1、 第2节 微生物的培养技术及应用 01微生物的基本培养技术WEISHENGWUDEJIBENPEIYANGJISHU 教学目标1. 概述培养基的配制方法和微生物纯培养的基本操作要求,进行酵母菌的纯培养。2. 阐明微生物选择培养的原理。3. 进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。传统发酵技术的缺点传统发酵技术的缺点 菌种差异、杂菌情况不明、发酵过程的控制缺乏标准等，往往会造成发酵食品的品质不一。 为了缩短发酵时间，确保品质稳定，工业上大规模生产时，通常先通过微生物培养技术获得单一菌种，再将它们接种到物料中进行发酵。 向经过杀菌处理的牛奶中添加某些向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌，再
2、经过发酵就可以制对人体有益的细菌，再经过发酵就可以制成酸奶，由于制作工艺并不复杂，一些人成酸奶，由于制作工艺并不复杂，一些人会在家里自制酸奶，自制酸奶虽然方便，会在家里自制酸奶，自制酸奶虽然方便，但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事件屡见不鲜，主要原因是在制作过程中有杂菌见不鲜，主要原因是在制作过程中有杂菌混入。混入。那么，怎样才能保证无处不在的杂那么，怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？菌不混入发酵物中呢？ 应该先对制作用具和原料进行灭菌处理，再接种纯的菌种，应该先对制作用具和原料进行灭菌处理，再接种纯的菌种，并控制发酵条件，避免杂菌进入。并控制发酵条
3、件，避免杂菌进入。本节聚焦本节聚焦1.1.什么是培养基？如何配置？什么是培养基？如何配置？2.2.什么是无菌技术？什么是无菌技术？3.3.怎样进行酵母菌的纯培养？怎样进行酵母菌的纯培养？ 防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物是研究是研究和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。在和应用微生物的前提，也是发酵工程的重要基础。在实验室培养微生物，实验室培养微生物，一方面一方面要为人们需要的微生物提要为人们需要的微生物提供合适的营养和环境条件；供合适的营养和环境条件；另一方面另一方面要确保其他微生要确保其他微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来。物无法混入，并
4、将需要的微生物分离出来。（一）微生物（一）微生物难以用肉眼观察的微小生物的统称。难以用肉眼观察的微小生物的统称。1.1.概念概念2.2.微生物的类群微生物的类群（1）无细胞结构（2）原核细胞（3）真核细胞病毒：SARS病毒、新冠病毒等RAN病毒；噬菌体等DNA病毒细菌：蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等；放线菌：链霉菌等真菌：酵母菌、毛霉等；原生生物：草履虫、变形虫等3.3.微生物的结构微生物的结构（一）微生物（一）微生物直径在直径在3030200nm200nm之间之间直径在直径在0.50.55m5m之间之间直径直径3 36m6m之间之间 微生物微生物结构简单、形体微小结构简单、形体微小，眼睛看不到，
5、若想看某种纯，眼睛看不到，若想看某种纯净的微生物。我们该怎么做？若想通过肉眼能看到细菌，我们净的微生物。我们该怎么做？若想通过肉眼能看到细菌，我们又该如何？又该如何？ 必须对其进行分离纯化；必须对其进行分离纯化； 对微生物进行大量培养，致使其在对微生物进行大量培养，致使其在培养基表面或内部形成菌落。不同的细培养基表面或内部形成菌落。不同的细菌具有不同的菌具有不同的菌落菌落。 分散的微生物在适宜的分散的微生物在适宜的琼脂琼脂固体培养基固体培养基表面或内部生长，表面或内部生长，可以形成肉眼可见的可以形成肉眼可见的菌落菌落。沙门氏菌毛霉（一）微生物（一）微生物2.2.实验室培养微生物条件实验室培养微
6、生物条件（1 1）提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件。）提供微生物生长繁殖所需营养和环境条件。培养基培养基（2 2）确保其它微生物无法混入。）确保其它微生物无法混入。 无菌技术无菌技术（二）培养基的配制（二）培养基的配制1.1.培养基概念培养基概念2.2.培养基作用培养基作用2.2.作用：作用：用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。用以培养、分离、鉴定、保存微生物或积累其代谢物。1. 培养基的概念培养基的概念 培养基是人们按照培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供微生物对营养物质的不同需求，配制出供其其生长繁殖的生长繁殖的营养基质营养基质。固体固体培养基培养基液体液体
