1、溶血性贫血的实验室检查Laboratory diagnosis of hemolytic anemia南方医科大学第一临床医学院南方医科大学第一临床医学院实验诊断学教研室实验诊断学教研室熊石龙熊石龙本章提纲本章提纲一、溶血性贫血定义和分类一、溶血性贫血定义和分类二、溶血性贫血的确诊试验二、溶血性贫血的确诊试验三、溶血性贫血原因的实验室检查三、溶血性贫血原因的实验室检查贫血贫血 外周血中单位容积内红外周血中单位容积内红细胞计数、血红蛋白含量细胞计数、血红蛋白含量或红细胞比容（或红细胞比容（Hct）低于）低于正常下限。正常下限。症状症状:疲乏困倦；疲乏困倦；气促；心悸；食欲差，气促；心悸；食欲差，
2、腹帐、便秘；腹帐、便秘；头晕、眼花，嗜睡，头晕、眼花，嗜睡，精力不集中精力不集中体征：体征：皮肤黏膜苍白；皮肤黏膜苍白；黄疸；黄疸；肝脾肿大肝脾肿大 贫贫 血血v失血性贫血失血性贫血v缺铁性贫血缺铁性贫血v巨幼细胞性贫血巨幼细胞性贫血v再生障碍性贫血再生障碍性贫血v溶血性贫血溶血性贫血 溶血性贫血的分类溶血性贫血的分类根据红细胞破坏的场所：根据红细胞破坏的场所：血管内溶血血管内溶血：在血流中被破坏在血流中被破坏 获得性因素和酶缺陷获得性因素和酶缺陷 血管外溶血血管外溶血：在单核在单核-巨噬系统中被破坏巨噬系统中被破坏 膜缺陷、珠蛋白异常、膜缺陷、珠蛋白异常、脾功亢进脾功亢进 原位溶血原位溶血：
3、在骨髓中被破坏在骨髓中被破坏 巨幼细胞贫血、急性白血病巨幼细胞贫血、急性白血病 溶血性贫血的分类溶血性贫血的分类根据发生机制：根据发生机制：代表疾病膜酶血红蛋白红细胞内在缺陷遗传性球形红细胞增多症遗传性椭圆形红细胞增多症G6PD缺陷症PK缺陷症珠蛋白生成障碍性贫血异常血红蛋白病溶血性贫血的分类溶血性贫血的分类红细胞外在因素损伤免疫因素非免疫因素AIHAAIHA自体免疫溶血性贫血自体免疫溶血性贫血CASCAS冷凝集综合症冷凝集综合症PCHPCH阵发性冷性血红蛋白尿阵发性冷性血红蛋白尿 药物诱发的免疫性溶贫药物诱发的免疫性溶贫 新生儿同种免疫性溶贫新生儿同种免疫性溶贫溶血性输血反应溶血性输血反应
4、PNH PNH微血管病性溶血性贫血微血管病性溶血性贫血心源性溶血性贫血心源性溶血性贫血 行军性血红蛋白尿症行军性血红蛋白尿症 砷化物、硝基苯、苯肼、蛇毒等中毒砷化物、硝基苯、苯肼、蛇毒等中毒 溶血性链球菌、疟原虫、产气荚膜溶血性链球菌、疟原虫、产气荚膜杆菌等感染杆菌等感染溶血性贫血：溶血性贫血：各种原因使红细胞生存时间各种原因使红细胞生存时间缩短缩短，破坏破坏增多增多，骨髓造血，骨髓造血代偿不足代偿不足时发生的一类贫血时发生的一类贫血红细胞破坏增加红细胞破坏增加红细胞代偿性增加红细胞代偿性增加v溶血：溶血：红细胞非自然衰老而提前遭受破坏的过程。红细胞非自然衰老而提前遭受破坏的过程。v溶血性疾病
5、：溶血性疾病：发生溶血而骨髓能够代偿，未出现贫血。发生溶血而骨髓能够代偿，未出现贫血。v溶血性贫血：溶血性贫血：溶血程度超过造血代偿能力，出现贫血。溶血程度超过造血代偿能力，出现贫血。定义定义（一）显示红细胞破坏增加的依据（一）显示红细胞破坏增加的依据1 红细胞寿命缩短、破坏增加的检验红细胞寿命缩短、破坏增加的检验v红细胞寿命测定；红细胞寿命测定；v红细胞形态改变；红细胞形态改变；v血浆血浆LDH测定测定 2 血红蛋白代谢的检验血红蛋白代谢的检验v血浆游离血红蛋白测定血浆游离血红蛋白测定(40mg/L)；血管内溶血的指征血管内溶血的指征v血清结合珠蛋白测定血清结合珠蛋白测定(500-1500m
