1、抗核抗体（ANA）检测与临床应用 传统定义：针对细胞核成分的自身抗体的总称。广义定义：针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。抗核抗体的定义抗核抗体的定义抗核抗体谱的分类抗核抗体谱的分类 根据产生的荧光模型、靶抗原的分布部位分类如下：有丝分裂间期细胞结构模式图有丝分裂间期细胞结构模式图有丝分裂各期染色体变化模式图有丝分裂各期染色体变化模式图 正确判读荧光模型(比较法）比较法）确认实验检测靶抗原 明确靶抗原所对应的疾病特异性 完成抗体滴度测定（定量或半定量实验）ANA检测结果判读目标检测结果判读目标ANA检测的临床意义检测的临床意义ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊断
2、、病情判断和疗效观察的指标在非结缔组织病（感染性疾病或肿瘤）中也可出现阳性。正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且常表现为IgM型高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病 目前，ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。抗抗核核抗抗体体应应用用指指南南对诊断非常有用的疾病对诊断非常有用的疾病SLE95100SSc6080对诊断对诊断有一定作用的一定作用的疾病SS4070PM/DM3080对监测或预后有用的疾病青少年慢性少关节炎伴葡萄膜炎2050雷诺现象2060药物性狼疮100自身免疫性肝病100MCTD100没有诊断意义的疾病RA3050MS25特发性血小板减少性紫癜
3、1030甲状腺疾病3050盘状红斑525感染性疾病变异较大恶性肿瘤变异较大硅胶隆胸患者1525纤维肌痛1525自身免疫性疾病患者亲属525正常人1:4020301:8010121:16051:3203Kavanaugh A,et al.Arch Pathol Lab Med 2000;124:71-81ANA的检测方法的检测方法免疫荧光法免疫荧光法(Immunfluorescence Assay,IFA)免疫印迹法(Western-blot,WB)酶联免疫吸附法 (Enzyme-linked Immunosorbant Assay,ELISA)免疫微珠法（Multiplex Immunoass
4、ay,MIA)光化学发光法（Chemiluminescene Immunoassay,CLIA)对流免疫电泳及免疫双扩散法(Counterimmunoelectrophoresis and Immunodiffusion Assay)放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)RNP +SmANA的检测策略的检测策略患者疑似结缔组织病IIF法检测ANA 阴性非CTD,假阴性（考虑SSc,PM/DM 或者 非活动性SLE，如果高度怀疑进行特异性抗原检测）阳性 进行特异性抗原检测确定靶抗原及疾病特性ANA的检测策略的检测策略ANACytoplasmic patternNuclear pa
5、tternHomogeneousSpeckledNucleolar CentromerePCNANuclear MembraneNuclear DotsFine speckledCourse speckledKuScl-70RNA polymerase I,II,IIIU3-RNPPM-SclNORPCNAPCNA Multiple Nuclear DotsFew Nuclear DotsCytoskeletalcytoplasmic dot MitochondrialRibosomal PGolgiJo-1lysosomeActinTropomyosinVimentinCell cycle