7、培养基培养基有无琼脂有无琼脂长有酵母菌菌落长有酵母菌菌落盛有液体培养基盛有液体培养基分离、计数、鉴定分离、计数、鉴定等等扩大培养扩大培养、用于工业生产、用于工业生产（二）培养基的配制（二）培养基的配制3.3.培养基的营养构成培养基的营养构成3.3.基本成分基本成分水、碳源、氮源和无机盐 碳源无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-等有机碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物 氮源无机氮源：NH4、NO3-、NH3等有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源 无机盐Ca、K 、Mg等为大量元素Zn、Cu、Mn、Co、Mo等为微
8、量元素* *一般情况下，不添加氮源培养基可用来培养一般情况下，不添加氮源培养基可用来培养_微生物微生物固氮固氮补充说明：补充说明： 含有含有C C、H H、O O、N N的的有机物有机物可作为可作为异养型异养型微生物的微生物的碳源、氮源、碳源、氮源、能源能源。 自养型微生物与异养型微生物自养型微生物与异养型微生物培养基的主要差别在于碳源培养基的主要差别在于碳源。 自养自养型微生物所需的碳源来自型微生物所需的碳源来自无机碳源无机碳源，异养异养型微生物所需的型微生物所需的碳源来自碳源来自有机碳源有机碳源，因此可以根据培养基中营养物质判断微生物的，因此可以根据培养基中营养物质判断微生物的代谢类型。代
9、谢类型。 无机氮源无机氮源不但能给不但能给自养型自养型微生物提供微生物提供氮源氮源，也能作为，也能作为能源能源物质，物质，如如NHNH3 3既作为硝化细菌的氮源，也作为能源（既作为硝化细菌的氮源，也作为能源（NHNH3 3氧化释放的化学氧化释放的化学能）。能）。 无机盐除了可以调节酸碱平衡、维持一定的渗透压之外，无机盐除了可以调节酸碱平衡、维持一定的渗透压之外，有些有些无机盐离子可以作为化能合成菌的能源（如铁细菌）。无机盐离子可以作为化能合成菌的能源（如铁细菌）。旁栏思考题：旁栏思考题： 为什么培养基需要氮源？为什么培养基需要氮源？ 培养基中的氮元素是微生物合成蛋白质、核酸等物培养基中的氮元素
10、是微生物合成蛋白质、核酸等物质所必需的。质所必需的。（二）培养基的配制（二）培养基的配制4.4.培培养基的营养构成养基的营养构成表1-1 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成组分含量提供的主要营养牛肉膏5 g碳源、磷酸盐和维生素等蛋白胨10 g氮源和维生素等NaCl5 g无机盐H2O定容至1 000ml水 牛肉膏和蛋白牛肉膏和蛋白胨来源与动物，含胨来源与动物，含有糖、维生素和有有糖、维生素和有机氮等营养物质。机氮等营养物质。（二）培养基的配制（二）培养基的配制5.5.培养基的特殊需求培养基的特殊需求 在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基
11、还需要满足微生物生长对满足微生物生长对_ _、_以及以及_ _ _ _的需求；的需求；pHpH特殊营养物质特殊营养物质O O2 2微生物例子微生物例子培养基需要的特殊物质或条件培养基需要的特殊物质或条件 乳酸杆菌乳酸杆菌霉菌霉菌细菌细菌厌氧微生物厌氧微生物添加维生素添加维生素调至酸性调至酸性调至中性或弱碱性调至中性或弱碱性提供无氧的条件提供无氧的条件现学现用：现学现用： 下列四种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的描述，正确下列四种生物的能源、碳源、氮源和代谢类型的描述，正确的是的是( )( ) A. A.硝化细菌硝化细菌 B. B.乳酸菌乳酸菌 C. C.酵母菌酵母菌 D. D.衣藻衣藻硝化细
12、菌乳酸菌酵母菌衣藻能源氧化氧化NHNH3 3分解乳酸分解乳酸固定固定N N2 2利用光能利用光能碳源COCO2 2糖类糖类糖类糖类COCO2 2氮源NHNH3 3N N2 2N N2 2NONO3 3- -代谢类型自养需氧型自养需氧型异异养养需氧型需氧型异样需氧型异样需氧型自养需氧型自养需氧型A A划分培养基种类特点用途物理性质化学成分用途不加凝固剂不加凝固剂加凝固剂，如琼脂加凝固剂，如琼脂工业生产工业生产观察微生物的运动、观察微生物的运动、分类鉴定。分类鉴定。微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌种活菌计数、保藏菌种含化学成分不明确的天然物质含化学成分不明确的天然物质工业生产工
13、业生产培养基成分明确培养基成分明确分类、鉴定分类、鉴定在培养基中加入某种化学物质在培养基中加入某种化学物质, ,以抑制不需要的微生物的生长以抑制不需要的微生物的生长, ,促进所需要的微生物的生长促进所需要的微生物的生长培养、分离出特定培养、分离出特定微生物。微生物。在培养基中加入某种指示剂或化学在培养基中加入某种指示剂或化学药品药品, ,用以鉴别不同种类的微生物用以鉴别不同种类的微生物鉴别不同种类微生物鉴别不同种类微生物选择培养基液体培养基半固体培养基固体培养基天然培养基合成培养基鉴别培养基（二）培养基的配制（二）培养基的配制4.4.培养基的类型培养基的类型具体处理原理目的选择培养基加入青霉素
