培养48h，3000r/min离心30min,吸取上清液0.将菌株接种于血琼脂平板上，35孵育18-24h后观察菌落，肠球菌在血琼脂平板上呈灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，菌落周围可出现溶血环，也可无溶血环。结果：细菌生长且使得培养基变黄为阳性，不生长为阴性，肠球菌为阳性。肠球菌形态类似链球菌，为单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰氏阳性球菌。原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR），释放出-萘基酰胺，与PYR试剂作用形成红色复合物。（1）触酶试验：肠球菌属为阴性反应。原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR），释放
6、出-萘基酰胺，与PYR试剂作用形成红色复合物。结果：约1min后纸片呈红色为阳性，不变色为阴性。结果判断：出现抑菌环为敏感，推断为A群化脓性链球菌。原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR），释放出-萘基酰胺，与PYR试剂作用形成红色复合物。原理：Lancefield根据链球菌细胞壁中多糖抗原的不同，将链球菌分为20多个群，对人类治病的多数为A群，偶见B、C、D、F、G群。肠球菌形态类似链球菌，为单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰氏阳性球菌。结果：约1min后纸片呈红色为阳性，不变色为阴性。培养特性：营养要求高，兼性厌氧。原理：A群化脓性链球菌对杆菌肽几乎100
7、%敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药。结果判断：平板法若菌落消失为阳性，不消失为阴性，试管法若液体由浑浊变透明为阳性，不透明为阴性，此试验是鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌的重要试验，后者阳性。培养特性：培养48h后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹陷，像“肚脐”称脐状凹陷。原理：A群化脓性链球菌对杆菌肽几乎100%敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药。方法：先将病人血清5630min灭活，然后用生理盐水做1：15稀释。甲型溶血链球菌甲型溶血链球菌(R)肺炎链球菌肺炎链球菌(S)痰标本肺炎链球菌革兰染色A群群(化脓性化脓性)链球菌链球菌 生物学性状生物学性状 球形或椭圆形球形或椭圆形，链状排列
8、，革兰染色阳性链状排列，革兰染色阳性(G)，无芽胞，无鞭毛，透明质酸的荚膜。无芽胞，无鞭毛，透明质酸的荚膜。1.形态与染色形态与染色化脓性链球菌A群群(化脓性化脓性)链球菌链球菌 生物学性状生物学性状 营养要求高营养要求高：血平板或含血清培养基血平板或含血清培养基；液体培养为沉淀生长液体培养为沉淀生长；血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同 菌株溶血不一菌株溶血不一，多数有透明溶血环多数有透明溶血环(b b溶血现象溶血现象)。2.培养特性培养特性B化脓性链球菌杆菌肽阳性B群无乳链球菌群无乳链球菌涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下细菌染色性、大小、形态及排列。培养特性：
9、培养48h后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹陷，像“肚脐”称脐状凹陷。原理：A群化脓性链球菌对杆菌肽几乎100%敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药。肠球菌形态类似链球菌，为单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰氏阳性球菌。结果：约1min后纸片呈红色为阳性，不变色为阴性。无乳链球菌CAMP试验阳性B、试管法：将甲型链球菌和肺炎链球菌血清肉汤培养液1ml分别加入2支试管，再于各管中加入去氧胆酸钠溶液0.在两种细菌划线的交接处出现箭头型透明溶血区为阳性，否则为阴性，此试验为B群链球菌与其他链球菌鉴别的重要试验，无乳链球菌为阳性，其他为阴性。结果判断：出现抑菌环为敏感，推断为A群化脓性链球菌。肠球菌
