1、5.1 DNA5.1 DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定 1 1、提取生物大分子的基本思路是什么？、提取生物大分子的基本思路是什么？ 2 2、DNADNA有哪些物理化学性质？有哪些物理化学性质？ 3 3、如何根据、如何根据DNADNA的理化性质来进行的理化性质来进行DNADNA的初的初 提取？提取？ 4 4、DNADNA鉴定的原理如何？鉴定的原理如何？ 5 5、DNADNA提取与鉴定的过程是怎样的？提取与鉴定的过程是怎样的？ 一、基础知识一、基础知识 （一）（一）DNADNA粗提取与鉴定的方法粗提取与鉴定的方法 （1 1）提取生物大分子的基本思路：）提取生物大分子的基本思路： 选用一定的物理或
2、化学方法，分离具有选用一定的物理或化学方法，分离具有 不同物理或化学性质的生物大分子不同物理或化学性质的生物大分子 1.1.提取提取DNADNA的基本思路的基本思路 （2 2）提取）提取DNADNA的基本思路的基本思路 利用利用DNA与与RNA、蛋白质和脂质等在、蛋白质和脂质等在 物理和化学性质方面的差异，物理和化学性质方面的差异，提取提取DNA， 去除其他成分。去除其他成分。 （1 1）DNADNA的溶解性的溶解性 NaClNaCl溶液中溶解度溶液中溶解度 DNADNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaClNaCl溶液中溶液中 溶解度不同溶解度不同，利用这一特点
3、利用这一特点，选择适当的盐浓度选择适当的盐浓度 就能使就能使DNADNA充分溶解充分溶解，而使杂质沉淀而使杂质沉淀，或者相反或者相反 2.DNA2.DNA的理化性质的理化性质 根据根据DNA在在NaCl溶液中的溶液中的 溶解度曲线图溶解度曲线图，思考在什么思考在什么 浓度下浓度下，DNA的溶解度最小的溶解度最小？ DNA在在NaCl溶液中的溶解度溶液中的溶解度 是如何变化的是如何变化的？ 在在NaCl溶液浓度低于溶液浓度低于0.14 mol/L时时，DNA的的 溶解度随溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；溶液浓度的增加而逐渐降低； 在在0.14 mol/L时时，DNA溶解度溶解度最小最小
4、；当；当NaCl 溶液浓度继续增加时溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐的溶解度又逐 渐增大渐增大。 如何通过控制如何通过控制NaCl溶溶 液的浓度使液的浓度使DNA在盐溶在盐溶 液中溶解或析出液中溶解或析出？ 当氯化钠的物质的量浓度为当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol L时时，DNA的溶解度最大的溶解度最大，浓度浓度 为为 014 molL时时，DNA的溶解的溶解 度最低度最低。利用这一原理利用这一原理，可以使可以使 DNA在盐溶液中溶解或析出在盐溶液中溶解或析出 DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液 DNA不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质 则溶于酒精，
5、将则溶于酒精，将DNA与蛋白质进一步分离与蛋白质进一步分离。 （2） DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶蛋白酶水解蛋白质，水解蛋白质，对对DNA没有影响没有影响 高高 温温大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受6080 而而DNA在在80以上才会变性以上才会变性 洗涤剂洗涤剂瓦解细胞膜，瓦解细胞膜，但对但对DNA没有影响没有影响 瓦解细胞膜（瓦解细胞膜（破坏膜中的蛋白质分子破坏膜中的蛋白质分子） 试剂：试剂： （二）（二）DNA的鉴定的鉴定 条件：条件： 二苯胺二苯胺（现配现用）（现配现用） 沸水浴条件下，沸水浴条件下， DNADNA与二苯胺反应呈现与二苯胺反
6、应呈现蓝色蓝色 沸水浴沸水浴 现象：现象： （一）实验材料的选取（一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液 （三）除去滤液中的杂质（三）除去滤液中的杂质( (纯化纯化) ) （四）（四）DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定 二、实验设计二、实验设计 . 实验原理实验原理 去掉滤液中的杂质：去掉滤液中的杂质：DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶溶液中的溶 解度解度。利用这一原理，可以使溶解在利用这一原理，可以使溶解在NaClNaCl溶液中溶液中 的的DNADNA析出。析出。 使使DNADNA从溶液中析出：从溶液中析出： DNADNA不溶于酒精
7、溶液，不溶于酒精溶液， 但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。利但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。利 用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的 DNADNA。 鉴定：鉴定：DNADNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色， 因此，二苯胺可以作为鉴定因此，二苯胺可以作为鉴定DNADNA的试剂。的试剂。 二、实验设计二、实验设计 （一）实验材料的选取（一）实验材料的选取 从下列材料中选取从下列材料中选取2 23 3种种 原则：原则： 菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜； 鱼卵、猪肝、鸡血、
