1、病原生物学病原生物学 1提问提问1、IMViC？2、细菌毒素？、细菌毒素？3、细菌耐药性如何产生？、细菌耐药性如何产生？4、大肠杆菌所致疾病？、大肠杆菌所致疾病？5、志贺毒素、志贺毒素6、沙门菌重要的生化特征？、沙门菌重要的生化特征？7、Vi抗原抗原8、幽门螺杆菌主要的生物学特征？、幽门螺杆菌主要的生物学特征？9、霍乱弧菌培养的特点？、霍乱弧菌培养的特点？10、霍乱毒素、霍乱毒素2案例分析案例分析案例分析案例分析 患者，男，患者，男，16岁。因岁。因“发热、腹痛。腹泻、解脓便发热、腹痛。腹泻、解脓便1天天”就诊。就就诊。就诊前一天，患者晚餐进食卤肉后，当晚即感身体不适、头痛、发诊前一天，患者晚
2、餐进食卤肉后，当晚即感身体不适、头痛、发热、恶心、四肢无力。半夜有阵痛性腹痛，大便为黄色水样，量热、恶心、四肢无力。半夜有阵痛性腹痛，大便为黄色水样，量多，其后每多，其后每0.5-1h排便排便1次，便前有剧烈腹痛，最近几次带有脓血次，便前有剧烈腹痛，最近几次带有脓血便，便后仍想解大便。便，便后仍想解大便。要求：从微生物学角度，应该考虑采集哪些标本进行检测？要求：从微生物学角度，应该考虑采集哪些标本进行检测？ 如何设计鉴定试验？如何设计鉴定试验？ 试分析引起该患者腹泻的可能原因。试分析引起该患者腹泻的可能原因。3第二章、细菌所致疾病第二章、细菌所致疾病消化道感染细菌消化道感染细菌化脓性细菌化脓性
3、细菌呼吸道感染细菌呼吸道感染细菌4第二节、化脓性细菌第二节、化脓性细菌化脓性细菌：引起化脓性炎症的细菌化脓性细菌：引起化脓性炎症的细菌皮肤皮肤皮下软组织皮下软组织深部组织深部组织内脏器官脓肿内脏器官脓肿5化脓性细菌化脓性细菌革兰氏阳性菌：革兰氏阳性菌：葡萄球菌葡萄球菌属、属、链球菌链球菌属、肠球菌属属、肠球菌属革兰氏阴性菌：革兰氏阴性菌：奈瑟菌奈瑟菌属、莫拉菌属、假单胞菌属、埃希属、莫拉菌属、假单胞菌属、埃希菌属、变形杆菌属、无芽孢厌氧菌菌属、变形杆菌属、无芽孢厌氧菌6一、葡萄球菌属一、葡萄球菌属化脓性细菌中最常见的化脓性细菌中最常见的G+G+球菌，呈葡萄串状球菌，呈葡萄串状人及动物的皮肤与腔
4、道均存在，人及动物的皮肤与腔道均存在，多数不致病多数不致病（除金黄色葡萄球菌）（除金黄色葡萄球菌）医务人员医务人员带菌率高达带菌率高达70%70%，多为耐药菌，医院内交叉感染的主要传染源，多为耐药菌，医院内交叉感染的主要传染源组织器官组织器官化脓性化脓性炎症，炎症，食物中毒食物中毒，烫伤样皮肤综合症烫伤样皮肤综合症、毒性休克毒性休克综合症综合症化脓性腹膜炎化脓性腹膜炎烫伤样皮肤综合症烫伤样皮肤综合症金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌71、生物学性状、生物学性状 形态与染色形态与染色0.51.0um，球形或椭圆形的，球形或椭圆形的G+细菌，呈葡萄串状，无芽孢，无鞭毛；细菌，呈葡萄串状，无芽孢，无鞭毛；
5、在脓汁或液体培养基中呈单个、成双或短链状排列；在脓汁或液体培养基中呈单个、成双或短链状排列；在固体培养基上呈典型排列。在青霉素作用下变为在固体培养基上呈典型排列。在青霉素作用下变为L型细菌型细菌。电镜观察电镜观察L型葡萄球菌型葡萄球菌81、生物学性状、生物学性状 培养与生化培养与生化需氧或兼性厌氧，营养要求不高，需氧或兼性厌氧，营养要求不高，耐盐耐盐（1015% NaCl）。）。菌落特征：菌落特征：13mm圆形、凸起、边缘光滑、不透明的菌落，不同菌株可圆形、凸起、边缘光滑、不透明的菌落，不同菌株可产生不同的产生不同的脂溶性色素脂溶性色素；血平板上致病菌株能产生；血平板上致病菌株能产生-溶血；溶
6、血；多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇甘露醇，产酸不产气，产酸不产气鉴定鉴定金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌腐生葡萄球菌91、生物学性状、生物学性状 抗原结构抗原结构葡萄球菌葡萄球菌A蛋白（蛋白（SPA）：90%金黄色葡萄球菌细胞壁上存在、具有种属金黄色葡萄球菌细胞壁上存在、具有种属特异性的单链多肽，可与人和动物的特异性的单链多肽，可与人和动物的IgG的的Fc段非特异性结合，从而段非特异性结合，从而干扰吞干扰吞噬细胞噬细胞的作用。的作用。SPA与与IgG复合物有促进细胞分裂、引起超敏反应、损伤血复合物有促进细胞分裂、引
