1、CONTENTSCONTENTS目目 录录1无菌技术2培 养 基 的 制 备3 微 生 物 的 纯 培 养1.2.1微生物的基本培养技术下表是关于对四种生物能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述，其中正确的一组是（ ）代表生物 衣藻硝化细菌乳酸菌根瘤菌代谢类型自养型自养型异养型异养型碳源CO2CO2糖类糖类能源利用光能利用化学能分解乳酸固定N2氮源 NO3NH3N2N2A硝化细菌与乳酸菌 B乳酸菌与根瘤菌C根瘤菌与衣藻 D硝化细菌与衣藻培养基碳源碳源（提供（提供C）、）、氮源氮源（提供（提供N）、）、无机无机盐盐、水水基本成分：基本成分：个性需求个性需求：pH、特殊营养特殊营养物质（生长因子，物
2、质（生长因子，如如维生素维生素等）、等）、O2等等乳酸菌-加入维生素细菌-pH调至中性或碱性霉菌-pH调至酸性碳源碳源 异养型：异养型：自养型：自养型：含碳有机物（有机碳）含碳无机物（CO2）糖类（主要）、糖类（主要）、蛋白质蛋白质、脂肪酸脂肪酸作用：作用：构成细胞物质和一些代谢产物；构成细胞物质和一些代谢产物；异养微生物的异养微生物的能源能源凡是能为微生物提供凡是能为微生物提供碳元素碳元素的营养物质的营养物质无机氮源：无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等等。主要是有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等。主要是有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等。凡是能够为微生物提供凡是能够为微
3、生物提供N N元素元素的营养物质。的营养物质。氮源异养型：异养型：自养型：自养型：下表是关于对四种生物能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述，其中正确的一组是（ ）代表生物 衣藻硝化细菌乳酸菌根瘤菌代谢类型自养型自养型异养型异养型碳源CO2CO2糖类糖类能源利用光能利用化学能分解乳酸固定N2氮源 NO3NH3N2N2A硝化细菌与乳酸菌 B乳酸菌与根瘤菌C根瘤菌与衣藻 D硝化细菌与衣藻D利用化学能NH4+利用化学能自养型CO2异养型糖类等含碳有机物利用化学能分类依据分类依据种类种类特点特点应用应用物理性质物理性质液体培养基液体培养基不加凝固剂不加凝固剂工业生产工业生产固体培养基固体培养基加凝固剂（
4、加凝固剂（琼脂琼脂）微生物的分离、鉴定、微生物的分离、鉴定、活菌计数、保藏活菌计数、保藏化学成分化学成分天然培养基天然培养基 含化学成分不明的天然物质含化学成分不明的天然物质合成培养基合成培养基培养基成分明确或培养基成分明确或用一定化学物质配制用一定化学物质配制用途用途选择培养基选择培养基添加某物质添加某物质，抑制杂菌生长，抑制杂菌生长，促进所需微生物生长促进所需微生物生长培养培养分离出特定微生分离出特定微生物物鉴别培养基鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在根据微生物的代谢特点，在培养基中培养基中加入某种指示剂加入某种指示剂或或化学药品化学药品鉴别微生物鉴别微生物培养基的分类如何获得纯净的微生物
5、培养物避免杂菌污染无菌技术（前提，基本保障）目的：目的： （1）防止培养物被污染（2）防止感染实验操作者消毒消毒灭菌灭菌定义常用方法用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）使用强烈理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，而达到完全无菌之过程煮沸消毒法巴氏消毒法化学药剂消毒法灼烧灭菌法高压蒸汽灭菌法干热灭菌法无 菌 技 术煮沸消毒巴氏消毒100煮沸5-6min70-75 30min / 8015min紫外线消毒化学药剂消毒酒精、氯气等消毒剂紫外线照射30min化学药剂消毒消毒灭菌煮沸消毒巴氏消毒化学药剂消毒紫外线消毒100煮沸5-6mi
6、n70-7530min/8015min酒精、氯气等紫外线照射30min无 菌 技 术玻璃仪器、棉织品牛奶手、水源（外植体）实验室/操作台/衣物等灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌外焰灼烧接种环、涂布器、瓶口160-170加热1-2h玻璃仪器、金属用具121 100kPa 15-30mins 培养基/玻璃仪器/棉塞操作步骤操作步骤操作要领操作要领加水加水将内层灭菌桶取出，向外层锅内加水，水面与三角形搁架平齐将内层灭菌桶取出，向外层锅内加水，水面与三角形搁架平齐装锅装锅将灭菌物品放在灭菌桶中将灭菌物品放在灭菌桶中( (不要装得太满不要装得太满) )，加盖，对称固定螺栓，加盖，对称固定螺栓加热排气加热排气
