1、LOREM IPSUM DOLOR第1页，共27页。1、荧光定量PCR技术2、乙肝病毒的感染3、HBV-DNA与临床第2页，共27页。荧光定量PCR技术第3页，共27页。荧光定量荧光定量PCR技术技术*Polymerase chain reaction(PCR)，聚合酶链式反应，是一种DNA的快速扩增技术。PCR技术通过两个短的称为引物的DNA小片段和一种耐热酶（TaqDNA聚合酶）的作用，经过三个步骤在3个小时内反复循环25-30次，把特定的DNA片段扩增1000万倍。*每个PCR体系含4种主要成分：第4页，共27页。实时荧光定量PCR技术，是指在反应体系中加入，利用荧光信号积累实时检测整个
2、PCR过程，通过对PCR终产物的分析，最终实现对未知的起始模版进行定量分析的一种技术，是迄今对已知基因序列的核酸测定中最灵敏的方法。荧光定量荧光定量PCR技术技术第5页，共27页。PCR 反应过程5533d.NTPsTaq 酶Primers5353535353535353反应组分反应组分变变 性性535353535353第6页，共27页。延延 伸伸53535353353TaqTaq55重重 复复退退 火火第7页，共27页。5353535355335353循环循环24个拷贝个拷贝循环循环38个拷贝个拷贝53535353535353535353533553535353第8页，共27页。荧光定量PC
3、R原理插入染料法插入染料法 SYBR Green I杂交探针法杂交探针法(最常用最常用)TaqMan第9页，共27页。TaqMan探针5533d.NTPsTaq酶Primers5353535353535353反应体系变 性535353535353Taql53RQProbe53RQ第10页，共27页。535353RQ退 火531.链取代Taq3QR5533QTaqR52.水 解3.聚 合53QTaqR354.检测荧光533QTaqR5l第11页，共27页。乙肝病毒的感染第12页，共27页。乙肝病毒的感染HBsAg：是HBV感染的主要标志HBsAb：保护性抗体HBcAb:非保护性抗体，HBcAb-
4、IgM提示HBV处于复制状态HBeAg：HBV复制及强感染性的指标HBeAb：有一定的保护作用，预后良好第13页，共27页。乙肝病毒的感染1.“两对半”：机体的免疫反应状态；2.“携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学指标。HBsAg()HBV-DNA()HBeAg()HBV-DNA()3.第14页，共27页。乙肝病毒的感染5.HBeAg阳性标本HBV DNA检出率90左右 4.也可能出现HBsAg()，HBV-DNA()。第15页，共27页。乙肝病毒的感染HBV DNAHBV DNAHBV DNAHBV DNA贯穿感染者的终生，是评价病毒复制的金标准贯穿感染者的终生，是评价病毒复制的金标准
5、ALTALT正常正常增高或者波动增高或者波动正常正常增高或者波动增高或者波动免疫耐受期免疫耐受期免疫清除期免疫清除期非活动或低（非活动或低（非）复制期非）复制期再活动期再活动期肝组织学肝组织学无明显异常无明显异常,或或轻度炎症纤维化轻度炎症纤维化中度或严重炎症、纤中度或严重炎症、纤维化快速进展维化快速进展无炎症或仅有轻无炎症或仅有轻度炎症度炎症中度或严重炎中度或严重炎症、肝纤维化症、肝纤维化临床诊断临床诊断慢性慢性HBV携带者携带者HBeAg阳性慢性乙型肝阳性慢性乙型肝炎炎乙型肝炎肝硬化乙型肝炎肝硬化非活动性非活动性HBsAg携带者携带者HBeAg阴性阴性慢性乙型肝炎慢性乙型肝炎乙型肝炎肝硬化
6、乙型肝炎肝硬化第16页，共27页。乙肝病毒的感染慢性慢性HBV感染分期及相关实验室检测指标感染分期及相关实验室检测指标 鲁凤民，庄辉，乙型肝炎实验室诊断研究进展 2009 第17页，共27页。第18页，共27页。HBV DNA检测的临床意义HBV DNAHBV DNA是是HBVHBV存在最直接的依据存在最直接的依据HBV DNAHBV DNA是是HBVHBV复制的标志复制的标志HBV DNAHBV DNA是患者具有传染性的标志是患者具有传染性的标志HBV DNAHBV DNA对乙肝两对半起补充作用对乙肝两对半起补充作用HBV DNAHBV DNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标是目前判
7、断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标HBV DNAHBV DNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎可检测出隐匿性慢性乙型肝炎第19页，共27页。PCRPCR检测检测“窗口期窗口期”核酸检测缩短的核酸检测缩短的“窗口期窗口期”的天数的天数HBVHBV56566-156-15HCVHCV707041-6041-60HIVHIV222210-1510-15有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断提供直接证据缩短提供直接证据缩短“窗口期窗口期”HBV DNA检测的临床意义第20页，共27页。调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小
8、三阳”的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBV DNA来决定。HBV DNA检测的临床意义第21页，共27页。第22页，共27页。第23页，共27页。HBV DNA检测的临床意义干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结合。病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBV DNA很少或缺乏。第24页，共27页。目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50左右。目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗病毒药物主要有两大类：重组人-1b干扰素、-2a、-2b干扰素等。：拉米夫定、阿德福韦。乙肝的治疗第25页，共27页。乙肝的治疗第26页，共27页。第27页，共27页。