7、起超敏反应、损伤血小板等活性。小板等活性。多糖抗原：多糖抗原：细胞壁上含磷多聚物，具有群特异性。细胞壁上含磷多聚物，具有群特异性。磷壁酸磷壁酸能与细胞表面的纤能与细胞表面的纤连蛋白结合，介导葡萄糖球菌对粘膜表面的黏附。连蛋白结合，介导葡萄糖球菌对粘膜表面的黏附。101、生物学性状、生物学性状分类分类金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌（金黄色）（金黄色）表皮葡萄球菌表皮葡萄球菌（白色）（白色）腐生葡萄球菌腐生葡萄球菌（柠檬色）（柠檬色）表表型型凝固酶阳性菌凝固酶阳性菌凝固酶阴性菌凝固酶阴性菌4群群23型型凝凝固固酶酶噬菌体分型噬菌体分型I群：医院群：医院败血症败血症流行株流行株II群：产生群：产生表皮
8、剥脱毒素表皮剥脱毒素III群：产生群：产生肠毒素肠毒素详见详见p59 表表8-1 三种葡萄球菌主要性状鉴别三种葡萄球菌主要性状鉴别111、生物学性状、生物学性状为无芽胞细菌中最强的，可概括为为无芽胞细菌中最强的，可概括为“四耐一敏感四耐一敏感”：耐干燥，在干脓汁、痰液中可存活耐干燥，在干脓汁、痰液中可存活2 2- -3 3个月；个月；耐热，在耐热，在60 160 1h h或或80 3080 30minmin以上仍能存活；以上仍能存活；耐药，目前对耐药，目前对青霉素青霉素耐药以达耐药以达90%90%以上；以上；耐盐，可在耐盐，可在10-15%NaCl10-15%NaCl肉汤中生长；肉汤中生长；对
9、碱性染料敏感，对碱性染料敏感，1/101/10万龙胆紫能抑制其生长。万龙胆紫能抑制其生长。抵抗力抵抗力122、致病性、致病性 金黄色葡萄球菌磷壁酸介导黏附、荚膜抗吞噬以及产生多种酶和毒素金黄色葡萄球菌磷壁酸介导黏附、荚膜抗吞噬以及产生多种酶和毒素，故致病力极强，而表皮和腐生葡萄球菌则一般不致病，为条件致病菌，故致病力极强，而表皮和腐生葡萄球菌则一般不致病，为条件致病菌 致病物质致病物质凝固酶凝固酶葡萄球菌溶血素葡萄球菌溶血素杀白细胞素杀白细胞素肠毒素肠毒素表皮剥脱毒素表皮剥脱毒素毒性休克综合征毒素毒性休克综合征毒素 13 凝固酶凝固酶：鉴别葡萄球菌有无致病性的重要指标鉴别葡萄球菌有无致病性的重
10、要指标。分分游离型游离型和和结合型结合型两两种。使血液或血浆中的种。使血液或血浆中的纤维蛋白沉积纤维蛋白沉积，保护细菌抵抗吞噬及其它杀菌，保护细菌抵抗吞噬及其它杀菌物质作用，并决定了金黄色葡萄球菌引起化脓性感染时的物质作用，并决定了金黄色葡萄球菌引起化脓性感染时的感染特点：感染特点：病灶局限、不易扩散、而且脓汁粘稠。病灶局限、不易扩散、而且脓汁粘稠。 葡萄球菌溶血素葡萄球菌溶血素： 4种溶血素，种溶血素，溶血素为主要致病因子，溶解红细胞溶血素为主要致病因子，溶解红细胞，破坏白细胞、血小板及多种其它细胞，破坏白细胞、血小板及多种其它细胞 杀白细胞素杀白细胞素：破坏中性粒细胞和吞噬细胞、抗吞噬、增
11、强病菌侵袭力破坏中性粒细胞和吞噬细胞、抗吞噬、增强病菌侵袭力 重要的毒素和酶重要的毒素和酶14 肠毒素肠毒素：部分金葡菌产生（部分金葡菌产生（1/31/3），可引起），可引起急性胃肠炎急性胃肠炎。耐热，耐热，1003010030min,min,引起毒素性引起毒素性食物中毒（呕吐）食物中毒（呕吐） 抗酸，不受胃肠液中蛋白酶影响抗酸，不受胃肠液中蛋白酶影响. . 表皮剥脱毒素表皮剥脱毒素 又称又称表皮溶解毒素表皮溶解毒素，裂解细胞间桥小体，破坏细胞间连接，引起表，裂解细胞间桥小体，破坏细胞间连接，引起表皮与真皮脱落皮与真皮脱落烫伤样皮肤综合征烫伤样皮肤综合征 毒性休克综合征毒性休克综合征-1-1(
12、TSST-1)(TSST-1)： 引起发热、组织损伤、引起发热、组织损伤、休克休克、肾衰肾衰、皮疹等多个器官功能紊乱，毒、皮疹等多个器官功能紊乱，毒性休克综合征（性休克综合征（TSSTSS） 其它其它 葡激酶、耐热核酸酶、透明质酸、脂酶，有利于细菌在机体内扩散葡激酶、耐热核酸酶、透明质酸、脂酶，有利于细菌在机体内扩散15 侵袭性疾病侵袭性疾病：主要引起化脓性炎症。常见的有：主要引起化脓性炎症。常见的有： 皮肤软组织的感染皮肤软组织的感染：疖、痈、毛囊炎、脓疱疮、甲沟炎：疖、痈、毛囊炎、脓疱疮、甲沟炎、麦粒肿、伤口化脓；、麦粒肿、伤口化脓； 内脏器官的感染内脏器官的感染：气管、肺、脑膜、中耳、尿