7、加热加热灭菌锅，灭菌锅，打开排气阀，等冷空气完全排尽后，关闭排气阀打开排气阀，等冷空气完全排尽后，关闭排气阀保温保压保温保压100 kPa、121 下，保温保压下，保温保压1530 min出锅出锅 1.关闭电源关闭电源 2. 2.压力表降至压力表降至“0”0”点，点，（温度下降）（温度下降）打开排气阀打开排气阀， 3.旋开固定螺栓，取出灭菌物品旋开固定螺栓，取出灭菌物品高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法 （最常用）：培养基、玻璃器皿、工作服等1212 1.（2018江苏扬州模拟，2分）微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染。请分析下列操作中错误
8、的是（ ）煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢 接种操作要在酒精灯火焰附近进行 家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌 培养基要进行高压蒸汽灭菌加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌A. B. C. D.C课 后 提 分 练 用用的是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌，所以制作葡萄酒时不需要的是附着在葡萄皮上的野生型酵母菌，所以制作葡萄酒时不需要对葡萄进行灭菌，以免杀死酵母菌，错误；培养基的灭菌方法是高压蒸对葡萄进行灭菌，以免杀死酵母菌，错误；培养基的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，正确；指示剂和染料可能混有微生物，故加入培养基前需灭菌，汽灭菌，正确；指示剂和染料可能混有微生物，故加入培养基前需灭菌，错
9、误。综上所述，操作错误的是，故错误。综上所述，操作错误的是，故C项正确。项正确。解析：在配制培养基的过程中，必须严格遵循无菌操作，下列操作错误的是A探究实践 酵母菌的纯培养1制备培养基制备培养基配制培养基灭菌倒平板（1）培养基灭菌：高压蒸汽灭菌）培养基灭菌：高压蒸汽灭菌121，气压，气压100kPa，15-30min；培养皿灭菌：；培养皿灭菌：干热灭菌干热灭菌160170 灭菌灭菌2h。平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。任务：视频1.归纳对接种环灭菌的注意事项。
10、（1）方法（2）灭菌的时间点2.归纳划线的注意事项，并说明原因。指出错误2接种和分离酵母菌接种和分离酵母菌平板划线法任务：视频1.归纳对接种环灭菌的注意事项。（1）方法（2）灭菌的时间点2.归纳注意事项，并说明原因。平板划线法菌落：菌落的特征有形状、大小、隆起程度和颜色等。菌落是鉴定菌种的重要依据。平板划线法的含义：用带有微生物平板划线法的含义：用带有微生物的接种环的接种环在平板培养基表面通过在平板培养基表面通过 分区划线分区划线 而达到而达到纯化分离微生物的方法纯化分离微生物的方法。注意事项：接种和划线操作时需要在注意事项：接种和划线操作时需要在酒精灯火焰酒精灯火焰附近进行附近进行。培养结果
11、：可以得到由单个细菌增殖而形成的培养结果：可以得到由单个细菌增殖而形成的 菌落菌落。分离、纯化大肠杆菌实验中，划线接种(甲)、培养结果(乙)如下图所示。下列有关叙述错误的是()A. 甲中a区域为划线的起始位置B. 连续划线的目的是获得单个细菌形成的菌落C. 接种过程中至少需要对接种环灼烧5次D. 接种后将培养皿倒置并在适宜温度下培养ABCD倒平板的方法及注意事项（1）培养基灭菌后，需要冷却到_左右时，才能用来倒平板。（2）请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：_。 （3）甲、乙、丙中的灭菌方法是_。（4）丁中的操作需要等待_才能进行。为什么要将平板倒置？使培养基表面的水分更好地挥发，防止皿盖上水珠落入培养基造成污染（5）整个过程为何要在酒精灯旁进行？（6）如何检测培养基制备是否成功？50丙乙甲丁 灼烧灭菌 平板冷却凝固 3737倒置培养倒置培养242448h48h，观察是否有微生物生长观察是否有微生物生长
