1、姓名：报考专业：准考证号码：密封线内不要写题2018年全国硕士研究生招生考试初试自命题试题科目名称：微生物学（A卷B卷）科目代码：808考试时间：3小时 满分150分可使用的常用工具：无 计算器 直尺 圆规（请在使用工具前打）注意：所有答题内容必须写在答题纸上，写在试题或草稿纸上的一律无效；考完后试题随答题纸交回。一、名词解释(共6小题，每小题5分，共30分)1、SOS修复（SOS repair）2、前噬菌体（prophage）3、分批培养（batch culture）4、次级代谢（secondary metabolism）5、基团转位（group translocation）6、Ames试验
2、（Ames test）二、单项选择题(共10小题，每小题2分，共20分)1、革兰氏阳性菌细胞壁特有的成分是（）。A、肽聚糖；B、几丁质；C、脂多糖；D、磷壁酸；2、培养百日咳博德氏菌的培养基中含有血液，这种培养基是（）。A、基础培养基；B、加富培养基；C、选择培养基；D、鉴别培养基；3、细菌的种名用双名法命名，即种的学名由属名和种名加词两部分组合而成。第一个词的首字母要大写，该词是（）。A、种名；B、属名；C、人名；D、科名；4、加大接种量可控制少量污染菌的繁殖，是利用微生物间的（）。A、互生关系；B、共生关系；C、竞争关系；D、拮抗关系；5、类病毒是一类仅含有侵染性（）的病毒。A、蛋白质；B
3、、RNA；C、DNA；D、DNA和RNA；6、果汁、牛奶常用的灭菌方法为（）。A、巴斯德消毒；B、干热灭菌；C、间歇灭菌； D、高压蒸汽灭菌；7、当向正在进行乙醇发酵的啤酒酵母培养液中通入氧气时，葡萄糖的消耗量将（）。A、增加；B、减少；C、不变；D、不定；8、在U形玻璃管中，将一滤片置于二株菌之间使之不能接触，在左臂发现有原养型菌出现，这一现象不可能是由于（）。A、接合；B、转化；C、普遍转导；D、局限性转导；9、枯草芽孢杆菌通过有序的（）更换，使RNA聚合酶识别不同基因的启动子，使与孢子形成有关的基因有序地表达。A、基因；B、信号肽；C、因子；D、调节蛋白；10、某个碱基的改变，使代表某种
4、氨基酸的密码子变成蛋白质合成的终止密码子（UAA，UAG，UGA）。蛋白质的合成提前终止，产生截短的蛋白质，这种基因突变是（）。A、同义突变；B、错义突变；C、无义突变；D、移码突变；三、简答题(共6小题，每小题10分，共60分)1、培养基按物理状态可分为哪几种？分别用于什么实验？2、封闭系统中微生物的生长经历了哪几个生长期？以图表示并指明各期的特点。3、什么是缺壁细菌？试简述4类缺壁细菌的形成、特点及实践意义？4、什么是溶源菌？如何通过实验方法判断某菌株是否为溶源菌？5、某同学配制一种含有抗生素的液体培养基，他将培养基组成成分和抗生素按要求含量称取，用水溶解后调好pH，然后进行了高压灭菌（1
5、15，30 min）。使用后发现对该抗生素敏感的菌株也能在该培养基中生长，请问造成这种结果的原因是什么？6、根据微生物与氧的关系，可将微生物分为几类？其各自特点和产能方式是什么?在好气性微生物的培养过程中如何保证供氧？四、论述题(共2小题，每小题20分，共40分)1、有两种不同营养缺陷的大肠杆菌K12突变株，其中A菌株和B菌株的遗传标记分别是：A：bio-Leu+，B：bio+leu-，将他们在完全培养基上混合培养过夜，然后把混合培养物经离心和洗涤除去完全培养基，再涂布于基本培养基平板上，结果发现在基本培养基上出现原养型菌落；而将A菌株和B菌株单独涂布在基本培养基平板上的对照组则没有菌落。原养