13、路感染：气管、肺、脑膜、中耳、尿路感染 全身感染全身感染：败血症败血症 毒素性疾病：毒素性疾病： 食物中毒、假膜性肠炎、皮肤烫伤综合征、毒性休克综食物中毒、假膜性肠炎、皮肤烫伤综合征、毒性休克综合征等。合征等。2.2.所致疾病：所致疾病：痈痈麦粒肿麦粒肿甲沟炎甲沟炎毛囊炎毛囊炎16 烫伤样皮肤综合征烫伤样皮肤综合征 假膜性肠炎假膜性肠炎 173、微生物学检查、微生物学检查（一）标本的采集脓汁/渗出液 血液呕吐物/粪便（二）检查方法直接涂片分离培养与鉴定快速诊断试验肠毒素检查184、防治原则、防治原则及时处理伤口保证饮食卫生安全选择敏感药物治疗耐药性耐药性19二、链球菌属二、链球菌属 链球菌属种
14、类繁多，致病性强弱不一链球菌属种类繁多，致病性强弱不一, , 广泛分布于人粪便、鼻咽部广泛分布于人粪便、鼻咽部，大多数不致病，主要引起，大多数不致病，主要引起化脓性炎症化脓性炎症，如扁桃体炎、咽炎、新生，如扁桃体炎、咽炎、新生儿败血症、细菌性心内膜炎，儿败血症、细菌性心内膜炎，毒素性疾病毒素性疾病（猩红热）以及（猩红热）以及超敏反应超敏反应对人类致病的主要是对人类致病的主要是A A群链球菌和肺炎链球菌群链球菌和肺炎链球菌肺炎链球菌肺炎链球菌猪链球菌猪链球菌20 1.1.形态染色：形态染色：G+G+，呈呈链状链状排列排列，无芽孢、无鞭毛。多数幼龄期有荚膜，随培养时间的，无芽孢、无鞭毛。多数幼龄期
15、有荚膜，随培养时间的延长，菌体自身产生的延长，菌体自身产生的透明质酸透明质酸使荚膜消失。使荚膜消失。营养要求高，普通培养基上生长不良，兼性厌氧。营养要求高，普通培养基上生长不良，兼性厌氧。在液体培养基中混浊，在液体培养基中混浊，管低有絮状沉淀；管低有絮状沉淀；血平板上形成血平板上形成灰白色灰白色光滑型的细小菌落。分解葡萄糖，光滑型的细小菌落。分解葡萄糖，只产酸，只产酸，不分解菊糖，不被胆汁溶解不分解菊糖，不被胆汁溶解。肺炎链球菌肺炎链球菌 生物学性状生物学性状21在血平板上可有在血平板上可有、三种溶血三种溶血22 1) 1)根据溶血现象分类：根据溶血现象分类： 甲型溶血型链球菌（甲型溶血型链球
16、菌（溶血溶血）：）：菌落周围有菌落周围有草绿色草绿色溶血环，亦称为溶血环，亦称为草绿色链球菌。草绿色链球菌。溶血环中的溶血环中的红细胞并未完全溶解红细胞并未完全溶解，可能是细菌产生的，可能是细菌产生的H H2 2O O2 2使血红蛋白氧化成正铁血红蛋白的产物。使血红蛋白氧化成正铁血红蛋白的产物。此类细菌多为此类细菌多为条件致病菌条件致病菌 ( (拔牙、扁桃体摘除、龋齿拔牙、扁桃体摘除、龋齿) )乙型溶血型链球菌（乙型溶血型链球菌（溶血）：菌落周围形成溶血）：菌落周围形成完全透明完全透明的溶血环（，的溶血环（，也称为溶血性链球菌。其也称为溶血性链球菌。其致病性强致病性强，常引起人类和动物的多种疾
17、病。，常引起人类和动物的多种疾病。丙型链球菌（丙型链球菌（溶血）：不产生溶血素，菌落周围溶血）：不产生溶血素，菌落周围无溶血环无溶血环，也称为，也称为不溶血不溶血/ /链球菌，链球菌，无致病性无致病性，主要分布于乳类或动物的粪便中。，主要分布于乳类或动物的粪便中。 2.分类分类232)2)根据抗原分类：根据抗原分类： 根据细胞壁中的根据细胞壁中的多糖抗原多糖抗原不同分类，现已有不同分类，现已有2020个血清群。对人类个血清群。对人类致病的主要为致病的主要为A A群（群（90%90%以上，多数呈以上，多数呈溶血），其它如溶血），其它如B B、C C、D D、G G群群偶尔可感染人。同一群的链球菌
18、因其偶尔可感染人。同一群的链球菌因其表面抗原表面抗原不同又可分为若干血清不同又可分为若干血清型，例如型，例如A A群根据群根据M M抗原抗原的不同分为的不同分为10100 0个型。个型。3.3.抵抗力：抵抗力： 对理化因素对理化因素抵抗力弱抵抗力弱，不耐热不耐热（60 30min），对常用消毒剂敏感。），对常用消毒剂敏感。 青霉素是首选，极少产生耐药性。青霉素是首选，极少产生耐药性。 24链球菌引起的感染在临床上极为常见。链球菌引起的感染在临床上极为常见。（一）致病物质：（一）致病物质： 溶血素溶血素：能溶解红细胞能溶解红细胞，据其对氧的敏感性分为溶血素，据其对氧的敏感性分为溶血素O（SLO）
19、和溶血素和溶血素S（SLS），），前者对氧敏感，对热较稳定，抗原性强，感染后前者对氧敏感，对热较稳定，抗原性强，感染后23周可产生抗体（周可产生抗体（ASO）；）；后者对氧稳定，对热敏感，抗原性弱。后者对氧稳定，对热敏感，抗原性弱。 致热外毒素致热外毒素（SPE） ：也称：也称红疹毒素或猩红热毒素红疹毒素或猩红热毒素，具有致热作，具有致热作用和细胞毒作用，抗原性强，是人类猩红热主要致病物质。用和细胞毒作用，抗原性强，是人类猩红热主要致病物质。 侵袭性酶侵袭性酶：链激酶链激酶（溶解血块或阻止血浆凝固）、（溶解血块或阻止血浆凝固）、链道酶链道酶（降解脓（降解脓汁中具有高度黏稠性的汁中具有高度黏稠性