14、加入青霉素青霉素能抑制细菌生长，青霉素能抑制细菌生长，对真菌无作用对真菌无作用不加氮源不加氮源固氮微生物能利用空气中的氮气固氮微生物能利用空气中的氮气不加有机碳源不加有机碳源自养型微生物能利用无机碳源自养型微生物能利用无机碳源鉴别培养基加入酚红培养基尿素被分解产生氨，培养基呈碱性，尿素被分解产生氨，培养基呈碱性，酚红指示剂变红。酚红指示剂变红。加入刚果红 刚果红与纤维素能形成红色复合物，当纤维素被分解后，复合物就无法形成，培养基中会出现以菌落为中心的透明圈。拓展练习：拓展练习：分离酵母菌、分离酵母菌、霉菌等真菌霉菌等真菌分离固氮菌分离固氮菌分离自养微生物分离自养微生物鉴别分解鉴别分解尿素尿素的
15、细菌的细菌鉴别鉴别纤维素纤维素分解菌分解菌思考：思考： 是否所有培养基都必须添加碳源、氮源？是否所有培养基都必须添加碳源、氮源？不是；不是； 例如分离固氮菌不需要额外添加例如分离固氮菌不需要额外添加氮源氮源，其可以，其可以直接利用空气中的氮气。直接利用空气中的氮气。（三）无菌技术（三）无菌技术1.1.获得纯净的微生物培养物的关键：获得纯净的微生物培养物的关键：_2.2.无菌技术应围绕无菌技术应围绕_展开，主要包括展开，主要包括消毒消毒和和灭菌灭菌。3.3.无菌技术工作两个方面无菌技术工作两个方面* *对操作的对操作的_、操作者的、操作者的_和和_进行进行_和和_；对用于微生物培养的对用于微生物
16、培养的_、_和和_等进行等进行_； * *做好消毒灭菌工作后，要注意做好消毒灭菌工作后，要注意避免已经灭菌处理避免已经灭菌处理的材料用的材料用具与具与周围的物品接触周围的物品接触。 * *为为避免周围环境中微生物的污染避免周围环境中微生物的污染，许多操作都应在，许多操作都应在超净工超净工作台作台并在并在酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近进行。进行。防止杂菌污染防止杂菌污染如何避免杂菌的污染如何避免杂菌的污染空间空间衣着衣着手手清洁清洁消毒消毒器皿器皿接种用具接种用具培养基培养基灭菌灭菌思考：思考： 无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？无菌技术还能有效避免无菌技术还能
17、有效避免操作者操作者被微生物感染。被微生物感染。2.2.常用的消毒和灭菌方法常用的消毒和灭菌方法（1 1）消毒）消毒 概念概念 使用较为温和的使用较为温和的物理、化学或生物物理、化学或生物等方法，杀死物等方法，杀死物体表面或内部体表面或内部一部分微生物一部分微生物。类型类型适用范围适用范围操作方法操作方法消消毒毒较为较为温温和和理化理化生方法，生方法，杀死杀死部部分分微生微生物物（不（不包括芽包括芽孢、孢孢、孢子）。子）。煮沸消毒法煮沸消毒法日常生活日常生活100 100 煮沸煮沸5 56min6min巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高温不耐高温的的液体液体62626565消毒消毒30min30min
18、或或80809090消毒消毒30s30s1 1minmin化学药物化学药物生物活体、生物活体、水源水源等等用用酒精擦拭酒精擦拭双手、双手、用用氯气消毒水源氯气消毒水源紫外线照射紫外线照射紫外线紫外线照射照射30min30min接种室、接种箱，接种室、接种箱，超净工作台。超净工作台。 常用的消毒方法常用的消毒方法2.2.常用的消毒和灭菌方法常用的消毒和灭菌方法（2 2）灭菌）灭菌 概念概念 指使用强烈的理化方法杀死物体内外所指使用强烈的理化方法杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。有微生物，包括芽孢和孢子。 灭菌的方法灭菌的方法湿热灭菌湿热灭菌干热灭菌干热灭菌灼烧灭菌灼烧灭菌（2 2）灭菌）灭
19、菌原理：原理：高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性。高温蒸汽破坏蛋白质、核酸等结构使其变性。优点：优点：操作简便，效果可靠，操作简便，效果可靠，可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不被破坏。些微生物的休眠体。基本保持培养基的营养成分不被破坏。对象：对象：培养基等培养基等注：注：使用后的培养基必须使用后的培养基必须灭菌后才能丢弃，以免污灭菌后才能丢弃，以免污染环境。染环境。 湿热灭菌湿热灭菌：高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅内内100kPa100kPa、121121下维持下维持151530min30min。高压蒸汽灭菌锅2.
