1、专题专题2:2:微生物的培养与应用微生物的培养与应用 微生物：微生物：指形体微小指形体微小(小于小于0.1mm)0.1mm)，结构简，结构简单，在适宜环境中能迅速生长繁殖，易变异，通单，在适宜环境中能迅速生长繁殖，易变异，通常要借助显微镜才能看清楚的生物。大约有常要借助显微镜才能看清楚的生物。大约有1010万万种。种。微生物微生物 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌真菌界界病毒病毒(细菌、放线菌、蓝藻细菌、放线菌、蓝藻)(酵母菌、霉菌、大型真菌酵母菌、霉菌、大型真菌)(草履虫、变形虫、衣藻草履虫、变形虫、衣藻)(噬菌体、艾滋病毒噬菌体、艾滋病毒)1 1、细菌的形态：球形、杆形、螺旋
2、形。、细菌的形态：球形、杆形、螺旋形。螺旋菌螺旋菌球菌球菌杆菌杆菌2 2、细菌的结构、细菌的结构所有的细菌所共有的基本结构有哪些？所有的细菌所共有的基本结构有哪些？某些细菌所具有的特殊结构有哪些？某些细菌所具有的特殊结构有哪些？（拟核）（拟核）基本结构基本结构特殊结构特殊结构*细胞壁 细胞壁有哪些功能？细胞壁有哪些功能？伤伤寒寒杆杆菌菌细细胞胞壁壁中中含含毒毒素素结构结构化学本质化学本质功能或应用功能或应用细胞壁细胞壁细胞膜细胞膜细细胞胞质质基质基质核糖体核糖体质粒质粒贮藏性贮藏性颗粒颗粒拟核拟核主要是肽聚糖主要是肽聚糖 保护和维持细胞形状等保护和维持细胞形状等同真核生物同真核生物同真核生物同
3、真核生物多种成分多种成分新陈代谢的主要场所新陈代谢的主要场所小型小型DNA分子分子同真核生物同真核生物同真核生物同真核生物控制细菌的抗药性、控制细菌的抗药性、固氮、抗生素生成固氮、抗生素生成多种成分多种成分贮藏营养物质或代谢废贮藏营养物质或代谢废物，如淀粉粒、硫粒物，如淀粉粒、硫粒大型环型大型环型DNA 控制细菌主要遗传性状控制细菌主要遗传性状特殊的结构特殊的结构荚膜荚膜 主要成分为多糖，与其致病性有关。主要成分为多糖，与其致病性有关。芽孢芽孢 细菌生长到一定阶段产生的一种抗逆细菌生长到一定阶段产生的一种抗逆 性很强的性很强的休眠体休眠体,以度过不良的环境以度过不良的环境。荚膜、鞭毛、芽孢荚膜
4、、鞭毛、芽孢 一般说，芽孢不一般说，芽孢不起繁殖作用，只起度起繁殖作用，只起度过不良环境的作用，过不良环境的作用，芽孢对热、紫外线和芽孢对热、紫外线和许多有毒化学物质有许多有毒化学物质有很强的抗性。很强的抗性。3 3、细菌的代谢、细菌的代谢自养自养硝化细菌、铁细菌、硫细菌等。硝化细菌、铁细菌、硫细菌等。异养异养大肠杆菌、乳酸菌、枯草杆菌等。大肠杆菌、乳酸菌、枯草杆菌等。腐生腐生依靠分解动植物的遗体（尸体、依靠分解动植物的遗体（尸体、粪便和枯枝落叶），从中吸取有机物来生粪便和枯枝落叶），从中吸取有机物来生活。例如枯草杆菌，它可以引起食物的腐活。例如枯草杆菌，它可以引起食物的腐败。败。寄生寄生从活
5、的动植物体内吸取有机物来从活的动植物体内吸取有机物来生活。例如寄生在肠道内的痢疾杆菌，它生活。例如寄生在肠道内的痢疾杆菌，它能够引起细菌性痢疾。能够引起细菌性痢疾。需氧型：需氧型：好氧性细菌。如：枯草杆菌、硝化细菌、铁细菌、根好氧性细菌。如：枯草杆菌、硝化细菌、铁细菌、根 瘤菌等瘤菌等。厌氧型：厌氧型：厌氧性细菌。如：破伤风杆菌，大肠杆菌，乳酸菌等。厌氧性细菌。如：破伤风杆菌，大肠杆菌，乳酸菌等。异养需氧型异养需氧型 异养厌氧型异养厌氧型 自养需氧型自养需氧型 自养厌氧型自养厌氧型问问：细菌的代谢类型属于什么方式细菌的代谢类型属于什么方式?在生态系统中处于什么地位在生态系统中处于什么地位?分解
6、者或消费者分解者或消费者生产者生产者3 3、细菌的繁殖、细菌的繁殖 二分裂二分裂2020分钟分钟3030分钟，分裂一次分钟，分裂一次 无鞭毛的球菌：无鞭毛的球菌：菌落较小较厚、边菌落较小较厚、边缘整齐缘整齐.有鞭毛的细菌：有鞭毛的细菌：菌落大而扁平、边菌落大而扁平、边缘波状或锯齿状缘波状或锯齿状.问：菌落在生态学问：菌落在生态学上属于什么单位？上属于什么单位？菌菌 落落问：什么叫菌落？问：什么叫菌落？菌落可以作为菌种菌落可以作为菌种鉴定的重要依据。鉴定的重要依据。几种菌落三册书中所有细菌的种类三册书中所有细菌的种类例如：例如：乳酸菌的有关知识乳酸菌的有关知识细胞类型：原核细胞细胞类型：原核细胞
7、代谢类型：异养厌养代谢类型：异养厌养代谢产物：乳酸代谢产物：乳酸生产用途：酸奶、泡菜生产用途：酸奶、泡菜可产生乳酸的生物：可产生乳酸的生物：人无氧呼吸人无氧呼吸马铃薯块茎马铃薯块茎玉米的胚、甜菜块根玉米的胚、甜菜块根 菌体由分枝状的菌丝菌体由分枝状的菌丝构成构成基内菌丝基内菌丝(营养菌营养菌丝丝)吸收现成的有机吸收现成的有机物物(大多营腐生生活大多营腐生生活)气生菌丝气生菌丝到一定阶到一定阶段分化成段分化成孢子丝孢子丝，上，上有成串的孢子。有成串的孢子。单细胞的原核生物，分布广泛。单细胞的原核生物，分布广泛。放线菌的生殖放线菌的生殖孢子生殖孢子生殖70%70%以上的天然抗生素均由土壤放线菌产生
