1、卫生部卫生部“十二五十二五”规划教材规划教材 全国高等医药教材建设研究会规划教材全国高等医药教材建设研究会规划教材南方医科大学 曾方银中南大学湘雅医学院 唐爱国学习要求了解自动生化分析仪的分类及系统完整性的要求熟悉自动生化分析仪的分析原理、分析技术掌握自动生化分析仪的日常操作、性能检定 第一节 自动生化分析仪概述自动生化分析仪的发展自动生化分析仪的发展 分立式自动生化分析仪的分析原理分立式自动生化分析仪的分析原理 干式自动生化分析仪的分析原理干式自动生化分析仪的分析原理全自动化实验室构建全自动化实验室构建一、一、自动生化分析仪的发展自动生化分析仪的发展 按照反应装置：连续流动式、离心式、分立式
2、和干片式按照反应装置：连续流动式、离心式、分立式和干片式按照测定项目：单通道和多通道按照测定项目：单通道和多通道按照自动化程度：全自动和半自动按照自动化程度：全自动和半自动按照仪器的复杂程度：小型、中型、大型及超大型按照仪器的复杂程度：小型、中型、大型及超大型按照程序可否更改：程序固定和程序可变型按照程序可否更改：程序固定和程序可变型 自动生化分析仪的分类自动生化分析仪的分类二、分立式自动生化分析仪二、分立式自动生化分析仪 顺序分析示意图顺序分析示意图分立式自动生化分析仪的基本结构分立式自动生化分析仪的基本结构 样品处理系统样品处理系统 样品架与试剂盘：样品架与试剂盘：圆盘状、传送条带状、圆盘
3、状、传送条带状、轨道式及链式进样轨道式及链式进样 加样装置：定量吸量器与加样针加样装置：定量吸量器与加样针混匀装置：搅拌混匀与超声混匀混匀装置：搅拌混匀与超声混匀检测系统检测系统 1.1.光路系统光路系统前分光光路前分光光路后分光光路后分光光路分光装置分光装置 分光装置分光装置 吸收滤光片吸收滤光片滤光片滤光片单色器单色器干涉滤光干涉滤光片片棱镜棱镜光栅光栅复合滤光片复合滤光片全息全息反射光栅反射光栅凹面蚀刻光栅凹面蚀刻光栅比色杯比色杯 硬质石英玻璃硬质石英玻璃硬质玻璃硬质玻璃丙烯酸塑料丙烯酸塑料 光径光径0.51cm，自动冲洗备用，自动冲洗备用恒温装置恒温装置 干式（空气浴式）干式（空气浴式
4、）水浴循环式水浴循环式 恒温液循环间接加热式恒温液循环间接加热式 工作原理工作原理 多层薄膜固相试剂技术多层薄膜固相试剂技术测定方法：反射光度法、差示电位法测定方法：反射光度法、差示电位法 干化学式自动生化分析仪 干化学式自动生化分析仪干化学式自动生化分析仪分类：分类：反射光度法技术分析仪反射光度法技术分析仪胶片涂层技术分析仪胶片涂层技术分析仪袋式分析仪袋式分析仪 干片试剂结构示意图干片试剂结构示意图全自动化实验室构建全自动化实验室构建前处理系统前处理系统标本运送系统标本运送系统样本分析系统样本分析系统实验数据实验数据/结果处理系统（包括结果处理系统（包括LIS系统）系统）样本保存系统和计算机
5、硬件样本保存系统和计算机硬件一、生化分析仪常用分析方法一、生化分析仪常用分析方法终点分析法（平衡法）终点分析法（平衡法）固定时间法固定时间法 连续监测法连续监测法 比浊测定法比浊测定法 第二节第二节 自动生化分析仪的分析技术自动生化分析仪的分析技术一点终点法一点终点法(一一)终点分析法（平衡法）终点分析法（平衡法）l两点终点法A AA A1 1A2(一一)波长的选择原则波长的选择原则待测物质在该波长下的光吸收最大待测物质在该波长下的光吸收最大其吸收峰宜较宽而钝其吸收峰宜较宽而钝常见干扰物在该波长下的光吸收最小常见干扰物在该波长下的光吸收最小 l单波长单波长l双波长双波长l多波长多波长l有25、
6、30、37三种温度l一般固定为37 温度的选择最小反应液总体积为最小反应液总体积为80 500 lSVF=Vs/Vt SVF越大，线性范围越窄，但灵敏度越高越大，线性范围越窄，但灵敏度越高随意改变随意改变SVF不尽可靠，尤其是酶活性测定不尽可靠，尤其是酶活性测定样品量与试剂量样品量与试剂量 l单试剂法 l双试剂法 其他参数设置其他参数设置测定方法的选择测定方法的选择 分析时间的选择分析时间的选择 线性范围的选择线性范围的选择 校正方法的选择：一点、两点、多点校正方法的选择：一点、两点、多点三、生化分析仪的校准l校准品：配套校准品、第三方校准品l酶活性测定的校准：理论K值与校准K值l校准频率：更
