1、液体活检专业知识宣液体活检专业知识宣讲讲内容摘要内容摘要一一. . 液体活检液体活检 1 1）cfDNA&ctDNA & CTCcfDNA&ctDNA & CTC概念和最新研究进展概念和最新研究进展二二. CTC/CTSC. CTC/CTSC研究方法和进展研究方法和进展 2 2）液体活检应用和意义）液体活检应用和意义三三. . 我们的研究我们的研究液态活检 来源于肿瘤组织，存在来源于肿瘤组织，存在于血液中：于血液中：循环肿瘤细胞循环肿瘤细胞 （CTCCTC）循环肿瘤循环肿瘤DNADNA（ctDNActDNA）肿瘤外泌体肿瘤外泌体 exosomeexosome 提示肿瘤发展进程及抗药性等信息，指
2、导个体化精准治疗Diaz LA Jr, Bardelli A.Liquid Biopsies: Genotyping Circulating Tumor DNA. J Clin Oncol. 2014; 32(6): 579586cfDNA WhatWhat : :循环游离循环游离DNADNA，机体细胞释放入外周血，机体细胞释放入外周血循环后发生部分降解的内源性循环后发生部分降解的内源性DNADNA。高度片段。高度片段化，约化，约170bp170bp。 Source:Source:正常细胞、异常细胞（如肿瘤细胞）正常细胞、异常细胞（如肿瘤细胞），病毒，病毒DNADNA 等等 State: St
3、ate: 半衰期短，动态表达量，核小体以单半衰期短，动态表达量，核小体以单个、双联或三联的形式进入血液，并逐步分解个、双联或三联的形式进入血液，并逐步分解。cfDNA（cell-free DNA）ctDNAWhatWhat: : 循环肿瘤循环肿瘤DNADNA，是指肿瘤细胞，是指肿瘤细胞DNADNA经脱落或细经脱落或细胞凋亡后释放进入循环系统。一种特征性的胞凋亡后释放进入循环系统。一种特征性的肿瘤生肿瘤生物标记物物标记物，可以被定性、定量和追踪。，可以被定性、定量和追踪。 SourceSource: :来源于肿瘤细胞的来源于肿瘤细胞的cfDNAcfDNA，属于，属于cfDNAcfDNA的一的一种
4、类型。不同患者的水平差异显著，受肿瘤负荷，种类型。不同患者的水平差异显著，受肿瘤负荷，分期等因素的影响分期等因素的影响ctDNA（circulating tumor DNA）cfDNA & ctDNAcfDNA & ctDNAEllen Heitzer,Peter Ulz,and Jochen B.Geig.Circulating Tumor DNA as a Liquid Biopsy for Cancer. Clinical Chemistry . 2015,1121231：CAPP-Seq（cancer personalized profiling by deep sequencing）
5、癌症个体化深度测序分析方法:利用定制化的NimbleGen SeqCap EZ Choice Library作为”筛选器“对样本靶向捕获后再深度测序，灵敏度高，特异性强且经济可行。2 2：利用数字错误抑制（IDES）的方法和CAPP-seq（ctDNA测序方法），能够检测到频率低至0.004的突变等位基因Newman AM , Lovejoy A F , Klass DM, et al. Integrated digital error suppression for improved detection of circulating tumor DNA. Nature Biotechnolo
6、gy(2016) doi:10.1038/nbt.3520ctDNA-ctDNA-高通量测序高通量测序cfDNAcfDNA片段谱系分析Deep sequencing of circulating cell-freeDNA yields a dense, genome-wide map ofnucleosome occupancy that enables identification of its cell-types of origin,potentially enabling the noninvasive monitoring of a broader set of clinical c
7、onditionsMatthew W. Snyder, Martin Kircher,Andrew J. Hillet al. Cell-free DNA Comprises an In Vivo Nucleosome Footprint that Informs Its Tissues-Of-Origin.Cell. 2016 Jan 14;164(1-2):57-68. CTCWhatWhat： 循环肿瘤细胞，是指从实体瘤中脱离出来并循环肿瘤细胞，是指从实体瘤中脱离出来并进入外周血液循环的肿瘤细胞。进入外周血液循环的肿瘤细胞。Source: Source: 原发肿瘤原发肿瘤和和转移灶转移灶
