1、高压蒸汽灭菌液体培养基从社会中来 向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶。 一般家庭自制酸奶可能会导致肠胃不适，主要原因是有杂菌混入。 那么怎么才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？这需要应用无菌技术和微生物的培养技术一、微生物的基本培养技术1、微生物的类群原核生物 (细菌、细菌、蓝细菌等蓝细菌等)原生生物 (如草履虫、衣藻等如草履虫、衣藻等)真菌 (如酵母菌、霉菌等如酵母菌、霉菌等)酵母菌青霉菌大型真菌球菌蓝细菌草履虫衣藻病毒禽流感病毒SARS病毒一、微生物的基本培养技术2、实验室培养微生物条件1）提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件培养基2）确保其它微生
2、物无法混入无菌技术 微生物结构简单、形体微小，眼睛看不到，若想得到纯净的微生物，就必须对其进行培养和分离。高压蒸汽灭菌细菌的形态细菌的形态杆菌球菌霍乱弧菌葡萄球菌螺旋菌2 2）微生物生长繁殖产生的菌落）微生物生长繁殖产生的菌落沙门氏菌毛霉（一）培养基的配制1、培养基概念：人们按照微生物对人们按照微生物对营养物质营养物质的不同需求，配制出供其的不同需求，配制出供其生长繁殖的生长繁殖的营养基质营养基质。3、培养基类型：固体固体培养基培养基液体液体培养基培养基有 无 琼脂分离、分离、计数、计数、鉴定等鉴定等2、培养基作用：用以用以培养培养、分离分离、鉴定鉴定、保存微生物保存微生物或积累其代谢物。或积
3、累其代谢物。阅读P9回答划分标准培养基种类特点用途物理性质化学成分用途（补充资料1) 培养基的类型及用途不加凝固剂不加凝固剂加凝固剂，如琼脂加凝固剂，如琼脂微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质含化学成分不明确的天然物质工业生产工业生产培养基成分明确培养基成分明确分类、鉴定分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质在培养基中加入某种化学物质, ,以抑以抑制不需要的微生物的生长制不需要的微生物的生长, ,促进所需促进所需要的微生物的生长要的微生物的生长培养、分离出特定培养、分离出特定微生物微生物在培养基中加入某种指示剂或化学在培养基中加入某种
4、指示剂或化学药品药品, ,用以鉴别不同种类的微生物用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类鉴别不同种类微生物微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基天然培养基合成培养基鉴别培养基培养基中加培养基中加氨苄青霉素氨苄青霉素具有具有抗抗氨苄青霉氨苄青霉素能力素能力的菌落的菌落没有没有氨氨苄苄青霉青霉素抗性素抗性的的细菌细菌选择培养基培养基培养基+ +氨苄青霉素氨苄青霉素培养基培养基 没有没有抗氨苄青霉素抗氨苄青霉素能力能力的菌落的菌落被淘汰被淘汰怎样怎样选择选择出出抗抗氨苄青霉氨苄青霉素能力素能力的细菌的细菌?4、培养基的营养构成:碳源、氮源、水、无机盐无机碳源：无机碳源：COCO2 2、COC
5、O3 32 2- -、HCOHCO3 3- -有机碳源：有机碳源： 葡萄糖、葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等自养微生物自养微生物异养微生物异养微生物2）无机氮源：无机氮源： NHNH4 4、NONO3 3- -有机氮源：有机氮源：牛肉膏牛肉膏、蛋白胨、蛋白胨、尿素、尿素、等等注：3）CaCa、K K 、MgMg为为大量元素大量元素ZnZn、CuCu、MnMn、CoCo、MoMo等等微量元素微量元素表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成组分组分含量含量提供的主要营养提供的主要营养牛肉膏牛肉膏5g5g碳源、磷酸盐和维生素等碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨蛋白胨10g10g氮源和维生
6、素等氮源和维生素等NaClNaCl5g5g无机盐无机盐H H2 2O O定容至定容至1000ml1000ml水水维生素、氨基酸、维生素、氨基酸、等等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）pH氧气的需求例如例如: :培养培养乳酸菌乳酸菌要添加维生素；培养要添加维生素；培养霉菌霉菌要调酸性；培养要调酸性；培养细菌细菌要调至中性或弱碱性要调至中性或弱碱性 ；培养；培养厌氧菌厌氧菌要提供无氧条件。要提供无氧条件。主要包括消毒和灭菌两个方面： 消毒对操作的空间、操作者的衣着和手灭菌培养细菌用的培养基与培养皿玻棒、试管、烧瓶、吸管和接种环等还要注意：灼烧灭菌：灼烧灭菌：酒精灯火焰灼烧
7、酒精灯火焰灼烧原理：原理：使微生物使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和原生细胞膜破坏、蛋白质变性和原生质干燥等质干燥等 对象：对象：耐高温，需保持干燥的物品，耐高温，需保持干燥的物品，适用于适用于 玻璃器皿玻璃器皿 ( (如试管、培养皿、吸管、注射器如试管、培养皿、吸管、注射器) ) 金属器具金属器具 ( (如针头、如针头、 镊子、剪刀等镊子、剪刀等) )的灭菌的灭菌可以杀灭所有的生物，包括最耐热的可以杀灭所有的生物，包括最耐热的 某些微生物的休眠体。某些微生物的休眠体。基本保持基本保持培养基培养基的营养成分不被破坏。的营养成分不被破坏。注：使用后的培养基必须灭菌后注：使用后的培养基必须灭菌后 才
8、能丢弃，以免污染环境。才能丢弃，以免污染环境。 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的成一个椭圆形的休眠体休眠体，叫做芽孢。，叫做芽孢。 细菌、原生动物、真菌和植物等产生的细菌、原生动物、真菌和植物等产生的一种有繁殖作用的一种有繁殖作用的无性生殖细胞无性生殖细胞。能直接。能直接发育成新个体。发育成新个体。 类型适用范围操作方法消毒灭菌较为温和理化方法，杀死部分微生物（不包括芽孢、孢子）强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活100 煮沸56 min巴氏消毒法不耐高温的液体6265 煮30 min或80-90 煮30s-1 m
9、in化学药剂生物活体、水源等擦拭等,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源紫外线紫外线照射30 min灼烧灭菌接种的金属工具、接种时用的试管口或瓶口等直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧干热灭菌耐高温、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金属用具等物品放入干热灭菌箱,160170 加热23h湿热灭菌培养基、培养皿等,生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅内,100 kPa,温度121 ,1530 min3.无菌的方法：消毒与灭菌接种室、接种箱，超净工作台（三）微生物的纯培养由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为纯培养物纯培养物，获得纯培养物的过程就是获得纯培养物的过程就是纯培养纯培