6、g/L)；肝脏合成的肝脏合成的2糖蛋白，运输游离血红蛋白糖蛋白，运输游离血红蛋白v血浆高铁血红素白蛋白试验；血浆高铁血红素白蛋白试验；不敏感，见于严重血管内溶血不敏感，见于严重血管内溶血 （二）显示红细胞代偿增生依据（二）显示红细胞代偿增生依据v外周血网织红增多；外周血网织红增多；v外周血红细胞形态：外周血红细胞形态：大小不均，大红细胞、嗜多色细胞及有核红细胞，大小不均，大红细胞、嗜多色细胞及有核红细胞，Howell-Jolly小体、小体、Cabot环、点彩红细胞等环、点彩红细胞等v增生性贫血骨髓象：增生性贫血骨髓象：增生明显活跃，红系显著增生，粒系相对减少，巨增生明显活跃，红系显著增生，粒系
7、相对减少，巨核系一般正常核系一般正常 （二）显示红细胞代偿增生依据（二）显示红细胞代偿增生依据v外周血红细胞形态：外周血红细胞形态：大小不均，大红细胞、嗜多色细胞及有核红细胞，大小不均，大红细胞、嗜多色细胞及有核红细胞，Howell-Jolly小体、小体、Cabot环、点彩红细胞等环、点彩红细胞等Howell-Jolly小体小体 Cabot环环 特特 点点 1.1.遗传性遗传性溶血性贫血常有贫血、黄疸、脾肿大的家族史溶血性贫血常有贫血、黄疸、脾肿大的家族史2.2.某些溶贫呈一定的地域性分布某些溶贫呈一定的地域性分布3.3.化学因素所致常和患者所从事的职业有关化学因素所致常和患者所从事的职业有关
8、4.4.多种药物都可致溶贫多种药物都可致溶贫5.5.长期反复贫血和黄疸见于遗传性溶贫，自身免疫性溶血长期反复贫血和黄疸见于遗传性溶贫，自身免疫性溶血 性贫血亦常表现为时重时轻性贫血亦常表现为时重时轻6.6.恶性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病和恶性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病和SLESLE易并发易并发AIHAAIHA，人工心脏瓣膜置换术后常易致继发性红细胞破碎综合征人工心脏瓣膜置换术后常易致继发性红细胞破碎综合征溶贫的实验室诊断溶贫的实验室诊断1.1.确定是否为溶血性贫血确定是否为溶血性贫血2.2.确定主要的溶血部位是血管内还是血管外确定主要的溶血部位是血管内还是血管外3.3.查找溶血原因，明确诊断查
9、找溶血原因，明确诊断Hb代谢示意图代谢示意图 珠蛋白珠蛋白 血红素血红素 铁铁+卟啉卟啉单核巨噬系统单核巨噬系统 脾脏脾脏血管外溶血血管外溶血RBC血管内溶血血管内溶血血浆游离血浆游离Hb肾脏肾脏血红蛋白尿血红蛋白尿游离胆红素游离胆红素肝脏肝脏结合珠蛋白结合珠蛋白近曲小管上皮细胞近曲小管上皮细胞肾阈肾阈结合胆红素结合胆红素粪胆原的肠肝循环粪胆原的肠肝循环含铁血黄素尿含铁血黄素尿 Rous 实验胆汁胆汁粪胆原粪胆原肠道肠道血液血液肾脏肾脏尿胆原尿胆原高铁血红蛋白高铁血红蛋白清蛋白清蛋白/血红素蛋白血红素蛋白 检查检查一溶血性贫血的筛查检测一溶血性贫血的筛查检测血浆游离血红蛋白测定血浆游离血红蛋白
10、测定 参考值参考值 0-40 mg/L 意义：意义：见于血管內溶血见于血管內溶血血清结合珠蛋白检测血清结合珠蛋白检测 参考值参考值 0.5-1.5g/L 意义：意义：见于血管內溶血及严重的血管外溶血见于血管內溶血及严重的血管外溶血血浆高铁血红素清蛋白检测血浆高铁血红素清蛋白检测正常结果：正常结果：阴性阴性意义：意义：阳性见于严重血管內溶血阳性见于严重血管內溶血含铁血黄素尿试验（含铁血黄素尿试验（Rous试验）试验）血红蛋白在肾小管上皮细胞代谢为血红蛋白在肾小管上皮细胞代谢为 含铁血黄素，脱落后铁染色法查出含铁血黄素，脱落后铁染色法查出 正常结果正常结果：阴性：阴性意义：意义：阳性见于慢性血管内