8、哺乳动物的红细胞；鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞； 在液体培养基中培养的大肠杆菌在液体培养基中培养的大肠杆菌 凡是含有凡是含有DNADNA的生物材料都可以考虑的生物材料都可以考虑 选用选用DNADNA含量相对较高的组织含量相对较高的组织 最好选择最好选择：新鲜的鸡血，新鲜的鸡血，DNADNA含量丰富，材料易得，含量丰富，材料易得， 易吸水涨破易吸水涨破 思考：思考： 哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核和众多的细胞哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核和众多的细胞 器，不含器，不含DNA;大肠杆菌大肠杆菌DNA少，不能选少，不能选 . 动物细胞的破碎动物细胞的破碎比比较较容容易易，例如，在鸡血细胞例如，
9、在鸡血细胞 液中加入一定量的蒸馏水液中加入一定量的蒸馏水 ，同时用，同时用玻璃棒搅拌玻璃棒搅拌， 过滤后收集滤液即可过滤后收集滤液即可 （二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液 1 1、动物细胞、动物细胞 答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体， 水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂， 再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的 破裂破裂( (细胞膜和核膜的破裂细胞膜和核膜的破裂) )，从而释放出，从而释放出DNADNA 讨论：为什么加入蒸馏水
10、能使鸡血细胞破裂？讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？ . 植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解 细胞膜细胞膜 2 2、植物细胞、植物细胞 讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？讨论：加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜， 有利于有利于DNADNA的释放；食盐的主要成分是的释放；食盐的主要成分是NaClNaCl， 有利于有利于DNADNA的溶解的溶解 实例：提取洋葱实例：提取洋葱DNADNA时，在切碎的洋葱中加时，在切碎的洋葱中加 入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌
11、和研入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研 磨，过滤后收集研磨液磨，过滤后收集研磨液 . 答：研磨不充分会使细胞核内的答：研磨不充分会使细胞核内的DNADNA释放不完全，释放不完全， 提取的提取的DNADNA量变少，影响实验结果，导致看不到量变少，影响实验结果，导致看不到 丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等 讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样 的影响？的影响？ （三）去除滤液中的杂质（三）去除滤液中的杂质 为了纯化提取的为了纯化提取的DNADNA需要将滤液作进一步处理需要将滤液作进一步处理 讨论：此步骤获
12、得的滤液中可能含有哪些细胞讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞 成分？成分？ 答：可能含有核蛋白、多糖和答：可能含有核蛋白、多糖和RNARNA等杂质等杂质 . 讨论：为什么反复地溶解与析出讨论：为什么反复地溶解与析出DNADNA，能够去，能够去 除杂质除杂质 答：用高盐浓度的溶液溶解答：用高盐浓度的溶液溶解DNADNA，能除去在高，能除去在高 盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNADNA析出，析出， 能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反 复溶解与析出复溶解与析出DNADNA，就能够除去与，就能够除去与DNADN
13、A溶解度溶解度 不同的多种杂质不同的多种杂质 . . 讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？ 答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而 使提取的使提取的DNADNA与蛋白质分开；与蛋白质分开； 方案三利用的是方案三利用的是DNADNA和蛋白质对高温耐受性的和蛋白质对高温耐受性的 不同，从而使蛋白质变性，与不同，从而使蛋白质变性，与DNADNA分离分离 . （四）（四） DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定 DNADNA的析出用的是与滤液体积相等的的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒冷却的酒 精溶液（体积分数为精溶液（