7、换试剂(批号)、重要仪器部件的保养维护和更换、质控结果失控及其它纠正措施无效时、每6个月 计量部门对仪器进行的计量学检定或校准 l波长l反应温度l加样(试剂和样本)精度l吸光度准确性(半峰宽)l基线漂移 一、安装及使用前准备一、安装及使用前准备（一）工作环境 周围有足够空间，避免阳光直射，防尘、烟雾和振动电源电压波动应小于10%，可靠接地电源频率、功率应符合要求，应使用UPS远离强烈电磁场温度1832之间（波动小于2），湿度40%80%之间；空调出风口不宜直对仪器 第三节 自动生化分析仪的日常操作（二）实验用水 超纯水一般要求电阻率10 M-cm总有机碳（TOC）应50ppb使用0.5m或更细
8、的滤膜过滤除菌，细菌水平5cfu/ml干扰元素越少越好 仪器简介仪器简介仪器的工作原理仪器的工作原理仪器工作环境要求仪器工作环境要求授权操作人授权操作人开机程序开机程序室内质控程序室内质控程序常规样本检测程序常规样本检测程序样本检验结果的处理程序样本检验结果的处理程序工作后保养与关机程序工作后保养与关机程序其他支持性文件：如校准程序、维护与保养程序等其他支持性文件：如校准程序、维护与保养程序等 （四）操作程序文件的主要内容二、基本操作步骤 l仪器自检 l加试剂、取样和混匀 l保温反应与吸光度检测l计算、显示或打印结果 检查试剂注射器、样品注射器等有无渗漏检查试剂注射器、样品注射器等有无渗漏检查
9、纯水是否正常或足量、各种清洗剂是否足够检查纯水是否正常或足量、各种清洗剂是否足够检查各项分析试剂是否充足、检查各项分析试剂是否充足、检查试剂针、加样针等是否需要特别清洁处理检查试剂针、加样针等是否需要特别清洁处理检查样品运行通道是否通畅无障碍检查样品运行通道是否通畅无障碍 （二）质控品测定（二）质控品测定检测频率：每批次检测频率：每批次质控品个数：单、双、三水平质控品个数：单、双、三水平质控规则：质控规则：出现出现1 12s2s为警告，出现为警告，出现1 13s3s、2 22s2s、R R4s4s、4 41s1s、10 x10 x为失控为失控 （三）患者标本的测定（三）患者标本的测定n项目录入
10、：项目录入：手工录入：手工录入：逐项录入，逐项录入，组合项目录入，组合项目录入，批量录入批量录入 条形码识别条形码识别n急诊优先检验急诊优先检验 1.每天维护检查样品针、试剂针、搅拌棒有无明显磨损，位置是否正确，需否特殊清洁添加或更换试剂添加清洗剂清洗ISE单元：用CLEAN液执行每日清洗程序，然后关机2.2.每周维护每周维护u执行比色杯清洗程序对比色杯进行清洗执行比色杯清洗程序对比色杯进行清洗u对比色杯进行空白吸光度检查，了解透光性的对比色杯进行空白吸光度检查，了解透光性的改变情况改变情况u清洗样品探针、试剂探针、搅拌棒、电极管道清洗样品探针、试剂探针、搅拌棒、电极管道u清洗恒温水槽清洗恒温
11、水槽3.每月维护每月维护对清洗装置本身、纯水桶、供水过滤器、散热对清洗装置本身、纯水桶、供水过滤器、散热器过滤网等进行清洗器过滤网等进行清洗清洗电极模块清洗电极模块4.不定期维护不定期维护检查进样注射器是否需要更换、各冲洗管路是否检查进样注射器是否需要更换、各冲洗管路是否畅通、各机械运转部分是否工作正常畅通、各机械运转部分是否工作正常彻底清洗比色杯和比色杯轮盘，检查比色杯是否彻底清洗比色杯和比色杯轮盘，检查比色杯是否需要更换需要更换更换光源灯更换光源灯更换样品探针和试剂探针、搅拌棒更换样品探针和试剂探针、搅拌棒更换电极、蠕动泵管更换电极、蠕动泵管1.杂散光 50g/L亚硝酸钠溶液直接加入比色杯
12、，测定波长340nm的吸光度*吸光度应不小于2.3 2温度准确度测定 l比色杯中加入500l去离子水，温度稳定，测温仪每隔30s读数一次，连续20次。求出平均温度和20次中最大值与最小值之差-波动度。*温度应在设定值的0.3内，波动度不大于0.2 l将色素原液稀释成11个浓度梯度，各梯度液重复测定5次吸光度，计算平均值。以稀释比例为横坐标，吸光度平均值为纵坐标，画出散点图，用最小二乘法先对前4个点进行线性拟合，并计算511点的相对偏倚。*各测定值的相对偏倚在5%范围内的最大吸光度应不小于2.0。l340nm吸光度为0.5的重铬酸钾标准溶液，600nm700nm波长范围内任一波长的吸光度为0.5