8、。以上的天然抗生素均由土壤放线菌产生。如头孢拉定、链霉素、金霉素、土霉素、庆大如头孢拉定、链霉素、金霉素、土霉素、庆大霉素、春雷霉素、四环素、红霉素和卡那霉素霉素、春雷霉素、四环素、红霉素和卡那霉素等。等。HIV病毒病毒整合酶的功能是将病毒整合酶的功能是将病毒DNA整整合到宿主细胞染色体中合到宿主细胞染色体中 1 1、病毒的结构、病毒的结构病毒病毒结构结构核酸核酸(DNA或或RNA)衣壳衣壳(蛋白质蛋白质)；由衣壳粒构成；由衣壳粒构成核衣壳核衣壳囊囊 膜膜(有的病毒具有有的病毒具有)由蛋白质、多糖和脂类构成由蛋白质、多糖和脂类构成,上常有刺突；如流感病毒上常有刺突；如流感病毒.衣壳衣壳化学组成
9、化学组成形态单位形态单位功能功能排列方式排列方式由蛋白质构成由蛋白质构成衣壳粒衣壳粒通常由通常由1-6个多个多肽分子组成肽分子组成保护核酸保护核酸决定抗原特异性决定抗原特异性使病毒呈现不同的形态使病毒呈现不同的形态2 2、病毒的增殖、病毒的增殖只能在宿主的只能在宿主的活细胞活细胞中进行中进行类群类群结构特点结构特点遗传物质遗传物质繁殖方式繁殖方式举例举例病毒病毒原核原核生物界生物界真菌界真菌界原生原生生物界生物界无细胞结构无细胞结构(核酸衣壳囊膜核酸衣壳囊膜)原核原核(细胞壁、细胞壁、膜、质膜、质)真核真核(细胞壁、细胞壁、膜、质、核膜、质、核)真核真核(细胞膜、细胞膜、质、核质、核)噬菌体噬
10、菌体烟草花叶病毒烟草花叶病毒流感病毒流感病毒细菌细菌(形状菌形状菌)放线菌放线菌霉菌、蘑菇、霉菌、蘑菇、酵母菌酵母菌衣藻、草履衣藻、草履虫、变形虫虫、变形虫DNA或或RNADNADNADNA增殖：吸附增殖：吸附注入注入合成合成装配装配释放释放分裂生殖分裂生殖(二分裂二分裂)孢子生殖孢子生殖出芽生殖出芽生殖分裂生殖分裂生殖有性生殖有性生殖 了解有关培养基的基础知识，进行无了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。菌技术的操作，进行微生物的培养。一、课题目标：一、课题目标：掌握掌握培养基的制备培养基的制备、高压蒸气灭菌高压蒸气灭菌和和平板划线法平板划线法等基本操作技术，熟练、
11、规范等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。地进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：二、课题重点和难点：三、技能目标：三、技能目标：一、基础知识：一、基础知识：（一）培养基（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。（1 1）按物理状态来分：培养基可分为）按物理状态来分：培养基可分为固体培固体培养基养基和和液体培养基液体培养基。其中固体培养基用于菌。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。种分离、鉴定菌落等。
12、（2 2）按功能来分，可分为）按功能来分，可分为选择培养基选择培养基和和鉴别鉴别培养基培养基。（3 3）按成分来分，可分为）按成分来分，可分为天然培养基天然培养基和和合成合成培养基培养基。1.1.培养基的类型和用途培养基的类型和用途 2.2.不同的微生物往往需要采用不同不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方的培养基配方(参考教材附录内容参考教材附录内容)3.3.不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、碳源碳源、和、和氮源氮源、无机盐无机盐、等等营养物质，营养物质，另外还需要满足微生物生长对另外还需要满足微生物生长对pHpH、特特殊营养物质殊营养物质,例如例如:生长因子生长因
13、子(即细菌生长即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物必需，而自身不能合成的化合物,如维生如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等的要求。等的要求。选择培养基加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入
14、了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基核苷的培养基:分离杂交瘤细胞分离杂交瘤细胞 根据细胞生存所需物质的种类和根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。数量，用人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基酸、合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。一些辅助物质。优点：优点：标准化生产，组分和含量相标准化生产，组分和含量相对固定对固定;成本低成本低 缺点：缺点：缺少某些成分，不能完全满缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。足体