14、体积分数为95 95 ） ，静臵，静臵2 23min3min， 溶液中会出现溶液中会出现白色丝状物，白色丝状物，这就是粗提取这就是粗提取DNADNA。 用玻璃棒沿用玻璃棒沿一个方向一个方向搅拌，卷起丝状物，并用搅拌，卷起丝状物，并用 滤纸吸取上面的水滤纸吸取上面的水 1 1、DNADNA的析出的析出 . . 答：答：抑制核酸水解酶的活性，防止抑制核酸水解酶的活性，防止DNADNA降解降解 降低降低DNADNA分子的运动，使分子的运动，使DNADNA易形成沉淀析出易形成沉淀析出 低温有利于增加低温有利于增加DNADNA分子的柔韧性，减少其断分子的柔韧性，减少其断 裂裂 讨论：讨论： 为什么要加为
15、什么要加50mL50mL的的冷酒精冷酒精？ 2. DNA的鉴定的鉴定 向两支试管中分别加入向两支试管中分别加入 2mol/L 2mol/L NaClNaCl 溶液溶液5ml5ml 其中一支试管中加入其中一支试管中加入DNADNA丝状物丝状物 各加入各加入二苯胺二苯胺试剂试剂4ml4ml 混匀后，置于沸水浴中加热混匀后，置于沸水浴中加热5min5min 待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化待冷却后，比较两只试管中溶液的颜色变化 观察现象：观察现象： 溶解丝状物的溶液变为溶解丝状物的溶液变为蓝色蓝色 . . 讨论：讨论： 答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试
16、管还是 原来颜色原来颜色 （2 2）这一鉴定结果说明什么问题？）这一鉴定结果说明什么问题？ （1 1）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？）比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？ 答：提取出的丝状物是答：提取出的丝状物是DNADNA （3 3） DNADNA的直径约为的直径约为20201010- -10 m10 m，实验中，实验中 出现的丝状物的粗细是否表示出现的丝状物的粗细是否表示1 1个个DNADNA分子直径分子直径 的大小？的大小？ 答：答： DNADNA分子直径只有分子直径只有2 nm2 nm。丝状物是多。丝状物是多 个个DNADNA子聚在一起形成的子聚在一起形成的 . （一）案例一：以
17、鸡血为实验材料进行（一）案例一：以鸡血为实验材料进行DNADNA的的 粗提取粗提取 三、实验案例三、实验案例 鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞鸡血细胞极易吸水胀破，而用动物肝脏细胞 作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求作实验材料常常需要匀浆和离心，对设备要求 较高，操作繁琐，历时较长较高，操作繁琐，历时较长 1 1、鸡血细胞做实验材料的原因、鸡血细胞做实验材料的原因 鸡血细胞核的鸡血细胞核的DNADNA含量丰富，材料易得含量丰富，材料易得 . 3 3、实验材料和用具：、实验材料和用具： 鸡血细胞液（鸡血细胞液（510ml510ml）；体积分数为）；体积分数为95%95%的冷的冷 酒精
18、溶液（实验前臵于冰箱内冷却酒精溶液（实验前臵于冰箱内冷却24h24h）；蒸馏）；蒸馏 水；质量浓度为水；质量浓度为0 0g/mlg/ml的柠檬酸纳溶液；务的柠檬酸纳溶液；务 质量的浓度分别为质量的浓度分别为2mol/L2mol/L和和0 0015mol/L015mol/L的氯的氯 化纳溶液；二苯胺试剂。铁架台；铁环；镊子；化纳溶液；二苯胺试剂。铁架台；铁环；镊子； 三角架；酒精灯；石棉网；载玻片；玻璃棒；滤三角架；酒精灯；石棉网；载玻片；玻璃棒；滤 纸；滴管；量筒（纸；滴管；量筒（100ml100ml，一个）；烧杯；，一个）；烧杯； （100ml100ml，一个，一个，50ml50ml、500
19、ml500ml各二个）；试各二个）；试 管（管（20ml20ml，二个）；漏斗；试管夹；纱布。，二个）；漏斗；试管夹；纱布。 . 4 4、课前准备鸡血细胞液、课前准备鸡血细胞液 取质量浓度为取质量浓度为0 01g/ml1g/ml的的柠檬酸纳溶液（抗凝柠檬酸纳溶液（抗凝 剂）剂）100ml100ml，臵于，臵于500ml500ml烧杯中。注入新鲜的烧杯中。注入新鲜的 鸡血（约鸡血（约180ml180ml），同时用玻璃棒搅拌，使血），同时用玻璃棒搅拌，使血 液与柠檬酸纳溶液充分混合，以免凝血。将烧液与柠檬酸纳溶液充分混合，以免凝血。将烧 杯中的血液臵于冰箱内，精臵一天，使血细胞杯中的血液臵于冰箱内
20、，精臵一天，使血细胞 自行沉淀。（也可以将血液倒入离心管内，用自行沉淀。（也可以将血液倒入离心管内，用 1000r/min1000r/min（转每分）的离心机离心（转每分）的离心机离心2min2min， 血细胞沉淀于离心管底部。实验时。血细胞沉淀于离心管底部。实验时。用吸管除用吸管除 去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞去离心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞 液。）液。） 过程过程 . 讨论：提取鸡血中的讨论：提取鸡血中的DNADNA时，为什么时，为什么除去血液除去血液 中的上清液？中的上清液？ 答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分答：血液分为两部分，一部分是血浆，一部分 是血细胞，
