1、分子病理学讲座The development of molecular and genetic approaches to the diagnosis and classification of human tumours The design and validation of predictive biomarkers for treatment response and disease progressionThe susceptibility of individuals of different genetic constitution to develop cancer一、分子病理
2、学诊断的定义一、分子病理学诊断的定义开发分子和遗传学方法用于人类肿瘤诊断和分类开发分子和遗传学方法用于人类肿瘤诊断和分类设计和确认生物标志物用于疾病进展和疗效的预测设计和确认生物标志物用于疾病进展和疗效的预测不同遗传背景个体对于肿瘤发生的敏感性不同遗传背景个体对于肿瘤发生的敏感性二、常用分子病理学诊断方法二、常用分子病理学诊断方法p PCR PCR 聚合酶链反应聚合酶链反应p FISH FISH 荧光原位杂交荧光原位杂交p Microarray Microarray 基因芯片基因芯片PCRPCR发明者获得诺贝尔化学奖发明者获得诺贝尔化学奖三、三、PCR(PCR(结合结合DNADNA测序测序)技
3、术在技术在 分子病理诊断中的应用分子病理诊断中的应用基因突变检查基因突变检查EGFRc-kit PDGFRAk-rasB-rafPIK3CAEGFR基因突变与肺癌的靶向治疗什么是什么是EGFR基因及其突变？基因及其突变？表皮生长因子受体erbB1HER1肺癌患者为什么要进行肺癌患者为什么要进行EGFR基因突变检测？基因突变检测？西妥昔单抗（爱必妥）易瑞沙（吉非替尼）特罗凯（厄罗替尼）非小细胞肺癌中药敏相关的非小细胞肺癌中药敏相关的EGFR突变突变耐药EGFR突变检查及其临床意义突变检查及其临床意义易瑞沙和特罗凯是治疗非小细胞肺癌的重要靶向药物易瑞沙和特罗凯是治疗非小细胞肺癌的重要靶向药物EGF
4、R基因突变主要集中在酪氨酸激酶区，基因突变主要集中在酪氨酸激酶区，1818，1919，2121外显子。外显子。1919外显子约占外显子约占4545，2121外显子约占外显子约占4040突变可以增强肿瘤细胞对酪氨酸激酶抑制剂的敏感性突变可以增强肿瘤细胞对酪氨酸激酶抑制剂的敏感性EGFREGFR突变检查可以作为靶向治疗的有效预测指标突变检查可以作为靶向治疗的有效预测指标 c-kit c-kit和和PDGFRAPDGFRA突变检测突变检测在胃肠间质瘤诊断和治疗中的意义在胃肠间质瘤诊断和治疗中的意义c-kitc-kit 基因第基因第1111、9 9、1313和和1717外显子存在突变外显子存在突变PD
5、GFRAPDGFRA基因第基因第1212和和1818外显子存在突变外显子存在突变 大多数大多数GISTGIST（65658585）的基因突变发生在）的基因突变发生在c-kitc-kit的第的第1111或或9 9外显子外显子突变使其在无配体结合的情况下，蛋白仍然保持活性突变使其在无配体结合的情况下，蛋白仍然保持活性甲磺酸伊马替尼（格列卫）最初是用来治疗慢性甲磺酸伊马替尼（格列卫）最初是用来治疗慢性髓性白血病，最近才用来治疗髓性白血病，最近才用来治疗c-kitc-kit异常表达的异常表达的GISTGIST在突变的患者中，相对于第在突变的患者中，相对于第9 9号外显子突变和野生型，号外显子突变和野生
6、型，第第1111号外显子突变患者疗效最佳号外显子突变患者疗效最佳第第9 9号外显子突变患者一线治疗应用号外显子突变患者一线治疗应用800800比比400md/d400md/d明显延长中位无进展生存期明显延长中位无进展生存期C-kitC-kit突变与临床治疗突变与临床治疗k-ras 基因检测及其临床应用基因检测及其临床应用k-ras基因突变基因突变k-ras基因被激活最常见的方式是点突变基因被激活最常见的方式是点突变,多发生在多发生在N N端第端第12,1312,13和和6161密码子密码子,其中又以第其中又以第1212密码子突变密码子突变最常见最常见,为为GGTGGT突变成突变成GATGAT或
7、或GTTGTT20205050结直肠癌发生结直肠癌发生K-rasK-ras基因突变基因突变第第1212和和1313密码子突变占密码子突变占9090，第，第6161密码子密码子 占占5 5k-ras突变的临床意义突变的临床意义K-rasK-ras基因突变型患者不能从抗基因突变型患者不能从抗EGFREGFR治疗中获益，治疗中获益，反而增加不良反应危险和治疗费用反而增加不良反应危险和治疗费用只有只有k-rask-ras基因野生型患者才能接受基因野生型患者才能接受EGFREGFR抑制剂抑制剂（如西妥昔单抗和帕尼单抗）治疗（如西妥昔单抗和帕尼单抗）治疗但并不是所有但并不是所有k-rask-ras基因野生