6、型的形成是转化、转导还是接合导致的？请设计实验方案证明。2、欲从环境中分离获得能利用苯作为唯一碳源和能源的微生物纯培养物，请你设计一个可行的实验方案。2018年全国硕士研究生招生考试初试自命题试题答案科目名称：微生物学（A卷B卷）科目代码：808考试时间：3小时 满分150分可使用的常用工具：无 计算器 直尺 圆规（请在使用工具前打）注意：所有答题内容必须写在答题纸上，写在试题或草稿纸上的一律无效；考完后试题随答题纸交回。一、名词解释(共6小题，每小题5分，共30分)1、SOS修复（SOS repair）：DNA受到广泛损伤时发生的复杂诱导型应急修复过程。2、前噬菌体（prophage）：整合
7、于细菌染色体或以质粒形式存在的温和性噬菌体基因组。3、分批培养（batch culture）：是指微生物在封闭系统中进行的培养，培养过程中不对培养基进行更换。4、次级代谢（secondary metabolism）：微生物在一定的生长时期，以初级代谢产物为前体合成一些对微生物自身生命活动无明确生理功能物质的过程。5、基团转位（group translocation）：物质通过载体帮助，在一个较复杂的运输系统的作用下进行的跨膜主动运输，被运输物质在该过程中化学性质发生改变。6、Ames试验（Ames test）：现已发现许多化学诱变及能够引起动物和人的癌症，利用细菌突变来检测环境中存在的致癌物质
8、是一种简便、快速、灵敏的方法。该方法是由美国加利福尼亚大学的Ames教授首先发明，因此又称Ames试验。二、单项选择题(共10小题，每小题2分，共20分)12345678910DBBCBABACC三、简答题(共6小题，每小题10分，共60分)1、培养基按物理状态可分为哪几种？分别用于什么实验？答：划分方式类型特点及应用物理状态固体培养基微生物菌种分离、鉴定、计数和保藏半固体培养基观察微生物运动特征、根据氧的需求微生物的分类、噬菌体效价滴定液体培养基在科研或生产中通过发酵获得菌体或代谢产物（分类1分，每个类型的应用各3分（33）2、封闭系统中微生物的生长经历了哪几个生长期？以图表示并指明各期的特
9、点。答：封闭系统中微生物的生长经历四个时期：延滞期（I），指数期（II），稳定期（III），衰亡期（IV）。各期的特点如下：（2分）延滞期的特点：（2分） 生长速率常数等于零； 细胞形态变化或增长；许多杆菌可长成长丝状； 细菌内RNA尤其是rRNA含量增高，原生质呈嗜酸性； 合成代谢活跃，核糖体、酶类和ATP的合成加快，易产生诱导酶； 对外界不良条件如NaCl溶液浓度、温度和抗生素等化学药物的反应敏感；指数期的特点：（2分） 生长速率常数R最大，因而细胞每分裂一次所需的代时G（增代时间）或原生质增加一倍所需的倍增时间最短； 细胞进行平衡生长，菌体内各种成分最为均匀； 酶系活跃，代谢旺盛。稳定期
10、的特点：（2分） 生长速率常数R等于0，即处于新繁殖的细胞数与衰亡的细胞数相等。 细胞开始贮存糖原、异染颗粒和脂肪等贮藏物。 多数芽孢杆菌在这时开始形成芽孢； 有的微生物在稳定期时还开始合成抗生素等次生代谢产物。衰亡期的特点：（2分） 个体死亡的速度超过新生的速度，因此，整个群体就呈现出负生长（R为负值），此时活菌数在一个阶段以几何级数下降，此时称为对数衰亡期； 细胞形态多样，如有的微生物发生自溶； 有的微生物在这时产生或释放对人类有用的抗生素等次生代谢产物； 芽孢杆菌的芽孢释放常发生在这一时期； 后期可因部分细菌产生抗性而使细菌死亡速率降低；3、什么是缺壁细菌？试简述4类缺壁细菌的形成、特点