11、溶血阳性见于慢性血管内溶血红细胞寿命测定红细胞寿命测定 正常红细胞半衰期为天溶血性正常红细胞半衰期为天溶血性贫血時常天贫血時常天 溶血原因分析的有关检验溶血原因分析的有关检验一、红细胞膜缺陷的检验一、红细胞膜缺陷的检验二、红细胞内酶缺陷的检验二、红细胞内酶缺陷的检验三、珠蛋白合成异常的检验三、珠蛋白合成异常的检验四、自身免疫性溶血的检验四、自身免疫性溶血的检验五、阵发性睡眠性血红蛋白尿症有关检测五、阵发性睡眠性血红蛋白尿症有关检测一、红细胞膜缺陷的检测一、红细胞膜缺陷的检测（一）红细胞渗透脆性试验（一）红细胞渗透脆性试验（erythrocyte osmotic fragility test)目
12、的：目的：了解红细胞的渗透脆性（即抵抗力）了解红细胞的渗透脆性（即抵抗力）原理：原理：低渗溶液低渗溶液红细胞皱缩红细胞皱缩红细胞膨胀红细胞膨胀甚至破裂甚至破裂高渗溶液高渗溶液等渗溶液等渗溶液正常正常低渗溶液低渗溶液 红细胞对低渗溶液的抵抗能力红细胞对低渗溶液的抵抗能力 0.6-0.8%NaCl0.6-0.8%NaCl溶液溶液红细胞不破裂红细胞不破裂 0.42-0.45%NaCl0.42-0.45%NaCl溶液溶液部分红细胞破裂部分红细胞破裂 0.35-0.30%NaCl0.35-0.30%NaCl溶液溶液红细胞完全破裂红细胞完全破裂NaCl0.85%0.6%0.42%0.35%0.8%0.7%
13、对低渗溶液抵抗能力对低渗溶液抵抗能力减小减小即即RBCRBC渗透脆性渗透脆性增加增加v脆性增高：遗传球（椭）、脆性增高：遗传球（椭）、AIHA伴球形细胞增多（在伴球形细胞增多（在0.52或或0.72开始溶开始溶)。v脆性减低脆性减低:各型地中海贫血、缺铁性贫血、肝硬化及阻塞性各型地中海贫血、缺铁性贫血、肝硬化及阻塞性黄疸等。黄疸等。结果：结果：正常人开始溶血正常人开始溶血0.40.4%，完全，完全溶血溶血0.280.32%（患者与对照相差（患者与对照相差0.04%以以上即为阳性）上即为阳性）。（二）红细胞孵育渗透脆性试验（二）红细胞孵育渗透脆性试验（erythrocyte incubated
14、osmotic fragility test)原理：原理：红细胞在红细胞在37 C孵育过程中，葡萄糖消耗增加，孵育过程中，葡萄糖消耗增加，ATP贮贮备减少，钠泵受阻，钠离子在胞内聚集，备减少，钠泵受阻，钠离子在胞内聚集，红细胞膨胀破裂红细胞膨胀破裂参考值：参考值：未孵育未孵育 50%溶血溶血 4.00-4.45 g/L NaCl溶液溶液 37 C孵育孵育50%溶血溶血 4.65-5.90 g/L NaCl溶液溶液临床意义：临床意义：用于轻型遗传性球形细胞增多症、遗传性非球形细胞用于轻型遗传性球形细胞增多症、遗传性非球形细胞溶贫的诊断和鉴别诊断溶贫的诊断和鉴别诊断（三）（三）（autohemol
15、ysis and correction test)原理：原理：先天性非球形细胞溶血性贫血病人红细胞内酶缺陷，先天性非球形细胞溶血性贫血病人红细胞内酶缺陷，葡萄糖酵解障碍，生成葡萄糖酵解障碍，生成ATP不足，不能维持钠泵，导致溶不足，不能维持钠泵，导致溶血增强。加入葡萄糖或血增强。加入葡萄糖或ATP，观察溶血能否被纠正。，观察溶血能否被纠正。参考值：参考值：正常人红细胞孵育正常人红细胞孵育48h小时后，溶血度小时后，溶血度3.5%；加入葡萄糖或加入葡萄糖或ATP后明显纠正，溶血度后明显纠正，溶血度1%加等渗盐水加等渗盐水加葡萄糖加葡萄糖加加ATP正常正常2.0（0.24.0）0.3（0.10.6
