1、2022-8-91实验八实验八 酵母菌的形态观察、酵母菌的形态观察、细菌的生理生化反应细菌的生理生化反应2022-8-92一、目的一、目的1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式,学习区 分酵母菌死活细胞的实验方法,学习观察酵 母菌液泡、肝糖粒的方法;2、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的 重要作用;3、了解吲哚、甲基红、伏-普反应的原理及其 在肠道菌鉴定中的意义和方法。2022-8-93二、基本原理二、基本原理 酵母菌以出芽方式进行无性繁殖,有的分裂繁殖。美兰是一种无毒性的染料,可用于鉴别细胞的死活。糖分解试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为
2、碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。发酵培养基含有蛋白胨,指示剂,倒置的德汉氏小管和不同的糖类。当发酵产酸时,溴甲酚紫指示剂可由紫色(pH6.8)变为黄色(pH5.2)。气体的产生可由倒置的德汉氏小管中有无气泡来证明。吲哚、甲基红、伏-普这三个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气杆菌,多用于水的细菌学检查。大肠杆菌虽非致病菌,但在饮用水中若超过一定数量,则表示受粪便污染。产气杆菌也广泛存在于自然界中,因此检查水时要将两者分开。2022-8-94三、器材三、器材1、菌种:酿酒酵母、热带假丝酵母培养约2d的培养物;大 肠杆菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。2、培养基:牛肉膏蛋白胨斜
3、面培养基,PDA液体培养基、葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试 管、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基3、试剂:吕氏碱性美兰染色液、中性红染色液、碘液、甲 基红指示剂,40KOH,5-萘酚,乙醚,吲 哚试剂等。4、仪器或其他用具:显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片等。2022-8-95四、操作步骤四、操作步骤1、酵母菌的形态观察:(1)酵母菌死活细胞的鉴别:取菌液 滴加美兰染色液 盖上盖玻片 镜检。(2)酵母菌液泡的观察:取菌液 滴加中性红染色液 盖上盖玻片 镜检。(3)酵母菌细胞中肝糖粒的观察:取菌液 滴加碘液 盖上盖玻片 镜检。2、细菌的生理生化反应:将供试菌株分别接种在相应的培养液中,置适宜的温箱中恒温培养。在规定的时间内,选用相应的指示剂测定和观察试验结果。2022-8-962022-8-972022-8-982022-8-99吲哚试验吲哚试验2022-8-9102022-8-911乙酰甲基甲醇试验(伏-普)2022-8-9122022-8-913五、实验报告五、实验报告1、绘图说明你所观察到的酵母菌形态特征;并分别说明经美兰染色后,酵母菌的活细胞、死细胞和衰老细胞被染成何种颜色,为什么?2、列表说明各供试菌对糖类的分解利用情况和吲哚、甲基红、伏-普试验结果。2022-8-914六、预习六、预习 糯米甜酒的酿制