1、目目 录录 一、概述一、概述 二、临床前安全性评价在中药新药创二、临床前安全性评价在中药新药创制制 中的地位和作用中的地位和作用 三、临床前安全性研究所涉及的内容三、临床前安全性研究所涉及的内容 四、急性毒性试验在新药评价中的作四、急性毒性试验在新药评价中的作用用 五、长期毒性试验在新药评价中的作五、长期毒性试验在新药评价中的作用用 六、毒理学试验结果的综合分析六、毒理学试验结果的综合分析 七、新药申报资料中的常见问题分析七、新药申报资料中的常见问题分析概概 述述药品的概念和基本要求药品的概念和基本要求 治疗、预防和诊断疾病治疗、预防和诊断疾病 安全、有效、质量可控安全、有效、质量可控 安全第
2、一安全第一药品非临床研究质量管理规范药品非临床研究质量管理规范Good Laboratory Practice(GLP)美国日本欧盟 中国于1994年由国家科委颁布GLP，1999年由SDA签署局长令实施GLP。有毒与无毒的界限有毒与无毒的界限如何区分药物和毒物如何区分药物和毒物:不同剂量不同剂量;不同临床主治不同临床主治;不同给药途径不同给药途径;生理盐水生理盐水(小鼠小鼠iv,LD50=68ml/kg)；蒸馏水蒸馏水(小鼠小鼠iv,LD50=4ml/kg)新药发展的历史新药发展的历史 20世纪前世纪前50年：新药发展空前迅速年：新药发展空前迅速 1930-1950年年 磺胺类药物、抗生素、
3、抗微生物药物、抗精神失常药、抗高血压药、抗肿瘤药、抗心绞痛药、抗心律失常药、调血脂药、利尿药、螯合剂等。但但 是是氯丙嗪：氯丙嗪：临床使用前没做过几项指标酶抑宁：酶抑宁：几乎没做过毒性试验就上临床应用 （治疗重症肌无力）。甲磺丁脲：甲磺丁脲：人体应用的报道和小鼠LD50测 定的报道发表在同一期的杂志上。事实上甲磺丁脲在人体应用前也 仅仅做了小鼠的急性毒性试验。有利方面有利方面临床试用方便发现新药机会多研究周期短成功率高研究新药的积极性高不利方面不利方面毒理研究少;临床事故出现较多;有些毒性在临床使用几年后才出现;不断出现药害“事件”二硝基酚减肥引起白内障、骨髓抑制死亡二硝基酚减肥引起白内障、骨
4、髓抑制死亡177人人乙二醇磺胺酏剂造成乙二醇磺胺酏剂造成107人死亡人死亡有机锡（有机锡（Stalinon）胶囊引起）胶囊引起207人视力障碍人视力障碍沙利度胺（沙利度胺（Thalidomide,反应停）使万余名新反应停）使万余名新生儿先天畸形生儿先天畸形氯碘喹啉造成千人失明或下肢瘫痪氯碘喹啉造成千人失明或下肢瘫痪 关于中药关于中药 在中国，传统上认为绝大多数中药无毒。在中国，传统上认为绝大多数中药无毒。中药在临床上出现的毒性有关报道增多中药在临床上出现的毒性有关报道增多:马兜铃酸马兜铃酸,雷公藤，大黄蒽醌等。雷公藤，大黄蒽醌等。新药中的未知毒性成份越来越多。新药中的未知毒性成份越来越多。中药
5、中药类、类、部分部分类新药，已经很难用传统类新药，已经很难用传统的中医理论阐述其功能主治，从化学本质、毒性潜的中医理论阐述其功能主治，从化学本质、毒性潜力上有别于传统的中药。力上有别于传统的中药。尤其是中药注射剂。尤其是中药注射剂。开发中药新药必须认识开发中药新药必须认识 对类、部分类新药毒性的了解已经没有传统的参考背景，对其用药的安全性就更应加以重视。只有通过动物的毒理学试验才能为临床人体试验研究提供毒理方面的参考依据。临床前安全性评价在中药新药临床前安全性评价在中药新药创制中的地位和作用创制中的地位和作用-毒理学技术审评的审评依据毒理学技术审评的审评依据 1法律：药品管理法 2法规：药品注
6、册管理办法 3技术指导原则：毒理学 4毒理学专业知识临床前安全评价的目的临床前安全评价的目的 提供新药危害程度的科学依据提供新药危害程度的科学依据 预测上市后对人体的有害程度预测上市后对人体的有害程度 淘汰危害大的淘汰危害大的 权衡有危害的权衡有危害的 通过危害小的通过危害小的 理想的是没有危害的新药理想的是没有危害的新药临床前安全评价的措施临床前安全评价的措施综合分析综合分析权衡利弊权衡利弊客观评价客观评价为临床安全、有效用药，提供毒理学参考依据临床前安全评价的作用临床前安全评价的作用1.预测临床用药时可能出现的毒性反应预测临床用药时可能出现的毒性反应；2.制定临床检测、预防措施制定临床检测
