1、一、课题目标一、课题目标说明植物组织培养的基本原理，学习植物组织培说明植物组织培养的基本原理，学习植物组织培养的基本技术，进行菊花或其他植物的组织培养。养的基本技术，进行菊花或其他植物的组织培养。二、课题重点与难点二、课题重点与难点课题重点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。课题重点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。课题难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。课题难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。教法：谈话法、多媒体辅助教学教法：谈话法、多媒体辅助教学课时安排：课时安排：2 2课时课时教学时间：教学时间：3 3月月1 12 2日日由高度分化的植物组织或细胞产由高度分化的植物组织或细胞产
2、生愈伤组织的过程。也叫去分化生愈伤组织的过程。也叫去分化脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程又可以重新分化成根或芽等器官的过程接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养。培养接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养。培养期间应定期消毒。培养温度期间应定期消毒。培养温度18221822，每日用，每日用日光灯光照日光灯光照12h12h 植物的花药培养在育种上有什植物的花药培养在育种上有什么意义？么意义？花粉粒（花粉粒（1N）单倍体植株单倍体植株（1N）二倍体纯合子二倍体纯合子植株（植株（2N）花的结构花的结构花丝花丝花药：花药：囊状结构，内有很多
3、花粉囊状结构，内有很多花粉 花粉是由花粉母细胞（即小孢子母细胞）花粉是由花粉母细胞（即小孢子母细胞）经过经过而形成的，因此，花粉是而形成的，因此，花粉是。花粉的发育要经历：花粉的发育要经历：时期、单核时期、单核期、双核期期、双核期等阶段。等阶段。雄蕊雄蕊（一）被子植物的花粉发育（一）被子植物的花粉发育1花粉母花粉母细胞（细胞（2n）4个小孢子个小孢子(小孢子小孢子四分体四分体)（n）减分减分有分有分1个花粉管细胞核（个花粉管细胞核（n）1个生殖细胞核（个生殖细胞核（n）有分有分2个精子个精子单核居中期（单核居中期（n）单核靠边期（单核靠边期（n）注意：二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含二核花粉粒
4、：成熟的花粉粒中，只含花粉花粉管细胞核和生殖细胞核管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中。（精子在花粉管中形成）形成）三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两一个营养核和两个精子。个精子。两个精子和一个营养核的两个精子和一个营养核的基因型基因型相同。相同。（二）产生花粉植株的两种途径二）产生花粉植株的两种途径形成原因：主要形成原因：主要取决于培养基中取决于培养基中的激素的种类及的激素的种类及其浓度的配比其浓度的配比体细
5、胞胚（胚状体）：体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些体细胞在形在组织培养过程中，某些体细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，被的结构，发育过程亦与合子胚类似，被称为称为。（三）影响花药培养的因素（三）影响花药培养的因素1、材料的选择、材料的选择 不同植物不同植物 同一植物的不同生理状况同一植物的不同生理状况（花期早期初花期花期早期初花期）合适的花粉发育期合适的花粉发育期（单核居中期与靠边期之间单核居中期与靠边期之间）此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等密度等2、培养基的
6、组成、培养基的组成实验操作实验操作材料选取材料选取材料和材料和消毒消毒接种和接种和培养培养（一）材料选取（一）材料选取 通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。通过镜检来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。最常用的方法：最常用的方法：醋酸洋红法。醋酸洋红法。某些植物的花粉细胞核不易着色，某些植物的花粉细胞核不易着色，采用采用焙花青焙花青-铬矾法铬矾法，这种方法能将，这种方法能将花粉细胞核花粉细胞核染成染成蓝黑色蓝黑色。月季的初花期月季的初花期。选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说，重要因素。一般来说，在单核期，细胞核由中央
7、移向在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。，花药培养成功率最高。二、材料的消毒：二、材料的消毒：花花蕾蕾（70酒精）酒精）大约大约30s（无（无菌水）菌水）清洗清洗（无菌（无菌吸水纸）吸水纸）吸干水吸干水分分（1氯化氯化汞溶液）汞溶液）24min（无（无菌水）菌水）冲洗冲洗 月季花蕾的消毒与菊花外植体的消月季花蕾的消毒与菊花外植体的消毒相比较，二者有何不同？毒相比较，二者有何不同？在酒精消毒前，花药不需要预先用流在酒精消毒前，花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗 三、接种和培养三、接种和培养剥取花药剥取花药接种花药接种
8、花药培养培养分化培养基培养分化培养基培养鉴定和筛选鉴定和筛选不要损伤花药不要损伤花药？要彻底除去花丝要彻底除去花丝？常常会出现染色体倍性的变化常常会出现染色体倍性的变化？每个培养瓶接种每个培养瓶接种 （7 710 10）个花药个花药？花药长出愈伤组织还要转移花药长出愈伤组织还要转移到哪？到哪？主要原因是主要原因是营养核和生营养核和生殖核融合殖核融合造造成的成的植物组织培养技术与花药培养技术的植物组织培养技术与花药培养技术的异同点异同点项目项目相同点相同点不同点不同点植物组织培养植物组织培养技术技术离体的植物离体的植物组织经脱分组织经脱分化形成愈伤化形成愈伤组织，再分组织，再分化成丛芽，化成丛芽，诱导出根，诱导出根，然后进行移然后进行移栽。栽。外植体为体细胞，外植体为体细胞，染色体数染色体数无无需加倍。需加倍。花药培养技术花药培养技术取材为花药，培养的为取材为花药，培养的为单倍体幼苗单倍体幼苗，植株，植株弱小，弱小，高度不育高度不育，必须用，必须用秋水秋水仙素处理仙素处理，使染色体加，使染色体加倍，恢复正常植株的染倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。色体数，而且为纯种。
