1、化妆品微生物检验化妆品微生物检验 化妆品因含有水分，油脂，蛋白质，多元醇等，为微生物的生长创造了良好的条件，造成产品变质。 为了抑制微生物的繁殖和消费者使用过程中的产品污染，往往在化妆品中加入防腐剂，但不能过量。 因此，化妆品一方面为微生物的生长繁殖提供了良好的环境；另一方面由于防腐剂的应用又可抑制微生物的生长。化妆品卫生标准微生物检验方法 GB/T 7918.1-1987 化妆品微生物标准检验方法 总则 菌落总数 （化妆品卫生规范-2007年） GB/T 7918.2-1987 化妆品微生物标准检验方法 细菌总数测定 粪大肠菌群：GB/T 7918.3-1987 化妆品微生物标准检验方法 粪
2、大肠菌群 铜绿假单胞菌 （化妆品卫生规范-2007年） GB/T 7918.4-1987 化妆品微生物标准检验方法 绿脓杆菌 金黄色葡萄球菌 GB/T 7918.5-1987 化妆品微生物标准检验方法 金黄色葡萄球菌 霉菌和酵母菌：（化妆品卫生规范-2007年） 总则 微生物检验的基本要求 微生物检验样品的采集、保存及制备适用范围总则1、具有代表性 随机抽取相应随机抽取相应数量的包装单位。数量的包装单位。 应从批的整体中各部位抽取，如从四角应从批的整体中各部位抽取，如从四角+中中间；分上、中、下层；或上、中上、中、中间；分上、中、下层；或上、中上、中、中下、下层；梅花点式等。下、下层；梅花点式
3、等。 所所有接触样品的工具、容器都必须保持清洁。有接触样品的工具、容器都必须保持清洁。 样品的采集 2、抽/采样数量 按照抽样批及抽样方案JJF1070JJF107020052005 定量包装定量包装商品净含量计量检验规则商品净含量计量检验规则3、检验量 检验时，应分别从两个包装单位以上的检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取样品中共取10g 或或10mL。包装量。包装量小于小于20g的样品，采样量可适当增加样品包装数的样品，采样量可适当增加样品包装数量。量。 样品的制备 液体样品 膏、霜、乳剂半固体状样品 固体样品样品的制备注意事项无菌容器、材料及操作样品的均一性样品的检验及保管 及时
4、检验样品应放在室温阴凉干燥处样品先进行微生物检验，再做其他指标须防止微生物的再污染和扩散 如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出之日起该菌种及被检样品应保存一个月菌落总数检验 菌落总数（Aerobic bacterial count）是指化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度、培养时间、pH 值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。 测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。 数据数据处理处理混合平板混合平板的制备的制备细菌的培细菌的培养养检查结果、检查
5、结果、观察与计数观察与计数供试液供试液的制备的制备书写检验书写检验记录单记录单 化妆品中防腐剂抑制细菌的生长. 含卵磷脂、吐温80 营养琼脂培养基进行中和。对尼泊金类、苯甲酸类、六氯酚类等有效，但对卡松类的防腐剂的中和效果有限。 卡松的中和剂半胱氨酸,可较好的中和卡松的抑菌效果。因此,检测时不同的防腐剂加入不同的中和剂 为便于区别化妆品中的颗粒与菌落，可在每 100mL 卵磷脂吐温 80 营养琼脂中加入 1mL 0.5的 TTC 溶液，如有细菌存在，培养后菌落呈红色，而化妆品的颗粒颜色无变化。 在膏霜类化妆品中,微生物都是吸附或附着于颗粒状的原料中,检测时不易洗脱下来,因此,需要验证检测方法的
