1、(Corynebacterium diphtheria)u棒状杆菌属棒状杆菌属(Corynebacterium)主要有主要有白喉棒状白喉棒状杆菌杆菌、假白喉棒状杆菌、干燥棒状杆菌、化脓棒、假白喉棒状杆菌、干燥棒状杆菌、化脓棒状杆菌、溃疡棒状杆菌、假结核棒状杆菌、溶血状杆菌、溃疡棒状杆菌、假结核棒状杆菌、溶血棒状杆菌、棒状杆菌、J-KJ-K群棒状杆菌。群棒状杆菌。u此属细菌种类较多。广泛分布于动、植物上。可此属细菌种类较多。广泛分布于动、植物上。可定植于人皮肤、上呼吸道和泌尿生殖道粘膜。定植于人皮肤、上呼吸道和泌尿生殖道粘膜。u其中大多数为条件致病菌，引起人类疾病的主要其中大多数为条件致病菌，引
2、起人类疾病的主要是是白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌。u棒状杆菌属与分枝杆菌属和诺卡菌属一样，细胞棒状杆菌属与分枝杆菌属和诺卡菌属一样，细胞壁含壁含短链分枝菌酸短链分枝菌酸的菌属，属放线菌科。的菌属，属放线菌科。u革兰阳性，革兰阳性，菌体一端或两端膨大呈棒状菌体一端或两端膨大呈棒状的杆菌。的杆菌。u菌体染色不均匀，出现节段浓染或有菌体染色不均匀，出现节段浓染或有异染颗粒异染颗粒。排列不规则，呈栅栏状。排列不规则，呈栅栏状。u无荚膜、无鞭毛，不产生芽胞。无荚膜、无鞭毛，不产生芽胞。1.1.形态染色形态染色菌体细长微弯，一端或两端膨大呈棒状。细菌常排菌体细长微弯，一端或两端膨大呈棒状。细菌常排列呈列呈V
3、V、L L等或等或栅栏状栅栏状具具异染颗粒异染颗粒，主要成分是核糖核酸和多磷酸盐，在，主要成分是核糖核酸和多磷酸盐，在鉴定时有重要意义。鉴定时有重要意义。l革兰染色阳性，异染颗粒着色深革兰染色阳性，异染颗粒着色深,可使菌体呈明显可使菌体呈明显节段性节段性。l美蓝染色：菌体着色不均匀，出现有深染的颗粒。美蓝染色：菌体着色不均匀，出现有深染的颗粒。lNeisserNeisser或或AlbertAlbert等法等法染色，异染颗粒与菌体颜色不同染色，异染颗粒与菌体颜色不同Albert染色：菌体草绿色，异染颗粒呈紫褐色；Neisser（柰瑟染色）：菌体棕黄色，异染颗粒呈棕褐色；菌体排列不规则 2.2.培
4、养特性培养特性需氧或兼性厌氧菌。需氧或兼性厌氧菌。在在吕氏血清斜面吕氏血清斜面（含凝固血清的）：生长迅速，（含凝固血清的）：生长迅速，细小灰白菌落，涂片染色异染颗粒明显。细小灰白菌落，涂片染色异染颗粒明显。血平板：长出血平板：长出1-2mm1-2mm、不透明的、不透明的S S型菌落。轻型有型菌落。轻型有溶血溶血亚碲酸钾的血平板亚碲酸钾的血平板：常用鉴别选择培养基含：常用鉴别选择培养基含0.030.03-0.04-0.04亚碲酸钾，亚碲酸钾能抑制杂菌，且亚碲酸钾，亚碲酸钾能抑制杂菌，且白喉杆菌能吸收亚碲酸钾使其还原为元素碲，菌白喉杆菌能吸收亚碲酸钾使其还原为元素碲，菌落呈落呈黑色黑色。3.3.分
5、型分型l根据细菌在亚碲酸钾的血平板生长情况分三型根据细菌在亚碲酸钾的血平板生长情况分三型重型重型:为不溶血、灰白、不规则、有条纹。为不溶血、灰白、不规则、有条纹。轻型轻型:为为溶血、黑色、光泽、凸起。溶血、黑色、光泽、凸起。中间型中间型:为不溶血的小菌落，外形在重型和轻型之为不溶血的小菌落，外形在重型和轻型之间。间。l在液体培养基生长情况在液体培养基生长情况重型有菌膜重型有菌膜轻型分散生长轻型分散生长中间型沉淀生长。中间型沉淀生长。4.抵抗力抵抗力对湿热抵抗力不强，煮沸对湿热抵抗力不强，煮沸1min死亡。死亡。对寒冷、干燥和日光抵抗力强。在衣服、对寒冷、干燥和日光抵抗力强。在衣服、床单、玩具上