20、的DNA）、透明质酸酶（利于细菌扩散）、胶原酶。）、透明质酸酶（利于细菌扩散）、胶原酶。感染特点：感染病灶与周围界限不清，易于扩散，脓汁稀薄感染特点：感染病灶与周围界限不清，易于扩散，脓汁稀薄 菌体表面结构菌体表面结构：脂磷壁酸（黏附）、：脂磷壁酸（黏附）、M蛋白（抗吞噬）、蛋白（抗吞噬）、F蛋白蛋白（结合纤连蛋白）（结合纤连蛋白）4、致病性：、致病性：25（一）致病因子（一）致病因子脂磷壁酸脂磷壁酸(LTA) 黏附黏附于细胞表面于细胞表面F蛋白蛋白:与上皮细胞粘连蛋白结合，利于与上皮细胞粘连蛋白结合，利于定植定植和增殖，抗吞噬能力和增殖，抗吞噬能力M蛋白蛋白:抗吞噬抗吞噬和抗杀菌作用，介导细
21、菌的和抗杀菌作用，介导细菌的黏附黏附，参与超敏反应，参与超敏反应定植因子定植因子溶血素溶血素能溶解红细胞、破坏白细胞和血小板能溶解红细胞、破坏白细胞和血小板又称红疹毒素或猩红热毒素，引起发烧，是人类猩红又称红疹毒素或猩红热毒素，引起发烧，是人类猩红热的主要毒性物质，也可导致毒性休克综合征热的主要毒性物质，也可导致毒性休克综合征致热外毒素致热外毒素2、致病性、致病性侵袭性酶侵袭性酶透明质酸酶：分解细胞间质的透明质酸透明质酸酶：分解细胞间质的透明质酸链激酶：溶解血块或组织血浆凝固，链激酶：溶解血块或组织血浆凝固，利于扩散利于扩散。急性心肌梗塞。急性心肌梗塞链道酶：脓液变稀薄链道酶：脓液变稀薄胶原酶
22、：溶解胶原纤维胶原酶：溶解胶原纤维26A A群链球菌群链球菌：主要导致：主要导致化脓性感染化脓性感染，约占人类链球菌感染的，约占人类链球菌感染的90%90%， 1. 1.急性化脓性炎症：丹毒、蜂窝组织炎、淋巴（节）炎、脓皮病等急性化脓性炎症：丹毒、蜂窝组织炎、淋巴（节）炎、脓皮病等 2. 2.猩红热：链球菌经咽喉黏膜侵入机体，增殖并产生致热外毒素猩红热：链球菌经咽喉黏膜侵入机体，增殖并产生致热外毒素 3. 3.感染后超敏反应性疾病：感染后超敏反应性疾病： 急性肾小球肾炎：急性肾小球肾炎：上呼吸道及皮肤感染均可继发急性肾小球肾炎上呼吸道及皮肤感染均可继发急性肾小球肾炎 风湿热：风湿热：常继发于常
23、继发于A A族链球菌感染的咽炎族链球菌感染的咽炎 （二）所致疾病：（二）所致疾病：丹毒丹毒蜂窝组织炎蜂窝组织炎脓皮病脓皮病猩红热猩红热27其他链球菌感染其他链球菌感染 1.B1.B群链球菌：为阴道、鼻咽部的正常菌群，分娩时感染胎儿，导群链球菌：为阴道、鼻咽部的正常菌群，分娩时感染胎儿，导致新生儿致新生儿脑膜炎、肺炎、败血症脑膜炎、肺炎、败血症（死亡率（死亡率5070%5070%）。）。 2. 2.D D群肠球菌：属于皮肤、上呼吸道、消化道、泌尿生殖道的正常群肠球菌：属于皮肤、上呼吸道、消化道、泌尿生殖道的正常菌群，可导致老年及中青年女性的泌尿生殖道感染、化脓性盆腔感染菌群，可导致老年及中青年女
24、性的泌尿生殖道感染、化脓性盆腔感染、败血症败血症等。等。 3. 3.甲型溶血性链球菌：为人鼻咽、口腔、女性生殖道的正常菌群，甲型溶血性链球菌：为人鼻咽、口腔、女性生殖道的正常菌群，拔牙时，入血可导致亚急性拔牙时，入血可导致亚急性心内膜炎心内膜炎、败血症败血症等，变异链球菌与等，变异链球菌与龋齿龋齿有关。有关。龋齿龋齿28三、肺炎链球菌三、肺炎链球菌 寄生于正常人的鼻咽腔中，寄生于正常人的鼻咽腔中， 40 4070%70%的正常人鼻咽部携带有此菌的正常人鼻咽部携带有此菌，一般不致病，当机体免疫力下降时才致病，是细菌性肺炎的主要病一般不致病，当机体免疫力下降时才致病，是细菌性肺炎的主要病原体原体，
25、主要引起大叶性肺炎。，主要引起大叶性肺炎。 1.1.形态染色：形态染色： G+G+球菌，呈球菌，呈矛头状矛头状，排列时钝端相对，尖端相背，故又称肺炎双球，排列时钝端相对，尖端相背，故又称肺炎双球菌；在脓汁、痰液标本中有时呈单个或短链排列，液体培养基中呈链状。菌；在脓汁、痰液标本中有时呈单个或短链排列，液体培养基中呈链状。在人体内可形成在人体内可形成荚膜荚膜，人工传代后消失。，人工传代后消失。292 2、培养与生化、培养与生化 血平板上形成灰白色细小、半透明的菌落，血平板上形成灰白色细小、半透明的菌落， 呈呈溶血溶血，与甲型溶，与甲型溶血性链球菌相似。若孵育时间血性链球菌相似。若孵育时间48h4