6、有效性。粪大肠菌群 粪大肠菌群（Fecal coliforms） 系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在 44.50.5培养 24h48h 能发酵乳糖产酸并产气。该菌直接来自粪便，是重要的卫生指示菌。产酸：黄色产酸：黄色产气：气泡产气：气泡产酸产气产酸产气书写检验书写检验记录单记录单不产酸不产气不产酸不产气增增菌菌培培养养供试供试液的液的制备制备配培配培养基养基和稀和稀释液释液检查检查结果结果判断判断44 44 0.50.52428h2428h分离培养分离培养蛋白胨水蛋白胨水培养培养最终结最终结果判断果判断44 44 0.50.524242h2h靛基质靛基质特特征征菌菌落落36361 1
7、 1824h1824h双倍胆盐乳糖双倍胆盐乳糖MMEMBEMB琼脂琼脂液面玫瑰红色液面玫瑰红色紫黑色紫黑色粪大肠菌群检查流程图粪大肠菌群检查流程图铜绿假单胞菌 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶，还原硝酸盐为亚硝酸盐，在 421条件下能生长。 该菌对人有致病力，可使伤处化脓，引起败血症等。最终结最终结果判断果判断增增菌菌培培养养供试供试液的液的制备制备书写检验书写检验记录单记录单分分离离纯纯化化无菌落或无特征菌落无菌落或无特征菌落配培配培养基养基和稀和稀释液释液革兰染色、镜检革兰染色、镜检
8、氧化酶试验氧化酶试验 绿脓菌素试验绿脓菌素试验生化试验生化试验 硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验 4242生长试验生长试验 明胶液化试验明胶液化试验铜绿假单胞菌检查流程图铜绿假单胞菌检查流程图SCDLPSCDLP培养基培养基十六烷三甲基十六烷三甲基溴化铵琼脂溴化铵琼脂3636111824h1824h3636111824h1824h特征菌落特征菌落灰白色、扁灰白色、扁平、周围有平、周围有水溶性蓝绿水溶性蓝绿色素色素十六烷三甲基溴化铵平板十六烷三甲基溴化铵平板SCDLP培养基培养基黄绿色黄绿色菌膜菌膜灰白色灰白色湿润湿润氧化酶试验氧化酶试验粉红粉红/紫红色紫红色绿脓菌素试验绿脓菌素试验盐酸层呈粉紫色盐
9、酸层呈粉紫色氯仿层呈蓝绿色氯仿层呈蓝绿色硝酸盐还原产气试验硝酸盐还原产气试验N2明胶液化明胶液化试验试验明胶培养基（高层）明胶培养基（高层）明胶液化明胶液化金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。该菌是葡萄球菌中对人类致病力最强的一种，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症。革兰染色、镜检革兰染色、镜检 生化试验生化试验: :血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验 甘露醇发酵试验甘露醇发酵试验最终结最终结果判断果判断增增菌菌培培养养供试供试品的品的处理处理书写检验书写检验记录单记录单分
10、分离离纯纯化化无菌落或无特征菌落无菌落或无特征菌落配培配培养基养基和稀和稀释液释液363611363611SCDLPSCDLP培养基或培养基或7.5%NaCl7.5%NaCl肉汤肉汤24242h hBaird ParkersBaird Parkers或血琼脂或血琼脂2448h2448h特征菌落特征菌落金黄色葡萄球菌检查流程图金黄色葡萄球菌检查流程图Baird ParkersBaird Parkers平板平板灰灰/黑色黑色甘露醇发酵试验甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验血浆凝块血浆凝块液态血浆液态血浆霉菌和酵母菌 霉菌和酵母菌数测定（Determination of molds and yeast count）是指化妆品检样在一定条件下培养后，1g 或 1mL 化妆品中所污染的活的霉菌和酵母菌数量，藉以判明化妆品被霉菌和酵母菌污染程度及其一般卫生状况。检验结果正确的保证 设备方面： 恒温培养设备 高压灭菌器 超净工作台 均质器 天平 显微镜 材料要求： 无菌容器及溶液； 材料充足； 培养基的制备与质量控制； 人员操作方面： 无菌操作，避免污染； 一定专业技术 日常维护： 设备的计量与保证； 超净台及时清洁与杀菌； 检验后材料的及时处理； 环境卫生。 人、机、样、法、环、溯