16、）0.2（0.1-0.8）遗传性球形红细胞增多症遗传性球形红细胞增多症16.0（630）3.0（0.214）3.0（16）非球形细胞性贫血非球形细胞性贫血 I型型3.0（16）2.0（0.54.0）1.0（0.4-2.0）II型型13.0（844）15（448）1.0（0.2-2.0）I型：型：G6PD缺乏症；缺乏症；II 型：丙酮酸激酶缺陷症型：丙酮酸激酶缺陷症二、红细胞酶缺陷的检测二、红细胞酶缺陷的检测 葡萄糖葡萄糖6 6磷酸脱氢酶缺乏症磷酸脱氢酶缺乏症 蚕豆病：蚕豆病：患者多为儿童，在每年患者多为儿童，在每年3-53-5月蚕豆成熟季节月蚕豆成熟季节发病。起病急，在食新鲜蚕豆几小时至几天突
17、然发作。发病。起病急，在食新鲜蚕豆几小时至几天突然发作。表现为急性溶血伴有血红蛋白尿，治疗以输血、防治表现为急性溶血伴有血红蛋白尿，治疗以输血、防治急性肾功能衰竭及肾上腺皮质激素为主。急性肾功能衰竭及肾上腺皮质激素为主。(一一)高铁血红蛋白还原试验高铁血红蛋白还原试验 正常时亚铁正常时亚铁Hb 经亚硝酸盐氧化成高铁经亚硝酸盐氧化成高铁Hb，当红细胞内，当红细胞内G6-PD含量正常时，含量正常时，Hb Fe+可以还原为可以还原为Fe+(红色红色)；G6-PD缺乏缺乏时，时，Hb Fe+则不能还原为则不能还原为Fe+(褐色褐色)，通过颜色变化来间，通过颜色变化来间接测知接测知G6-PD含量是否缺乏
18、。含量是否缺乏。目的：目的：该试验用来了解该试验用来了解G-6PD活性，是一种间接的方法。活性，是一种间接的方法。红细胞对红细胞对Glu的代谢有的代谢有2个途径个途径1、无氧糖酵解、无氧糖酵解(90%)2、戊糖旁路途径、戊糖旁路途径(5-10%)原理：原理：G6PD高铁高铁Hb还原酶还原酶G6PG6-PANADPNADPH还原型美兰还原型美兰氧化型美兰氧化型美兰高铁高铁Hb（Fe3+）为褐色）为褐色氧合氧合HB（Fe2+）红色）红色结果：结果：光电比色法光电比色法，正常还原率，正常还原率75%，低于，低于75%为异常，为异常，提示提示G6PD活力活力，74 31%为为G-6PD缺乏的杂合子（红
19、棕缺乏的杂合子（红棕色），色），30%以下为显著缺陷的纯合子（为棕色以下为显著缺陷的纯合子（为棕色 目测比色法）。目测比色法）。（二）氰化物（二）氰化物-抗坏血酸盐试验抗坏血酸盐试验原理原理:6-磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖 NADP GSH H202 氧合血红蛋白氧合血红蛋白 6-磷酸葡萄糖酸磷酸葡萄糖酸 NADPH GSSG H20 高铁血红蛋白高铁血红蛋白结果结果:正常人标本呈红色正常人标本呈红色临床意义临床意义:1.纯合子纯合子G6PD缺乏经缺乏经1-3h温育后温育后,变为棕色变为棕色 2.杂合子标本杂合子标本3-4h变成棕红色变成棕红色G-6PD（三）变性珠蛋白小体生成试验（三）变性珠蛋白小
20、体生成试验v又称又称“红细胞包涵体红细胞包涵体”、“赫恩小体赫恩小体”、“Heinz小体小体”、“海因小体海因小体”v原理原理：G-6PD缺乏及不稳定缺乏及不稳定Hb病患者病患者 Hb易被易被氧化，其珠蛋白变性沉着于红细胞膜上。氧化，其珠蛋白变性沉着于红细胞膜上。抗凝血+乙酰苯肼37温育24h充分的氧化其Hb氧化成Heinz小体（用结晶紫、甲紫或煌焦油兰染色，油镜观察）v1.正常人正常人 30%v2.G6P缺陷症缺陷症、不稳定、不稳定Hb、HbH病等常高于病等常高于45%结果：结果：该小体为圆形或多角形该小体为圆形或多角形色涵体，色涵体，0.22um。多位于红细多位于红细胞边缘，一个红细胞含胞