21、离心后除去的上清液是血浆是血细胞，离心后除去的上清液是血浆 5 5、方法步骤、方法步骤 将制备好的鸡血细胞液将制备好的鸡血细胞液5 mL5 mL10mL10mL，注入到，注入到 50 mL50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 mL20 mL， 同时用同时用玻璃棒玻璃棒充分搅拌充分搅拌5 min5 min，使血细胞加速使血细胞加速 破裂。破裂。然后，用放有然后，用放有纱布的漏斗纱布的漏斗将血细胞液过将血细胞液过 滤至滤至500mL500mL。取其滤液。取其滤液。 提取鸡血细胞的细胞核物质提取鸡血细胞的细胞核物质 . . 讨论：讨论： 答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓
22、度，细胞答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞 会吸水以至胀破会吸水以至胀破 （1 1）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞）为什么要加入蒸馏水？加入蒸馏水后细胞 会有什么变化？会有什么变化？ （2 2）用玻璃棒搅拌有什么意义？）用玻璃棒搅拌有什么意义？ 答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的 破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能 太快太猛，防止打碎太快太猛，防止打碎DNADNA （3 3）滤去的是什么物质？）滤去的是什么物质？得到的是什么？得到的是什么？ 答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；答：过滤将滤
23、去的是细胞膜和核膜等物质； 得到的是与蛋白质等物质结合在一起的得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNADNA . 溶解细胞核内的溶解细胞核内的DNADNA 将氯化钠的物质的量浓度为将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol2 mol的溶的溶40mL40mL 加入到滤液中，并用加入到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌玻璃棒沿一个方向搅拌 1min1min，使其混合均匀，这时，使其混合均匀，这时DNADNA在溶液中呈溶在溶液中呈溶 解状态解状态 沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停玻璃棒不停 地轻轻搅拌，地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观这时烧杯中有丝状物出现
24、，注意观 察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中 出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时 停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量 浓度相当于浓度相当于0.14 mol0.14 molL L） 析出含析出含DNADNA的粘稠物的粘稠物 . . 讨论：加入蒸馏水的目的？讨论：加入蒸馏水的目的？ 降低降低NaClNaCl溶液浓度到使溶液浓度到使DNADNA溶解度最低点，使溶解度最低点，使 DNADNA从从NaClNaCl溶液中析出溶液中析出 将溶液中的将溶液中的D
25、NADNA与其他杂质分离，这一步骤是与其他杂质分离，这一步骤是 实验成败的关键。实验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁加入蒸实验中应该缓慢贴壁加入蒸 馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌， 以利于以利于DNADNA分子的附着和缠绕分子的附着和缠绕 注意事项：注意事项： . 滤取含滤取含DNADNA的粘稠物的粘稠物 用放有用放有多层纱布多层纱布的漏斗，过滤步骤的漏斗，过滤步骤3 3中的溶液中的溶液 至至 500mL500mL的烧杯中，含的烧杯中，含 DNADNA的的粘稠物被留在粘稠物被留在 纱布上纱布上 将将DNADNA的粘稠物再溶解的粘稠物再溶解 取取 1
26、 1个个 50 mL50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物 质的量浓度为质的量浓度为 2 mol2 molL L的溶液的溶液 20mL20mL。用钝头。用钝头 镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻用玻 璃择不停地搅拌，璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶使粘稠物尽可能多地溶解于溶 液中液中 . . 过滤含有过滤含有DNADNA的氯化钠溶液的氯化钠溶液 取取1 1个个100 mL100 mL烧杯，用放有烧杯，用放有两层纱布两层纱布的漏斗的漏斗 过滤步骤过滤步骤5 5中的溶液。取其滤液，中的溶液。取其滤液，DNADNA溶