8、都会释放都会释放CTCCTC。可检测到。可检测到的的CTCCTC是肿瘤细胞在循环系统微环境下生存竞争的结是肿瘤细胞在循环系统微环境下生存竞争的结果果。CTC（circulating tumor cells）液体活检应用价值液体活检应用价值（监测肿瘤特异性突变发现肿瘤复发）Ellen Heitzer,Peter Ulz,and Jochen B.Geig.Circulating Tumor DNA as a Liquid Biopsy for Cancer. Clinical Chemistry . 2015,112123液体活检应用价值液体活检应用价值（分析耐药株的遗传变异）Ellen Hei
9、tzer,Peter Ulz,and Jochen B.Geig.Circulating Tumor DNA as a Liquid Biopsy for Cancer. Clinical Chemistry . 2015,112123 液体活检优势及前景液体活检优势及前景液态活检无侵入性、可频繁多次检测及快速反应能力均体现出发展潜液态活检无侵入性、可频繁多次检测及快速反应能力均体现出发展潜力巨大应用价值。将削减无效肿瘤医疗开支、降低医疗成本。力巨大应用价值。将削减无效肿瘤医疗开支、降低医疗成本。适应症广泛，如适应症广泛，如乳腺癌、结直肠癌、肺癌、胃癌、食管癌乳腺癌、结直肠癌、肺癌、胃癌、食管
10、癌等常见肿瘤等常见肿瘤均可用液态活检技术进行诊断与监测。均可用液态活检技术进行诊断与监测。20152015年美国发布的肿瘤治疗计划的四大举措之一：年美国发布的肿瘤治疗计划的四大举措之一：“液态活检液态活检”血浆血浆开发新方法来评估治疗反应以及抵抗可能的耐药性。开发新方法来评估治疗反应以及抵抗可能的耐药性。根据中国国家癌症中心发布的数据，我国根据中国国家癌症中心发布的数据，我国5 5年内诊断为癌症且仍存活的年内诊断为癌症且仍存活的病例数约为病例数约为749749万万。也是液态活检巨大的市场。也是液态活检巨大的市场。CTC CTC 研究概况研究概况1 1）CTCCTC与转移的关系与转移的关系 2
11、2）CTCCTC异质性与肿瘤治疗异质性与肿瘤治疗 3 3）CTCCTC应用和意义应用和意义 4 4）CTC CTC 研究方法研究方法 CTCs (circulating tumor cells, CTCs) Ashworth Ashworth早在早在18961896年就提出了循环肿瘤细胞的概念。侵入循环系年就提出了循环肿瘤细胞的概念。侵入循环系统的肿瘤细胞，大部分由于机体的免疫识别、机械杀伤及自身凋亡在统的肿瘤细胞，大部分由于机体的免疫识别、机械杀伤及自身凋亡在短期内死亡，只有极少数存活下来，在适于自身存活和增殖的器官或短期内死亡，只有极少数存活下来，在适于自身存活和增殖的器官或组织形成转移灶
12、。组织形成转移灶。CTCCTC与肿瘤转移与肿瘤转移Simon A Joosse, Tobias M Gorges, and Klaus Pantel. Biology, detection, and clinical implications of circulating tumor cells. EMBO Mol Med. 2015 ; 7(1): 111.Brouwer A, De Laere B, Peeters D, et al.consequences of heterogeneity in the circulating tumor cell compartment. Oncota
13、rget. 2016 Mar 9. doi: 10.18632/oncotarget.8015.CTCCTC异质性异质性CTCCTC应用和意义应用和意义CTCs肿瘤转移肿瘤转移预测预测肿瘤治疗肿瘤治疗CTCs数量改变反映了肿瘤细胞对各种治数量改变反映了肿瘤细胞对各种治疗方案的敏感性和有效性，为个体化治疗疗方案的敏感性和有效性，为个体化治疗提供依据提供依据。监测早期转移监测早期转移乳腺癌、前列腺癌乳腺癌、前列腺癌结肠癌、肺癌、胃癌、结肠癌、肺癌、胃癌、肝癌、胰腺癌多种肿瘤肝癌、胰腺癌多种肿瘤监测监测CTCs基因表达突变，找到药物敏基因表达突变，找到药物敏感的靶点，指导个体化治疗感的靶点，指导个体
14、化治疗CTCCTC优化治疗方案优化治疗方案 2014 2014年年GoldKornGoldKorn，接受，接受多西他赛联合阿曲生坦治疗多西他赛联合阿曲生坦治疗的转移性去势的转移性去势抵抗性前列腺癌患者，基线循环肿瘤细胞抵抗性前列腺癌患者，基线循环肿瘤细胞CTCCTC数量可预测预后，数量可预测预后，3 3周时周时CTCCTC升高提示总生存较差，有望作为升高提示总生存较差，有望作为重新指导重新指导和和优化治疗优化治疗的较好指标的较好指标。Goldkorn A，Ely B，Quinn DI，et alCirculating Tumo cell counts are Prognostic of ove