26、8h，产生，产生自溶酶自溶酶，菌体溶解，菌，菌体溶解，菌落中央下陷呈脐状，在血清肉汤中培养早期呈混浊生长，稍久因落中央下陷呈脐状，在血清肉汤中培养早期呈混浊生长，稍久因自溶而逐渐澄清。自溶而逐渐澄清。分解菊糖，胆汁溶菌试验阳性分解菊糖，胆汁溶菌试验阳性1、生物学性状、生物学性状接种小白鼠接种小白鼠（腹腔）（腹腔）肺炎链球菌：肺炎链球菌：24h内死亡内死亡甲型溶血性链球菌：不死亡甲型溶血性链球菌：不死亡303.3.抗原结构：抗原结构：荚膜多糖抗原荚膜多糖抗原具有型特异性，分为具有型特异性，分为9 90 0多个血清型，其中多个血清型，其中2020多个可引起多个可引起疾病。疾病。M M蛋白：型特异性
27、抗原，但各型免疫原性不同，与细菌毒力无关蛋白：型特异性抗原，但各型免疫原性不同，与细菌毒力无关C C多糖：多糖：CRPCRP与肺炎链球菌多糖抗原结合能激活补体，并增强吞噬细胞与肺炎链球菌多糖抗原结合能激活补体，并增强吞噬细胞的吞噬功能。的吞噬功能。312、致病性、致病性一般不致病，多形成一般不致病，多形成带菌状态带菌状态；感染后获得；感染后获得牢固的免疫牢固的免疫。致病物质致病物质： 荚膜：荚膜：主要致病物质，有荚膜才能致病主要致病物质，有荚膜才能致病 溶血素溶血素O O：溶解红细胞、抑制吞噬：溶解红细胞、抑制吞噬 脂磷壁酸、神经氨酸酶、脂磷壁酸、神经氨酸酶、SIgASIgA蛋白酶蛋白酶所致疾
28、病：大叶性所致疾病：大叶性肺炎肺炎和和支气管炎支气管炎，也可引起肺脓肿、败，也可引起肺脓肿、败血症及脑膜炎、中耳炎等。血症及脑膜炎、中耳炎等。 多重耐药株多重耐药株增多，死亡率高增多，死亡率高323、微生物学检查、微生物学检查（一）标本的采集脓汁/渗出液/脑脊液血液/脑脊液（二）检查方法直接涂片分离培养与鉴定 动物试验小鼠对肺炎链球菌高度易感33提问提问1、巧克力培养基？、巧克力培养基？2、细菌毒素？、细菌毒素？3、溶血？溶血？4、如何区分甲型链球菌和肺炎链球菌？、如何区分甲型链球菌和肺炎链球菌？5、猩红热由哪个病原体造成？猩红热由哪个病原体造成？6 6、肺炎链球菌的生化培养特征、肺炎链球菌的
29、生化培养特征7、表皮剥脱毒素、表皮剥脱毒素34案例分析案例分析案例分析案例分析 患者，男，患者，男，16岁。因岁。因“发热、腹痛。腹泻、解脓便发热、腹痛。腹泻、解脓便1天天”就诊。就就诊。就诊前一天，患者晚餐进食卤肉后，当晚即感身体不适、头痛、发诊前一天，患者晚餐进食卤肉后，当晚即感身体不适、头痛、发热、恶心、四肢无力。半夜有阵痛性腹痛，大便为黄色水样，量热、恶心、四肢无力。半夜有阵痛性腹痛，大便为黄色水样，量多，其后每多，其后每0.5-1h排便排便1次，便前有剧烈腹痛，最近几次带有脓血次，便前有剧烈腹痛，最近几次带有脓血便，便后仍想解大便。便，便后仍想解大便。要求：从微生物学角度，应该考虑采
30、集哪些标本进行检测？要求：从微生物学角度，应该考虑采集哪些标本进行检测？ 如何设计鉴定试验？如何设计鉴定试验？ 试分析引起该患者腹泻的可能原因。试分析引起该患者腹泻的可能原因。35三糖铁琼脂试验三糖铁琼脂试验 志贺菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生志贺菌都能分解葡萄糖，产酸不产气，大多不发酵乳糖，不产生H2S。 沙门氏菌能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生沙门氏菌能分解葡萄糖，不发酵乳糖，大多数产生H2S，多数产气。，多数产气。 大肠埃希菌能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生大肠埃希菌能分解葡萄糖产酸产气，大多数能分解乳糖，不产生H2S。 对照对照志贺菌志贺菌 沙门
31、氏菌沙门氏菌大肠埃希菌大肠埃希菌乳糖：蔗糖：葡萄糖乳糖：蔗糖：葡萄糖=10:10:1, H2S酚红指示剂：酚红指示剂：酸性酸性黄色黄色pH6.6至至8.0橙色橙色碱性碱性红色红色36重要的致病菌包括重要的致病菌包括脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。一、脑膜炎奈瑟菌一、脑膜炎奈瑟菌，简称脑膜炎双球菌，是流行性脑脊髓膜炎简称脑膜炎双球菌，是流行性脑脊髓膜炎（流脑流脑）的病原菌。人是本菌的唯一宿主，主要通过咳嗽、喷嚏等）的病原菌。人是本菌的唯一宿主，主要通过咳嗽、喷嚏等飞沫传播飞沫传播，流脑患者和带菌者是本病的主要传染源。，流脑患者和带菌者是本病的主要传染源。（一）生物学性状（一）生