7、、预防措施；3.推算临床研究时，人用药的安全参考剂推算临床研究时，人用药的安全参考剂 量和安全范围量和安全范围；4.确立禁忌证，限制用药人群确立禁忌证，限制用药人群。毒理学与药学毒理学与药学、临床间的关系临床间的关系毒理学与药学的关系毒理学与药学的关系1.毒理评价是以药学为基础和前提的（物质基础）：毒理评价是以药学为基础和前提的（物质基础）：2.药物结构，组分、杂质（相关物质）含量、理化性质、剂药物结构，组分、杂质（相关物质）含量、理化性质、剂型（辅料）、稳定性等，与其毒理作用密切相关。型（辅料）、稳定性等，与其毒理作用密切相关。毒理学与临床的关系毒理学与临床的关系1.毒理研究是为临床服务毒理
8、研究是为临床服务;2.毒理研究的思路和目的与临床基本一致，只是主体不同，毒理研究的思路和目的与临床基本一致，只是主体不同，临床前新药的评价要密切结合临床试验临床前新药的评价要密切结合临床试验;3.大多数毒理学的结果最终要通过临床来证实大多数毒理学的结果最终要通过临床来证实;4.临床研究结果可能对毒理提出新的要求临床研究结果可能对毒理提出新的要求(弥补不足弥补不足)。综合审评和联系人制度综合审评和联系人制度1.促使新药研发和创新思路逐步与国际接轨2.从审评角度引导新药开发向研究行为过渡3.取代以往固守、套用技术指导原则的模式4.以科学方法完善药品研制过程和审评机制中药的特点中药的特点化学实体（c
9、hemical entity）：1.多种成分（组分）的集合体；2.多种中药有效成分或有效分子群并不明确；3.中药中各成分之间的相互作用知之甚少；中药的特点中药的特点临床治疗方面的特点：1.中医是复方用药；2.辩证施治，病证结合；3.广泛和长期的临床应用基础；中药的特点中药的特点药理作用的特点：1.多种成分、多靶点、综合作用；2.生物活性缓和；3.一般来说，毒副作用较低；中药的特点中药的特点中药和化药在研制程序上的差异1.化学药品研制的程序：实验室筛选 leading compounds(先导化合物)新药开发轨道 临床研究 生产与销售2.中药开发研制的程序：临床实践筛选 candidate(候选
10、化合物)临床验证 新药开发轨道 临床研究 生产与销售中药复方制剂中药复方制剂来源于长期临床实践，有人用历史。安全性评价有别于植物药和以有效成分安全性评价有别于植物药和以有效成分或有效部位制成的新制剂，更有别于化药。或有效部位制成的新制剂，更有别于化药。中药临床前安全性评价的特点中药临床前安全性评价的特点考虑：考虑：1.毒理学上的要求不同；2.动物与人在毒性反应上的差别。毒理学上的不同毒理学上的不同一、急性毒性试验1.给药途径给药途径中药：中药：1、2类药：二种给药途径或动物测定LD50；其它类别：一种临床给药途径即可。化学药：化学药：采用二种动物和/或给药途径分别测定LD50。毒理学上的不同毒
11、理学上的不同一、急性毒性试验2.最大给药量的测定最大给药量的测定中药：中药：以动物能耐受的最大浓度、最大体积的药量单次或一日内23次给药。（体重、死亡分布表）化学药：化学药：在测定最大给药量时，一般采用单次给药，而不采用一日多次给药的方式。毒理学上的不同毒理学上的不同二、长期毒性试验1.三、四类中药可免做长期毒性试验的条件三、四类中药可免做长期毒性试验的条件(1)给药周期在一周之内；(2)药材符合法定标准；(3)无毒性药材；(4)无18反、19畏等配伍禁忌；(5)未经化学处理（水、乙醇粗提除外）；(6)难以测出LD50，或给药剂量大于20g生药/kg；毒理学上的不同毒理学上的不同 此处所称毒性
12、药材，系指入国务院医疗用毒性药品管理办法的中药品种。即：砒石、砒霜、水银、生马钱子、生川乌、生草乌、生白附子、生附子、生半夏、生南星、生巴豆、斑蝥、青娘虫、红娘虫、生甘遂、生狼毒、生藤黄、生千金子、生天仙子、闹羊花、雪上一枝蒿、红升丹、白降丹、蟾酥、洋金花、红粉、轻粉、雄黄。凡在近年来发现所研制的药材（原料）有毒性作用或在复方中含有有毒组份的均按毒性药材处理。毒理学上的不同毒理学上的不同二、长期毒性试验2.外用三、四类中药制剂，如不含毒性药材或有外用三、四类中药制剂，如不含毒性药材或有毒成分，可免做长期毒性试验。毒成分，可免做长期毒性试验。毒理学上的不同毒理学上的不同二、长期毒性试验3.在下述