15、rall survival in SWOG S0421：a Phase III Trial of docetaxel with or without atrasentan For Metastatic castration resistant prostate cancer.J Clin Oncol2014 32(11)：1136-1142 2012 2012年年Bian,Bian,乳癌患者在接受化疗乳癌患者在接受化疗（白蛋白结合型紫杉醇白蛋白结合型紫杉醇+ +卡培卡培他滨他滨+ +曲妥珠单抗）前后曲妥珠单抗）前后CTCCTC变化。变化。治疗前治疗前：CTCCTC 3 3，HER-2+HER-
16、2+； 1 1疗程：疗程： CTC 0CTC 0。6 6疗程：疗程：病理学病理学 CR CR。证实证实CTCCTC值在乳腺癌值在乳腺癌治疗早期治疗早期发生显著变化，能够准确发生显著变化，能够准确预示疗效，预示疗效，能够科学指导选择治疗方案能够科学指导选择治疗方案。Bian L，Wang T，Liu Y，et alEvaluation of treatment response for breast cancer：are we Entering the era of ”biological Complete remission”?Chin J Cancer Res2012，24：403-407C
17、TCs的研究方法的研究方法Ramdane Harouaka , Zhigang Kang , Si-Yang Zheng , Liang Cao. Circulating tumor cells: Advances in isolation and analysis, and challenges for clinical applications. Pharmacology & Therapeutics.2014; 141:209221.研究方法研究方法（1）-Cell SearchCellSearchCellSearch系统是系统是唯一唯一经经FDAFDA批准进入临床应用的批准进入临床应用
18、的CTCsCTCs检检测方案。测方案。原理：原理：EpCAMEpCAM抗体标识的微磁珠从全血中捕获细胞，用免抗体标识的微磁珠从全血中捕获细胞，用免疫荧光识疫荧光识EpCAM+CK+CD45EpCAM+CK+CD45进行磁性分离进行磁性分离。CTCEpCAMCKCD45DAPICell Search 数据解读数据解读: : 1. 7.5ML1. 7.5ML外周血外周血 判断阈值：判断阈值： 转移性乳腺癌转移性乳腺癌 CTCs CTCs 55 细胞细胞 前列腺癌前列腺癌 CTCs CTCs 55细胞细胞 结肠癌：结肠癌：CTCs CTCs 33细胞细胞 表明预后不良表明预后不良3. 3. 目前目前
19、FDAFDA只批准用于以上只批准用于以上三种三种肿瘤肿瘤CTCsCTCs的研究方法（的研究方法（2 2）- -基因芯片基因芯片CTCsCTCs的研究方法（的研究方法（3 3）- -测序测序Xiaohui Nia, Minglei Zhuo, Zhe Sua，et al. Reproducible copy number variation patterns among single circulating tumor cells of lung cancer patients. PNA,2013,52(110) 21083-21088. Xiaohui Nia, Minglei Zhuo, Z
20、he Sua，et al. Reproducible copy number variation patterns among single circulating tumor cells of lung cancer patients. PNA,2013,52(110) 21083-21088. Ramdane Harouaka , Zhigang Kang , Si-Yang Zheng , Liang Cao. Circulating tumor cells: Advances in isolation and analysis, and challenges for clinical
21、applications. Pharmacology & Therapeutics.2014; 141:209221.CTCsCTCs的分离方法（的分离方法（1 1）CTCsCTCs的分离方法（的分离方法（2 2）- -体外培养体外培养Min Yu , Aditya Bardia , Nicola Aceto, et al. Ex vivo culture of circulating breast tumor cells forindividualized testing of drug susceptibility. Science. 2014 ; 345(6193): 216220.Pa
