1、2019 年年生物技术制药生物技术制药作业题作业题资料附答案资料附答案 1. 什么是 cDNA 文库？ 以 mRNA 为模板，经反转录酶催化，在体外反转录成 cDNA，与适当的载体（常用噬菌 体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段 cDNA，并能繁殖扩增，这样包含 着细胞全部 mRNA 信息的 cDNA 克隆集合称为该组织细胞的 cDNA 文库。 2. 构建 cDNA 文库的基本步骤？ 1、mRNA 的纯化：2、cDNA 第一链的合成；3、cDNA 第二链的合成；4、cDNA 的克隆； 5、将重组体导入宿主细胞；6、cDNA 文库的鉴定：抗性基因失活法、噬菌斑颜色改变法 3. 基因
2、工程药物制药的主要程序有哪些？ 1、目的基因的克隆 2、构建 DAN 重组体 3、DAN 重组体转入宿主菌 4、 构建工程菌 5、工程菌发酵 6、表达产物的分离纯化 7、产品的检验等 4. 什么是生物技术制药？ 采用现代生物技术,借助某些微生物、植物、动物生产医药品，叫作生物技术制药。 5. 举例生物技术药物，6 例 干扰素、白细胞介素、粒细胞集落刺激因子、红细胞生成素、胰岛素、乙肝疫苗 6. 新型生物反应器有哪些？ 新型生物反应器有: 1.气升式生物反应器2.流化床式生物反应器3.固定床式生物反应器 4.袋式或膜式生物反应器5.中空纤维生物反应器 7. 生物技术药物按照医学用途有哪些分类？
3、按照医学用途分类： 1.治疗药物 2.诊断药物3.预防药物 8. 生物技术药物的特性有哪些？ 1.分子结构复杂 2.具有种属特异性3.治疗针对性强，疗效高4.稳定性差 5.基因稳定性 6.免疫原性 7.体内 t1/2 短8.受体效应9.多效性和网络性效应 10.检验的特殊性 9. 适合目的基因表达的宿主细胞应满足哪些要求？ 1、容易获得较高浓度的细胞；2、能利用易得廉价原料；3、不致病、不产生内毒素； 4、 发热量低、需氧低、适当的发酵温度和细胞形态；5、容易进行代谢调控； 5、 容易进行 DNA 重组技术操作；7、产物的产量、产率高，产物容易提取纯化 10. 宿主细胞分为哪两大类？ 第一类为
4、原核细胞：常用有大肠杆菌、枯草芽胞杆菌、链霉菌等； 第二类为真核细胞：常用有酵母、丝状真菌、哺乳动物细胞等。 11. 大肠杆菌作为宿主细胞表达基因产物的优缺点？ 优点： 1大肠杆菌生长迅速，分子遗传学研究深入，目前是基因工程研究中采用最多的原核 表达体系。 2表达基因产物形式多样：细胞内不溶性表达(包含体)、细胞内可溶性表达、细胞周 质表达等。 3大肠杆菌中的表达不存在信号肽，产品多为胞内产物，提取困难。 缺点： 4因分泌能力不足，真核蛋白质常形成不溶性的包含体，表达产物需经变性、复性才 恢复活性。 5蛋白质不能糖基化。 6产物蛋白质 N 端多余一个蛋氨酸（甲硫氨酸）残基。 7其内毒素很难除去
5、。 12. 酵母菌作为宿主细胞表达基因产物的优缺点？ 优点：分泌能力强，能正确进行翻译后加工（肽剪切糖基化）有成熟的发酵和后处理工艺。 缺点： 13. 哺乳动物细胞作为宿主细胞表达基因产物的优缺点？ 优点：表达产物可由重组转化细胞分泌到培养液中，纯化容易。产物是糖基化的接近天然物。 缺点：生长慢，生产率低，培养条件苛刻，费用高，培养液浓度稀。 14. 影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素？ 外源基因表达产量与细胞浓度和单个细胞表达产量呈正相关。单个细胞产量取决于： 外源基因的拷贝数 外源基因的表达效率 启动子的强弱 核糖体接合位点的有效性 SD 序列和起始密码 ATG 的间距 密码子组成 表达产