10、形态类似链球菌，为单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰氏阳性球菌。原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR），释放出-萘基酰胺，与PYR试剂作用形成红色复合物。（3）65g/L NaCl生长试验：原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被适量的溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗体，多余抗“O”抗体与ASO胶乳试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。结果判断：出现凝集为阳性、不凝集为阴性。原理：B群溶血性链球菌能产生CAMP因子，该物质可促进金黄色葡萄球菌溶血素的活性，故在血琼脂平板上两菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明溶血区。方法：将待检菌接种65
11、g/L NaCl血清肉汤中，35孵育18-24h。掌握链球菌属及肠球菌属的分离培养与鉴定方法。原理：Lancefield根据链球菌细胞壁中多糖抗原的不同，将链球菌分为20多个群，对人类治病的多数为A群，偶见B、C、D、F、G群。涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下细菌染色性、大小、形态及排列。肠球菌形态类似链球菌，为单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰氏阳性球菌。（1）触酶试验：肠球菌属为阴性反应。原理：B群溶血性链球菌能产生CAMP因子，该物质可促进金黄色葡萄球菌溶血素的活性，故在血琼脂平板上两菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明溶血区。无乳链球菌CAMP试验阳性CAMP阳性肠球菌能在胆汁中生长，并
12、水解七叶苷，使培养基变黑。原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR），释放出-萘基酰胺，与PYR试剂作用形成红色复合物。肠球菌形态类似链球菌，为单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰氏阳性球菌。结果判断：出现抑菌环为敏感，推断为A群化脓性链球菌。18-24h后血平板上形成灰白色、圆形、针尖样的菌落。原理：Lancefield根据链球菌细胞壁中多糖抗原的不同，将链球菌分为20多个群，对人类治病的多数为A群，偶见B、C、D、F、G群。pneumoniae结果：出现恒定沉淀物为阳性。结果：细菌生长且使得培养基变黄为阳性，不生长为阴性，肠球菌为阳性。肠球菌、A群链球菌和某些
13、凝固酶阴性的葡萄球菌为阳性。2ml，立即混匀，10-15min观察结果。（2）胆汁-七叶苷试验：原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR），释放出-萘基酰胺，与PYR试剂作用形成红色复合物。结果判断：平板法若菌落消失为阳性，不消失为阴性，试管法若液体由浑浊变透明为阳性，不透明为阴性，此试验是鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌的重要试验，后者阳性。结果：出现恒定沉淀物为阳性。方法：取待检菌纯培养物接种于马尿酸钠培养基，35培养48h，3000r/min离心30min,吸取上清液0.原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被适量的溶血素“O”中和后，失去了
14、正常水平量的抗体，多余抗“O”抗体与ASO胶乳试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。形态与染色：G+球菌,矛头状,成双排列，宽端相对将菌株接种于血琼脂平板上，35孵育18-24h后观察菌落，肠球菌在血琼脂平板上呈灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，菌落周围可出现溶血环，也可无溶血环。肺炎链球菌荚膜染色特点菌落周围有草绿色溶血环。涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下细菌染色性、大小、形态及排列。方法：挑取被检菌落，密涂于血琼脂平板上，将杆菌肽纸片（0.结果：约1min后纸片呈红色为阳性，不变色为阴性。结果：约1min后纸片呈红色为阳性，不变色为阴性。营养要求高：血平板或含血清培养基；营养要求高：血平板或含
15、血清培养基；原理：B群链球菌有马尿酸水解酶，可水解马尿酸为苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸可与FeCl3，结合形成苯甲酸铁沉淀。结果：细菌生长，且培养基变黑色或棕褐色为阳性，不变色为阴性。多数有透明溶血环(b溶血现象)。结果：出现恒定沉淀物为阳性。肠球菌、A群链球菌和某些凝固酶阴性的葡萄球菌为阳性。结果：出现恒定沉淀物为阳性。方法：取待检菌纯培养物接种于马尿酸钠培养基，35培养48h，3000r/min离心30min,吸取上清液0.04U/片）贴于平板上，35孵育18-24h观察。原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR），释放出-萘基酰胺，与PYR试剂作用形成红色复合物
