1、切取切取外植体外植体接种接种愈伤组织的形成愈伤组织的形成分化形成芽或根分化形成芽或根试管苗的形成试管苗的形成移栽移栽植物组织培养植物组织培养脱分化脱分化再分化再分化几个关键词几个关键词:细胞离体、一定的营养物质细胞离体、一定的营养物质( (水、无机盐、蔗糖、维水、无机盐、蔗糖、维生素等)、激素(细胞分裂素和生长素)和其他外生素等)、激素(细胞分裂素和生长素)和其他外界条件界条件必要条件必要条件:脱分化脱分化: :再分化再分化: :愈伤组织愈伤组织: :胚状体胚状体: :已经分化的细胞,在一定的条件下,重新回复到原始的未已经分化的细胞,在一定的条件下,重新回复到原始的未分化状态分化状态脱分化的细
2、胞,在一定的条件下,又重新分化成各种特异脱分化的细胞,在一定的条件下,又重新分化成各种特异性的组织细胞的过程性的组织细胞的过程在人工培养基上长出来的一团无序生长的薄壁细胞在人工培养基上长出来的一团无序生长的薄壁细胞(细胞排列疏松、细胞壁薄、相对未分化)。(细胞排列疏松、细胞壁薄、相对未分化)。细胞分化细胞分化: :在发育过程中,具有全能性的细胞(如受精卵细胞)在发育过程中,具有全能性的细胞(如受精卵细胞)逐步转变成形态、结构、功能各异的组织细胞的过程逐步转变成形态、结构、功能各异的组织细胞的过程12取动物组织块取动物组织块制成细胞悬液制成细胞悬液用用胰蛋白酶胰蛋白酶酶解,消化组织中的酶解,消化
3、组织中的胶原纤维胶原纤维和和细胞外的其他成分,获得细胞外的其他成分,获得单个的单个的成纤维细胞成纤维细胞悬浮液悬浮液剪碎组织剪碎组织转入培养液中转入培养液中进行进行原代培养原代培养转入培养转入培养液中进行液中进行传代培养传代培养贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理分散成单个细胞,制成细胞悬液分散成单个细胞,制成细胞悬液放入二氧放入二氧化碳培养化碳培养箱中培养箱中培养原代培养的贴壁细胞达到生长原代培养的贴壁细胞达到生长基质的基质的80%80%表面积时表面积时v所谓细胞所谓细胞“一代一代”,即从细胞接种到分离再培养的一,即从细胞接种到分离再培养的一段时间。如某一细胞系为段时间。如某一细胞系为5050代即该细胞已传代代即该细胞已传代5050次。次。