15、外细胞生长需要。合成培养基合成培养基:天然培养基有血清、血浆、和组天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：优点：营养成分丰富，培养效果好营养成分丰富，培养效果好缺点：缺点：来源受限来源受限;成分复杂，影响对某成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染易发生支原体污染;天然培养基：天然培养基：固体培养基：菌落固体培养基：菌落4.4.培养基的用途培养基的用途液体培养基：增菌液体培养基：增菌固体培养基：纯化，增菌固体培养基：纯化，增菌半固体培养基：动力检测，保种半固体培养基：动力检测，保种
16、1.1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指无菌操作泛指在培养微生物的操作在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。中，所有防止杂菌污染的方法。无论是无论是随后将要学到的随后将要学到的倒平板倒平板、平板划线平板划线操作，操作，还是还是平板稀释涂布法平板稀释涂布法，其操作中的每一，其操作中的每一步都需要做到步都需要做到“无菌无菌”，即防止杂菌污，即防止杂菌污染。只有熟练、规范地进行无菌操作，染。只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。才可能成功地培养微生物。（）（）消毒定义：消毒定义：利用化学或物理方法，杀死大部份利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程。区分为致病
17、微生物的过程。区分为高程度消毒高程度消毒、中程度消毒中程度消毒、低程度消毒低程度消毒三种方式。三种方式。2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别（2 2）灭菌的定义：）灭菌的定义：以化学剂或物理方法消灭以化学剂或物理方法消灭所有所有微微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到霉菌及病毒，而达到完全无菌完全无菌之过程。之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。作中最普通也是最重要的技术。1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法
18、：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3 3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源氯气消毒水源4 4、紫外线消毒、紫外线消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法1 1、灼烧灭菌、灼烧灭菌2 2、干热灭菌：、干热灭菌：160-170 160-170 下加下加热热1-2h1-2h。3 3、高压蒸气灭菌：、高压蒸气灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维持下维持15-30min.15-3
19、0min.(2)灭菌的方法：灭菌的方法：最常用的灭菌方法是最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌，它可以，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。破坏。有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌高温干热灭菌。为了。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只塞，也可采用各种金
20、属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。硅胶主要成分是二氧化硅，硅胶主要成分是二氧化硅，化学性质稳定，不燃烧硅化学性质稳定，不燃烧硅胶有很强的吸附能力，对胶有很强的吸附能力，对人的皮肤能产生干燥作用人的皮肤能产生干燥作用主要用于仪器、仪表、设主要用于仪器、仪表、设备等在密闭条件下的吸潮备等在密闭条件下的吸潮防锈防锈 分类分类定义定义方法方法灭菌法灭菌法杀灭一切微生物杀灭一
21、切微生物物理法：热力、辐射、微物理法：热力、辐射、微波、等离子体波、等离子体化学法：醛类、烷化剂化学法：醛类、烷化剂高效消高效消毒法毒法杀灭一切致病微杀灭一切致病微生物生物紫外线、含氯剂、臭氧、紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等复配剂等中效消中效消毒法毒法杀灭除芽孢外的杀灭除芽孢外的致病微生物致病微生物超声波、碘类、醇类、酚超声波、碘类、醇类、酚类类低效消低效消毒法毒法杀灭细菌繁殖体、杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、中单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子草药、金属离子1 1、器具的灭菌、器具的灭菌2 2、培养基的配制、培养基的配制3 3、培养基的灭菌、培养基的灭菌4 4、倒平板