13、情况下，在下述情况下，三、四类中药可用大鼠进行长三、四类中药可用大鼠进行长期毒性试验。期毒性试验。(1)处方中各味中药材符合法定标准；(2)无毒性药材；(3)无18反、19畏等配伍禁忌；毒理学上的不同毒理学上的不同二、长期毒性试验4.在下述情况下，在下述情况下，给药周期可为临床用药期的给药周期可为临床用药期的2倍倍(1)三、四类中药；(2)处方中各味中药材符合法定标准；(3)无毒性药材；(4)无18反、19畏等配伍禁忌；(5)未经化学处理（水、乙醇粗提除外）；(6)难以测出LD50，或给药剂量大于20g生药/kg；毒理学上的不同毒理学上的不同二、长期毒性试验5.其它中药一般要求长期毒性试验其它
14、中药一般要求长期毒性试验给药周期应为给药周期应为临床用药期的临床用药期的34倍。倍。化学药：化学药：一般要求长期毒性试验给药期应为临床用药期的34倍。毒理学上的不同毒理学上的不同三、特殊毒性试验（“三致”试验）中药：中药：1.只有一类新药才要求做只有一类新药才要求做“三致三致”试验；试验；2.强调以体内试验为主。强调以体内试验为主。化学药：化学药：1.均做“三致”试验；2.体外、体内试验同等重要。毒理学上的不同毒理学上的不同1.致突变试验：一般可参照化药的相关要求来进行，但中药制剂若有其特殊性时，如溶解度、pH值等问题，难以进行体外试验者(Ames，染色体畸变试验)，可只进行体内试验(小鼠微核
15、试验)。毒理学上的不同毒理学上的不同2.生殖毒性试验：一般生殖毒性试验、致畸敏感期毒性试验和围产期一般生殖毒性试验、致畸敏感期毒性试验和围产期毒性试验。毒性试验。动物应选用大鼠，其中致畸敏感期试验需用两种动动物应选用大鼠，其中致畸敏感期试验需用两种动物（大鼠和兔）进行试验。从节省研发单位的时间出发，物（大鼠和兔）进行试验。从节省研发单位的时间出发，致畸敏感期兔试验和围产期毒性试验致畸敏感期兔试验和围产期毒性试验可在批准进行临床可在批准进行临床研究后，在临床试验期间进行。研究后，在临床试验期间进行。以上原则要求适用于一般的一类新药。对部分具有以上原则要求适用于一般的一类新药。对部分具有特殊性的新
16、药，可免做部分或全部试验者，可由申报单特殊性的新药，可免做部分或全部试验者，可由申报单位提出申请，充分说明理由，经位提出申请，充分说明理由，经SDASDA药品审评中心批准药品审评中心批准后可免做。如部分抗肿瘤药、老年性用药、抢救药物后可免做。如部分抗肿瘤药、老年性用药、抢救药物（用药次数极少、用药时间短）等。（用药次数极少、用药时间短）等。毒理学上的不同毒理学上的不同3.致癌试验：临床上连续用药临床上连续用药6 6个月以上的药物及慢性或复发性疾病个月以上的药物及慢性或复发性疾病需间断性长期反复治疗的药物，需进行致癌试验；需间断性长期反复治疗的药物，需进行致癌试验；具有遗传毒性的药物往往具有致癌
17、性，若这类药物预具有遗传毒性的药物往往具有致癌性，若这类药物预期长期应用于临床时，应进行致癌试验；期长期应用于临床时，应进行致癌试验；若在长期毒性试验中发现有癌前病变的药物或属于与若在长期毒性试验中发现有癌前病变的药物或属于与人相关的具有潜在致癌性的同类化合物，也需进行致癌人相关的具有潜在致癌性的同类化合物，也需进行致癌试验。考虑到致癌试验的周期很长，故致癌试验可在临试验。考虑到致癌试验的周期很长，故致癌试验可在临床研究期间进行，在申报生产时报送致癌试验有关资料。床研究期间进行，在申报生产时报送致癌试验有关资料。毒理学上的不同毒理学上的不同可考虑免做致癌试验的条件：肿瘤治疗剂或应用于预期寿命短
18、暂人群的药物，不要求进肿瘤治疗剂或应用于预期寿命短暂人群的药物，不要求进行致癌试验；行致癌试验；原药材有国家标准，且文献报道无原药材有国家标准，且文献报道无“三致三致”作用，提取的作用，提取的同结构类型化合物无致癌作用且该受试物致突变试验阴性；同结构类型化合物无致癌作用且该受试物致突变试验阴性；无生殖毒性和长期毒性试验未发现有增生作用者。无生殖毒性和长期毒性试验未发现有增生作用者。动物与人在毒性反应上的差别动物与人在毒性反应上的差别 以动物试验来预测药物临床毒性的局限性：以动物试验来预测药物临床毒性的局限性：中药注射剂的一些不良反应报道中药注射剂的一些不良反应报道 国际生命科学研究院的研究国际