10、养。1）配制培养基2）灭菌（培养基和器具）3）微生物接种4）分离5）恒温箱中培养分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落菌落。1、菌落：2、纯培养：采用采用平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法将单个微生物将单个微生物分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是分散在固体培养基上，之后得到的单菌落一般是由单个微生物形成的纯培养物。由单个微生物形成的纯培养物。3、原理：微生物群微生物群分散分散或或稀释稀释单个细胞单个细胞单个菌
11、落单个菌落繁殖繁殖方法步骤包器材包器材1.拔出锥形瓶的棉塞2.将瓶口迅速通过火焰3.用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基到人，立即盖上皿盖。4.等待培养皿冷却后，将培养皿倒过来放置。灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入灭菌后的培养基在无菌操作台上倒入4 4个培养皿中，倒个培养皿中，倒后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿后立即置于水平位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之底部，待凝，使之形成平面形成平面。倒平板注意事项：温度：50左右操作：在酒精灯火焰附近冷凝后平板倒置1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到5050左右时，才能用来倒平板。你
12、用左右时，才能用来倒平板。你用什么办什么办法来估计法来估计培养基的温度？培养基的温度？可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。2.2.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间皿盖与皿底之间的部位，这的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？个平板还能用来培养微生物吗？为什么？最好不要用这个平板培养微生物。 防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。将所倒平板所倒平板放入37的恒温箱中培养12h24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。4.4.怎么确定所倒平板怎么确定所倒平板未被杂菌污染未
13、被杂菌污染？3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。问题讨论 通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。稀释分散到培养基表面。经过数次划线后培养可以分离得到单菌落。(1)(1)原理原理：单个细胞单个细胞微生物群微生物群单个菌落单个菌落连续划线连续划线分散分散或或稀释稀释生长繁殖
14、生长繁殖连续划线法连续划线法分区划线法分区划线法(2)“(2)“平板划线平板划线”实验操作实验操作(2)“平板划线”实验操作1、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红。2、在火焰旁冷却接种环，并拔出装有酵母菌的棉塞 3、将试管口通过火焰 .4、将已冷却的接种环伸入菌液中，蘸取一环菌液 5、将试管通过火焰，并塞上棉塞 6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连8、将平板倒置放入培养箱中
15、培养。划3个平板（重复实验）1个不划线（空白对照）1）一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；2）存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。第第1区划线区划线接种环灭菌接种环灭菌第第2区划线区划线接种环灭菌接种环灭菌第第3区划线区划线接种环灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环灭菌分区划线法分区划线法12345接种环接种环只蘸一次菌液只蘸一次菌液, ,但要在培养基不同位置但要在培养基不同位置连续划线多次连续划线多次. .划线划线首尾不能相接首尾不能相接每次划线前每次划线前接种环进行灭菌接种环进行灭菌划线后划线后, ,培养皿培养皿倒置培养倒置培养
16、平板划线法平板划线法注意事项注意事项: :（1）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结）为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时束时,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？仍然需要灼烧接种环吗？为什么？杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者操作者杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而来源上次划线的末端，从而使每次划线时菌种数目逐使每次划线时菌种数目逐渐减少渐减少，直至得到单个细胞，直至得到单个细胞杀死接种环上原有
17、微生物杀死接种环上原有微生物灼烧时期灼烧时期目的目的取菌种前取菌种前每次划线前每次划线前接种结束后接种结束后 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入接种的平板倒置，放入2828左右的恒温培养箱中培养左右的恒温培养箱中培养24-28h24-28h. .1 1、未接种的培养基表面是否有菌落生长，如果有，说明了什么？、未接种的培养基表面是否有菌落生长，如果有，说明了什么？2 2、在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了菌落？这些菌落的、在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了菌落？这些菌落的颜色、颜色、形状
18、、大小形状、大小是否一致，如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析可能是否一致，如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析可能是哪些原因引起的吗？是哪些原因引起的吗？3 3、你是如何记录实验结果的？请与其他同学交流、互评。、你是如何记录实验结果的？请与其他同学交流、互评。思维训练评估论点的可信程度评估“水果酵素”的功效是否真实？ P14阅读讨论编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml（1 1）右表培养基可培养的微生物）右表培养基可培养的微生物类型是类型是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中加入培养基中。如。如不想浪费此培养基，可再加入不想浪费此培养基，可再加入 . .自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 练一练练一练右表是某微生物培养基成分，请据此回答：右表是某微生物培养基成分，请据此回答：（3 3）若除去成分，加入（）若除去成分，加入（CHCH2 2OO），该培养基可用于培养），该培养基可用于培养 。固氮微生物固氮微生物