22、panicolaou staining for uncultured primary Representative images of nonadherent CTCimmunofluorescent staining ：CK： red；Ki67：yellow； CD45 ：green； DAPI： blue. CTSC CTSC 研究概况研究概况1 1）CTSCCTSC定义定义 2 2）CSC,CTC,CTSCCSC,CTC,CTSC三者关系三者关系 3 3）CTCTS SC C研究进展研究进展 4 4）CTCTS SC C 研究难点和未来方向研究难点和未来方向CTSC CTSC 背景介绍背
23、景介绍循环肿瘤干细胞（循环肿瘤干细胞（circulating tumor stem cells, CTSCscirculating tumor stem cells, CTSCs）：CTCsCTCs中具有中具有干细胞特性干细胞特性，即自我更新及分化潜能的一小群，即自我更新及分化潜能的一小群细胞细胞。作为标志物作为标志物CTSCCTSC具有更重要的临床价值。具有更重要的临床价值。EMTEMT可使可使CTCsCTCs获得干细胞特性，而具有获得干细胞特性，而具有药物耐受性药物耐受性和和高侵高侵袭性袭性。CTSCCTSC已在包括肝癌，乳腺癌，胃癌，结直肠癌等多种肿瘤已在包括肝癌，乳腺癌，胃癌，结直肠癌
24、等多种肿瘤中被证实。中被证实。CSC ,CTC ,CTSC（肿瘤转移等级结构图）Yang MH, Imrali A, Heeschen C.Circulating cancer stem cells: the importance to select.Chin J Cancer Res. 2015 Oct;27(5):437-49.Markers for CTSCYang MH, Imrali A, Heeschen C.Circulating cancer stem cells: the importance to select.Chin J Cancer Res. 2015 Oct;27(
25、5):437-49.乳腺癌乳腺癌CTSCCTSC研究进展研究进展学者们采用不同的表面标志物组合来定义学者们采用不同的表面标志物组合来定义CTSCCTSC：Epcam/CK/CD44CD24； Epcam/CK/ALDH1CD24Epcam/CK/Vimentin/Fibernectin；Epcam/CK/TWISTI/Akt2PDKaEpcam/Muc1/HER2KasimirBauer S，Hoffmann 0，Wallwiener D，et a1Expression Of stem cell and epithelialmesenchymal transition markers in P
26、rimary breast cancer Patients With circulating tumor cells JBreast Cancer Res，2012，14(1)：R15Baccelli I，Schneeweiss A，Riethdorf S，et a1Identification of a population of blood circulating tumor cells from breast cancer patients that initiates metastasis in a xenografi assayJNat Biotechnol，2013，31(6)：5
27、39544乳腺癌乳腺癌CTSCCTSC研究进展研究进展Yu MBardia A，Wittner BSet a1Circulating breast tumor cells Exhibit dynamic changes In Epithelial and mesenehymal eompostionJScience，2013，339(6119)：580-584 EPCAM low MET high CD47 high CD44 high 20132013年上海复旦大学附属肝癌研究所樊嘉及周俭研究组年上海复旦大学附属肝癌研究所樊嘉及周俭研究组通过研究通过研究123123例肝癌患者例肝癌患者CTC
28、sCTCs相关肿瘤干细胞免表标记物，包相关肿瘤干细胞免表标记物，包括括CD133CD133、ABCG2ABCG2、CD90CD90、-catenin-catenin、E-cadherinE-cadherin以及以及VimentinVimentin。 2013 2013年年Liu Liu 等鉴于等鉴于 ICAM-1 ICAM-1 可能是肝癌干细胞标志物，可能是肝癌干细胞标志物， 也采用流式细胞术检测了肝癌血样，也采用流式细胞术检测了肝癌血样， 发现部分病例可检出发现部分病例可检出 CD45 - ICAM-1 + CD45 - ICAM-1 + 细胞，细胞， 这样的细胞具有较强的体外成球和这样的细
29、胞具有较强的体外成球和体内致瘤能力。体内致瘤能力。Y.F., et al., Circulating stem cell-like epithelial cell adhesion molecule-positive tumor cells indicate poor prognosis of hepatocellular carcinoma after curative resection. Hepatology, 2013. 57(4): p. 1458-68。 Liu S, Li N, Yu X, et al. Expression of intercellular adhesionmo