19、生命科学研究院的研究 Litchfield临床前毒性研究实验临床前毒性研究实验药品动物试验毒性与临床毒性一致性药品动物试验毒性与临床毒性一致性的国际研究的国际研究70700 0101020203030404050506060707080809090100100阳性一致率阳性一致率人与动人与动物物非啮齿非啮齿类类啮齿类啮齿类 动物毒性试验与人动物毒性试验与人临床毒性反应的阳临床毒性反应的阳性一致率为性一致率为70%非啮齿类动物单独非啮齿类动物单独预测的阳性一致率预测的阳性一致率为为63%啮齿类动物为啮齿类动物为43%6060年代临床前毒性研究资料年代临床前毒性研究资料55550 01010202
20、03030404050506060707080809090100100预测率预测率RatRatDogDogRat&DogRat&Dog 500名病人名病人53种药种药物反应物反应 Rat预测预测18种占种占 34%Dog预测占预测占55%Rat&Dog占占57%94%的临床毒性是在一个月或更短时间的动物试验中被预测到的。结果提示：动物毒性试验预测主要临床毒性的重要，但同时又存在明显的不足之处，即对某些系统毒性的预见性较差。这就提醒人们：这就提醒人们：不能期望仅用从动物实验中得到全 面的信息来指导临床应用。动物毒理试验的局限性：临床仍有 风险。动物与人的敏感性不同，假阴性和 假阳性。一致率仅70
21、%左右。毒理学研究的对策毒理学研究的对策1.1.设法减少动物试验设计上的不足设法减少动物试验设计上的不足 参考参考PPPP、ATAT、GPGP、PKPK、TKTK的信息的信息,选选择合理的采样和检测时机。择合理的采样和检测时机。2 2应重视一般药理学（应重视一般药理学（GPGP安全药安全药 理）的研究。理）的研究。3 3更仔细并合理地选择动物种属更仔细并合理地选择动物种属 （敏感动物（敏感动物)。4 4重视生化指标和全身（免疫重视生化指标和全身（免疫/淋巴）器官脏器重量检测，采淋巴）器官脏器重量检测，采 用新技术检测血液学指标。用新技术检测血液学指标。5 5加强加强GLPGLP实验室中对动物各
22、项实验室中对动物各项 正常生理指标的数据背景资料正常生理指标的数据背景资料 （data backgrounddata background）的研究。）的研究。6 6必要时采用其他非常规的试必要时采用其他非常规的试 验方法和模型，以加强毒性验方法和模型，以加强毒性 机理研究（肝药酶机理研究（肝药酶P P450450的研究）的研究）7 7可直接用人体组织及分子生物可直接用人体组织及分子生物 学技术等进行毒理实验。学技术等进行毒理实验。药品临床前安全性研究药品临床前安全性研究所涉及的内容所涉及的内容全身毒性和局部毒性研究全身毒性和局部毒性研究全身毒性研究：全身毒性研究：急性毒性试验；急性毒性试验；长
23、期毒性试验；长期毒性试验；特殊毒性试验；特殊毒性试验；药物依赖性试验；药物依赖性试验；一般药理（安全药理）一般药理（安全药理）试验；试验；全身过敏性试验全身过敏性试验；局部毒性研究局部毒性研究 皮肤、粘膜毒性试验：皮肤、粘膜毒性试验：1 1）局部刺激性试验）局部刺激性试验2 2）局部过敏试验（光敏试验，）局部过敏试验（光敏试验，被动皮肤过敏试验等）被动皮肤过敏试验等）静脉（肌肉）用药毒性试验：静脉（肌肉）用药毒性试验：1 1）血管（肌肉）刺激性试验）血管（肌肉）刺激性试验2 2）溶血试验）溶血试验 基本目的基本目的 1.找出毒性剂量：找出毒性剂量：单次、重复给药的毒性剂量；单次、重复给药的毒性
24、剂量；2.确定安全范围：确定安全范围：起效而不中毒，范围越大越好；起效而不中毒，范围越大越好；3.发现毒性反应：发现毒性反应：为临床安全监护提供依据，为临床安全监护提供依据，预防毒副反应发生预防毒副反应发生 4.寻找毒性靶器官：寻找毒性靶器官：为药物毒性防治提供依据，为药物毒性防治提供依据，为开发新药提供线索；为开发新药提供线索；5.毒性可逆与否：毒性可逆与否：可逆性毒性反应不影响新药审可逆性毒性反应不影响新药审 批；不可逆损伤一般不批临床；批；不可逆损伤一般不批临床；6.解救措施：解救措施：尤对毒性强猛、安全范围小的药；尤对毒性强猛、安全范围小的药；基本要求基本要求课题负责人：课题负责人：扎
25、实理论、经验、法规；扎实理论、经验、法规；试验者：试验者：受过专门训练、业内人士受过专门训练、业内人士 在试验记录上签字；在试验记录上签字；受试物：受试物：制备工艺基本稳定，质控成制备工艺基本稳定，质控成 熟；试剂：批号、厂家、规格；熟；试剂：批号、厂家、规格；动物：动物：符合国家科技部规定的等级动物符合国家科技部规定的等级动物 要求（要求（SPF,Special Pathogen FreeSPF,Special Pathogen Free）。）。一般用成年；必要时用特定年一般用成年；必要时用特定年 龄、性别、模型动物龄、性别、模型动物仪器设备：仪器设备：符合要求、厂家、规格、专人定期符合要求