21、边缘，一个红细胞含120个，个，多为多为12个，以含个，以含5个以上小体的个以上小体的红细胞计数红细胞计数（四）（四）G6PD荧光斑点试验和活性测定荧光斑点试验和活性测定原理原理:G6PD 使使NADP还原成还原成NADPH,后者在紫外线后者在紫外线照射下发出荧光照射下发出荧光 参考值：参考值：正常人强荧光；正常人强荧光；酶活性酶活性 5 U/gHb 6-磷酸葡萄糖磷酸葡萄糖 NADP GSH H202 氧合血红蛋白氧合血红蛋白 6-磷酸葡萄糖酸磷酸葡萄糖酸 NADPH GSSG H20 高铁血红蛋白高铁血红蛋白G-6PD三、珠蛋白合成异常的检测三、珠蛋白合成异常的检测v血红蛋白的结构血红蛋白
22、的结构 原卟啉原卟啉 血红素血红素HbHb（四聚体）（四聚体）铁铁 2 2条条链链 珠蛋白：由珠蛋白：由4 4条多肽链组成条多肽链组成 2 2条非条非链链正常人正常人 HbA（2 2）97%HbA2（2 2）1.5-3%HbF（2 2）0.5-0.8%血红蛋白病血红蛋白病珠蛋白肽链量的不正常珠蛋白肽链量的不正常(地中海贫血地中海贫血)血红蛋白分子结构异常血红蛋白分子结构异常(异常血红蛋白病异常血红蛋白病)遗传性溶血性疾病遗传性溶血性疾病 (一一)血红蛋白电泳血红蛋白电泳蛋白质的两性性质蛋白质的两性性质是由氨基酸的是由氨基酸的NH+与与COO-决定的。决定的。等电点等电点调节水溶液的调节水溶液的
23、pH，能使蛋白质的，能使蛋白质的NH+与与COO-数目相等呈电中性，数目相等呈电中性，此时蛋白质无电泳，在水中电解度小，并发生沉淀。此时蛋白质无电泳，在水中电解度小，并发生沉淀。电泳：电泳：一个带电荷的离子或胶体颗粒在电场中可向一极移动。一个带电荷的离子或胶体颗粒在电场中可向一极移动。原理：原理：在一定的在一定的pH缓冲液中，缓冲液的缓冲液中，缓冲液的pH大于大于Hb等电点，其带负电，在等电点，其带负电，在电场中向阳极移动；反之向阴极移动。电场中向阳极移动；反之向阴极移动。由于各种由于各种Hb珠蛋白肽链结构不同，其珠蛋白肽链结构不同，其等电点不同，电泳方向和速度亦不同，故可分离出不同的区带，对
24、区带进行电等电点不同，电泳方向和速度亦不同，故可分离出不同的区带，对区带进行电泳扫描，可进行泳扫描，可进行Hb定量分析。定量分析。(+)H J K A G D E (-)1.HbH增多是增多是HbH病，为病，为-地中海贫血的一种；地中海贫血的一种；HbA2明显增明显增高见于轻型高见于轻型地中海贫血；地中海贫血；HbF 明显增高见于中重型明显增高见于中重型地中海地中海贫血。贫血。2.正常值：醋纤法（正常值：醋纤法（PH8.6）HbA 96%98%，HbA2 1.0%3.1%，HbF2%电电 泳泳 结结 果果CAA2FA异常异常正常正常（二）（二）HbF（2 2）酸洗脱试验：）酸洗脱试验：含含Hb
25、F红细胞着色红细胞着色（三）（三）HbF定量测定（碱变性试验）定量测定（碱变性试验）:2岁岁-成人成人 HbF4%为异常，为异常，重型重型 地贫地贫30-90%，遗传性胎儿血红蛋白持续存在综合症遗传性胎儿血红蛋白持续存在综合症100%（四）（四）HbA2定量测定定量测定 诊断轻型诊断轻型 地贫的重要依据地贫的重要依据（五）限制性内切酶谱分析（五）限制性内切酶谱分析四、四、自身免疫性溶血性贫血检验自身免疫性溶血性贫血检验自身免疫性溶血性贫血自身免疫性溶血性贫血 （autoimmune hemolytic anemia,AIHA)1.1.病因：病因：抗红细胞自身抗体的产生机制尚未阐明，有以抗红细胞