6、relatedCentriolesMitotic SpindleMidbodyChromosomeSLEsystemic sclerosisPrimary biliary cirrhosisdermatomyositis/polymyositisSjgren Syndrome autoimmune hepatitis mixed connective tissue disease dsDNAHistoneNucleosomeDLESSA/LaSSB/RoSmU1-nRNPGP210Sp100p80F-Actin（一）（一）染色质相关抗原染色质相关抗原抗抗dsDNA抗体抗体抗核小体抗体抗核小体抗
7、体抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体抗Ku抗体抗增殖性细胞核抗原抗体(1)抗抗ssDNA/dsDNA抗体抗体抗原：单链DNA，变性的DNA（嘌呤和嘧啶碱基）双链DNA，天然DNA（脱氧核糖核酸骨架）相关疾病：ssDNA:SLE 80.8%SS 40.0%SSc 44.0%RA 12.3%健康献血者 6.8%dsDNA:SLE 30-90%滴度与疾病活动性相关，但不适用于所有患者 抗dsDNA抗体与SLE肾损伤有关 不同方法学的比较不同方法学的比较不同抗不同抗dsDNA检测方法对于检测方法对于SLE的临床诊断价值的临床诊断价值不同检测方法灵敏性特异性ELISA50-81%91%IIF(CL)25%98%R
8、IA38-74%78-96%(2)抗核小体抗体抗核小体抗体 抗原:组蛋白和DNA形成的复合物 功能:染色体的功能亚单位 临床意义:SLE,阳性率 50-95%(100%特异性特异性)与与SLE疾病活动性显著相关疾病活动性显著相关 抗核小体抗体的敏感性、特异性、疾病活动度 Su et al.,Clin Immunol 122:115-120,2007 抗核小体抗体与狼疮性肾炎抗核小体抗体与狼疮性肾炎 狼疮肾炎是SLE的一种潜在的严重并发症(高达 50%)1.2%需要进行肾移植的患者有狼疮肾炎 LNTP=lupus nephritis requiring renal transplantation
9、 LN=biopsy proven lupus nephritis CON=SLE patients without nephritis Stinton et al.,Lupus 15:394-400,2007(3)抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体抗原抗原:组蛋白组蛋白H1,H2A,H2B,H3,H4 (主要的靶抗原为主要的靶抗原为H1和和H2B)功能功能:核小体的组成结构核小体的组成结构临床意义临床意义:药物诱导性药物诱导性LE:100%(抗组蛋白抗体是该病唯一的标志性抗体抗组蛋白抗体是该病唯一的标志性抗体)SLE:40%-80%在其他风湿病中很少见在其他风湿病中很少见服用异烟肼的病人中最高，但临床
10、上并没有出现狼疮的临床症状，其它肼苯哒嗪、普鲁卡因酰胺。(4)抗抗Ku抗体抗体 功能：功能：DNA依赖蛋白激酶调节亚基（依赖蛋白激酶调节亚基（DNA断裂修复）断裂修复）靶抗原：靶抗原：66kD及及86kD的两种核蛋白的两种核蛋白相关疾病：多发性肌炎相关疾病：多发性肌炎/皮肌炎皮肌炎 30%SLE 5-15%原发性肺动脉高压原发性肺动脉高压 20%(5)抗增殖性细胞核抗原抗体抗增殖性细胞核抗原抗体(PCNA)靶抗原：增殖性细胞核抗原靶抗原：增殖性细胞核抗原功能：功能：DNA聚合蛋白聚合蛋白 的辅助蛋白，参与细胞周期调控的辅助蛋白，参与细胞周期调控相关疾病：相关疾病：PCNA SLE 38%（SL
