1、 实验四实验四 细菌的染色细菌的染色实验目的：了解细菌革兰染色的原理，掌握革兰染色方法实验内容：1、涂片 2、革兰染色细菌染色的目的细菌染色的目的意义：n细菌菌体微小、而且折光率低，无反差，很难细菌菌体微小、而且折光率低，无反差，很难看清楚。看清楚。n染色可使折光率增大，便容易观察。染色可使折光率增大，便容易观察。n菌体的性质及各部分对某些染料的着色性不同。菌体的性质及各部分对某些染料的着色性不同。可区别细菌及其结构的染色方法可区别细菌及其结构的染色方法n单染色单染色n复染色复染色n特殊染色特殊染色载玻片革兰氏染色革兰氏染色可将所有的细菌分为两大类，蓝色的革兰阳性菌革兰阳性菌和红色的革兰阴性菌
2、革兰阴性菌。是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。革兰氏染色步骤：紫紫、碘碘、酒酒、红红四步1、草酸铵结晶紫染色1-2 min（初染），水洗；2、革兰氏碘液染1-3 min（媒染剂媒染)，水 洗；3、酒精脱色30s左右左右（脱色剂)，水洗；4、稀释的石炭酸复红30s 1min（复染），水洗。干燥，镜检。革兰氏阳性菌：革兰氏阳性菌：细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞内而不被脱色，结果使细胞呈现紫色。革兰氏阴性菌：革兰氏阴性菌：细胞壁肽聚糖层薄，网状结构交联少，类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，
3、细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，因而细菌细胞被脱色，再经石炭酸复红复染后细胞呈红色。革兰氏染色步骤革兰氏染色步骤涂片涂片草酸铵草酸铵结晶紫结晶紫 碘碘 液液95%酒精酒精 稀释的稀释的石石 炭酸复红炭酸复红自然干燥自然干燥媒染媒染2-3min脱色脱色2030s固定固定初染初染1-2min复染复染3060s干燥干燥镜检镜检接接种种环环蒸蒸馏馏水水滴水滴水革兰氏染色时注意事项：革兰氏染色时注意事项：1、要用幼龄培养物作革兰氏染色；、要用幼龄培养物作革兰氏染色；2、涂片不宜太厚，以免脱色不完全造成假阳、涂片不宜太厚，以免脱色不完全造成假阳性性10100枯草杆菌枯草杆菌（蓝色）（蓝色）大肠杆菌（红色）大肠杆菌（红色）革兰氏染色革兰氏染色思考题思考题1、革兰染色的关键步骤是什么？3、进行革兰染色时注意那些事项？作业：原理、方法、结果、分析讨论及绘图、思考题。绘图：绘出用革兰氏染色法染出的细菌形态图要求：视野要圆；细菌的大小要合理；并写出菌名及放大倍数；用铅笔。标出染的细菌种类及颜色。