32、物学性状： 1. 1.形态染色：形态染色： G-G-球菌，菌体呈肾形或豆形，多成双排列，凹面相对；无鞭球菌，菌体呈肾形或豆形，多成双排列，凹面相对；无鞭毛，无芽孢。毛，无芽孢。 新分离株大多有荚膜和菌毛。新分离株大多有荚膜和菌毛。奈瑟菌属奈瑟菌属372.培养特征培养特征 专性需氧菌专性需氧菌，初次分离时应用，初次分离时应用510%的的CO2刺激刺激; 营养要求较高营养要求较高，在，在一般培养基上不生长，需加入全血、血清、腹水、卵黄等，一般培养基上不生长，需加入全血、血清、腹水、卵黄等，巧克力培养基：培养巧克力培养基：培养2448小时后形成圆形、突起、光滑、透明、边小时后形成圆形、突起、光滑、透
33、明、边 缘整齐的菌落，露珠样，直径缘整齐的菌落，露珠样，直径12mm。血平板：菌落形态似巧克力平板，不溶血。血平板：菌落形态似巧克力平板，不溶血。生长过程中产生自溶酶，生长过程中产生自溶酶，培养培养48小时后不易生长小时后不易生长。能分解葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气能分解葡萄糖、麦芽糖，产酸不产气383 3、抗原结构、抗原结构荚膜多糖抗原荚膜多糖抗原 有群特异性，分为有群特异性，分为A-DA-D、X X、Y Y、Z Z、29E29E、W135W135等等1313个血个血清群。对人致病的多属于清群。对人致病的多属于A A、B B、C C群；群；C C群致病力最强而病例极少群致病力最强而病例极少，B
34、 B群散群散发，我国发，我国95%95%属于属于A A群群。外膜蛋白抗原外膜蛋白抗原 分为分为1-51-5类，刺激机体产生抗体，有免疫保护作用类，刺激机体产生抗体，有免疫保护作用脂寡糖抗原（脂寡糖抗原（LOSLOS） 型特异性抗原，型特异性抗原，L1-L12L1-L12血清型。血清型。A A群群L10L10型为优势株型为优势株4.4.抵抗力弱，对热、冷、干燥等敏感，抵抗力弱，对热、冷、干燥等敏感，对常用消毒剂敏感。对青霉素敏感，对磺胺普遍耐药。对常用消毒剂敏感。对青霉素敏感，对磺胺普遍耐药。脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌（油镜）（油镜）G-，双球菌，双球菌39（二）致病性（二）致病性 1. 1.致病
35、物质：菌毛、致病物质：菌毛、荚膜荚膜和内毒素。和内毒素。 2. 2.所致疾病：流行性脑脊髓膜炎（流脑）所致疾病：流行性脑脊髓膜炎（流脑）致病过程：致病过程：通过通过菌毛菌毛黏附于鼻咽部上皮细胞表面引起局部感染，出现黏附于鼻咽部上皮细胞表面引起局部感染，出现上呼吸道上呼吸道症状症状; ;细菌进入细菌进入血液血液，引起，引起菌血症或败血症菌血症或败血症（2-3%2-3%，恶寒、发热、恶心、皮肤恶寒、发热、恶心、皮肤出血性皮疹出血性皮疹）；）；细菌进入细菌进入脑脊髓膜脑脊髓膜，引起化脓性脑脊髓膜炎，引起化脓性脑脊髓膜炎（ 2-3% 2-3%，头痛、喷射状呕吐，头痛、喷射状呕吐、颈项强直等）、颈项强直
36、等）；严重者导致爆发性脑膜炎；严重者导致爆发性脑膜炎（10-20%10-20%，爆发性紫癜、衰，爆发性紫癜、衰竭、内毒素休克、竭、内毒素休克、DICDIC及严重的中枢神经系统症状）及严重的中枢神经系统症状）。403、微生物学检查、微生物学检查（一）标本的采集脓汁/渗出液血液/脑脊液（二）检查方法直接涂片离心后涂片镜检41（三）免疫性（三）免疫性 特异性抗特异性抗荚膜多糖荚膜多糖抗体及抗抗体及抗外膜蛋白外膜蛋白抗体是主要的保护性抗体，抗体是主要的保护性抗体，SIgA可阻止该菌对呼吸道的侵袭。可阻止该菌对呼吸道的侵袭。疫苗疫苗荚膜多糖，荚膜多糖，A A、C C二价或二价或A A、C C、Y Y和和
37、W135W135四价混合多糖疫苗。四价混合多糖疫苗。治疗：青霉素、磺胺类等能通过血脑屏障的抗生素治疗：青霉素、磺胺类等能通过血脑屏障的抗生素42（一）生物学性状（一）生物学性状1.1.形态染色：形态染色： G-G-双球菌，菌体呈肾形或蚕豆状，凹面相对；双球菌，菌体呈肾形或蚕豆状，凹面相对； 急性患者中多数细菌位于脓汁标本的中性粒细胞内，而在慢性患急性患者中多数细菌位于脓汁标本的中性粒细胞内，而在慢性患者则菌量较少，且多位于细胞外；者则菌量较少，且多位于细胞外； 有菌毛，有荚膜。有菌毛，有荚膜。二、淋病奈瑟菌二、淋病奈瑟菌 432.2.培养特征：培养特征：专性专性需氧菌需氧菌，初次分离需要，初次
38、分离需要5 510%10%的的COCO2 2；营养要求高，在巧克力培养基；营养要求高，在巧克力培养基上生长缓慢，上生长缓慢，4848小时形成圆形、光滑、无色或灰白色小菌落，血平板上小时形成圆形、光滑、无色或灰白色小菌落，血平板上不溶血。只分解葡萄糖，产酸不产气。不溶血。只分解葡萄糖，产酸不产气。3.3.生化反应：生化反应： 不活泼，只分解葡萄糖，不分解麦芽糖，产酸不产气不活泼，只分解葡萄糖，不分解麦芽糖，产酸不产气4.4.抵抗力：抵抗力： 弱，对冷、热、干燥、消毒剂极度敏感，弱，对冷、热、干燥、消毒剂极度敏感，1/40001/4000硝酸银硝酸银7min7min死亡，死亡，1%1%硝酸银硝酸银