26、自身抗体的产生机制尚未阐明，有以下的解释：病毒感染可激活多克隆下的解释：病毒感染可激活多克隆B B细胞或化学物与红细胞或化学物与红细胞膜相结合，改变其抗原性，导致自身抗体产生细胞膜相结合，改变其抗原性，导致自身抗体产生2.2.分类：分类：本本病可为原发性的，也可继发于结缔组织病、造血系统病可为原发性的，也可继发于结缔组织病、造血系统肿瘤、感染等。肿瘤、感染等。按抗体反应最适温度分为温抗体型和冷抗体型，后者按抗体反应最适温度分为温抗体型和冷抗体型，后者又分为冷凝集素综合征和阵发性冷性血红蛋白尿又分为冷凝集素综合征和阵发性冷性血红蛋白尿（一）（一）Coombs试验（抗人球蛋白试验）试验（抗人球蛋白
27、试验）原理：原理：不完全抗体不完全抗体(IgG)，无法架接两个邻近的红细胞，而只，无法架接两个邻近的红细胞，而只能和一个红细胞抗原相结合。能和一个红细胞抗原相结合。抗人球蛋白抗体是完全抗体抗人球蛋白抗体是完全抗体,可与多个不完全抗体的可与多个不完全抗体的Fc段相结合段相结合,导致红细胞凝集现象导致红细胞凝集现象,称为抗人球蛋白试验阳性。称为抗人球蛋白试验阳性。目的：目的：检查红细胞表面的或血清中游离的不完全检查红细胞表面的或血清中游离的不完全 抗体，用于诊断抗体，用于诊断AIHA。v直接直接Coombs Test(+)说明病人说明病人RBC表面上包被有不完全抗体表面上包被有不完全抗体v间接间接
28、Coombs Test(+)则说明病人血清中存在着不完全抗体则说明病人血清中存在着不完全抗体Coombs血血清清（抗（抗人球蛋白人球蛋白血血清清）（一）直接试验（一）直接试验正常人：阴性正常人：阴性直接反应阳性，最常见于直接反应阳性，最常见于AIHA（其他有药物诱（其他有药物诱发的溶贫、阵发性冷性发的溶贫、阵发性冷性Hb尿、新生儿同种免疫溶尿、新生儿同种免疫溶血病、血病、SLE、类风湿关节炎、恶性淋巴瘤等）。、类风湿关节炎、恶性淋巴瘤等）。目的：目的：测定吸附于红细胞表面的不完全抗体测定吸附于红细胞表面的不完全抗体方法：方法：结果：结果：（二）间接试验（二）间接试验有过剩抗体时直接、间接均为阳
29、性。有过剩抗体时直接、间接均为阳性。AIHA分三型：分三型：C3型型12%，IgG型型24%，IgG+C3型型60%。冷凝集素病为冷凝集素病为IgM抗体。抗体。目的：目的：测定血清中游离的不完全抗体测定血清中游离的不完全抗体方法方法：结果：结果：间接阳性，见于间接阳性，见于AIHA，正常人为阴性，正常人为阴性。病人血清正常RBC抗 IgG(二二)冷凝集素试验冷凝集素试验：冷凝集素是一种可逆性抗体，在低温冷凝集素是一种可逆性抗体，在低温时可与自身红细胞、时可与自身红细胞、“O”型红细胞或患者型红细胞或患者同型红细胞发生凝集，当温度增高时，凝同型红细胞发生凝集，当温度增高时，凝集块又消失集块又消失
30、参考值：参考值：效价效价 1 40，反应最适温度，反应最适温度4 C临床意义：临床意义：阳性见于冷凝集素综合症阳性见于冷凝集素综合症(三三)冷热双相溶血试验冷热双相溶血试验 阵发性寒冷性血红蛋白尿症（阵发性寒冷性血红蛋白尿症（PCH）患者的）患者的血清中有双相溶血素，在血清中有双相溶血素，在0-4 C时，溶血素与红时，溶血素与红细胞结合，并吸附补体，但不溶血；当升温至细胞结合，并吸附补体，但不溶血；当升温至30-37 C则发生溶血则发生溶血参考值：参考值：阴性阴性临床意义：临床意义：阳性见于阵发性寒冷性血红蛋白尿患者阳性见于阵发性寒冷性血红蛋白尿患者五、阵发性睡眠性血红蛋白尿五、阵发性睡眠性血