6、可存活数天至数周。床单、玩具上可存活数天至数周。5%石炭酸中石炭酸中min、3%来苏尔中来苏尔中10min死亡。死亡。对青霉素、氯霉素、红霉素敏感对青霉素、氯霉素、红霉素敏感。1.1.致病物质致病物质-白喉毒素白喉毒素u产生产生：携带携带-噬菌体噬菌体白喉棒状杆菌带有编码外毒白喉棒状杆菌带有编码外毒素的素的toxtox基因，噬菌体侵入白喉棒状杆菌，在溶原基因，噬菌体侵入白喉棒状杆菌，在溶原阶段阶段toxtox基因即可整合到宿主染色体上，使之产生基因即可整合到宿主染色体上，使之产生毒素毒素。u影响影响toxtox+基因的表达因素基因的表达因素：(即白喉毒素的产生即白喉毒素的产生)与与菌体内菌体内
7、无机铁含量无机铁含量密切相关。铁含量适量密切相关。铁含量适量(0.14g/ml),tox+(0.14g/ml),tox+基因表达基因表达,否则铁含量高否则铁含量高,tox,tox+基因不表达。基因不表达。l毒素的结构：毒素的结构：白喉毒素含有白喉毒素含有A A和和2 2个个B B 亚单位。亚单位。B B亚单位上有亚单位上有1 1个受体个受体结合结合区和区和1 1个个转位转位区，可作用区，可作用心肌和神经细胞心肌和神经细胞，引起中毒性心肌炎和神经症状。，引起中毒性心肌炎和神经症状。A A亚单位上有亚单位上有1 1个催化区，为个催化区，为毒性单位毒性单位。具有酶活具有酶活性性,能将氧化型烟酰胺腺嘌
8、呤二核苷能将氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷(NAD+)(NAD+)水解为水解为烟酰胺及腺嘌呤二磷酸核糖烟酰胺及腺嘌呤二磷酸核糖(ADPR)(ADPR)两部分两部分,并催化并催化延伸因子延伸因子2(EF-2)2(EF-2)与与ADPRADPR共价结合共价结合,使使EF-2EF-2不能继不能继续加入续加入,肽链不能延长肽链不能延长,影响蛋白质的合成影响蛋白质的合成。2.2.所致疾病所致疾病-白喉白喉u传染源：患者及带菌者(鼻咽腔粘膜粘膜)u传播途径：随飞沫或污染的物品传播。u临床表现：本菌不侵入血流,但外毒素吸收入血造成毒血症。u局部炎症:假膜(细菌和外毒素可使局部粘膜上皮细胞产生炎性渗出与坏死。渗出物
9、中含有纤维蛋白，能将炎性细胞、粘膜坏死组织和白喉棒状杆菌凝聚在一起，形成灰白色点状或灰白色点状或片状假膜片状假膜)。u全身中毒症状：如心肌炎、软腭麻痹、声嘶、肾上腺功能障碍等症状u其他u此假膜在咽部与粘膜下组织紧密粘连不易拭去。若假膜扩展至气管、支气管粘膜，由于其上具有纤毛，假膜容易脱落气管内而引起呼吸道阻塞窒息，早期致死的主要原因。u外毒素致病，引起如心肌炎、软腭麻痹、外毒素致病，引起如心肌炎、软腭麻痹、声嘶、肾上腺功能障碍等症状。约声嘶、肾上腺功能障碍等症状。约2/3患者患者的心肌受损，多发生在病后的心肌受损，多发生在病后23周，成为周，成为白喉白喉晚期致死晚期致死的主要原因。的主要原因。
10、结果 试验侧：检测有无抗毒素免疫。对照侧：检测有无超敏反应。试验侧试验侧 对照侧对照侧 本质本质阴性反应阴性反应 有免疫力有免疫力阳性反应阳性反应 2448h h红肿红肿 无免疫力无免疫力 47d d达峰达峰假阳性反应假阳性反应 6 618h18h红肿红肿 同前同前 有免疫力，超敏反应有免疫力，超敏反应 1 12d2d消退消退混合反应混合反应 6 618h18h红肿红肿 6 618h18h红肿红肿 无免疫力，超敏反应无免疫力，超敏反应 4 47d7d达峰达峰 3 34d4d反应消退反应消退毒力试验患者或带菌者咽喉、鼻咽拭子等直接涂片染色镜检（单染或G 染色+异染颗粒染色）吕氏血清斜面35121