26、、厂家、规格、专人定期 校验、误差在允许范围内。校验、误差在允许范围内。试验设计：试验设计：随机、对照、重复三原则。随机、对照、重复三原则。试验记录试验记录：要求客观采用的仪器记录、表格化、要求客观采用的仪器记录、表格化、标准化。遇有未预见的现象及时记标准化。遇有未预见的现象及时记 录；试验中差错应立即在记录中写明录；试验中差错应立即在记录中写明 情况。原始记录至少要保持到药品情况。原始记录至少要保持到药品 上市后上市后5 5年。年。结果结果：统计学处理，结合客观实际恰当下结统计学处理，结合客观实际恰当下结 论论。急性毒性试验急性毒性试验在新药安全性评价中的作用在新药安全性评价中的作用急性毒性
27、试验急性毒性试验 是指动物是指动物24hr24hr内单次或多次给药内单次或多次给药后在后在7d7d或或14d14d中，连续观察动物所产中，连续观察动物所产生的毒性反应及死亡情况。生的毒性反应及死亡情况。定性：定性：毒性反应性质（中毒表毒性反应性质（中毒表现）、毒性出现和消失的时间、现）、毒性出现和消失的时间、毒性涉及的组织器官、中毒过程毒性涉及的组织器官、中毒过程中的特征、可能的死亡原因等。中的特征、可能的死亡原因等。定量：定量：观察毒性反应与剂量的关观察毒性反应与剂量的关系、近似致死量（系、近似致死量（ALDALD）、最大耐）、最大耐受量（受量（MTDMTD）或最大给药量、半数）或最大给药量
28、、半数致死量（致死量（LDLD5050）、致死剂量（）、致死剂量（LDLD）；）；小动物以小动物以LDLD50 50 作指标，大动物以作指标，大动物以ALDALD作指标。作指标。意意 义义 了解新药的急性毒性了解新药的急性毒性强度强度；为临床研究、试验、使用时的毒副反为临床研究、试验、使用时的毒副反 应检测提供参考依据；应检测提供参考依据；为不同提取工艺产品的毒性比较以及为不同提取工艺产品的毒性比较以及 配伍用药或联合用药时药物的相互配伍用药或联合用药时药物的相互 作用情况提供作用情况提供参考参考依据。依据。.可计算新药相对毒性可计算新药相对毒性参数参数：TITI（治疗指数）（治疗指数）=LD
29、=LD5050/ED/ED5050、SMSM（安全范围）（安全范围）=（LDLD1 1/ED/ED9999-1-1）100%100%；（；（LDLD1 1无害量）无害量）.为长期毒性、蓄积毒性及特殊毒性试为长期毒性、蓄积毒性及特殊毒性试验（验（如生殖如生殖毒性试验高剂量为母鼠的毒性试验高剂量为母鼠的最最大耐受量，大耐受量，微核试验的最高剂量一般采微核试验的最高剂量一般采用用1/2LD1/2LD5050，长期毒性试验的高剂量一般，长期毒性试验的高剂量一般采用同种动物采用同种动物1/51/51/10LD1/10LD5050）的的观察指观察指标及剂量标及剂量选择提供参考依据；选择提供参考依据；目前对
30、急毒试验的看法目前对急毒试验的看法LDLD5050测定存在明显的不足：动物消耗量大，测定存在明显的不足：动物消耗量大，获得的信息有限，不需要精确的获得的信息有限，不需要精确的LDLD5050值值,从安全性评价角度来讲，需要的不是精确的从安全性评价角度来讲，需要的不是精确的 LDLD5050 ，而是更多的毒性信息，目前，而是更多的毒性信息，目前ICHICH（人（人 用药品注册技术要求国际协调会议）三方已用药品注册技术要求国际协调会议）三方已 主张不采用主张不采用LDLD5050测定的方法测定的方法对急毒试验的主要要求对急毒试验的主要要求原则上：原则上：用尽可能少的动物获得尽可能用尽可能少的动物获
31、得尽可能 多的急性毒性多的急性毒性信息（信息（3R）；）；内容上：内容上：只需提供其近似致死量（最大只需提供其近似致死量（最大 耐受量）和详细观察记录中毒耐受量）和详细观察记录中毒 表现；表现；.方法上：方法上：最大耐受量试验，固定剂量法、最大耐受量试验，固定剂量法、近似致死量法。近似致死量法。半数致死量（半数致死量（LD50）测定）测定 试验环境试验环境 受试药物受试药物 实验动物实验动物 给药途径给药途径 给药剂量给药剂量 给药容积给药容积 观察指标观察指标试验环境试验环境：符合GLP实验室的规范要求温度(1826C)，湿度(4070%)，照度(300450Lux，局部150Lux)，换气
