1、实验一实验一 细胞凝集反应细胞凝集反应和细胞膜的渗透性和细胞膜的渗透性 【课前预习】 1土豆凝集素的本质及其使红细胞凝集的原理？ 2在等渗溶液中细胞一定能维持正常形态吗？ 3预测红细胞在各种溶液中的溶血速度？一、实验目的一、实验目的 1 了解细胞膜的表面结构； 2了解细胞糖被的特点和功能，了解植物凝集素的作用 3了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度二、实验的原理二、实验的原理1. 细胞凝集反应细胞凝集反应 细胞膜表面的有分支状糖外被，细胞间的联系、细胞的生长和分化、免疫反应、肿瘤的发生等都和细胞表面的分支状糖分子有关。凝集素（lectin）是一类含糖并能与糖分子专一结合的蛋白质，它具有凝
2、集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞表面间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 2. 细胞膜的渗透性细胞膜的渗透性 在低渗液中，红细胞很快吸水胀裂，称为溶血。在等渗液中，由于有些溶质会进入红细胞内、引起细胞渗透压升高，细胞也会吸水胀裂，由于各种物质透入细胞的速度不同，溶血的时间不同三、实验用品三、实验用品1. 器材: 显微镜、天平、载玻片、滴管、离心管、烧杯、10ml移液管、试管、试管架2. 材料: 土豆块茎3. 试剂: 鸭血红细胞、抗凝血剂、PBS、土豆块茎、0.85生理盐水、2鸡红细胞、PBS缓冲液、Alsever溶液、等
3、渗液：0.17 mol/L氯化钠、0.17 mol/L氯化铵、0.17 mol/L醋酸胺、0.17 mol/L硝酸钠、0.12 mol/L草酸铵、0.12 mol/L硫酸钠、0.32 mol/L葡萄糖、.0.32 mol/L甘油、.0.32 mol/L乙醇、00.32 mol/L丙酮低渗液 ：0.032 mol/L葡萄糖 0.017 mol/L 氯化钠四、实验步骤 (一一) 细胞凝集反应细胞凝集反应 1. 2鸡血红细胞悬液制备 新鲜鸡血加抗凝剂，生理盐水洗5次，每次2000r/min，离心5min，按红细胞压积用生理盐水配成2鸡血红细胞悬液。(为什么） 2. 土豆凝集素制备 土豆2克，加10m
4、l PBS，浸泡2h。 3. 细胞凝集反应 土豆凝集素1滴、2鸡血红细胞液1滴。 载玻片上混匀，静置20min。 4. 对照 分别用肉眼观察和显微镜下观察 PBS1滴、2鸡血红细胞液1滴。 （二）细胞膜的渗透性（二）细胞膜的渗透性 1、50 的鸡红细胞悬液的制备 新鲜鸡血加抗凝剂，生理盐水洗5次，每次2000r/min，离心5min，按红细胞压积用生理盐水配成50鸡血红细胞悬液。 1. 溶血现象的观察 试管3支： 分别加入0.032 mol/L葡萄糖 0.017 mol/L 氯化钠、水10ml 再加入鸡血红细胞液1ml；观察现象结果溶血，溶液变透明。 2. 红细胞对不同物质的渗透性 （1）取一
5、只试管加入0.17 mol/L氯化钠10ml ，再加入鸡血红细胞液1ml；观察现象颜色变化 （2）分别在以下几种等渗液中进行实验，步骤同上 0.17 mol/L氯化铵、0.17 mol/L醋酸胺、0.17 mol/L硝酸钠、0.12 mol/L草酸铵、0.12 mol/L硫酸钠、0.32 mol/L葡萄糖、.0.32 mol/L甘油、.0.32 mol/L乙醇、00.32 mol/L丙酮未溶血溶血【实验结果】 1土豆凝集素能使鸡红细胞凝集，PBS对照液中红细胞分散均匀未凝血凝血2细胞膜渗透性实验结果比较和分析 【实验报告】 1简图表示凝集素使血细胞凝集原理 2怎样根据细胞膜渗透性实验结果分析确定物质进入细胞的速度？物质进入细胞的快慢有什么规律？ 3、记录观察到的现象，并列表对实验结果进行分析和比较 【实验报告】 1简图表示凝集素使血细胞凝集原理 2怎样根据细胞膜渗透性实验结果分析确定物质进入细胞的速度？物质进入细胞的快慢有什么规律？