11、及实践意义？答：缺壁细菌是细胞壁缺乏或缺损的各种系统的统称，包括支原体、L型细菌、原生质体和球状体。一般因自然进化、自发突变或人为去除等方法而形成缺壁细胞。（2分）具体如下：（1）原生质体（protoplast）：指在人工条件下用溶菌酶除尽原有细胞壁或用青霉素抑制细胞壁的合成后，所留下的仅由细胞膜包裹着的圆球状渗透敏感细胞，一般由G+菌形成；（2）球状体：指还残留部分细胞壁的原生质体，一般由G-菌形成；原生质体和球状体的共同特点：无完整的细胞壁，细胞呈球状，对渗透压较敏感，即使有鞭毛也无法运动，对相应噬菌体不敏感，细胞不能分裂等。在合适的再生培养基中，原生质体可以回复，长出细胞壁。原生质体或球
12、状体比正常有细胞壁的细菌更易导入外源遗传物质和渗入诱变剂，故是研究遗传规律和进行原生质体育种的良好实验材料。（3）L型细菌：1935年时，在英国李斯特预防医学研究所中发现一种由自发突变而形成细胞壁缺损的细菌念珠状链杆菌，它的细胞膨大，对渗透压十分敏感，在固体培养基表面形成“油煎蛋”似的小菌落。由于李斯德研究所的第一字母是“L”，故称L型细菌。许多G+菌和G-菌都可形成L型。目前L型细菌的概念有时用得较杂，甚至还把原生质体或球状体也包括在内。严格地说，L型细菌专指在实验室中通过自发突变形成的遗传性稳定的细胞壁缺陷菌株。L型细菌虽然丧失合成细胞壁的能力，但是由于质膜完整，在一定渗透压下不影响其生存
13、和繁殖，但是不能保持原有细胞形态，菌体形成高度多形态的变异菌。（4）支原体：是在长期进化的过程中形成的、适应自然生活条件的无细胞壁的原核微生物。其细胞膜中含有一般原核生物所没有的甾醇，因此虽缺乏细胞壁，其细胞膜仍有较高的机械强度。项目支原体L型细菌原生质体球状体形成原因自然进化实验室中自发突变人工除壁人工除壁制备方法溶菌酶去壁或青霉素抑制肽聚糖合成溶菌酶去壁或青霉素抑制肽聚糖合成缺壁程度完全无壁完全无壁基本无壁部分缺壁繁殖能力有有无（待细胞壁再生后即可恢复其繁殖能力）无（待细胞壁再生后即可恢复其繁殖能力）实例各种支原体念珠状链杆菌等多数G+菌多数G-菌实践意义研究进化遗传和病理研究原生质体育种
14、遗传转化和育种（具体四种缺壁细胞的形成、特点和应用各2分）4、什么是溶源菌？如何通过实验方法判断某菌株是否为溶源菌？答：溶源菌指在核染色体组上整合有前噬菌体并能正常生长繁殖而不被裂解的细菌（或其他细胞）。溶原细胞中找不到形态可见的噬菌体粒子。（4分）检验溶源菌的方法：将少量溶源菌与大量的敏感性指示菌（遇溶源菌裂解后所释放的温和噬菌体会发生裂解性生活周期者）相混合，然后加至琼脂培养基中倒一平板。过一段时间后溶源菌就长成菌落。由于在溶源菌分裂过程中有极少数个体会发生自发裂解，其释放的噬菌体可不断侵染溶源菌菌落周围的指示菌菌苔，所以会发生一个个中央有溶源菌小菌落，四周有透明圈的特殊噬菌斑。（6分）5
15、、某同学配制一种含有抗生素的液体培养基，他将培养基组成成分和抗生素按要求含量称取，用水溶解后调好pH，然后进行了高压灭菌（115，30 min）。使用后发现对该抗生素敏感的菌株也能在该培养基中生长，请问造成这种结果的原因是什么？答：由于抗生素是热敏感物质，高压蒸汽灭菌时的高温会使其失效，所以导致对该抗生素敏感的菌株也能生长。（8分）配制含抗生素的培养基的正确方法是：将培养基配好后高压蒸汽灭菌，而抗生素另外配成高浓度溶液，用微孔滤膜过滤除菌。待灭菌后的培养基冷却后，采用无菌操作将高浓度的无菌抗生素溶液按需要量加入到培养基中，使其终浓度达到要求。（2分）6、根据微生物与氧的关系，可将微生物分为几类
