1、实验原理以聚苯乙烯胶乳颗粒为载体的间接凝集试验间接凝集试验：聚苯乙烯颗粒具有很强的吸附蛋白质的能力，借此将抗原（变性IgG）与胶乳颗粒结合成致敏颗粒，直接与待测标本中的抗体（RF）发生凝集反应。RF为抗变性IgG的抗体，因此本实验使用的是人IgG致敏的聚苯乙烯颗粒。试剂和器材 RF检测试剂（商品化试剂）RF阴性血清和阳性血清（试剂盒自带）黑色反应板、滴管、搅拌棒等操作方法1.在黑色反应板上取3格，用滴管分别加待测血清、阳性血清和阴性血清各1滴，然后每格加入1滴致敏胶乳颗粒试剂。2.用搅拌棒充分混匀后，连续摇动23min后与对照比较，观察结果。结果判断 胶乳颗粒凝集且液体澄清者为阳性，胶乳颗粒不
2、凝集仍保持均匀胶乳状者为阴性；首先观察阳性血清和阴性血清的反应结果，若前者为阳性反应后者为阴性反应，说明试剂有效；然后再观察待测样品的反应情况，并判断阴阳性。方法学评价 该试验方法简单、快速、特异性强、结果清晰易观察判断。观察时应注意排除非特异性凝集反应。如何进行半定量分析？实验原理：PEG沉淀法 聚乙二醇（PEG），分子量6000，具有较强的脱水作用，可引起蛋白质沉淀，沉淀具有选择性且对蛋白质生物活性无影响。是免疫浊度测定技术中常用的增浊剂。PEG沉淀蛋白质的选择性与其浓度相关：沉淀蛋白质的选择性与其浓度相关：2%PEG只能沉淀大分子，4%PEG能沉淀较小分子的循环免疫复合物 大于5%PEG
3、，选择性沉淀特性消失。在在PH、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量、离子强度等条件固定时，蛋白质分子量越大，用以沉淀的越大，用以沉淀的PEG浓度越小。浓度越小。分离血清免疫复合物一般采用最终浓度为3%4%PEG。血清中加入最终浓度约为3.5%的的PEG后，其浊度与血清中免疫复合物含量相关，用分光光度计测定其A值，代表免疫复合物相对含量。试剂和器材 试剂1：0.1mol/L PH8.6硼酸缓冲液 试剂2：3.75%PEG-硼酸缓冲液 （已备好）（已备好）仪器：721分光光度计 操作方法1.加样：对每一份标本，取两试管按下表操作 加入物（单位：mL）对照管测定管待测血清0.10.1试剂1（硼酸缓冲液）3试剂2（PEG-硼酸缓冲液）3操作方法2.将以上反应管充分混匀，置室温1小时。3.用721分光光度计在460nm波长下混匀测定OD值。4.关机，清洁仪器，盖上布罩。正常参考值：OD0.15 结果易受多种大分子蛋白质的干扰，特异性差。CIC的检出可以为多种与自身免疫相关疾病提供辅助诊断诊断指标，但由于方法上的问题，其测定结果尚不能作为诊断疾病的敏感可靠的指标。要 求1.实验结束后安排同学打扫卫生。2.实验报告与单扩实验分开写，下周上课交报告。