11、8h亚碲酸钾BAP、352448hBAP3516-18h涂片染色镜检(G染色和异染颗粒染色）观察菌落特点吕氏血清斜面生化反应涂片染色镜检检验程检验程序序1.1.标本采集标本采集 从假膜边缘采集分泌物，立即从假膜边缘采集分泌物，立即送检。送检。2.2.标本革兰和标本革兰和异染颗粒异染颗粒染色镜检。如发现染色镜检。如发现G+G+棒状杆菌，且有异染颗粒，可作棒状杆菌，且有异染颗粒，可作“直接涂片直接涂片检出形似白喉棒状杆菌检出形似白喉棒状杆菌”的的初步报告初步报告，为临，为临床床早期诊断提供依据。早期诊断提供依据。3.3.分离培养分离培养 u亚碲酸血琼脂平板亚碲酸血琼脂平板：将标本接种：将标本接种,
12、37,37培养培养181824h24h后后,呈现呈现1mm1mm、黑色或灰黑色特点的典、黑色或灰黑色特点的典型菌落。型菌落。u吕氏血清斜面吕氏血清斜面：生长迅速，细小灰白菌落，：生长迅速，细小灰白菌落，涂片染色异染颗粒涂片染色异染颗粒(1)(1)琼脂平板毒力试验：琼脂平板毒力试验：将含有将含有2020牛血清肉汤琼脂注于平皿中牛血清肉汤琼脂注于平皿中将浸有将浸有lOOulOOumlml抗毒素血清的滤纸条沉于琼脂内抗毒素血清的滤纸条沉于琼脂内在与滤纸条垂直方向将待检菌划线接种，同时接种在与滤纸条垂直方向将待检菌划线接种，同时接种标准产毒株作为阳性对照。标准产毒株作为阳性对照。3737培养培养 24
13、-48h24-48h若菌苔两侧出现斜向外侧延伸的乳白色沉淀线，并若菌苔两侧出现斜向外侧延伸的乳白色沉淀线，并与其邻近的标准产毒株的沉淀线相吻合，则为产毒与其邻近的标准产毒株的沉淀线相吻合，则为产毒株。株。u将白喉抗毒素将白喉抗毒素IgGIgG吸附在吸附在SPASPA上上u加入待检菌培养物，若有白喉毒素，则它可加入待检菌培养物，若有白喉毒素，则它可与与SPA-IgGSPA-IgG结合出现可见的凝集反应。结合出现可见的凝集反应。u此法简易快速。此法简易快速。u将已知白喉抗毒素和待检菌培养液分置将已知白喉抗毒素和待检菌培养液分置琼脂板两孔之中，电泳琼脂板两孔之中，电泳30min30min后后u若两孔
14、之间出现白色沉淀线，表明待检若两孔之间出现白色沉淀线，表明待检菌为产毒菌株菌为产毒菌株u此法比琼脂平板毒力试验敏感此法比琼脂平板毒力试验敏感1010100100倍，倍，适用于大批量标本的检测适用于大批量标本的检测(3)(3)对流电泳对流电泳：u采用家兔皮内试验法。采用家兔皮内试验法。u取待检菌的取待检菌的48h48h肉汤培养液肉汤培养液O.2mlO.2ml，注射在去毛的一，注射在去毛的一侧体壁皮内，侧体壁皮内，u5h5h后注射后注射500U500U白喉抗毒素血清，白喉抗毒素血清，u30min30min后再次注射同样的培养液于动物去毛的另一后再次注射同样的培养液于动物去毛的另一侧体壁皮内作为对照
15、。侧体壁皮内作为对照。u经经242472h72h后，若注射抗毒素后接种培养液的部位后，若注射抗毒素后接种培养液的部位不发生任何变化，而对照部位发生红肿与坏死，则不发生任何变化，而对照部位发生红肿与坏死，则说明待检菌株具有毒力。说明待检菌株具有毒力。u 致敏红细胞凝集试验，取待检者血致敏红细胞凝集试验，取待检者血清清0.1ml0.1ml在微量血凝板上作倍比稀释，在微量血凝板上作倍比稀释，然后滴加外毒素致敏血细胞。经振荡然后滴加外毒素致敏血细胞。经振荡后置后置3737 1 h 1 h 后观察结果，敏感度后观察结果，敏感度可达可达1010-4-4单位。单位。预防预防u人工主动免疫人工主动免疫：应用白
16、喉类毒素、百日咳疫苗和破伤风类毒：应用白喉类毒素、百日咳疫苗和破伤风类毒素混合制剂（简称素混合制剂（简称白百破三联疫苗白百破三联疫苗）u我国白喉的发病率从我国白喉的发病率从19491949年的年的23.1/1023.1/10万下降至万下降至19851985年的年的0.14/100.14/10万，万，应在出生后应在出生后3 3月初次接种，月初次接种，3434岁和岁和6 6岁各加强岁各加强1 1次。次。u人工被动免疫人工被动免疫：对密切接触过白喉病人的易感儿童，应肌肉：对密切接触过白喉病人的易感儿童，应肌肉注射注射白喉抗毒素白喉抗毒素1000300010003000单位作紧急预防。单位作紧急预防。