22、、倒平板5 5、微生物接种、微生物接种6 6、恒温箱中培养、恒温箱中培养7 7、菌种的保存、菌种的保存1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。菌。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自答：无
23、菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒）需要消毒。三、实验操作三、实验操作 1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）1 1计算、称量计算、称量2 2溶化溶化3 3调调pHpH：pH7pH76 64 4过滤：这一步可以省去。过滤：这一步可以省去。5 5分装：分装过程中注意不要使培养分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。三
24、角烧瓶容积的一半为宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步骤操作步骤 8 8灭菌灭菌:将将50ml50ml培养基培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为锅，在压力为100kPa100kPa、温度为、温度为121121，灭菌，灭菌151530min30min。将。将培养皿培养皿用旧报纸包裹，放入干用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在热灭菌箱内，在160160170 170 下灭菌下灭菌2h2h。9 9倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯附左右时，在酒精灯附近
25、倒平板。（倒平板操作见课本）近倒平板。（倒平板操作见课本）2d2d后观察平后观察平板，无杂菌污染才可用来接种板，无杂菌污染才可用来接种.10 10无菌检查：无菌检查：将灭菌的培养基放入将灭菌的培养基放入3737的温室中培的温室中培养养24482448小时，以检查灭菌是否彻底。小时，以检查灭菌是否彻底。1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？温度？答：答：可以用手触摸盛有培养基的锥形可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手瓶，感觉锥形瓶的温
26、度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。时，就可以进行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。物污染培养基。3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基
27、表面的湿度也比较高，将平板倒置，后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。培养微生物。2 2、纯化大肠杆菌、纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法:通过接种环在琼脂固体通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画
28、线的操作培养基表面连续画线的操作,将聚集的将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面菌钟逐步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后在数次画线后,可以分离到由一个细可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落这就是菌落.1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线种环上可能存
29、在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。感染操作者。2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其
30、冷却在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。落。涂布平板
31、的所有操作都应在火焰附近涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第操作要求，想一想，第2 2步应如何进行无步应如何进行无菌操作？菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。在酒精灯火焰周围等等。1 1、临时保藏：、临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后养基，菌落长成后置于置于44冰箱保存。冰箱保存。2 2、长期保存：、长