27、于溶于 滤液中滤液中 提取含杂质较少的提取含杂质较少的DNADNA 在上述滤过的溶液中，加入在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积冷却的、酒精的体积 分数为分数为 9595的溶液的溶液 50mL50mL（使用冷却的酒精，（使用冷却的酒精， 对对DNADNA的凝集效果较佳），并用的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，玻璃棒搅拌， 溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将 丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝 状物的主要成分就是状物的主要成分就是DNADNA . . 答：因为答：因为DNADNA不溶于冷酒精
28、，而其他物质可以不溶于冷酒精，而其他物质可以 溶解在酒精中，使含杂质较少的溶解在酒精中，使含杂质较少的DNADNA丝状物可丝状物可 以析出以析出, ,悬浮于溶液中悬浮于溶液中 讨论：讨论： （2 2）观察丝状物呈什么颜色？）观察丝状物呈什么颜色？ 答：白色答：白色 （1 1）为什么要加）为什么要加50mL50mL的冷酒精？的冷酒精？ . 取两支取两支20 mL20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量的试管，各加入氯化钠的物质的量 浓度为浓度为0 0015 mol015 molL L的溶液的溶液5 mL5 mL，将丝状物，将丝状物 放入其中一支试管中，放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，用玻璃棒搅
29、拌，使丝状物使丝状物 溶解。然后，向两支试管中各加入溶解。然后，向两支试管中各加入4mlL4mlL的二苯的二苯 胺试剂。混合均匀后，将试管臵于沸水中加热胺试剂。混合均匀后，将试管臵于沸水中加热 5 5 minmin，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中 溶液颜色的变化溶液颜色的变化 DNADNA的鉴定的鉴定 . . 答：整个实验共答：整个实验共“两次蒸馏水两次蒸馏水，三次过滤三次过滤，两两 次析出次析出，五五次搅拌次搅拌” 6 6、讨论：、讨论： 两次蒸馏水两次蒸馏水 第一次：第一次：细胞吸水胀破细胞吸水胀破 第一步第一步 第二次：使第二次：使 DNADN
30、A黏稠物析出黏稠物析出 第三步第三步 （1 1）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过）此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过 滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？滤，几次析出，几次搅拌？分别在哪一步？ 过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液 目的目的: :获得含核物质的滤液获得含核物质的滤液 过滤含粘稠物的过滤含粘稠物的0.140.14mol/LNaCl溶液溶液 目的目的: :获取纱布上的粘稠物获取纱布上的粘稠物 过滤溶解有过滤溶解有DNA的的2 2mol/LNaCl溶液溶液 目的目的: :得到含得到含DNA的滤液的滤液 本实验中有三次过滤本实验中有三次过滤 . 两次析出
31、两次析出 第一次：用第一次：用0.14 mol0.14 molL L 的的NaCINaCI 溶液含杂质多溶液含杂质多 第三步第三步 第二次：用冷却的第二次：用冷却的9595的酒精的酒精 第七步第七步 第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液 加速细胞的破裂加速细胞的破裂 第二次搅拌加第二次搅拌加2 2mol/LNaCl溶液的滤液溶液的滤液 使使DNA与溶液混合均匀与溶液混合均匀 第三次搅拌加蒸馏水至第三次搅拌加蒸馏水至0.140.14mol/LNaCl溶液溶液 稀释稀释NaCl溶液溶液, ,析出析出DNA 第四次搅拌放入第四次搅拌放入2 2mol/LNaCl溶液中纱布上的粘
32、稠物溶液中纱布上的粘稠物 使使DNADNA尽可能多的溶于溶液中尽可能多的溶于溶液中 第五次搅拌体积分数为第五次搅拌体积分数为95%95%的酒精的酒精 提取含杂质较少的提取含杂质较少的DNA 实验中有五次用玻璃棒搅拌实验中有五次用玻璃棒搅拌 . 观察你提取的观察你提取的DNADNA颜色，如果不是白色丝状物，颜色，如果不是白色丝状物， 说明说明DNADNA中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色 说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所 提取的提取的DNADNA含量低，或是实验操作中出现错误，含量低，或是实验操作中出现错误， 需要重新
33、制备需要重新制备 四、课题成果评价四、课题成果评价 （一）是否提取出了（一）是否提取出了DNADNA . 本实验提取的本实验提取的DNADNA粗制品有可能仍然含有核粗制品有可能仍然含有核 蛋白、多糖等杂质蛋白、多糖等杂质 （二）分析（二）分析DNADNA中的杂质中的杂质 （三）不同实验方法的比较（三）不同实验方法的比较 对于不同的实验方法，本课题可以采用分组的方对于不同的实验方法，本课题可以采用分组的方 法进行研究。首先选取不同的实验材料，其次同法进行研究。首先选取不同的实验材料，其次同 种材料还可以采用不同方法，从多方面比较实验种材料还可以采用不同方法，从多方面比较实验 结果，如结果，如DNADNA的纯度、的纯度、DNADNA的颜色、二苯胺显的颜色、二苯胺显 色的深浅等，看看哪种实验材料、哪种提取方法色的深浅等，看看哪种实验材料、哪种提取方法 的效果更好的效果更好