8、型对靶向治疗都有效基因野生型对靶向治疗都有效石蜡组织中基因突变检测流程石蜡组织中基因突变检测流程小 结u 分子病理学检查在某些肿瘤靶向治疗分子病理学检查在某些肿瘤靶向治疗 和诊断中具有重要价值和诊断中具有重要价值u 基于基于PCRPCR的多种生物学技术和方法用于的多种生物学技术和方法用于 突变检测，各有利弊，需要合理选择突变检测，各有利弊，需要合理选择四、四、FISH FISH 荧光原位杂交技术及其应用荧光原位杂交技术及其应用p 荧光原位杂交(FISH)技术的简介：发展历史、原理和实验操作程序p FISH检查在肿瘤靶向治疗中的应用：乳腺癌（Her2）、肺癌（EGFR、ALK）p FISH检查在
9、病理诊断中的应用：宫颈癌、膀胱癌、淋巴瘤、前列腺癌等p FISH检查在其他方面的应用：流产、遗传病等基本原理基本原理碱基互补配对原则，同源的碱基互补配对原则，同源的DNA-DNADNA-DNA，DNA-RNA,DNA-RNA,RNA-RNARNA-RNA两条单链在一定条件下能结合成双链。两条单链在一定条件下能结合成双链。用放射性或非放射性物质标记一条链作为探针，用放射性或非放射性物质标记一条链作为探针，与组织切片或细胞内待测核酸（与组织切片或细胞内待测核酸（RNARNA或或DNADNA）片）片段进行杂交，通过放射自显影或其他方法显示段进行杂交，通过放射自显影或其他方法显示目的基因存在和定位。目
10、的基因存在和定位。基本原理组织切片脱蜡酶消化杂交过夜清洗DAPI染细胞核荧光显微镜观察FISHFISH检查实验流程图检查实验流程图乳腺癌乳腺癌和和胃癌胃癌HER2 FISHHER2 FISH检查检查荧光原位杂交探针制备典型的乳腺癌典型的乳腺癌HER2 FISHHER2 FISH结果结果结结 果果 判判 断断 Ratio=Her2信号总数信号总数/CEP17信号总数信号总数 HER2:CEP17HER2:CEP17胃癌胃癌 乳腺癌乳腺癌 无扩增无扩增2.02.01.82.02.02.22.2FISHFISH检查淋巴瘤基因重排和其他应用检查淋巴瘤基因重排和其他应用 淋巴瘤类型淋巴瘤类型探针名称探针
11、名称涉及基因涉及基因发生率发生率临床意义临床意义B细胞淋巴瘤GLP ICHIGH50%-85%鉴别B细胞恶性淋巴瘤和淋巴组织良性增生性病变滤泡性淋巴瘤GLP IGH/GLP BCL2IGH/BCL290%辅助诊断滤泡性淋巴瘤套细胞淋巴瘤GLP IGH/GLP CCND1IGH/CCND1 95%辅助诊断套细胞淋巴瘤弥漫性大B细胞淋巴瘤GLP BCL6BCL640%辅助诊断弥漫性大B细胞淋巴瘤伯基特淋巴瘤GLP C-MYCC-MYC100%辅助诊断伯基特淋巴瘤粘膜相关淋巴组织淋巴瘤GLP MALT1MALT110%-20%辅助诊断MALT淋巴瘤GLP API2/GLP MALT1API2/MAL
12、T140%指导抗HP治疗间变性大细胞淋巴瘤GLP ALKALK60%-80%评估预后淋巴瘤FISH检测试剂盒IGH/BCL2IGH/BCL2融合基因检测辅助诊断滤泡性淋巴瘤（融合基因检测辅助诊断滤泡性淋巴瘤（FLFL）IGH/BCL2IGH/BCL2基因基因FISHFISH检测检测IgHBcl2IGH/BCL2探探针针14（灰）号和（灰）号和18号（黑）染色号（黑）染色体体IgH基因基因Bcl-2基因基因杂交杂交正正 常常 异异 常常融合融合基因扩增基因扩增双色双融合易位探针双色双融合易位探针(IGH/BCL2(IGH/BCL2）正正常常融融合合基因拷贝数增加基因拷贝数增加双色融合易位探针双色
13、融合易位探针(IGH/BCL2(IGH/BCL2）FISHFISH检查在其他方面的应用检查在其他方面的应用n 产前染色体异常诊断产前染色体异常诊断n 遗传病染色体分析遗传病染色体分析n 自然流产染色体异常诊断自然流产染色体异常诊断n 膀胱癌、前列腺癌膀胱癌、前列腺癌n 肺癌靶向治疗肺癌靶向治疗小小 结结u FISHFISH技术给乳腺癌、胃癌肿瘤靶向技术给乳腺癌、胃癌肿瘤靶向 治疗提供了金标准治疗提供了金标准u 为某些疾病诊断提供了无创性检查手段为某些疾病诊断提供了无创性检查手段 病理诊断提供了有用的辅助指标病理诊断提供了有用的辅助指标 u 为开展科学研究提供了重要实验技术为开展科学研究提供了重
14、要实验技术美国斯坦福大学病理科美国斯坦福大学病理科 Autopsy Pathology Clinical Biochemical Genetics Clinical Chemistry Clinical Microbiology Clinical Virology Cytogenetics Cytopathology Dermatopathology Hematopathology/Clinical Hematology Immunodiagnosis Molecular Genetic Pathology Neuropathology Renal Pathology Surgical Pathology(general and consultation services)Transfusion Medicinesfusion Medicine分子病理学诊断未来发展分子病理学诊断未来发展细胞形态细胞形态蛋白表达蛋白表达基因检测基因检测外科病理学诊断外科病理学诊断免疫组织化学检查免疫组织化学检查分子病理学检查分子病理学检查现代病理学诊断现代病理学诊断总结复习题1、常用的分子病理学检查有哪些？简述其应用。2、什么是FISH检查？请举例说明该技术在临床的应用。谢谢 谢谢Thank you