11、E特异性抗体）特异性抗体）PCNA 多见于肿瘤性疾病。多见于肿瘤性疾病。PCNAPCNA（二）（二）核糖核蛋白核糖核蛋白抗抗U1-nRNP/Sm抗体抗体抗抗Ro/SS-A抗体和抗体和La/SS-B抗体抗体 抗核糖体抗体抗核糖体抗体(1)抗抗U1-nRNP/Sm抗体抗体抗U1-nRNP 抗体 SLE:15-40%MCTD:95-100%抗 Sm抗体 SLE:5-30%SLE标记性抗体 可早于疾病12 年出现，是前瞻及回顾性诊断的指标。Sm和U1RNP是同一分子复合物中的不同位点，常与U1RNP抗体共存。抗nRNP/Sm和Sm抗体的结果解释抗nRNP/Sm抗体 抗Sm抗体 结果 解释 阴性阴性nR
12、NP:阴性Sm:阴性阴性 阳性阳性nRNP:？Sm:阳性SLE阳性阴性nRNP:阳性Sm:阴性SLE或MCTD阴性阳性结果不可靠 无73KD32KD29KD28KD73KD60KD52KD32KD29KD28KD17.5KD13.5KD52KD55KDSmU RNP、抗 体 阳 性1RASSASSA抗 体 阳 性SmU RNP、抗 体 阳 性1J-10抗 体 阳 性RNPRNPRNPRNPsmCOSm/U1Rnp Sm(2)抗抗SS-A(Ro-60),Ro-52 和和 SS-B抗体抗体抗SSA抗体是风湿免疫性疾病中出现频率最高的抗体。两个抗原表位，分子量 52KD,60KD。健康人 17%抗S
13、SA抗体阳性SLE和SS一级亲属 25%抗SSB抗体：常与抗 SSA抗体伴随出现Ro-52 为线性结构，可以非特异的与血清中蛋白结合(3)抗核糖体抗核糖体P蛋白抗体蛋白抗体抗原抗原:核糖体核糖体60S 亚基中的亚基中的3种蛋白质种蛋白质SLE 10%40%SLE的的高特异高特异性血清标志性血清标志抗体抗体，特异性为特异性为100 与中枢神经系统与中枢神经系统、肝脏或肾脏受累相关、肝脏或肾脏受累相关40 S subunit 60 S subunit P0 P1 P1 P2 P2 Mahler et al.,J Mol Med,2003 27(三）与系统性硬化相关的抗体三）与系统性硬化相关的抗体抗
14、着丝点抗体抗着丝点抗体抗拓扑异构酶抗拓扑异构酶1抗体（抗抗体（抗Scl 70抗体）抗体）抗核仁抗原的抗体抗核仁抗原的抗体。（1）抗着丝点抗体）抗着丝点抗体抗原：动粒中的4种蛋白：A(17 kDa),B(80 kDa),C(140 kDa),D蛋白(50 kDa)。着丝点蛋白B为主要的靶抗原功能:分裂期纺锤体的附着点相关疾病:硬化症:18%局限型:80%-95%(CREST综合征)原发性胆汁性肝硬化 10%20%（2）抗）抗Scl-70抗体抗体靶抗原：型拓扑异构酶(DNA促旋酶)进行性系统性硬化症特异性抗体 25%75%抗Scl-70抗体阳性的患者通常病情发展快、预后差、多器官累及。59%系统性
15、硬化症患者分别出现抗着丝点抗体或抗Scl-70抗体阳性（3）抗核仁抗原抗体）抗核仁抗原抗体抗原纤维蛋白抗体抗原纤维蛋白抗体 抗原:与U3-RNA相关的基本蛋白(34 kDa)和5种其它蛋白 系统性硬化症特异性抗体 5-10%抗抗PM-Scl抗体抗体 抗原:外切体(RNA加工/降解)硬化症:2%-5%，阳性者常伴有雷诺现象 肌炎:8%重叠综合征:24%抗抗RNA多聚酶抗体多聚酶抗体 抗原:RNA多聚酶I,II和III 硬化症:4%33%抗体阳性者常伴有严重的内脏受损，主要是肾脏和肺脏受累。（四）（四）肌炎特异性自身抗体肌炎特异性自身抗体抗合成酶抗体抗Mi2抗体抗SRP抗体抗Ku抗体。32（1）抗
16、合成酶抗体）抗合成酶抗体抗合成酶抗体（20%）：Jo-1抗体占所有抗合成酶抗体的80%，其它还有：抗PL-7抗体、抗PL-12抗体、抗OJ抗体等。抗Jo-1抗体 多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）高特异性抗体 20%40%伴肺间质纤维化的PM 70%抗体的效价与疾病的活动性相关 抗SRP抗体（抗信号识别颗粒抗体）（5%）与肌炎、心脏扩大、对治疗的抵抗相关，5年生存率为20%抗Mi2抗体（肌炎 5-15%，主要是皮肌炎）：靶抗原:多组分系统;与组蛋白乙酰基转移酶和核小体重塑活性有关的主要抗原(218kDa)预后较好，5年生存率为100%（2）其他肌炎特异性自身抗体）其他肌炎特异性自身抗体（2）肌炎
