1、1.2 基因工程的基本操作程序新课导入 将大鼠的生长激素基因导入到小鼠受精卵中，得到的“超级鼠”。学习目标1.简述基础理论研究和技术进步催化了基因工程；2.简述基因工程的原理和基本步骤。新知探究基因工程的基本操作步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取人工合成u利用PCR技术扩增已知序列：从基因文库获得未知序列：(DNA library)聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)鸟枪法：散弹射击法供体细胞DNA限制酶许多DNA片段载入运载体导入受体细胞扩增产生特定性状分离目的基因从基因文库获得基因
2、DNA文库的构建 将总DNA经过酶解，分离不同长短的DNA片段。包含基因片段分别克隆在质粒或噬菌体载体上，转染细菌或体外包装到噬菌体颗粒上便构成了该生物的基因文库。目的基因的mRNA逆转录单链DNA合成双链DNA（目的基因）蛋白质氨基酸序列推测mRNA的核苷酸序列推测结构基因的核苷酸序列化学合成目的基因人工合成法逆转录法根据已知氨基酸序列直接合成DNA二、基因表达载体的构建质粒DNA分子限制性核酸内切酶处理两个切口获得目的基因DNA连接酶重组DNA分子（重组质粒）同一种一个切口两个黏性末端三、将目的基因导入受体细胞（一）转化：（二）方法将目的基因导入植物细胞将目的基因导入动物细胞将目的基因导入
3、微生物细胞农杆菌转化法基因枪法花粉管通道法显微注射法感受态细胞目的基因进入_内，并且在受体细胞内维持_和_的过程受体细胞稳定表达四、目的基因的检测与鉴定（一）、检测1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 (关键步骤)首先取出转基因生物的基因组DNA 用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针 使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中（1）方法:DNA分子杂交（2）过程:2、检测目的基因是否转录出了mRNA3、检测目的基因是否翻译成蛋白质（1）方法：分子杂交方法：抗原抗体杂交（2）过程：用上述探针和转基因生物的mRNA杂交，若出
4、现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA。（二）、鉴定（个体生物学水平）抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等课堂小结1.获取目的基因u从基因文库u利用PCRu化学方法人工合成2.构建基因表达载体u目的基因、启动子、终止子、标记基因3.将目的基因导入受体细胞u农杆菌转化法、显微注射法4.目的基因的检测与鉴定u检测：是否插入、转录、翻译u鉴定随堂测试1.在基因工程中使用的限制性核酸内切酶，其作用是（）A.将目的基因从染色体上切割出来B.识别并切割特定的DNA核苷酸序列C.将目的基因与运载体结合D.将目的基因导入受体细胞B2.基因工程是DNA分子水平的操作，下列有关基因工程的叙述中，错误的是（）A.限制酶只用于切割获取目的基因B.载体与目的基因必须用同一种限制酶处理C.基因工程所用的工具酶是限制酶、DNA连接酶D.带有目的基因的载体是否进入受体细胞需检测A3.运用现代生物技术，将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因整合到棉花细胞中，为检测实验是否成功，最方便的方法是检测棉花植株是否有（）A.抗虫基因B.抗虫基因产物C.新的细胞核D.相应性状4.转基因动物转基因时的受体细胞是（）A.受精卵B.精细胞C.卵细胞D.体细胞DA5.质粒是基因工程最常用的运载体，它的主要特点是：()能自主复制 不能自主复制 结构很小蛋白质 环状RNA 环状DNA能“友好”地“借居”A.B.C.D.C退出