32、期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法四、课题成果评价四、课题成果评价（一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 12 d2 d后无菌后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。备。（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他
33、菌落，则说明接符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h12 h与与24 h24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。好的科学态度与习惯。本课题知识小结本
34、课题知识小结:【典例解析】【典例解析】例例1 1关微生物营养物质的叙述中，正确的是关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于针对微生物的具体情况分析。对于A A、B B选项，它的表达是选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可不完整的。有
35、的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如同时是氮源，如NH4HCO3NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3NaHCO3，可作为自养，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而型微生物的碳源和无机盐；而NaClNaCl则只能提供无机盐。对则只能提供无机盐。对于于D D选项，无机氮源提
36、供能量的情况还是存在的，如选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3NH3可可为硝化细菌提供能量和氮源。为硝化细菌提供能量和氮源。答案：答案：D例例2 2下面对发酵工程中灭菌的理解下面对发酵工程中灭菌的理解的的是是A.A.防止杂菌污染防止杂菌污染 B.B.消灭杂菌消灭杂菌C.C.培养基和发酵设备都必须灭菌培养基和发酵设备都必须灭菌 D.D.灭菌必须在接种前灭菌必须在接种前B 解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A A说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一的纯种，整个发酵过程不能混入其他微
37、生物（杂菌），的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌），所以是正确的；所以是正确的；B B是错误的，因为灭菌的目的是防止杂是错误的，因为灭菌的目的是防止杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消灭全部微生物。全部微生物。C C是正确的，因为与发酵有关的所有设备是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会把所接菌种也杀死。所接菌种也杀死。编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状
38、硫10g10g（NHNH4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml例例3 3右表是某微生物右表是某微生物培养基成分，请据此回答：培养基成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培）右表培养基可培养的微生物类型养的微生物类型是是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。加入培养基中。如不想浪费此培养基，如不想浪费此培养基，可再加入可再加入 .自养型微生物自养型微生物 含碳有
39、机物含碳有机物（3 3）若除去成分）若除去成分，加入（，加入（CH2OCH2O），该培养基），该培养基可用于培养可用于培养 。（4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是前，要进行的是 。（6 6）右表中各成分重量确定的原则）右表中各成分重量确定的原则是是 。（7 7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是分是 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂（或凝固剂）琼脂（或凝固剂）2 2