16、。多数有透明溶血环(b溶血现象)。结果：约1min后纸片呈红色为阳性，不变色为阴性。Lancefield血清凝集分型方法：取待检菌纯培养物接种于马尿酸钠培养基，35培养48h，3000r/min离心30min,吸取上清液0.结果：出现恒定沉淀物为阳性。营养要求高：血平板或含血清培养基；原理：肠球菌有很强的耐盐能力，能在65g/L NaCl血清肉汤培养基中生长，而链球菌的耐盐能力较弱，在此培养基中不能生长。将菌株接种于血琼脂平板上，35孵育18-24h后观察菌落，肠球菌在血琼脂平板上呈灰白色、不透明、表面光滑的小菌落，菌落周围可出现溶血环，也可无溶血环。甲型溶血链球菌甲型溶血链球菌(R)肺炎链球
17、菌肺炎链球菌(S)化脓性链球菌原理：培养基的胆汁对某些细菌有抑制作用，只有既能在胆汁中生长，又能水解七叶苷的细菌才能表现出对七叶苷的水解活性。无芽胞，无鞭毛，透明质酸的荚膜。原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR），释放出-萘基酰胺，与PYR试剂作用形成红色复合物。将肺炎链球菌继续孵育2-3天看菌落中心有无凹陷呈“脐状”。B、试管法：将甲型链球菌和肺炎链球菌血清肉汤培养液1ml分别加入2支试管，再于各管中加入去氧胆酸钠溶液0.结果：约1min后纸片呈红色为阳性，不变色为阴性。结果：细菌生长，且培养基变黑色或棕褐色为阳性，不变色为阴性。原理：B群溶血性链球菌能产
18、生CAMP因子，该物质可促进金黄色葡萄球菌溶血素的活性，故在血琼脂平板上两菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明溶血区。8ml于另一试管，加入FeCl30.B、试管法：将甲型链球菌和肺炎链球菌血清肉汤培养液1ml分别加入2支试管，再于各管中加入去氧胆酸钠溶液0.结果：细菌生长，且培养基变黑色或棕褐色为阳性，不变色为阴性。方法：挑取被检菌落，密涂于血琼脂平板上，将杆菌肽纸片（0.结果判断：出现抑菌环为敏感，推断为A群化脓性链球菌。B、试管法：将甲型链球菌和肺炎链球菌血清肉汤培养液1ml分别加入2支试管，再于各管中加入去氧胆酸钠溶液0.结果：出现恒定沉淀物为阳性。原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）
19、高滴度的病人血清被适量的溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗体，多余抗“O”抗体与ASO胶乳试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。pneumoniae结果判断：平板法若菌落消失为阳性，不消失为阴性，试管法若液体由浑浊变透明为阳性，不透明为阴性，此试验是鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌的重要试验，后者阳性。培养特性：培养48h后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹陷，像“肚脐”称脐状凹陷。多数有透明溶血环(b溶血现象)。结果：约1min后纸片呈红色为阳性，不变色为阴性。培养特性：培养48h后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹陷，像“肚脐”称脐状凹陷。结果：细菌生长且使得培养基变黄为阳性，不生
20、长为阴性，肠球菌为阳性。营养要求高：血平板或含血清培养基；原理：肠球菌有很强的耐盐能力，能在65g/L NaCl血清肉汤培养基中生长，而链球菌的耐盐能力较弱，在此培养基中不能生长。结果判断：在2-10min内发生胶乳凝集，为阳性。球形或椭圆形，链状排列，革兰染色阳性(G)，原理：Lancefield根据链球菌细胞壁中多糖抗原的不同，将链球菌分为20多个群，对人类治病的多数为A群，偶见B、C、D、F、G群。结果：约1min后纸片呈红色为阳性，不变色为阴性。肠球菌形态类似链球菌，为单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰氏阳性球菌。2ml，立即混匀，10-15min观察结果。结果：约1min后纸片呈红色
21、为阳性，不变色为阴性。结果：出现恒定沉淀物为阳性。涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下细菌染色性、大小、形态及排列。肺炎链球菌荚膜染色特点结果：细菌生长且使得培养基变黄为阳性，不生长为阴性，肠球菌为阳性。培养特性：培养48h后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹陷，像“肚脐”称脐状凹陷。涂片、革兰氏染色镜检，记录镜下细菌染色性、大小、形态及排列。（3）65g/L NaCl生长试验：原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被适量的溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗体，多余抗“O”抗体与ASO胶乳试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。结果判断：平板法若菌落消失为阳性，不消失为阴性，试管法