32、次数(1015次/h)，压力(150Pa)，菌落数等。试验单位应具有实验动物使用许可证。受试药物受试药物：一般为浸膏。其工艺基本稳定成型、质量可控，批号、来源明确，可用适当的溶剂溶解或混悬均匀。必要时应设溶媒对照。实验动物实验动物：注明种属、品系、来源。应出具实验动物供应单位的实验动物生产许可证和实验动物质量合格证。一般依体重确定，小鼠1822g，大鼠120150g，雌雄各半。类新药必须用2种动物（啮齿类和非啮齿类各一种，其中非啮齿类宜用Beagle犬）。类新药建议选用2种动物；给药途径：给药途径：类新药及可溶于水的至少选用两种给药途径，其中一种必须是临床给药途径。其它类至少有一种临床给药途径
33、；小动物以LD50 作指标，大动物以ALD作指标；给药剂量给药剂量：小动物一般设56个剂量组，随机分组；剂距一般以0.650.85为宜。大动物可用50%等量递升法，求出近似致死剂量（ALD）和最大耐受量（MTD）。给药容积给药容积：一般用不等浓度等容量给药，常规给药容量为小鼠 ig 0.20.4ml/10g，ip，sc和iv 0.10.2ml/10g；大鼠 ig 11.5ml/100g，ip，sc和iv 0.51ml/100g；观察指标观察指标：给药当天，尤其是给药后4h内应严密观察并记录，连续观察714天。重点记录动物毒性反应情况和死亡情况，包括中毒症状、中毒发生时间、持续时间、恢复期及最短
34、死亡时间和最长死亡时间表，体重变化表。建议采用Bliss法计算LD50值。最大给药量试验最大给药量试验 在最大浓度和最大给药体积在最大浓度和最大给药体积 （一日内（一日内2 23 3次给药）的情况次给药）的情况 下不引起动物死亡的剂量。下不引起动物死亡的剂量。长期毒性试验长期毒性试验在新药安全性评价中的作用在新药安全性评价中的作用 目目 的的 观察反复给药情况下，实验动物对受试物出现的毒性反应，剂量毒性效应的关系，主要靶器官，毒性反应的性质和损害程度及可逆性等；实验动物能耐受的剂量范围，无毒反应剂量、毒性反应剂量及安全剂量范围。还可以了解毒性产生时间、持续时间、可能反复产生毒性反应的时间、有否
35、迟发性毒性反应、有否蓄积毒性或耐受性等。特特 点点 长期毒性是研究周期最长，困难最大，耗资最多，难以重复的试验。但它对于新药研究的成功与否起着举足轻重的作用。如果说临床前安全性评价对保证临床安全用药有很大作用的话，则长毒试验起着最主要的作用。意意 义义 长毒试验是临床前毒性评价的主要内容，是新药审评的重点内容之一，是能否过渡到临床试用的主要依据。其结果为临床安全用药的剂量设计提供参考依据，为临床毒副反应的监护及生理生化指标监测提供依据。总之，长期毒性试验是总之，长期毒性试验是判断一个候选药物是否有进一步判断一个候选药物是否有进一步开发的价值、通过权衡利弊能否开发的价值、通过权衡利弊能否过渡到临
36、床的重要依据之一。过渡到临床的重要依据之一。一般原则一般原则 试验设计：周到合理，实验条件严格控制；观察指标：力求全面并针对受试药特点选择相应的敏感指标；实验数据：应经统计学处理（属正态分布的，可用t检验或方差分析；若属非正态分布，应选用非参数统计分析法，如Ridit分析或秩和检验）；试验结果：应认真分析，辨别真伪，以判断数据结果的变化是否与药物有关；试验结论：应能说明受试药长期服用时毒性反应的主要特点及安全剂量范围，提示在临床试验时应注意观察哪方面的毒性反应。长期毒性试验的具体要求长期毒性试验的具体要求长期毒性试验应在药理学试验（药效，药代，一般 药理，急毒试验）之后进行；试验设计应由药学、
37、药理、毒理、临床研究人员共同制定；长毒试验的研究设计必须科学、周到和合理；严格掌握试验条件、尽量排除干扰；观察指标力求全面并能针对新药的作用特点，突重点；认真、科学地分析实验结果，实事求是辨别真伪；数据经合理的统计学处理；结论能明确回答新药毒副反应的主要特点及安全剂量的 主要范围。试验环境试验环境：同急性毒性试验的要求；受试药物受试药物：处方固定，工艺和质量基本稳 定。口服制剂建议用提取物或浸 膏灌胃；外用制剂、注射剂可用 原制剂，为提高剂量可进行浓缩。考虑到中试供样量，可采用混批。实验动物实验动物：动物种属、品系、来源清晰。应出具实验动物供应单位的实验 动物生产许可证和实验动物质量 合格证。