13、的硫酸铜标准溶液。设定最小试剂量、最小样本量，最长反应时间或10min，读数间隔为仪器的测定周期或30s，测定上述溶液的吸光度值*最大与最小值吸光度之差应不大于0.01 l以蒸馏水空白，340nm处吸光度分别约为0.5和1.0的重铬酸钾标准溶液，重复测定3次，计算3次测量的算术平均值与标准值之差*吸光度为0.5的允许误差为0.025，吸光度应为1.0的允许误差应为0.076吸光度重复性检定 l吸光度为0.5的重铬酸钾标准溶液同时作为样品和试剂，加入量为分析仪标称的最小反应体积，反应时间为分析仪最长反应时间或10min，340nm连续测定20条反应曲线的最后一个读点的吸光度值*该吸光度的变异系数
14、CV应不大于1.5%7试剂加样精确度与重复性检定采用称量法：恒温、恒湿的实验室内，带盖容器在高精度电子天平调零。控制试剂针或样本针往该容器中加入规定量除气蒸馏水，盖盖再称重。每种规定加入量重复称量20次，求出实际加入量(l)，计算加样误差*仪器的最小、最大试剂加样量，准确度误差应不超过%，变异系数应不超过2%。8.样品加样准确性与重复性检定l称量法l比色法9样品携带污染率检定以去离子水为试剂，以高浓度orange G原液和去离子水为样品，样品的加入量为分析仪最大样品量，按照原液、原液、原液、去离子水、去离子水、去离子水的顺序为一组，测定上述样品反应结束时的吸光度，共进行5组测定，按照相应公式计
15、算携带污染率*5组的平均携带污染率，其值应小于0.5%10临床项目批内与批间精密度检定l双水平质控血清，测定不同的检测项目采用某种试剂时的批内与批间平均值、SD值及CV值。l不同项目不同浓度水平的CV有不同要求l（一）生化测定结果的量值溯源生化分析系统的概念 一个完整和有效的生化分析系统，是指生化分析仪、试剂、校准品、及相关的操作程序、质量控制程序、设备维护程序等的组合；若是手工操作，还包括具体的操作人员。（二）保证生化分析系统的完整性与有效性的方法l分析系统的性能核实（demonstration）l分析系统的性能确认（validation or verification）l分析系统的性能评价
16、（evaluation）小小 结（结（1 1）自动生化分析仪是临床生化检验最常用的设备，目前以分自动生化分析仪是临床生化检验最常用的设备，目前以分立式最为普遍。现代生化分析仪已能达到很高的精度。立式最为普遍。现代生化分析仪已能达到很高的精度。既可采用比色杯作为反应和检测的载体，也可采用干片既可采用比色杯作为反应和检测的载体，也可采用干片试剂进行检测，还可采用透射比浊法测定更加微量的标试剂进行检测，还可采用透射比浊法测定更加微量的标志物。志物。两点终点法结合双波长测定等能有效消除样品溶血、黄疸两点终点法结合双波长测定等能有效消除样品溶血、黄疸和脂浊等造成的光吸收干扰。连续监测法以时间和脂浊等造成
17、的光吸收干扰。连续监测法以时间-吸光吸光度曲线中线性反应期的单位时间内吸光度变化值度曲线中线性反应期的单位时间内吸光度变化值（A/minA/min）乘以）乘以K K值来计算结果，采用校准值来计算结果，采用校准K K值常优于值常优于理论理论K K值和实测值和实测K K值。值。小小 结（结（2）分析仪的基本参数设置包括试验名称、分析方法、主波长、分析仪的基本参数设置包括试验名称、分析方法、主波长、次波长、样品量、次波长、样品量、R R1 1量、量、R R2 2量、稀释液量、读数时间、线量、稀释液量、读数时间、线性范围、校准参数和质控参数等。性范围、校准参数和质控参数等。测定患者样品前需进行检查和（
18、或）校准，每分析批应测定测定患者样品前需进行检查和（或）校准，每分析批应测定质控品并确保结果在控。质控品并确保结果在控。分析仪还需进行定期与非定期的保养和维护。分析仪还需进行定期与非定期的保养和维护。性能检定主要针对系统硬件的技术性能指标，通常包括杂散性能检定主要针对系统硬件的技术性能指标，通常包括杂散光、吸光度稳定性与准确度及线性范围、温度准确度与波光、吸光度稳定性与准确度及线性范围、温度准确度与波动度、样品和试剂加样的准确度与重复性、样品携带污染动度、样品和试剂加样的准确度与重复性、样品携带污染率、临床项目的批内精密度等。率、临床项目的批内精密度等。注重生化检测系统的完整性和有效性，获得有溯源性的结果注重生化检测系统的完整性和有效性，获得有溯源性的结果临床生化检测的重要任务。临床生化检测的重要任务。谢谢！谢谢！