22、若液体由浑浊变透明为阳性，不透明为阴性，此试验是鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌的重要试验，后者阳性。结果判断：出现抑菌环为敏感，推断为A群化脓性链球菌。原理：培养基的胆汁对某些细菌有抑制作用，只有既能在胆汁中生长，又能水解七叶苷的细菌才能表现出对七叶苷的水解活性。结果：出现恒定沉淀物为阳性。原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被适量的溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗体，多余抗“O”抗体与ASO胶乳试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被适量的溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗体，多余抗“O”抗体与ASO胶乳试剂反
23、应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。原理：B群溶血性链球菌能产生CAMP因子，该物质可促进金黄色葡萄球菌溶血素的活性，故在血琼脂平板上两菌交界处溶血能力增强，形成箭头状透明溶血区。04U/片）贴于平板上，35孵育18-24h观察。原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR），释放出-萘基酰胺，与PYR试剂作用形成红色复合物。营养要求高：血平板或含血清培养基；培养特性：培养48h后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹陷，像“肚脐”称脐状凹陷。在反应板个空内分别滴加稀释血清、阳性和阴性对照血清1滴（50ul），再于各孔内滴加1滴溶血素“O”溶液，轻摇1min混匀，最后在各孔
24、内分别滴加1滴ASO胶乳试剂，轻摇3min后观察结果。原理：多数肠球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-萘基酰胺（PYR），释放出-萘基酰胺，与PYR试剂作用形成红色复合物。pneumoniae在反应板个空内分别滴加稀释血清、阳性和阴性对照血清1滴（50ul），再于各孔内滴加1滴溶血素“O”溶液，轻摇1min混匀，最后在各孔内分别滴加1滴ASO胶乳试剂，轻摇3min后观察结果。培养特性：培养48h后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹陷，像“肚脐”称脐状凹陷。pneumoniae肠球菌、A群链球菌和某些凝固酶阴性的葡萄球菌为阳性。方法：先将病人血清5630min灭活，然后用生理盐水做1：
25、15稀释。无乳链球菌CAMP试验阳性多数有透明溶血环(b溶血现象)。原理：A群化脓性链球菌对杆菌肽几乎100%敏感，而其他链球菌对杆菌肽通常耐药。结果判断：出现抑菌环为敏感，推断为A群化脓性链球菌。原理：Lancefield根据链球菌细胞壁中多糖抗原的不同，将链球菌分为20多个群，对人类治病的多数为A群，偶见B、C、D、F、G群。1）触酶试验：培养特性：培养48h后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹陷，像“肚脐”称脐状凹陷。肠球菌形态类似链球菌，为单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰氏阳性球菌。同时设阳性对照和阴性对照。方法：取待检菌纯培养物接种于马尿酸钠培养基，35培养48h，3000r/m
26、in离心30min,吸取上清液0.原理：肠球菌有很强的耐盐能力，能在65g/L NaCl血清肉汤培养基中生长，而链球菌的耐盐能力较弱，在此培养基中不能生长。营养要求高：血平板或含血清培养基；1）触酶试验：链球菌属为阴性。原理：抗链球菌溶血素“O”（ASO）高滴度的病人血清被适量的溶血素“O”中和后，失去了正常水平量的抗体，多余抗“O”抗体与ASO胶乳试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。方法：挑取被检菌落在含有PYR的纸片上涂擦，35孵育5min，再于纸片上滴加PYR试剂，观察纸片颜色。肠球菌形态类似链球菌，为单个、成双或短链状排列的卵圆形革兰氏阳性球菌。掌握链球菌属及肠球菌属的分离培养与鉴定方法。2ml，立即混匀，10-15min观察结果。结果：出现恒定沉淀物为阳性。培养特性：培养48h后，菌落有自溶现象，菌落的中心会出现凹陷，像“肚脐”称脐状凹陷。pneumoniae肺炎链球菌荚膜染色特点将肺炎链球菌继续孵育2-3天看菌落中心有无凹陷呈“脐状”。结果：约1min后纸片呈红色为阳性，不变色为阴性。结果判断：出现抑菌环为敏感，推断为A群化脓性链球菌。8ml于另一试管，加入FeCl30.营养要求高：血平板或含血清培养基；初次分离需提供5%-10%的CO2。