30、lecule 1 by hepatocellular carcinoma stem cells and circulating tumor cellsJ. Gastroenterology, 2013, 144(5):1031-1041肝癌肝癌CTSCs研究进展研究进展我们的研究我们的研究 1) CSC and miRNA2) CTC and CTSC 项目研究基础项目研究基础前期基金支持前期基金支持1. 2014年福建省卫教联合项目：年福建省卫教联合项目： 结直肠癌循环肿瘤细胞和肿瘤干细胞的分子结直肠癌循环肿瘤细胞和肿瘤干细胞的分子机制研究（机制研究（WKJ-FJ-14）2. 2012年福建
31、省科技厅重点项目年福建省科技厅重点项目:循环肿瘤细胞与肿瘤干细胞在恶性肿瘤个循环肿瘤细胞与肿瘤干细胞在恶性肿瘤个体化治疗中的应用研究体化治疗中的应用研究（2012Y0017）；）； 3. 2012年福建省卫生厅青年课题年福建省卫生厅青年课题:结直肠癌循环肿瘤细胞及其上皮间质变标结直肠癌循环肿瘤细胞及其上皮间质变标 志物的定量检测志物的定量检测（2012-2-13）；）；4. 2012年福建省自然科学基金项目年福建省自然科学基金项目:miR-148家族家族-靶蛋白网络在肝癌干细胞中靶蛋白网络在肝癌干细胞中调控机制研究调控机制研究（2012J05138）；）； 5. 2011年福建省医学创新课题年
32、福建省医学创新课题:乳腺癌循环肿瘤细胞（乳腺癌循环肿瘤细胞（CTC）及其单细胞多基）及其单细胞多基因检测的临床意义因检测的临床意义（2011-CX-16）；）；6. 2011年福建省自然科学基金项目年福建省自然科学基金项目:循环肿瘤细胞及其耐药基因表达水平在晚循环肿瘤细胞及其耐药基因表达水平在晚期乳腺癌化疗敏感性中的应用研究期乳腺癌化疗敏感性中的应用研究（2011J01141） 基金支持基金支持8. 8. 20092009年年福建省自然科学基金项目福建省自然科学基金项目: :靶向乳腺癌干细胞的树靶向乳腺癌干细胞的树 突状瘤苗抗肿瘤的研究突状瘤苗抗肿瘤的研究(2009J01118)(2009J0
33、1118)9. 9. 20082008年福建省自然科学基金项目年福建省自然科学基金项目: :miRNAmiRNA靶向肝癌靶向肝癌SPSP、NSPNSP 细胞基因差异表达的研究细胞基因差异表达的研究（2008J00772008J0077）7. 20167. 2016年福建省自然科学基金项目：年福建省自然科学基金项目：miR-194miR-194调控肝癌干细调控肝癌干细 胞的靶基因和胞的靶基因和 LncRNA LncRNA 鉴定鉴定 （2016J014362016J01436）MoFloMoFlo超高速流式细胞分选系统超高速流式细胞分选系统稀有细胞检稀有细胞检测的灵敏度测的灵敏度高高分选速度快分选
34、速度快 研究基础设备研究基础设备CSC- Side population(SP) assayIt is generally accepted that SP cells possess stem cell characteristics.Critical: Optimize Hoechst 33342 staining procedure to achieve a consistent and tumorigenic SP subtype as SP approach is based on the functional property of CSCs to exclude Hoechst-
35、33342-dye via ABC transporters. SPNSP-MoFlo analysis and sorting-Sphere formation assayFloating spheres were formed by SP cells, while none by NSP cellsHep-3B PLC/PRF/5 Huh-7 实验数据实验数据-Tumors formed in NOD/SCID micePLC/PRF/5 Huh-7 Hep-3B Week 12;1103 cells;SP: blue arrow; NSP: red arrow. miRNA profil
36、ing result by RT-qPCRmiRNA IDSP/NSP Fold changesP0.05miR-9-3miR-9*-2.41miR-23b-2.12miR-27b-2.35miR-96-2.8miR-151-3p-2.65miR-151-5p-2.57miR-183*-2.23miR-183-3.16miR-194-2.03miR-146a-3.44miR-148b-3.14miR-340-3p-2.85miR-421-2.32miRNA IDSP/NSP Fold changesP0.05 miR-135b*-3.55miR-489-3.28miR-15a-2.79miR-