20、2.常用的消毒和灭菌方法常用的消毒和灭菌方法（2 2）灭菌）灭菌原理：原理：使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和使微生物细胞膜破坏、蛋白质变性和 原生原生质干燥等。质干燥等。对象：对象：耐高温，需保持干燥的物品，耐高温，需保持干燥的物品，适用于适用于 玻璃器皿玻璃器皿 ( (如试管、培养皿、吸管、注射器如试管、培养皿、吸管、注射器) ) 金属器具金属器具 ( (如针头、如针头、 镊子、剪刀等镊子、剪刀等) )的灭菌。的灭菌。 干热灭菌干热灭菌：干热灭菌箱干热灭菌箱内内160160170 170 下加热下加热2 23h3h。2.2.常用的消毒和灭菌方法常用的消毒和灭菌方法干热灭菌箱干热灭菌箱（2 2
21、）灭菌）灭菌 灼烧灭菌灼烧灭菌：酒精灯酒精灯火焰灼烧火焰灼烧效果：效果：最彻底最彻底原理：原理：使微生物燃烧使微生物燃烧对象：对象：接种工具如接种工具如接种环、接种环、接种针接种针，以及接种过程中的，以及接种过程中的试管口或瓶口等易被污染部位。试管口或瓶口等易被污染部位。2.2.常用的消毒和灭菌方法常用的消毒和灭菌方法类型类型适用范围适用范围操作方法操作方法灭灭菌菌强烈强烈的的理化方理化方法，杀法，杀死死所有所有微生物微生物（包括包括芽孢、芽孢、孢子孢子）。）。灼烧灭菌灼烧灭菌接种的金属工具接种的金属工具、接种时用的试管口接种时用的试管口或瓶口或瓶口等等直接在直接在酒精灯火焰酒精灯火焰的的充分
22、燃烧层充分燃烧层灼烧灼烧干热灭菌干热灭菌耐高温耐高温、需要、需要保持保持干燥干燥的物品的物品, ,如玻璃如玻璃器皿和金属用具等器皿和金属用具等物品放入物品放入干热灭菌箱干热灭菌箱, ,160160170170加热加热2 23h3h湿热灭菌湿热灭菌培养基、培养皿培养基、培养皿等，等，生产和实验室常用生产和实验室常用高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅内内, ,100kPa100kPa，温度，温度121,121,151530min30min。常用的灭菌方法（小结）常用的灭菌方法（小结）（三）微生物的纯培养（三）微生物的纯培养 由单一个体繁殖所获得的微生物群由单一个体繁殖所获得的微生物群体称为体称为纯培养物
23、纯培养物，获得纯培养物的过程，获得纯培养物的过程就是就是纯培养纯培养。1.1.概念概念2.2.步骤步骤配制培养基灭菌接种分离培养等酵母菌的纯培养酵母菌的纯培养 分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、分散的微生物在适宜的固体培养基表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。采用有一定形态结构的子细胞群体，这就是菌落。采用平板划线法平板划线法和和稀释涂布稀释涂布平板法平板法能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般能将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。是由单个微生物繁殖
24、形成的纯培养物。 微生物群微生物群分散分散或或稀释稀释单个细胞单个细胞繁殖繁殖单菌落单菌落酵母菌的纯培养酵母菌的纯培养 目的要求目的要求 1 1. .学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板。学会配制培养酵母菌的培养基并倒平板。 2. 2.学会进行无菌操作。学会进行无菌操作。 3 3. .尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落。尝试通过平板划线操作来获得纯化的酵母菌菌落。 材料用具材料用具 酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖( (或蔗糖或蔗糖) )、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸( (或报
25、纸或报纸) )、皮筋、培养皿、接种环、酒、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱和恒温培养箱等。精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱和恒温培养箱等。2 2. .步骤步骤（1 1）制备培养基）制备培养基配制配制培养基培养基称取去皮称取去皮马铃薯马铃薯200g200g，切成小块，加水，切成小块，加水1000ml1000ml，加热煮沸，加热煮沸至马铃薯软烂，用至马铃薯软烂，用纱布过滤纱布过滤。向滤液中加入。向滤液中加入20g20g葡萄糖葡萄糖（也（也可用可用蔗糖蔗糖代替）代替）、151520g20g琼脂琼脂，用，用蒸馏水蒸馏水定容至定容至1000ml1000ml
26、。灭菌灭菌 将配制好的将配制好的培养基培养基转移到锥形瓶中，转移到锥形瓶中，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，加棉塞，包上牛皮纸，并用皮筋勒紧，再放入再放入高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅中，在压力为中，在压力为100kPa100kPa、温度为、温度为121121的条件下，灭菌的条件下，灭菌151530min30min。将。将5 58 8套套培养皿包成一包培养皿包成一包，用几层牛皮纸包紧，放入用几层牛皮纸包紧，放入干热灭菌箱干热灭菌箱内，在内，在160160170170灭菌灭菌2h2h。倒平板倒平板待培养基待培养基冷却到冷却到5050左右左右时，在时，在酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近倒平板。倒平板。
27、倒平板的具体操作步骤倒平板的具体操作步骤等待培养基等待培养基冷却凝固后冷却凝固后，将培养皿将培养皿倒转过来放置倒转过来放置拔出锥形瓶的棉塞拔出锥形瓶的棉塞将瓶口迅速通过火焰用拇指和食指将培养皿打用拇指和食指将培养皿打开一条开一条稍大于瓶口的缝隙稍大于瓶口的缝隙，将培养基（将培养基（10-20mL10-20mL）倒入）倒入培养皿，培养皿，立即盖上皿盖。立即盖上皿盖。（2 2）接种和分离酵母菌）接种和分离酵母菌 通过通过接种环接种环在在固体培养基表面连续划线固体培养基表面连续划线的操作，将的操作，将聚集的聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面菌种逐步稀释分散到培养基表面。经过。经过数次划线数次划线后培
28、养可以后培养可以分分离得到离得到单菌落单菌落。连续划线法连续划线法分区划线法分区划线法平板划线的具体操作步骤平板划线的具体操作步骤将接种环放在火将接种环放在火焰上焰上灼烧灼烧，直到接，直到接种环的金属丝种环的金属丝烧红。烧红。在在火焰旁冷却火焰旁冷却接接种环，种环，并拔出装有并拔出装有酵母菌的棉酵母菌的棉塞。塞。将将试管口试管口通过火焰通过火焰将将已冷却已冷却的接的接种环伸入菌液中，种环伸入菌液中，蘸取蘸取一环菌液。一环菌液。将将试管通过火试管通过火焰焰，并塞上棉塞。，并塞上棉塞。左手在左手在火焰附近火焰附近将皿盖将皿盖打开一条缝打开一条缝隙隙，右手将沾有菌，右手将沾有菌种的接种环迅速伸种的接
29、种环迅速伸入平板内，划入平板内，划三至三至五条平行线五条平行线，盖上盖上皿盖皿盖。注意不要划注意不要划破培养基。破培养基。灼烧灼烧接种环接种环，待其，待其冷却冷却后，后，从从第一区域划线的末端第一区域划线的末端开始开始往往第二区域内划线第二区域内划线。重复以上操。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与注意不要将最后一区的划线与第一区相连。第一区相连。平板划线的具体操作步骤平板划线的具体操作步骤1 12 23 34 45 5灼烧接种环灼烧接种环蘸取菌液蘸取菌液第第1 1区接种区接种灼烧接种环灼烧接种环第第2 2区接种区接种灼烧接种环灼烧接种环
30、第第3 3区接种区接种第第5 5区接种区接种注意：注意：接种环接种环只蘸一次只蘸一次菌液菌液, ,但要在培但要在培养基不同位置连续划线多次。养基不同位置连续划线多次。划线划线首尾不能相接首尾不能相接每次每次划线前接种环进行灭菌划线前接种环进行灭菌酵母菌的纯培养酵母菌的纯培养 3 3. .培养酵母菌培养酵母菌 完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和一个未接种的平板倒置，放入的平板倒置，放入 28 28 左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培养的恒温培养箱中