17、特异性自身抗体的特点）肌炎特异性自身抗体的特点几乎仅见于或最常见于多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）或PM/DM重叠综合征。存在于35%至40%的肌炎患者中。一个人出现一种以上MSA的情况很少见。Rnnelid et al.,Autoimmun Rev,2009（五）其他的抗核抗体（五）其他的抗核抗体 胞浆颗粒型（抗线粒体抗体、抗溶酶体抗体。）胞浆纤维型（抗肌动蛋白抗体、抗波形蛋白抗体。）核点型核膜型。抗线粒体抗体（抗线粒体抗体（AMA）AMA-M2靶抗原：线粒体呼吸链上2-酮酸脱氢酶(2-OADH)复合物 5个不同的抗原决定簇76KD、56KD、51KD、45KD、36KD,包括：支链2-酮酸
18、脱氢酶E2亚基（BCOADH-E2）酮酸脱氢酶E2亚基（PDH-E2）2-酮戊二酸脱氢酶E2亚基（OGDH-E2）PDH-E1t亚基 E3结合蛋白AMA-M2检测方法：ELISA、IBAMA-M2临床意义：PBC敏感的抗体，阳性率90%，AMA滴度与PBC疾病分期无关 SS,PM/DM,HCV 10-20M2 AMA可在临床症状出现前10年出现于PBC患者 抗肌动蛋白抗体抗肌动蛋白抗体 抗平滑肌抗体的靶抗原 Actin：Factin与AIH关系密切 Gactin与酒精性肝硬化有关检测方法 IB法46KDa IIF法HEp-2细胞底物敏感性？VSM47 细胞底物 ELISA法抗抗Sp100抗体抗
19、体两种核点（nuclear dots,ND）型荧光染色模型：a few nuclear dots：抗p80螺旋蛋白抗体 multiple nuclear dots，MND：抗Sp100抗体Sp100抗体靶抗原:53KD的可溶性酸性磷酸化核蛋白Sp100抗体检测方法：ELISA、IB、IIF（参考）Sp100抗体临床意义：PBC特异性抗体（10-30%），其他肝病患者均为阴性。PBC中阳性率为对AMA阴性的PBC患者的诊断具有重要意义 AMA阴性PBC中阳性率（50%）显著高于AMA阳性者（20%）该抗体可见于反复尿路感染的妇女核包膜蛋白自身抗体核包膜蛋白自身抗体抗板层素抗体（anti-lami
20、n antibody）anti-lamin A/C：PBC、CAH anti-lamin B：SLE（2.2-8.5%）与APS相关抗核孔复合物抗体（anti-nuclear pore complex antibody）抗Gp210抗体：诊断PBC特异性为88%，敏感性25%抗p62抗体：PBC高特异性自身抗体，敏感性为32%抗板层相关多肽（LAPs）抗体：10-30%伴anti lamin抗核板素受体（LBR）抗体：PBC（1%）抗抗gp210抗体抗体 靶抗原：位于核孔复合物上的210KD跨膜糖蛋白，gp210羧基末端上的15个氨基酸残基 临床意义：PBC特异性抗体（88%），敏感性为25%约1/4与AMA同时出现，也存在于20%47%AMA阴性PBC中 对于临床、生化和组织学表现疑诊PBC而AMA阴性的患者，抗gp210抗体检测有重要价值 可作为PBC患者预后指标，抗体阳性提示预后不良抗板层素抗体抗板层素抗体 抗原特征：核板是一中间丝状结构，与核内膜的内面连结，组成板层结构的蛋白，分子量60KD、68KD、74 KD 检测方法：IIF、IB、ELISA 临床意义：多见于PBC、CHA（慢活肝）、慢性疲劳综合征（chronic fatigue syndrome）、D型肝炎