38、应采用敏感动物进行试验:啮齿类动物一般选SD或Wistar大鼠，一般为68周龄，试验周期3个月以上者可选56周龄；非啮齿类动物选Beagle犬412月，杂种犬5岁以下。年轻动物对药敏感，另外可观察对生长发育的影响。试验开始时体重差异不应超过该次试验动物平均体重的20%。若用于儿童患者则应根据具体情况采用幼年动物。动物数：动物数：原则上应满足统计学的要求，具体应根据动物可能的消耗情况来设计（药物毒性特点、试验要达到的目标、指标变异情况、检测次数和给药周期长短等）。大鼠大鼠:每组至少20只，如试验周期为三个月以上，应根据需要增加数量至每组3040只；犬犬:每组动物至少6只，雌（无孕）雄各半（单性别
39、用药者例外），随机分组，对试验周期为6个月或9个月的长毒，应根据试验需要相应增加动物数。给药途径给药途径：给药途径应与推荐临床的途径一致，否则要说明理由。临床用药途径为静脉注射时，如有困难亦可用其它适宜的注射途径代替，详细说明给药方法。若掺食法给药应提供数据，说明如何保证给药剂量的一致性，药物的均一性和稳定性；外用药长毒试验要注意详细说明实验条件（环境温度、湿度等）和试验方法（给药部位、面积、固定方法、持续时间、给药厚度等）。剂量设计剂量设计 可参考药效学有效剂量、急性毒性试验（LD50法，MTD法）以及预试验的结果来设计高、中、低三个剂量组和一个对照组（必要时设溶剂或赋形剂对照组），以找到无
40、毒剂量、中毒剂量和药物安全范围。要求高剂量组原则上力求使动物产生明显的或严重的毒性反应，或个别动物死亡；低剂量组应高于同种动物的有效剂量（或按体表面积折算）而不出现毒性反应；在高、低剂量组之间应按等比关系再设1个中剂量组。剂量设计剂量设计 如果小鼠急性毒性试验在最大给药量情况下仍不出现毒性反应和死亡或仅个别动物有毒性反应时，可按动物药效剂量或临床拟用剂量科学合理的倍数进行设计。建议高剂量组应考虑采用最大给药浓度及动物的最大给药容量来完成长毒试验，或相当于犬和大鼠药效学有效剂量的2030倍。给药周期给药周期 应根据临床用药的实际情况并结合适应证的特点来定，具体要求我国已基本参照ICH达成的一致，
41、中药的毒性试验在充分考虑其特殊性的前提下，也建议与ICH一致。具体规定：临床用药期临床用药期 长期毒性试验长期毒性试验 1 1周内者周内者,2,2周周 2 2周内者周内者,4,4周周 2 24 4周周,13,13周周 4 4周周3 3月，月，2626周周 3 3个月以上者，个月以上者，大鼠大鼠2626周，犬周，犬9 9个月个月 此为最长试验周期。对需长期反复应用的药物，应做最此为最长试验周期。对需长期反复应用的药物，应做最长试验周期的长期毒性试验。长试验周期的长期毒性试验。给药周期给药周期 对功能主治有若干项的，应按临床最长疗程的功能主治来确定长毒给药周期；对一些慢性病的治疗药，应根据疾病临床
42、实际所需疗程按最长试验周期提供长期毒性资料。为加快申报速度减少浪费，为加快申报速度减少浪费，鼓励在长毒试验进行至与鼓励在长毒试验进行至与期临期临床试验疗程相等的给药时间时提床试验疗程相等的给药时间时提交申报资料。交申报资料。观测指标观测指标1）注意根据受试药特点选择针对性强的检测指标以反映其毒性特点：PP、GP特点下的过量给药；AT结果、LT预试结果预测可能的毒性 文献报道或临床预试的不良反应；处方中已知成分的毒性。2）设计指标检测的最佳时机和次数（可参考药代动力学数据）；3）对实验动物一般状况的观察是最基本、最重要的内容：体重的变化率与动物的摄食量在大多数情况下的变化是一致的。出现早、反应灵
43、。所以必须计算体重和摄食量。其他：瞳孔反射、步态、精神状态等。4）注意在试验中观察与免疫毒性相关的指标；5）要重视脏器病理组织学指标的全面检查，出具正式病理部门签章的、书写规范（高剂量组、空白对照组）的22个脏器的病理报告书，并提供病理照片（尤其是表现出病变的脏器）。毒理学试验结果的综合分析毒理学试验结果的综合分析分析目的：分析目的：数据变化是否与受试物有关；以确定无毒反应剂量、毒性反应剂量及安全剂量范围。2.差异的生物学意义与统计学意义的关差异的生物学意义与统计学意义的关系：系：没有统计学意义不等于没有生物学意义；有统计学意义也不等于有生物学意义；分析原则：综合分析，注意系统性和关联性。3.