16、？其各自特点和产能方式是什么?在好气性微生物的培养过程中如何保证供氧？答：按照微生物与分子氧的关系，可把它们分为好氧菌和厌氧菌两大类，并可继续细分为五类：（每个类型的菌各1.5分）主要从两个方面来保证供氧：（1）若是液体培养基，摇瓶需要通过振荡培养、减少装液量等来保证供氧；（2）用几层纱布做锥形瓶的棉塞即可保证无菌也可保证供氧。（3）如果是发酵罐（配有溶氧电极），要定期检测溶氧量，根据需求通无菌空气。（2.5分）四、论述题(共2小题，每小题20分，共40分)1、有两种不同营养缺陷的大肠杆菌K12突变株，其中A菌株和B菌株的遗传标记分别是：A：bio-Leu+，B：bio+leu-，将他们在完全
17、培养基上混合培养过夜，然后把混合培养物经离心和洗涤除去完全培养基，再涂布于基本培养基平板上，结果发现在基本培养基上出现原养型菌落；而将A菌株和B菌株单独涂布在基本培养基平板上的对照组则没有菌落。原养型的形成是转化、转导还是接合导致的？请设计实验方案证明。答：（1）利用U型管实验证明：U型管中间隔有滤板，只允许培养基通过而细菌不能通过。其二臂盛有完全培养基，当将两株营养缺陷型分别接种到U型管二臂进行“混合”培养后，没有发现基因交换和重组（基本培养基上无原养型菌落生长），就证明了此重组现象是由于接合作用导致的。（6分）（2）而如果仍能发现有基因重组现象，那说明不是因为接合作用完成，而是由于转化或转
18、导作用完成重组作用，接下来需要证实究竟是转化还是转导作用完成重组，将A和B菌的混合培养物涂布于与大量的敏感性指示菌（对噬菌体会发生裂解性生活周期者）相混合，然后加至琼脂培养基中倒一平板，如果发现有噬菌斑，那么说明培养物中存在有噬菌体，说明原养性的形成可能是由于转导完成，（7分）另外我们也可以U型管实验中加入DNA酶，如果加入DNA酶后，仍出现原养性菌落，这说明该重组作用绝不是由转化作用介导，综合这两点，可以得出重组是由转导完成的。（7分）2、欲从环境中分离获得能利用苯作为唯一碳源和能源的微生物纯培养物，请你设计一个可行的实验方案。答：分离：从被苯污染的土壤中分离；采用的是稀释涂平板的方法，涂布
19、的选择性培养基为以苯作为唯一碳源的基础盐培养基；原理：选择被苯污染的土壤作为分离材料，是因为长期进化会产生降解苯的细菌；另外，选择性培养基以苯为唯一碳源，那么只有能降解利用苯的细菌材料在选择性培养基上生长。具体的操作步骤如下：（1）从苯含量较高的环境中采集土样或水样； （2）配制培养基，制备平板，一种仅以苯作为唯一碳源（A），另一种不含任何碳源作为对照（B）；（3）将样品适当稀释（10倍稀释法），涂布A平板；（4）将平板置于适当温度条件下培养，观察是否有菌落产生；（5）将A平板上的菌落编号并分别转接到B平板，置于相同温度条件下培养（在B平板上生长的菌落是可利用空气中CO2的自养型微生物）；（6
20、）挑取在A平板上生长而不在B平板上生长的菌落，在一个新的A平板上划线、培养，获得单菌落，初步确定为可利用苯作为碳源和能源的微生物纯培养物。（10分）驯化：将分离到的细菌不断分离涂布到上述的选择性培养基上，在此过程中不断加大苯的量。原理：通过不断加大苯的量，来逐渐驯化提高细菌的降解苯的能力；（3分）检测：检测上述驯化菌液达到纯培养，第一在光学显微镜下观测菌体的形态大小是否均已，当然，菌体是需要革兰氏染色，那么光学显微镜下观察时，也要观测菌体的革兰氏染色是否一致。如果菌体的镜下形态和染色大概一致，说明菌液基本达到纯培养；还要检测该菌液降解苯的能力，通过设计生化试验来进行检测，具体步骤如下：将初步确定的目标菌株转接至以苯作为唯一碳源的液体培养基中进行摇瓶发酵实验，利用相应化学分析方法定量分析该菌株分解利用苯的情况。（7分）第 10 页 共 10 页