31、培养 24 24 48h48h。 结果分析与评价结果分析与评价 1 1. .在未接种的培养基表面是否有菌落生长在未接种的培养基表面是否有菌落生长? ?如果有如果有, ,说明了什么说明了什么? ? 2 2. .在接种酵母菌的培养基上在接种酵母菌的培养基上, ,你是否观察到了单菌落你是否观察到了单菌落? ?这些菌落的颜色、这些菌落的颜色、形状和大小是否一致形状和大小是否一致? ?如果你观察到了不同形态的菌落如果你观察到了不同形态的菌落, ,你能分析出可能是由你能分析出可能是由哪些原因引起的吗哪些原因引起的吗? ? 3 3. .你是如何记录实验结果的你是如何记录实验结果的? ?请与其他同学交流、互评
32、。请与其他同学交流、互评。警示：警示：在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防在实验室中，切不可吃东西、喝水，离开实验室时一定要洗手，以防止被微生物感染。使止被微生物感染。使用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以用后的培养基在丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染免污染环境。环境。酵母菌的纯培养酵母菌的纯培养结果分析与评价结果分析与评价 1 1. .在未接种的培养基表面是否有菌落生长在未接种的培养基表面是否有菌落生长? ?如果有如果有, ,说明了什么说明了什么? ? 2 2. .在接种酵母菌的培养基上在接种酵母菌的培养基上, ,你是否观察到了单菌落你是否观察到了单菌落? ?
33、这些菌落的颜色、这些菌落的颜色、形状和大小是否一致形状和大小是否一致? ?如果你观察到了不同形态的菌落如果你观察到了不同形态的菌落, ,你能分析出可能是由你能分析出可能是由哪些原因引起的吗哪些原因引起的吗? ? 3 3. .你是如何记录实验结果的你是如何记录实验结果的? ?请与其他同学交流、互评。请与其他同学交流、互评。提示提示1 1：在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明在未接种的培养基表面应该没有菌落生长，如果有，说明培养基被杂菌污染。培养基被杂菌污染。提示提示2 2：如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或如果观察到了不同形态的菌落，可能是接种的菌种不纯或无菌操作不
34、规范等原因引起的。无菌操作不规范等原因引起的。（四）（四）实验注意事项、分析、思考实验注意事项、分析、思考1.1.培养基灭菌后为什么要冷却到培养基灭菌后为什么要冷却到5050左右时开始倒平板？左右时开始倒平板？2.2.为什么倒平板和接种整个过程要在酒精灯火焰旁进行？为什么倒平板和接种整个过程要在酒精灯火焰旁进行？3.3.倒平板时为什么要使锥形瓶的瓶口通过火焰？倒平板时为什么要使锥形瓶的瓶口通过火焰？4.4.在倒平板的过程中，若不小心将培养基溅在皿盖与皿在倒平板的过程中，若不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么
35、？ 琼脂是一种多糖，在琼脂是一种多糖，在4444以下凝固，倒平板时，以下凝固，倒平板时，若低于若低于5050不及时操作，琼脂会凝固。不及时操作，琼脂会凝固。避免杂菌污染避免杂菌污染 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 不能；因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间不能；因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。的培养基上滋生。5.5.为什么倒平板时，将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不能为什么倒平板时，将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，不能完全打开？完全打开？6.6.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？7.