44、分析步骤分析步骤 分析计数和计量资料，数据属于正态分布，用t检验或方差分析；数据是非正态分布，应用非参数统计分析Ridit或秩和检验（如半定量的计分数据）是否有差异及统计学意义；差异是否有生物学意义。4.具体分析方法（计数和计量资料）具体分析方法（计数和计量资料）统计学家：统计学家：往往强调P值，不考虑实际情况；临床医生：临床医生：更多考虑临床的实际意义；药理毒理工作者：药理毒理工作者：应将二者结合起来考虑，才是客观、可信、可靠的结论。不能只求与对照组的比较，还要说明给药组两两之间的比较，以说明并分析量毒关系。如尿量、RBC、WBC及血小板计数等，由于系统误差可能有统计学意义，P0.05，但因
45、为一般都在正常范围内（指自己实验室的背景值范围）的波动,无量毒关系，所以无临床的实际意义。综合考虑同一指标的均数计量和个体计数结果的统计学和生物学意义。如：ALT的“均数SD”，往往因SD过大而使各组间的统计学分析无显著差异。此时应注意分析，SD过大通常是由于某几例动物个体数值的异常变化所致。虽然统计学无差异，但就某一个体来说，其数据的变化是异常的。此时，应列出个体数据再加以分析。注意选择敏感指标 如：血液检查常常只注意红细胞计数而忽视网织红细胞的检查。事实上RBC计数不论在反映溶血或反映红系造血抑制上都不灵敏。因为RBC寿命很长，120d。在此期间，骨髓红系造血即使受到抑制，外周血也表现不出
46、来，因为机体可以从贮存库将红细胞动员出来，外周血的红细胞不致明显下降。但网织红细胞却是一个很敏感的指标，其计数下降表明红系造血障碍和溶血加强。不能因为RBC无统计学意义而忽略其可能的毒性，甚至是毒性靶器官。又如：ALT、AST、ALP、Tbill是检测肝功的指标。ALT是敏感指标；AST受标本溶血影响大；ALP受动物年龄影响大，应强调组间对照。ALP、AST非肝脏特异性酶，也可来自机体的其他器官，在分析时要注意。狗BUN在天热时升高，320C以上可升高30%-50%；TP、ALB在营养不良或肝、肾功能长期损害时可降低，当免疫功能增强（感染）或自身免疫功能亢进时球蛋白增高，相反则降低。所以，既要
47、注意毒性相关指标系统的综合分析，来判断出毒性靶器官；也要将试验中出现的异常情况反映在申报资料上，便于审评者得出合理、正确的判断。重视脏器组织病理学检查及结果的量化 血中BUN、Cr在肾脏轻度损伤时其值仍正常，此时病理结果的判断十分重要；尸检器官重量降低，提示该器官萎缩或发育不良；器官重量增加可能充血、肥大或新生物。病理检查一般可见灶性炎症、炎性细胞浸润、灶性出血、淤血及可疑细胞变性，它们均可能与受试药无关，可因自身感染、宰杀方法等造成，但要如实描写，不能只写成“未见病理改变未见病理改变”。病理变化最好半定量：病理变化最好半定量：无病理变化（-）为0分，可疑（）为0.5分，轻度（+）为1分，中度
48、（+）为2分，重度（+）为3分，这些非正态分布的数据要进行统计学分析。分析受试动物流行病学的背景资料 动物饲养条件、工作人员的责任心等等，有必要结合参考；结合药代动力学和其他毒理实验结果来分析考虑文献资料和所在实验室正常值范围 不同时间点检测数据的波动情况；自己实验室的(data background)正常范围值。5 5尤其要注意别将动物结果不加分析地外推到人。更不能忽略甚至故意舍掉已看到的毒性反应。新药申报资料中新药申报资料中的常见问题分析的常见问题分析 试验设计欠合理（不符合前面讲试验设计欠合理（不符合前面讲述的原则），最主要在剂量、周期和述的原则），最主要在剂量、周期和结果分析上。结果分
49、析上。每组动物数不够，试验中期、给药 结束、恢复期结束缺少足够的统计 样本数 试验设计在时间上缺乏合理的预见 性，脱离临床指导原则中有关疗效 评价的时限要求 药效试验中的阳性结果，在大剂量、长期给药的情况下动物却是另一种表现（大多是没有反应），难以相信试验的科学性。RatRat雌、雄的摄食量和体重合并雌、雄的摄食量和体重合并统计：统计：不妥！因为随时间的延长，如6个月时间，雄性大鼠体重可达500g，雌性大鼠300g也属正常，如合并统计会造成标准差很大；摄食量也一样，其性别差异的现象被掩盖。申报后，遇到工艺路线改动的问题：申报后，遇到工艺路线改动的问题：工艺合理是按处方的功能主治，最大限度地体现活性“有效成份”，制剂的最终目的是供临床更好使用；片面追求药学方面而轻视生物学方面的做法是错误的。工艺改进与整体疗效的关系。研究单位与生产单位的目的应趋于统一。关于长毒某些指标变化的问题：关于长毒某些指标变化的问题：申报资料的血液和血清生化检测指标中，有些指标数值与空白对照组有统计学上的差异。不应单一引用XX书中，认为现资料中的数据在“正常范围内”；而应在掌握自我实验室中data background基础上，结合试验相关的因素，分析结果，做出判断。谢谢谢谢！
