1、12345678一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将序列，并在特定的切割点上将DNA DNA 分子切断。分子切断。目前已发现的限制酶有目前已发现的限制酶有200200多种。多种。9101112131415 目前被较广目前被较广泛提取使用的目泛提取使用的目的基因有：苏云的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因、植物抗病基因等。因等。16 将供体生物的将供体生物的DNADNA用限制用限制酶切割为许多片段，再用运载酶切割为许多片段，再用运
2、载体将这些片段都运载到受体生体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因个细胞获得了需要的目的基因并得以表达，基因工程就算成并得以表达，基因工程就算成功了。功了。该法最大的缺点是带有很该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功大的盲目性，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。因转移到原核生物中去。17 逆转录法：以信使逆转录法：以信使RNARNA为模板，在逆转录酶的为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合作用下将脱氧核苷酸合成合成成合成DNA(DNA(基因基因)。直接合成法：根据
3、蛋白直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出质的氨基酸顺序推算出信使信使RNARNA核苷酸顺序，核苷酸顺序，再据此推算出基因再据此推算出基因DNADNA的脱氧核苷酸顺序。用的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。成相应的基因。DNA合成仪PCR扩增仪181920 细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。步培养、研究。无表达产物无表达产物无表达产物无表达产物有表达产物有表达产物无表达产物无表达产物21例：用棉铃饲喂棉例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。抗虫基因并得到表达。2223返回24返回25返回26返回27返回