39、1min1min死亡。死亡。44（一）致病因子（一）致病因子依靠依靠菌毛菌毛黏附到柱状上皮细胞表面，能在吞噬细胞内寄生（抗吞噬）黏附到柱状上皮细胞表面，能在吞噬细胞内寄生（抗吞噬）黏附黏附外膜蛋白外膜蛋白PI: 破坏膜结构破坏膜结构的完整性导致中性粒细胞损伤，介导细菌与的完整性导致中性粒细胞损伤，介导细菌与靶细靶细 胞的胞的黏附黏附，组织吞噬溶酶体的形成，利于，组织吞噬溶酶体的形成，利于定植定植PII: 参与参与黏附黏附PIII：阻抑抗体活性阻抑抗体活性局部形成局部形成炎症炎症反应反应内毒素内毒素2、致病性、致病性45人是淋球菌的唯一天然宿主。几乎全是通过人是淋球菌的唯一天然宿主。几乎全是通过
40、性传播性传播感染，偶尔污染的内感染，偶尔污染的内衣、被褥、毛巾等也可衣、被褥、毛巾等也可间接传播间接传播，也可，也可垂直传播垂直传播。 感染淋球菌后，细菌借助感染淋球菌后，细菌借助菌毛吸附菌毛吸附于泌尿生殖道上皮细胞上，局部于泌尿生殖道上皮细胞上，局部大量繁殖，导致上皮细胞的溶解、破坏，引起大量繁殖，导致上皮细胞的溶解、破坏，引起急性化脓性炎症急性化脓性炎症，男性为，男性为尿道炎，女性为急性阴道炎和尿道炎。如果治疗不及时，该菌可沿泌尿尿道炎，女性为急性阴道炎和尿道炎。如果治疗不及时，该菌可沿泌尿系统扩散，造成各种合并症，如男性前列腺炎、附睾炎，女性盆腔炎、系统扩散，造成各种合并症，如男性前列腺
41、炎、附睾炎，女性盆腔炎、输卵管炎等，严重者可导致输卵管炎等，严重者可导致不孕、不育不孕、不育。 如孕妇感染淋球菌，分娩时胎儿可经产道感染，患淋菌性结膜炎。如孕妇感染淋球菌，分娩时胎儿可经产道感染，患淋菌性结膜炎。（二）所致病疾病（二）所致病疾病脓漏眼脓漏眼46（三）免疫性（三）免疫性 人无免疫力，多数可自愈，并出现特异性抗体，但再感染和人无免疫力，多数可自愈，并出现特异性抗体，但再感染和慢性患者普遍存在。慢性患者普遍存在。耐药株较多，耐药株较多，头孢菌素头孢菌素类治疗类治疗1%硝酸银硝酸银或其他银盐溶液处理新生婴儿或其他银盐溶液处理新生婴儿超级淋菌超级淋菌超级淋菌，超级淋菌，2013年年5月，
42、对头孢类药物有较好月，对头孢类药物有较好的抵抗性，如不及时阻住，的抵抗性，如不及时阻住，10年内将全球泛滥年内将全球泛滥473、微生物学检查、微生物学检查（一）标本的采集生殖道内脓性分泌物子宫颈口表面分泌物子宫颈口表面分泌物（二）检查方法直接涂片镜检分离培养与鉴定48其他化脓性细菌其他化脓性细菌1 1、铜绿假单胞菌、铜绿假单胞菌 俗称绿脓杆菌，广泛存在于自然界，是人体的正常菌群。俗称绿脓杆菌，广泛存在于自然界，是人体的正常菌群。uG-G-杆菌，无芽孢，杆菌，无芽孢，有荚膜，有鞭毛、菌毛有荚膜，有鞭毛、菌毛；u专性需氧，专性需氧，3535 ，在在4 4不生在而不生在而4242可生长可生长。普通培
43、养基上形成大。普通培养基上形成大小不一，扁平湿润，边缘不齐，带小不一，扁平湿润，边缘不齐，带亮绿色亮绿色的水溶性色素菌落。血琼脂上的水溶性色素菌落。血琼脂上产生产生透明溶血环透明溶血环。分解葡萄糖产酸不产气，不液化明胶。分解葡萄糖产酸不产气，不液化明胶u抗原结构抗原结构 O O和和H H抗原，抗原，O O抗原含有内毒素脂多糖、原内毒素蛋白（抗原含有内毒素脂多糖、原内毒素蛋白（OEPOEP）u抵抗力抵抗力 较强，耐多种化学消毒剂与抗生素，较强，耐多种化学消毒剂与抗生素，5656需需1h1h杀死杀死49致病性与免疫力致病性与免疫力致病物质：主要为内毒素致病物质：主要为内毒素所致疾病：条件致病菌，多
44、见于皮肤黏膜受损部位，长期化疗或免疫所致疾病：条件致病菌，多见于皮肤黏膜受损部位，长期化疗或免疫抑制缺陷患者。局部化脓性炎症，中耳炎、角膜炎、胃肠炎等；婴儿抑制缺陷患者。局部化脓性炎症，中耳炎、角膜炎、胃肠炎等；婴儿严重的流行性腹泻。严重的流行性腹泻。防治防治 OEP疫苗疫苗 氨基糖苷类和酰胺类抗生素联合治疗氨基糖苷类和酰胺类抗生素联合治疗50其他化脓性细菌其他化脓性细菌2 2、肠球菌属、肠球菌属是是G+G+中仅次于葡萄球菌的主要中仅次于葡萄球菌的主要医院感染病原菌医院感染病原菌，常见为尿路感染，创，常见为尿路感染，创伤或术后感染。伤或术后感染。常用青霉素和氨基糖苷类抗生素治疗。近年出现耐药株