37、21-2.67miR-22-2.5miR-365-2.47miR-450a-5p-2.46miR-7a-2.44miR-26b-2.28miR-125a-5p-2.27miR-25-2.22miR- 126-3p-2.15miR-182-2.14A total of 370 miRNA species were analyzed in PLC/PRF/5 SP and NSP cells, 27 miRNAs were identified as differentially expressed, all of which were down-regulated in SP .实验数据实验数据
38、-miR-148b-miR-148b在在SPSP中低表达中低表达实验数据实验数据-miR-148b-miR-148b改变改变SPSP比例比例实验数据实验数据-miR-148b-miR-148b改变增殖与耐药改变增殖与耐药实验数据实验数据-miR-148b-miR-148b改变迁移侵袭与血管生成改变迁移侵袭与血管生成实验数据实验数据-miR-148b-miR-148b过表达抑制肿瘤生成过表达抑制肿瘤生成实验数据实验数据-miR-148b-miR-148b沉默促进肿瘤生成沉默促进肿瘤生成研究方案研究方案CTC/CTSC CTC/CTSC 研究方案研究方案分选流程分选流程已完成已完成200200例鼻
39、咽癌患者例鼻咽癌患者CTCCTC检测，检测，100100例乳腺癌患例乳腺癌患者者CTCCTC检测，检测，100100例肺癌患者例肺癌患者CTCCTC检测，检测，150150例直肠例直肠癌患者癌患者CTC/CTSCCTC/CTSC检测，具备完善的检测，具备完善的CTCCTC检测技术流检测技术流程。程。在研项目：在研项目：150150例初诊未治肠癌患者，跟踪其全病例初诊未治肠癌患者，跟踪其全病程临床资料并抽取各阶段血样，分析患者程临床资料并抽取各阶段血样，分析患者各个时各个时期期CTCs/CTSCsCTCs/CTSCs数值，以数值，以PSFPSF为观察点，评估为观察点，评估CTCs/CTSCsCT
40、Cs/CTSCs数值与数值与临床分期、预后、治疗方案临床分期、预后、治疗方案及及疗效疗效等情况的相关性，等情况的相关性， 尤其是尤其是手术配合细胞治疗手术配合细胞治疗的疗效观察，开发的疗效观察，开发CTC/CTSCCTC/CTSC在疗效评估中的应用。在疗效评估中的应用。研究数据研究数据入组初诊未治肠癌患者入组初诊未治肠癌患者150例例跟踪患者全程临床资料并抽取各阶段血样跟踪患者全程临床资料并抽取各阶段血样（TIL组：组：根治术前、术后第一次细胞治疗后根治术前、术后第一次细胞治疗后 、细胞治疗、细胞治疗2个周期后、细胞个周期后、细胞治疗治疗3个周期后个周期后对照组：对照组：根治术前、术后根治术前
41、、术后7天、术后天、术后1月，术后月，术后2月月每月一次每月一次 ）利用利用Moflo对对CTCs/CTSCs计数计数患者各个时期患者各个时期CTCs/CTSCs数值与数值与临床分期、预后、治疗方案临床分期、预后、治疗方案及疗效及疗效等情况相关性等情况相关性以以PSF为观察点，评估手术配合为观察点，评估手术配合细胞治疗细胞治疗的疗效的疗效观察观察难点和关键技术难点和关键技术CTC/CTSC研究研究难点难点稀有性稀有性：仅占：仅占PBMC的的1/106活性活性：难以保：难以保持细胞活性进持细胞活性进行后续研究行后续研究单细胞性单细胞性：细：细胞稀少难以进胞稀少难以进行后续研究行后续研究分选精度可
42、达分选精度可达到到1/106可保持分选后可保持分选后细胞的活性细胞的活性进行单细胞进行单细胞水平水平RNA提提取和预扩增，取和预扩增，保证下游基保证下游基因表达谱分因表达谱分析的质量析的质量MoFlo超高超高速流式细胞速流式细胞分选系统分选系统REPLI-g WTA Single Cell Kit本本项项目目关关键键技技术术流式分析流式分析CTCCTC敏感性专一性检测敏感性专一性检测研究数据研究数据研究数据研究数据CTCsCTCs的画门模式的画门模式研究数据研究数据CTSCsCTSCs的画门模式的画门模式CTCsCTCs的检测的检测研究数据研究数据研究数据研究数据CTSCsCTSCs的检测的检
43、测首诊初治结直肠癌患者首诊初治结直肠癌患者CTC/CTSCCTC/CTSC检测分析结果检测分析结果Patient CharacteristicsNumber(%) CTC、CTSC(CD44+)p-value 6025(50.0)1312Sex0.205female20(40.0)1010man30(60.0)1317Tumor size(cm)0.189526(52.0)1313524(48.0)1014TNM stage0.072I5(10.0)41II11(22.0)92III29(58.0)218IV5(10.0)14T stage0.118T12(4.0)11T25(10.0)50T