36、7.怎么确定所倒平板未被杂菌（主要是细菌）污染？怎么确定所倒平板未被杂菌（主要是细菌）污染？8.8.未接种的培养基直接培养起什么作用？未接种的培养基直接培养起什么作用？防止杂菌污染培养基防止杂菌污染培养基 可避免培养基中的水分过快蒸发；可防止皿盖上的水珠落可避免培养基中的水分过快蒸发；可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。入培养基，造成污染。 将未接种的空白培养基放入将未接种的空白培养基放入3737的恒温箱中培养的恒温箱中培养12h12h24h24h，观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。观察是否有菌落存在以确定是否被污染或灭菌是否彻底。 做空白对照，若培养后培养基表面无菌落，则
37、说明培养基做空白对照，若培养后培养基表面无菌落，则说明培养基没有污染。没有污染。9.9.若未接种的培养基表面出现菌落，说明了什么？若未接种的培养基表面出现菌落，说明了什么？10.10.为什么在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种为什么在操作第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时环？在划线操作结束时, ,仍然需要灼烧接种环吗？为什么？仍然需要灼烧接种环吗？为什么？说明培养基被污染，实验组的菌落中可能存在杂菌。说明培养基被污染，实验组的菌落中可能存在杂菌。灼烧时期灼烧时期目的目的取菌种前取菌种前每次划线前每次划线前接种结束后接种结束后杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境杀死接
38、种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。和感染操作者。杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌杀死上次划线时残留菌种，使下一次划线的菌种直接来源上次划线的末端，从而种直接来源上次划线的末端，从而使每次划线使每次划线时菌种数目逐渐减少时菌种数目逐渐减少，直至得到单个细胞。，直至得到单个细胞。杀死接种环上原有微生物杀死接种环上原有微生物11.11.在灼烧接种环之后，要等其冷却再进行划线，目的是在灼烧接种环之后，要等其冷却再进行划线，目的是什么？什么？12.12.除第一次划线外，每次划线都从上一次划线的末端开除第一次划线外，每次划线都从上一次划线的末端开始，目的是什么？始，目的是什么？13.
39、13.为什么划线时要注意不能划破培养基？为什么划线时要注意不能划破培养基？避免温度过高杀死菌种避免温度过高杀死菌种使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落划破处生长，会形成一个条状的菌落一、微生物的基本培育技术一、微生物的基本培育技术评估论点的
40、可信程度评估论点的可信程度 有一段时间，水果有一段时间，水果“酵素酵素”风靡各地。水果风靡各地。水果“酵素酵素”制作的大致过程是：制作的大致过程是：将洗净、切成块状的水果放入洁净的容器，再加入糖和水将洗净、切成块状的水果放入洁净的容器，再加入糖和水, ,密封，置于阴凉密封，置于阴凉处发酵一至两周。有人说，吃水果处发酵一至两周。有人说，吃水果“酵素酵素”可以美容、减肥、促进消化和提可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力。请评估这一论点是否可信。追问以下问题可以帮助你分析。高免疫力。请评估这一论点是否可信。追问以下问题可以帮助你分析。 “ “酵素酵素”是什么？水果是什么？水果“酵素酵素”的制作原理是
41、什么？水果的制作原理是什么？水果“酵素酵素”中可中可能含有哪些成分？它是否含有人们无法从其他食品中获取但又是维护健康所能含有哪些成分？它是否含有人们无法从其他食品中获取但又是维护健康所必需的成分？水果必需的成分？水果“酵素酵素”中的所有成分都有益于人体健康吗？中的所有成分都有益于人体健康吗？ 如果要更加有力地支持或反驳水果如果要更加有力地支持或反驳水果“酵素酵素”有益健康的论点，应该怎有益健康的论点，应该怎样获取证据？样获取证据？一、微生物的基本培育技术一、微生物的基本培育技术评估论点的可信程度评估论点的可信程度 所谓所谓“酵素酵素”，就是，就是“酶酶”的另一种说法。的另一种说法。“酵酵素素”
42、制作就是利用微生物进行无氧呼吸的原理，进行制作就是利用微生物进行无氧呼吸的原理，进行像制作泡菜一样的发酵。像制作泡菜一样的发酵。 这样制作的这样制作的“酵素酵素”中可能中可能有糖类有糖类( (包括包括- -些简单的糖和膳食纤维等些简单的糖和膳食纤维等) )、蛋白质、蛋白质( (包包括多种酶括多种酶) )、有机酸等成分，不存在它独有的、特殊的、有机酸等成分，不存在它独有的、特殊的营养物质，其中甚至可能含有微生物发酵产生的有毒营养物质，其中甚至可能含有微生物发酵产生的有毒物质，食用后可能会危害人体健康。因此，物质，食用后可能会危害人体健康。因此，“吃水果吃水果酵素可以美容、减肥、促进消化和提高免疫
43、力酵素可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力”的论的论点值得怀疑。点值得怀疑。练习与应用练习与应用一、概念检测一、概念检测 1 1. .微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要微生物的纯培养既需要适宜的培养基，又要防止杂菌污染。判断下列相关表述是否正确。防止杂菌污染。判断下列相关表述是否正确。 （1 1）培养基中的营养物质浓度越高，对微生物）培养基中的营养物质浓度越高，对微生物的生长越有利。的生长越有利。 （ ） （2 2）消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。）消毒和灭菌的杀菌程度存在差异。 （ ） （3 3）微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的）微生物的纯培养物就是不含有代谢废物的微生物培养物。微生物