40、、微生物生理学时期、微生物生理学时期 建立了一套独特的研究方法建立了一套独特的研究方法,寻找各种传染寻找各种传染病病原菌病病原菌巴斯德在观察受狂巴斯德在观察受狂犬病感染的兔脊髓犬病感染的兔脊髓 有机物发酵和腐败由微生物引起有机物发酵和腐败由微生物引起 解决葡萄酒和啤酒变酸问题解决葡萄酒和啤酒变酸问题创立巴氏消毒法创立巴氏消毒法 解决蚕茧的解决蚕茧的“微粒子病微粒子病”的疾病，挽救了法国蚕丝的疾病，挽救了法国蚕丝业业 主张传染病是由微生物引起的，并可通过接触、唾主张传染病是由微生物引起的，并可通过接触、唾液及粪便传播液及粪便传播 19世纪世纪70年代，研究炭疽病，拯救了畜牧业年代，研究炭疽病，拯
41、救了畜牧业 1881年研制成功减毒活疫苗年研制成功减毒活疫苗开创人类战胜传染开创人类战胜传染病的新世纪病的新世纪 1885年，巴斯德第一次治好了被疯狗咬伤的年，巴斯德第一次治好了被疯狗咬伤的9岁男岁男孩梅斯特孩梅斯特奠定了免疫学基础奠定了免疫学基础 科赫科赫 科赫科赫 1882年发现引起结核病的病原年发现引起结核病的病原分离出结分离出结核杆菌核杆菌 创立了微生物学检查方法：固体培养技术、创立了微生物学检查方法：固体培养技术、染色技术、实验动物感染染色技术、实验动物感染 发现炭疽杆菌、霍乱弧菌发现炭疽杆菌、霍乱弧菌 总结了著名的总结了著名的“科赫法则科赫法则”-确立病原微生确立病原微生物物 19
42、05年获得了诺贝尔医学和生理学奖年获得了诺贝尔医学和生理学奖5、下面是有关细菌、下面是有关细菌A的四项实验：的四项实验：实验实验1：将：将A 接种于一般培养基上，结果出现菌落。接种于一般培养基上，结果出现菌落。实验实验2：用一定剂量的紫外线处理：用一定剂量的紫外线处理A，产生突变种，产生突变种a1。将。将a1接种于接种于一般培养基后，不出现菌落；但在培养基内添加营养物质甲后，一般培养基后，不出现菌落；但在培养基内添加营养物质甲后，就出现菌落。就出现菌落。实验实验3：用另一剂量的紫外线处理：用另一剂量的紫外线处理A，得突变种，得突变种a2。将。将a2接种于一接种于一般培养基后，也不出现菌落；但在
43、培养基内添加营养物质乙后，般培养基后，也不出现菌落；但在培养基内添加营养物质乙后，就出现菌落。就出现菌落。实验实验4：将：将a1和和a2一起接种于一般培养基上，数日后出现菌落。一起接种于一般培养基上，数日后出现菌落。分析实验，回答下列问题：分析实验，回答下列问题：（1）细菌）细菌a1和和a2分别接种于一般培养基，均不能生长。其原因分别接种于一般培养基，均不能生长。其原因是用紫外线处理导致细菌是用紫外线处理导致细菌A发生了发生了 ，从而缺乏合成营养，从而缺乏合成营养物质甲或乙的物质甲或乙的 。（2）实验）实验1至至3表明，物质甲和乙均是细菌表明，物质甲和乙均是细菌A在代谢过程中产生的在代谢过程中
44、产生的 代谢产物。在实验代谢产物。在实验2和和3中，它们作为中，它们作为 加加入一般培养基的。入一般培养基的。A碳源碳源 B氮源氮源 C生长因子生长因子 D无机盐无机盐（3）实验）实验4中出现菌落的原因可能是中出现菌落的原因可能是 。基因突变基因突变酶酶初级初级C细菌细菌a1能够合成营养物质乙，能够合成营养物质乙，a2能够能够合成营养物质甲合成营养物质甲 9.9.将将50mL50mL牛奶煮沸牛奶煮沸,倒入一消毒后的锥形瓶内倒入一消毒后的锥形瓶内,锥形瓶口用棉锥形瓶口用棉团堵住团堵住,每日观察牛奶的情况每日观察牛奶的情况(如右图如右图),),共进行共进行4 4天天.(1)(1)这个实验可以证明的
45、假说是这个实验可以证明的假说是棉团棉团煮沸的煮沸的牛奶牛奶新鲜花新鲜花园土园土土壤中有微生物存在土壤中有微生物存在在其他条件不变的基础上，把花园土换成高温加热在其他条件不变的基础上，把花园土换成高温加热过的花园土过的花园土（2 2）为这个实验设计的对照实验应该）为这个实验设计的对照实验应该是是（3 3）实验结束时，牛奶会）实验结束时，牛奶会，检测，检测的方法是的方法是，产生这一结，产生这一结果的原因是果的原因是（4 4）牛奶在这个实验中的作用是）牛奶在这个实验中的作用是（5 5）实验前先将牛奶煮沸的原因是）实验前先将牛奶煮沸的原因是（6 6）加入土样前，先让牛奶冷却至室温的原因是）加入土样前，
46、先让牛奶冷却至室温的原因是（7 7）用棉团堵住锥形瓶的原因是）用棉团堵住锥形瓶的原因是（8 8）实验前是否需要对锥形瓶进行消毒？）实验前是否需要对锥形瓶进行消毒？。理由是。理由是变酸变酸用用PHPH试纸检测试纸检测土壤中的微生物通过发酵作用，把牛奶变酸土壤中的微生物通过发酵作用，把牛奶变酸为土壤中的微生物提供营养为土壤中的微生物提供营养尽量杀死牛奶中可能存在的微生物尽量杀死牛奶中可能存在的微生物避免煮沸的牛奶杀死新鲜花园土中的微避免煮沸的牛奶杀死新鲜花园土中的微生物，从而影响实验结果生物，从而影响实验结果防止空气中的微生物进入锥形瓶，影响防止空气中的微生物进入锥形瓶，影响实验的准确性实验的准确性需要需要以此证明土壤加入之前，锥形瓶以此证明土壤加入之前，锥形瓶中无任何微生物中无任何微生物