31、红蛋白尿1.1.病因病因:红细胞膜缺陷引起的慢性血管内溶血红细胞膜缺陷引起的慢性血管内溶血 睡眠时加重睡眠时加重 发作性血红蛋白尿发作性血红蛋白尿 全血细胞减少症全血细胞减少症阵发性睡眠性血红蛋白尿阵发性睡眠性血红蛋白尿 (paroxysmal nocturnal hemoglobinuria,PNH)（一）（一）Ham试验（酸化溶血试验）试验（酸化溶血试验）（acid hemolysis test,Hams test)PNH是造血干细胞水平发生了突变，导致红细胞膜出现是造血干细胞水平发生了突变，导致红细胞膜出现获得性缺陷，影响了膜的结构，使之对正常血清中的补体敏感获得性缺陷，影响了膜的结构，
32、使之对正常血清中的补体敏感而发生溶血，特异性高，是国内外公认的而发生溶血，特异性高，是国内外公认的PNH确诊试验确诊试验。目的：目的：了解有无了解有无PNH补体敏感红细胞补体敏感红细胞原理：原理：PNH补体敏感红细胞可被正常人新鲜血清所溶解，但补体敏感红细胞可被正常人新鲜血清所溶解，但在酸性条件下（在酸性条件下（PH6.46.5）更为显著。）更为显著。要有补体存在要有补体存在 有酸性环境有酸性环境这个试验关键有两点这个试验关键有两点（二）蔗糖溶血试验（二）蔗糖溶血试验（sucrose hemolysis test)原理：原理：蔗糖溶液加强补体与红细胞结合，导致溶血增强。蔗糖溶液加强补体与红细胞
33、结合，导致溶血增强。临床意义：临床意义：敏感性最高，特异性差。是敏感性最高，特异性差。是PNH的的筛选试验筛选试验。阴性常可。阴性常可排除排除PNH，阳性需再做，阳性需再做Ham 试验。阳性率试验。阳性率90-91%。（三）蛇毒因子溶血试验（三）蛇毒因子溶血试验原理：原理：蛇毒因子直接激活补体蛇毒因子直接激活补体C3，旁路途径激活补体系统，旁路途径激活补体系统，攻击攻击PNH病人红细胞。病人红细胞。临床意义：临床意义：是特异性是特异性PNH试验，敏感性优于试验，敏感性优于Ham试验试验 常用的溶血性贫血病因实验检查项目常用的溶血性贫血病因实验检查项目项目项目结果结果常见疾病常见疾病红细胞脆性试
34、验红细胞脆性试验增高增高遗传性球形红细胞增多症遗传性球形红细胞增多症抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验阳性阳性自身免疫性溶血性贫血；药物免疫性自身免疫性溶血性贫血；药物免疫性溶血性贫血；新生儿同种免疫容血病；溶血性贫血；新生儿同种免疫容血病；冷凝集素综合症冷凝集素综合症酸溶血试验酸溶血试验阳性阳性PNH（确诊试验）（确诊试验）蔗糖溶血试验蔗糖溶血试验阳性阳性PNH（筛选试验）（筛选试验）高铁血红蛋白还原试验高铁血红蛋白还原试验还原率减低还原率减低G6PD缺乏症缺乏症血红蛋白电泳血红蛋白电泳异常异常用于检查用于检查HbC、HbBartS等等项目项目结果结果常见疾病常见疾病HbA2增高增高 地贫地贫HbF增高增高 地贫地贫冷热溶血试验冷热溶血试验阳性阳性PCH 病病练习题练习题诊断溶血性疾病的必需条件是诊断溶血性疾病的必需条件是vA 红细胞寿命缩短，破坏增加红细胞寿命缩短，破坏增加vB 贫血贫血vC 网织红细胞增多网织红细胞增多vD Ham试验阳性试验阳性vE Coombs试验阳性试验阳性THANK YOUTHANK YOU !THANK YOUTHANK YOU !