44、34(8.0)31T439(78.0)2613RLNM0.032N017(34.0)143N121(42.0)1011N212(24.0)102M (metastasis)0.024M045(90.0)34 11M15(10.0)14研究数据研究数据结直肠癌患者转移后化疗期间结直肠癌患者转移后化疗期间CTC/CTSCCTC/CTSC变化跟踪变化跟踪研究数据研究数据CTCCTC分选分选分选白细胞对照：DAPI+/CD45-/Epcam-分选CTC细胞：DAPI+/CD45-/Epcam+实验方案实验方案研究数据研究数据- -表达谱芯片聚类图肿瘤组织 正常组织 CTC细胞 白细胞对照实验方法实验方
45、法CNV区域中CN与基因表达的相关分析图表达谱芯片表达谱芯片 比较基因组杂交比较基因组杂交近年发表文章近年发表文章Qinying Liu, Yangmei Xu, Shenghong, et al. miRNA-148b suppresses hepatic cancer stem cell by targeting neuropilin1. Bioscience Reports , 2015; 35(4). Xu YM, Xie YQ, Wang XR, et al. Identification of cancer stem cells from hepetocellular carcin
46、oma cell lines and their related microRNAs. Oncol Rep. 2013. 30: 2056-62.龚福生，黄伟炜，刘健, 等. 乳腺癌患者循环肿瘤细胞检测的临床意义.中华肿瘤防治杂志, 2015, 22(13):1009-1013.Identification of perioperative circulating tumor cells and potential biomarkers of circulating tumor stem cells in colorectal cancer patients by flow cytometry
47、. 待发表袁婕 郑秋红 徐鹭英 ，等. 流式细胞术检测鼻咽癌患者外周血循环肿瘤细胞及临床相关性分析 第八届中国肿瘤学术大会暨第十三届海峡两岸肿瘤学术会议 论文，2014.6. Zheng QH, et al. Floating cells with stem cell properties in gastric cell line SGC-7901. Tumori. 2011. 97:393- 399.7. Zheng QH, XuYM, Wei ZQ, et al. Isolation and purification of cancer stem-like cells from cell
48、line PLC/PRF-5. Chinese Tumor Biological Therapy Journal, 2011, 18(2):126-132.8. Lai L, Cui C, Jin J, et al. Mouse embryonic stem cell-derived thymic epithelial cell progenitors enhance T-cell reconstitution after allogeneic bone marrow transplantation. Blood. 2011. 118(12):3410-3418. 近年发表文章近年发表文章Ch
49、en G, Wang L, Lu J, et al. Optical Diagnosis for Lung Cancer Using Multiphoton Imaging. Scanning. 2013. doi: 10.1002/sca.21076.Yan J, Tan C, Gu F, et al. Sorafenib delays recurrence and metastasis after liver transplantation in a rat model of hepatocellular carcinoma with high expression of pERK. Li
50、ver Transpl. 2013. doi: 10.1002/lt.23619.Chen L, Zhang WW, Zheng QH, et al. Aculeatusquinones A-D, novel metabolites from the marine-derived fungus Aspergillusaculeatus. Heterocycles. 2013. Published online.Zheng QF, Wang JJ, Ying MG, et al. Omentoplasty in preventing anastomotic leakage of oesophag
