1、一、基本概念一、基本概念probeprobeSouthern blot是最经典的基因分析方法，不但能检出特异是最经典的基因分析方法，不但能检出特异的的DNADNA片段，而且能进行定量和测定分子片段，而且能进行定量和测定分子量，可用于基因的酶切图谱分析、基因突变量，可用于基因的酶切图谱分析、基因突变分析等。分析等。寡核苷酸杂交分析寡核苷酸杂交分析SNP和等位基因特和等位基因特异寡核苷酸杂交异寡核苷酸杂交（ASO）#Mst酶切位点酶切位点(CCTNAGG)5 3 正常基因正常基因5 3 突变基因突变基因1.15kb1.35kb（一）镰状红细胞贫血分子机制（一）镰状红细胞贫血分子机制5 67-Pro
2、 GluGlu-CCT GAG GAG-5 67-Pro AlaGlu-CCT GTG GAG-0.2kb1.15kb1.35kb正常人正常人突变携带着突变携带着患者患者镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析引物引物1CCT GAG GAGCCT GTG GAG引物引物1引物引物2引物引物2294bp103bp191bpMst酶切位点酶切位点(CCTNAGG)103bp191bp294bp正常人正常人突变携带着突变携带着患者患者镰状红细胞贫血患者镰状红细胞贫血患者PCR产物的限制性酶切分析产物的限制性酶切分析c左侧缺失左侧缺失4.2kb右侧缺失右侧缺失
3、3.7kbbbba2112N端端1C端端正常基正常基因序列因序列PCR扩增法定性分析左侧缺失型左侧缺失型基因序列基因序列右侧缺失型右侧缺失型基因序列基因序列ac扩增0.4kbab无扩增片段ab扩增1.2kb0.4kb1.2kb正常人正常人右侧缺右侧缺失患者失患者地中海贫血患者基因组的地中海贫血患者基因组的PCR分析分析左侧缺左侧缺失患者失患者四、杜氏肌营养不良症（四、杜氏肌营养不良症（DMD）1.DMD是常见的性连锁隐性遗传病，是常见的性连锁隐性遗传病，2.主要特征是进行性肌萎缩和肠肌假性主要特征是进行性肌萎缩和肠肌假性肥大，肥大，XP21.2121.3区抗肌萎缩蛋白基区抗肌萎缩蛋白基因突变形
4、式不同。因突变形式不同。DMD多在多在5岁发病，岁发病，10岁左右瘫痪，岁左右瘫痪，在在20岁左右由于心力和呼吸衰竭而死亡，岁左右由于心力和呼吸衰竭而死亡，其发病率为活产男婴的其发病率为活产男婴的1/3500。苯丙氨酸苯丙氨酸羟化酶羟化酶（肝）（肝）五、苯丙酮尿症（五、苯丙酮尿症（PKU）（二）（二）PKU的的DNA诊断诊断 健康男性健康男性 男性携带者男性携带者男性患者男性患者 健康女性健康女性 女性携带者女性携带者女性患者女性患者正常探针突变探针着丝粒着丝粒 染色体染色体 22 bcr genec-abl gene 染色体染色体 9 bcr-mRNA bcr-abl mRNA 染色体染色体 9,22 bcr-abl 融合蛋白（具融合蛋白（具PTK活性）活性）慢性骨髓白血病慢性骨髓白血病 引物A 引物 B LTR gag pol env tat，rev LTR调节蛋白基因调节蛋白基因*HIVHIV病毒基因组结构病毒基因组结构Probe TGAGTTGCAACAGATGCTGTTGCGCCTCAATAGCCCTCAGPCR/核酸杂交诊断艾滋病