45、常用青霉素和氨基糖苷类抗生素治疗。近年出现耐药株3 3、卡他布兰汉菌、卡他布兰汉菌又称黏膜炎布兰汉菌，又称黏膜炎布兰汉菌，G-G-球菌。在痰液中呈肾形双球菌状，存在于吞球菌。在痰液中呈肾形双球菌状，存在于吞噬细胞内或外。抵抗力较强。导致急性咽喉炎、支气管炎、肺炎、脑噬细胞内或外。抵抗力较强。导致急性咽喉炎、支气管炎、肺炎、脑膜炎等。膜炎等。51第三节、呼吸道感染细菌第三节、呼吸道感染细菌能侵犯呼吸道，引起呼吸道局部病变或以其为侵入门户，引起呼吸道能侵犯呼吸道，引起呼吸道局部病变或以其为侵入门户，引起呼吸道及其他组织器官病变的病原菌。及其他组织器官病变的病原菌。经呼吸道途径感染，口经呼吸道途径感
46、染，口-口途径口途径结核分枝杆菌结核分枝杆菌棒状杆菌棒状杆菌白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌嗜肺军团菌嗜肺军团菌百日咳鲍特菌百日咳鲍特菌流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌52细长而略带弯曲的杆菌，生长繁殖过程中常呈分枝状。无特殊结构；细长而略带弯曲的杆菌，生长繁殖过程中常呈分枝状。无特殊结构；不不易着色易着色，经加热、延长加热时间、提高染料浓度等措施后，一旦染色又，经加热、延长加热时间、提高染料浓度等措施后，一旦染色又能抵抗酸酒精脱色能抵抗酸酒精脱色，故又称抗酸杆菌（，故又称抗酸杆菌（acid fast bacillusacid fast bacillus）。）。对人致病的主要有：对人致
47、病的主要有： 结核分枝杆菌结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌非结核分枝杆菌 麻风分枝杆菌麻风分枝杆菌一、分枝杆菌属一、分枝杆菌属 53结核分枝杆菌简称结核杆菌（结核分枝杆菌简称结核杆菌（TBTB），），是引起人类结核病的病原菌，是引起人类结核病的病原菌，通常是指通常是指人型和牛型人型和牛型。一、生物学性状：一、生物学性状：形态染色：形态染色： 1. 1.组织中典型的结核杆菌为组织中典型的结核杆菌为细长细长、直或微弯曲直或微弯曲，在痰液中多单个存在，在痰液中多单个存在，有时呈分枝状；菌量多时可聚集成团有时呈分枝状；菌量多时可聚集成团或束（簇）；人工培养后可呈丝状、棒状。一般牛型较人型粗短。或束（簇）；
48、人工培养后可呈丝状、棒状。一般牛型较人型粗短。 2. 2.G+G+杆菌杆菌, ,无鞭毛、无芽孢，有荚膜。无鞭毛、无芽孢，有荚膜。抗酸染色成红色，抗酸染色成红色，金胺金胺O O染色呈金黄色荧光。染色呈金黄色荧光。结核分枝杆菌结核分枝杆菌54培养特征：培养特征： 1.1.专性需氧专性需氧，初次分离需要，初次分离需要5 510% 10% COCO2 2刺激。刺激。 2. 2.温度范围广，温度范围广，3737最适；最适最适；最适pHpH值值6.56.56.86.8；生长需要一定的湿度。；生长需要一定的湿度。 3. 3.营养要求高营养要求高，需要加入卵黄、血液、马铃薯粉、氨基酸，无机盐等，需要加入卵黄、
49、血液、马铃薯粉、氨基酸，无机盐等( (罗氏培养基罗氏培养基) )。 4. 4.生长缓慢，生长缓慢，18182424小时分裂一代，小时分裂一代，3 34 4周形成菌落。周形成菌落。 55 5. 5.在罗氏培养基中人型结核分枝杆菌的在罗氏培养基中人型结核分枝杆菌的菌落为粗糙型表面干燥、颗粒状、不透明，乳菌落为粗糙型表面干燥、颗粒状、不透明，乳白色或淡黄色，菜花状；牛型结核分枝杆菌菌白色或淡黄色，菜花状；牛型结核分枝杆菌菌落为落为S S型。型。 6. 6. 在液体培养基中结核杆菌生长迅速，在液体培养基中结核杆菌生长迅速，形成菌膜，有毒株可呈形成菌膜，有毒株可呈索状生长索状生长。56（三）抵抗力：（三
50、）抵抗力： 结核杆菌细胞壁含有大量脂类，对理化因素的结核杆菌细胞壁含有大量脂类，对理化因素的抵抗力强抵抗力强。 耐干燥耐干燥：细菌细胞壁中含有大量的脂质，可防止水分的丢失；：细菌细胞壁中含有大量的脂质，可防止水分的丢失；在干燥的痰液中可存活在干燥的痰液中可存活6 68 8个月，粘附于尘埃中传染性能保持个月，粘附于尘埃中传染性能保持8 81010天；天； 耐酸碱耐酸碱：4% 4% NaOHNaOH、3% HCl3% HCl、6% H6% H2 2SOSO4 4中半小时仍能存活，故可中半小时仍能存活，故可用酸或碱处理标本去除杂菌；用酸或碱处理标本去除杂菌； 耐青霉素耐青霉素及低浓度的染料（龙胆紫、