17、u药物预防药物预防：为避免用马血清制备的白喉抗毒素引起速发型：为避免用马血清制备的白喉抗毒素引起速发型 超敏反应，一般主张立即给密切接触且鼻咽部培养阳性者进超敏反应，一般主张立即给密切接触且鼻咽部培养阳性者进行药物预防，如注射行药物预防，如注射青霉素青霉素或口服或口服红霉素红霉素，而不轻易使用抗，而不轻易使用抗毒素。毒素。治疗治疗u白喉抗毒素-皮肤试验、早期使用u抗生素u在鼻腔、咽喉部、外耳道、眼结膜、外阴和皮肤等在鼻腔、咽喉部、外耳道、眼结膜、外阴和皮肤等处可见一些类似白喉棒状杆菌的细菌，统称为处可见一些类似白喉棒状杆菌的细菌，统称为类白类白喉棒状杆菌喉棒状杆菌。u一般无致病性或仅能引起混合
18、感染。近年来，由于一般无致病性或仅能引起混合感染。近年来，由于使用免疫抑制剂和现代化检查手段，如心导管术等，使用免疫抑制剂和现代化检查手段，如心导管术等，使这些条件致病菌可致医院内感染，引起组织和血使这些条件致病菌可致医院内感染，引起组织和血行感染，包括菌血症、心内膜炎、骨髓炎等。行感染，包括菌血症、心内膜炎、骨髓炎等。u 本群细菌形态与白喉棒状杆菌相似，本群细菌形态与白喉棒状杆菌相似，无无异染颗粒或不明显异染颗粒或不明显。u不分解尿素。不液化明胶。能分解葡萄糖、不分解尿素。不液化明胶。能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，不分解淀粉，触酶常阴性。麦芽糖、蔗糖，不分解淀粉，触酶常阴性。u对万古霉素敏感，
19、对头孢菌素类及氨基糖对万古霉素敏感，对头孢菌素类及氨基糖甙类抗生素也敏感。甙类抗生素也敏感。1.1.假白喉棒状杆菌寄居于人类鼻咽部。可引假白喉棒状杆菌寄居于人类鼻咽部。可引起心瓣膜修复术后的起心瓣膜修复术后的心内膜炎心内膜炎及肾移植病及肾移植病人致死性尿道感染。人致死性尿道感染。2.2.结膜干燥棒状杆菌为人类眼结膜、鼻咽部结膜干燥棒状杆菌为人类眼结膜、鼻咽部粘膜或皮肤的正常菌群，可引起心瓣膜置粘膜或皮肤的正常菌群，可引起心瓣膜置换术后的心内膜炎，也可引起外伤后深部换术后的心内膜炎，也可引起外伤后深部组织感染。组织感染。3.3.化脓棒状杆菌常可从牛、羊和猪的化脓棒状杆菌常可从牛、羊和猪的 化脓性
20、损伤中分离到，人类感染已化脓性损伤中分离到，人类感染已 有报告。有报告。4.4.溃疡棒状杆菌可引起渗出性咽炎或溃疡棒状杆菌可引起渗出性咽炎或 其他组织感染。其他组织感染。5.假结核棒状杆菌主要引起家畜的慢性假结核棒状杆菌主要引起家畜的慢性病，偶尔可引起人类的淋巴结炎、肺病，偶尔可引起人类的淋巴结炎、肺炎等疾病。炎等疾病。6.6.溶血棒状杆菌可引起咽炎和皮肤溃疡溶血棒状杆菌可引起咽炎和皮肤溃疡病。偶尔咽部感染很像门喉，包括粘病。偶尔咽部感染很像门喉，包括粘膜分泌物和扁桃体周围脓肿。膜分泌物和扁桃体周围脓肿。7.杰克群棒状杆菌为常见的医院内感染菌杰克群棒状杆菌为常见的医院内感染菌,是人是人类皮肤正常菌群。从血液、组织、脑脊液、类皮肤正常菌群。从血液、组织、脑脊液、腹腔液、泌尿生殖道和伤口感染等处分离培腹腔液、泌尿生殖道和伤口感染等处分离培养出的类白喉样菌群，统称养出的类白喉样菌群，统称J-KJ-K群。大多数感群。大多数感染发生于颗粒细胞缺乏症、心脏手术病人，染发生于颗粒细胞缺乏症、心脏手术病人，而且常与应用静脉导管有关。而且常与应用静脉导管有关。1.从疑是白喉的儿童患者，简叙白喉棒状杆菌的检验程序？