6、物的稳定性 细胞代谢负荷 工程菌的培养条件 15. 动物细胞来源的药物的种类有哪些？ 动物细胞多肽与蛋白质类药物 多肽药物 多肽激素 多肽类细胞因子 蛋白质类药物 动物酶与辅酶类药物 促消化酶类 消炎酶类 治疗心脑血管类疾病的相关酶 抗肿瘤的酶 与电子传递有关的治疗酶 其它药用酶 动物辅酶类药物 动物核酸类药物 动物糖类药物：粘多糖类：甲壳素、硫酸软骨素、肝素、透明质酸 动物脂类药物 16 动物细胞生产药物的特点有哪些？ 1哺乳动物细胞外源基因表达产物可由重组转化的细胞分泌到培养液中，使产物易纯 化。 2基因产物糖基化接近天然产物。 17 基因载体导入动物细胞的常用方法有哪些？ 18. 杆状病
7、毒载体的优点？ 双链 DNA，易重组 插入 78kb DNA 不影响正常病毒粒子的形成。 多角体蛋白和病毒粒子的形成无直接关系，因此用外源基因更换多角体蛋白基因，仍 能形成有感染力病毒粒子； 多角体蛋白基因有非常强的启动子，产生的蛋白质可占全部蛋白质的 20%30%； 用光学显微镜可看到多角体，可以此作为标记物，选阳性克隆。 如用家蚕杆状病毒，还可在蚕体表达外源基因 19 什么是抗体，抗体是怎样产生的？ （1）抗体是指能与相应抗原特异性结合具有免疫功能的球蛋白。 （2）抗体的产生：机体免疫系统受抗原刺激后，B 淋巴细胞被活化增殖和分化为浆细胞，由 浆细胞合成和分泌的球蛋白。 20 什么是单克隆
8、抗体（monoclonal antibody，McAb） 针对一个抗原决定簇，由单一的 B 淋巴细胞克隆产生，具有高度特异性、均一性、来源 稳定、可大量生产等特点的抗体。 21 怎样制备单克隆抗体（McAb） 在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏 B 细胞和具有无限繁殖能 力的骨髓瘤细胞融合为 B 细胞杂交瘤。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可 制备针对一种抗原表位的特异性抗体即单克隆抗体。 22基因工程菌的遗传不稳定性的两种主要表现形式是什么？基因工程菌的遗传不稳定性的主 要机制是什么？ 分裂不稳定：指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒子代菌的现象。 结构不稳定：
9、指外源基因从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性能的改变。 含质粒菌产生不含质粒子代菌的频率（质粒丢失率）； 这两种菌（含质粒菌和不含质粒菌）比生长速率差异的大小。 23 动物细胞大规模培养的方法有哪些？各自的特点是什么？ 1.悬浮培养:让细胞自由的悬浮于培养基内生长繁殖。 2.贴壁培养:让细胞贴附在某种基质上生长繁殖的培养方法。 3.贴壁-悬浮培养（假悬浮培养） 24. 改造后的鼠源性单克隆小分子抗体的类型及结构特点？ 基因工程小分子抗体仅表达鼠源单抗的 V 区片段，相对分子量为原抗体的 1/801/3。即保留 CDR 区，而 Ig 分子中的 C 区不表达。 小分子抗体类型有： Fab 片段抗体 Fv 抗体（抗体可变区片段） 单链抗体（scFv） 单域抗体 分子识别单位（MRU） 25. 阐述对鼠源性单克隆抗体进行改造的目的是什么？ 鼠源性单克隆抗体，应用人体时会产生人抗鼠抗体及毒副作用。通过 DNA 水平对对鼠源性 的 Ig 基因进行切割、拼接或修饰的改造，可以降低免疫源性；降低相对分子量。更符合人类 的需求。