44、培养物。 （ ）练习与应用练习与应用一、概念检测一、概念检测 2 2. .日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方日常生活中保存食品的方法有哪些？这些方法是如何阻止或抑制微生物生长的？法是如何阻止或抑制微生物生长的？提示：日常生活中保存食品的方法有干制、腌制、低温储存提示：日常生活中保存食品的方法有干制、腌制、低温储存等。干制可以降低食品的水分含量；腌制可以通过食盐、糖等。干制可以降低食品的水分含量；腌制可以通过食盐、糖等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖；低温则是等制造高渗环境，从而抑制微生物的生长和繁殖；低温则是通过降低微生物的代谢速率来抑制微生物的生长和繁殖。通过降低微生物的代谢速率
45、来抑制微生物的生长和繁殖。二、拓展应用二、拓展应用 1 1. .某同学将某同学将5 5个手指尖在贴有个手指尖在贴有“洗手前洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将然后用肥皂将该手洗干净，再将5 5个指尖在贴有个指尖在贴有“洗手后洗手后”标签的同种培标签的同种培养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入3737恒温培养箱中培养恒温培养箱中培养24h24h后，后，发现贴有发现贴有“洗手后洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。 （1 1）这个实验中需要进行灭菌处理的
46、材料用具有）这个实验中需要进行灭菌处理的材料用具有 （2 2）“将指尖在培养基上轻轻按一下将指尖在培养基上轻轻按一下”相当于微生物培养中的哪一步相当于微生物培养中的哪一步操作？操作？提示（提示（1 1）：培养皿和培养基。）：培养皿和培养基。提示（提示（2 2）：接种。）：接种。练习与应用练习与应用二、拓展应用二、拓展应用 1 1. .某同学将某同学将5 5个手指尖在贴有个手指尖在贴有“洗手前洗手前”标签的培养基上轻轻按一下。标签的培养基上轻轻按一下。然后用肥皂将该手洗干净，再将然后用肥皂将该手洗干净，再将5 5个指尖在贴有个指尖在贴有“洗手后洗手后”标签的同种培标签的同种培养基上轻轻按一下。将
47、这两个培养皿放入养基上轻轻按一下。将这两个培养皿放入3737恒温培养箱中培养恒温培养箱中培养24h24h后，后，发现贴有发现贴有“洗手后洗手后”标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。标签的培养皿中菌落较少。请分析回答下列问题。 （3 3）从实验结果来看）从实验结果来看, ,洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，洗手后我们就能进行无菌操作了吗？操作时，我们可以采用什么方法来避免手上微生物的污染？我们可以采用什么方法来避免手上微生物的污染？提示：通过实验结果可以看到，洗手后手上还有一些微生物，提示：通过实验结果可以看到，洗手后手上还有一些微生物，不能直接进行无菌操作。可以通过用酒精棉球擦拭
48、双手，或戴不能直接进行无菌操作。可以通过用酒精棉球擦拭双手，或戴消过毒的手套等方法来避免手上微生物的污染。消过毒的手套等方法来避免手上微生物的污染。练习与应用练习与应用 2 2. .某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3 3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为分别为 210 r/min 210 r/min， 230 r/min 230 r/min和和250 r/min250 r/min。培养时间与酵母菌种群密度。培养时
49、间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。请分析回答下列问题。的关系如下图所示。请分析回答下列问题。（1 1）摇床转速不同）摇床转速不同, ,意味着培养条意味着培养条件有什么不同？件有什么不同？二、拓展应用二、拓展应用提示：意味着培养液中提示：意味着培养液中0 02 2含量不同。含量不同。练习与应用练习与应用 2 2. .某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于3 3个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速个盛有等量同种液体培养基的锥形瓶中，并放置在摇床上培养，摇床转速分别为分别为 210 r/min
50、 210 r/min， 230 r/min 230 r/min和和250 r/min250 r/min。培养时间与酵母菌种群密度。培养时间与酵母菌种群密度的关系如下图所示。请分析回答下列问题。的关系如下图所示。请分析回答下列问题。（2 2）从图中数据你可以得出什么结）从图中数据你可以得出什么结论论? ?其原因是什么其原因是什么? ?二、拓展应用二、拓展应用提示：培养液中提示：培养液中0 02 2含量越含量越高高, ,酵母菌种群密度越大。酵母菌种群密度越大。练习与应用练习与应用 2 2. .某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌分别接种于某生物兴趣小组将从葡萄皮上成功分离来的野生酵母菌
